网织红细胞的显示及体会

1.试剂的配制 :1煌焦油蓝 1克加无水酒精 1 0 0 ml,充分溶解后瓶口密封保存 ,若有沉淀使用前过滤。2需制备煌焦油蓝染色膜 :取一干净平滑优质玻璃片 ,用滴管在玻片一端滴加 2～ 3滴煌焦油蓝入平皿内以防灰尘污染 ,干后待用。3取新鲜耳垂血或手指血 2～ 4滴滴在已经干燥的染料色膜上 ,与血滴充分混合 ,可将两玻片轻轻移动两下 ,血液和染料的比例应恰到 1 :1 ,然后将染色的玻片放入平皿内或放在大玻璃缸内 ,缸内放湿沙布以防血液干固。 4在室温内静止染色 3～ 1 0 min。 5染色后将两张玻片分开 ,将血液按常规涂片方法涂成均匀的血片 ( 2～ 4张…     

胰岛B细胞、A细胞的快速双染

组织学特殊染色技术及免疫组织化学技术已广泛应用于基础医学和临床医学的科研工作中。本快速染色法即用组织学醛品红染色法和免疫组织化学 SP法在同一张切片上对胰岛 B细胞和 A细胞进行了双重染色 ,取得较好的效果 ,现作简单介绍。取大鼠胰腺 ,Bouin液固定 ,石蜡包埋 ,切 5 μm厚切片。双染步骤如下第一步 ,胰岛 B细胞的醛品红染色 :切片脱蜡到水 ;入 0 .2 5 %浓硫酸和 0 .2 5 %高锰酸钾等量混和液中 3min;蒸馏水洗后入 5 %草酸 2 min;蒸馏水洗 ;再经 70 %酒精后入醛品红染液 1 5 min;70 %酒精分色后 ,蒸馏水洗。第二步 ,胰岛 A细胞的免…     

成纤维细胞复合染料染色法

成纤维细胞是疏松结缔组织中常见的细胞,也是功能较重要的细胞.迄今为止,各种书籍、文献均介绍:在光镜下成纤维细胞轮廓不清,只能从核及胞质上辨别.给教学工作带来了极大的不便.为了改变这种状态,我们尝试用复合染料染成纤维细胞,得到了良好的效果.1 材料和方法(1)取材大白鼠肠系膜.(2)固定100%乙醇50ml,甲醇50ml配成的混合固定液,固定10分钟.(3)染色复合染料染色20分钟(复合染料配制:2%碱性品红,2%偶氮焰红,各50ml分别溶解后,两种溶液混合,滤过、沉淀,取沉淀物在烤箱中烤干,取沉淀物0.5克,加70%酒精100ml,再加三聚乙醛1ml为原液.取原液10ml加70%乙醇30ml,再加0.1     

Mallory三色法在小肠染色上的应用

本法主要是显示肌纤维、血细胞、结缔组织纤维和神经纤维等结构。原来我们将此法用在垂体染色上 ,现在我们用来染小肠、皮肤及含有结缔组织的器官等 ,可供教学及科研定性、定量分析 ,效果好 ,较传统的 H.E染色可更清晰地分辨各种结构。1 .组织固定 :取一小段用 Bouin氏液固定 2 4hr,常规包埋、切片、脱蜡。 2 .染色液的配制 :磷钨酸 5 g,橘红 G lg,苯胺蓝 0 .5 g,酸性复红 1 .5 g,蒸馏水 1 0 0 ml。先使磷钨酸溶于水内 ,逐次将染料加入 (要在前一染料完全溶解后 ,再加次一染料 )将三种染料混在一起用。 3.染色方法如下 :( 1 )常规方法脱蜡…     

PAS—M／PASM—M显示肾小球基膜,红细胞和细胞核的复合染色方法

多年来为了进一步提高肾小球的组化染色效果,我们进行了反复实验,根据染色机理和目的,重新组合PAS-M和PASM-M的二种染色方法,能够较好的显示肾小球毛细血管基膜、红细胞和细胞核的分布及病变程度,对于肾组织的疾病诊断和研究预后效果,具有一定的实用意义.1 材料和方法1.1 PAS—M法的试剂配制和染色方法 (1)试剂配制 ①Periodic acid (过碘酸)氧化液,过碘酸0.5g,蒸馏水98ml.②Martius yellow(马休黄)对比染色液:马休黄 0.5g,无水酒精 98ml,磷钨酸0.2g.③Schiff’s染色液:碱性复红2g,1M盐酸40ml,重亚硫酸钠4g,重蒸馏水400ml.先将蒸馏水煮沸,小火焰后加入碱性复红,再煮沸1分钟,冷却到50℃时加入盐酸,待35℃时加入重亚硫酸钠.将试剂盛棕色瓶中,冷却后入冰箱内备用.(2)染色方法 ①组织切片脱蜡至水.②过碘     

改良的Cajal—Faworsky组织块神经浸染法在神经病理切片染色中的应用

改良的Cajal-Fanwersky组织块浸染法(简称C-F法),系作者在神经病理科研过程中,经过多种方法的对比,并进行适当改进而成。此法染色性能稳定,效果较好,尤其在观察连续切片时更为适用。一、材料与方法: (一)试剂配制: 1.冰醋酸酒精固定液: 80%乙醇98ml 冰醋酸2ml 2.氨酒精溶液: 95%乙醇100ml 1～2滴浓氨水3.还原液: 焦性没食子酸2g 中性Formalin 10ml 蒸馏水90ml     

家鼠类肾上腺嗜铬细胞简易染色法

一、染色方法 :( 1 )固定小家鼠肾上腺髓质于下列固定液中 2 4hr:即 3%重铬酸钾水溶液 1 0 ml,1 0 %福尔马林 2 0 ml,蒸馏水2 0 ml。 ( 2 )移浸入 3%重铬酸钾水溶液 48hr。( 3)水洗 2 4hr。 ( 4 )石蜡包埋、切片。 ( 5 )切片脱蜡至蒸馏水。 ( 6 )常规苏木素染液 1 5 min、水洗。 ( 7) 1 %盐酸酒精分化适度、水洗1 5 min。 ( 8)各级酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。结果 :肾上腺髓质嗜铬细胞颗粒呈现棕黄色 ,细胞核呈蓝色。二、注意事项 :( 1 )动物选择家鼠类 ,组织力求新鲜。 ( 2 )固定液临用前配制。 ( 3)组织铬化过程需每日更换新液…     

介绍一种脂肪染色——油红滴染法

<正>油红染色在病理科作为脂肪特殊染色应用,传统方法一般为浸染法。根据本科室的工作情况,实验改用滴染法,配成的工作液也可以重复使用,效果良好,现介绍如下。1材料与方法1.1材料1%油红液:1 g油红,溶于纯异戊醇或无水乙醇100 m L。工作液:取储存液1 m L(VP管),加2~3滴蒸馏水,混匀,形成悬浊液,密封,2 000 r/min离心10 min。     

横纹肌快速染色法

目前 ,横纹肌染色多选用Ｍａｌｌｏｒｙ磷钨酸苏木精染色法(ＰＴＡＨ) ,但该方法存在着配置染液时间长 ,染色时间长等不足。虽有人加高锰酸钾氧化促其成熟 ,但还是需要几天时间 ,且染色效果也不是很满意。我们摸索出一种性能稳定的快速染色法 ,其试剂配制便捷 ,染色过程快速 ,组织色泽艳丽 ,对比度强 ,横纹显示清晰。一、材料与方法1 材料与试剂配置 :( 1)改良的磷钨酸苏木精染液 :苏木精 0 .1ｇ、磷钨酸 2ｇ、蒸馏水 10 0ｍｌ、黄色氧化汞 0 .1ｇ。Ａ液 :苏木精放入 3 0ｍｌ蒸馏水 ,加热使之溶解。Ｂ液 :取一 2 5 0ｍｌ烧杯 ,放入磷钨酸和…     

改良的Timm染色法显示大鼠海马苔藓纤维末梢出芽的变化

Timm染色方法是一种能够显示组织细胞内重金属分布的常用方法。苔藓纤维末端是脑内含锌量最高的区域 ,因此可以用此方法显示苔藓纤维末梢分布的情况。1、材料与方法1 .1　样品制备在恒温冷箱切片机中制备大鼠脑海马部位的连续冰冻切片 ,片厚 30 μm,吹干备用。1 .2　染色步骤采用改良的 Timm染色法配制 Timm′s混合液。用 30 g阿拉伯胶粉剂溶于 6 0 ml蒸馏水 ,搅拌均匀 ,放置 2 4hr,双层纱布过滤 ,配成 5 0 %的阿拉伯胶 6 0 ml。放入 1 0 ml枸橼酸缓冲液 ( 2 5 .5 %枸橼酸 2 3.5 %枸橼酸钠 )和30 ml5 .6 7%对苯二酚溶液 ,充分混合。切片…     

Ziehl-Neelsen改良染色法在痰涂片中的应用

针对结核杆菌菌体含有蜡质的特点和传统Ziehl Neelsen抗酸染色法存在的不足 ,笔者在以前工作的基础上对染色液的配方进行改良〔1,2〕,并结合微波辐射技术建立了一种快速、敏感、简便的痰涂片抗酸染色法。1　材料与方法1.1　材料　 5 3例结核杆菌痰培养阳性的痰液 ,每例涂片 2张 ,95 %乙醇固定 15～ 30min ,分别用Ziehl Neelsen改良染色法和传统的抗酸染色法染色 ,同时设阳性对照、阴性对照。1.2　染液配制　 (1)改良的Ziehl Neelsen染色液 :碱性复红无水乙醇饱和液 (相当 6 %浓度 ) 10ml,活性剂 5ml,蒸馏水85ml,先将碱性复红溶于无水乙醇…     

常用苏木素几种配方与染色结果的比较

苏木素是组织切片最常用的细胞核染料 ,H.E染色中配方甚多 ,染色效果也有差异 ,影响染色的因素颇多 ,未经氧化的苏木素无染色能力 ,氧化后的苏木素要使细胞核染色鲜蓝 ,还要借助媒染剂的作用 ,苏木素、氧化剂、媒染剂三者的搭配比例及染液的使用期限与染色效果都有着直接的关系。如何优化三者的比例和判断染液的有效期 ,使苏木素染色达到最佳效果 ,为此我们进行了以下探讨。1　方法与结果1.1　Ehrlich苏木素染液　这是一种自然氧化成熟的苏木素染液 ,比较合理的配方是 :苏木素 5g,无水乙醇2 0 0 ml,硫酸铝钾 2 0 g,甘油 2 0 0 ml,蒸馏水 1…     

神经肌梭的染色方法

肌梭是一种本体感受器,广泛分布在全身的肌肉中,在四肢肌肉中特别多,我们在进行肌肉组织染色比较时,经过实践,发现该方法简单可行,特介绍如下。1.取材:哺乳动物的四肢肌肉(近腱处)。2.固定:取新鲜材料3毫米左右,人固定液(水合氯醛5克,无水酒精25毫升,蒸馏水25毫升)固定24小时。3.方法:(1)取出材料,用蒸馏水冲洗,入氨酒精(无水酒精100毫升,氧氢化氨0.5毫升)中24小时。(2)去除氨酒精,流水冲洗12-24小时,用蒸馏水洗多次,直至洗去组织上多余的氨酒精。(3)入2%硝酸银水溶液一周(37℃温箱)。     

介绍一种新型高效的油红O染色法

正油红O染料对脂肪变性、脂质沉积的组织器官有良好的溶脂及吸附作用,它具有操作简便、色彩鲜亮等特点,优于苏丹Ⅲ染液,被广泛运用于临床和科研病理工作中。针式滤膜过滤器原用于过滤色谱分析样品及流动相,对色谱柱的保护、防止进样阀和输液泵管系统被污染等具有较好的作用,广泛应用于无菌实验、胶体分离及质量与微量分析。油红O染液中含醇类物质易挥发且杂质多,因此传统染色需要异丙醇漂洗分色,整个步骤历时较长且不易控制,对人体     

改良神经髓鞘的依来铬氰R染色法

为研究周围神经髓鞘被覆状态 ,我们经常要进行髓鞘染色 ,在实践中 ,我们摸索了一种便捷、有效、经济的染色方法 ,介绍如下。一、材料和方法1.取材、固定、切片 :取大鼠正常坐骨神经组织 ,4%甲醛生理盐水固定。石蜡切片 6～ 10 μｍ厚 ,6 0℃左右烘箱烘 3～4ｄ。2 .试剂配制 :(1)依来铬氰Ｒ液 :依来铬氰Ｒ 0 .2ｇ ,蒸馏水 96ｍｌ,10 %铁明矾液 4ｍｌ,浓硫酸 0 .5ｍｌ。 (2 )苦味酸丽春红Ｓ液 :1%丽春红Ｓ水溶液 10ｍｌ,苦味酸饱和水溶液 86ｍｌ,1%醋酸水 4ｍｌ。3.染色程序 :(1)石蜡切片 ,常规脱蜡水洗 ,吸干或烘干切片。 (2 )依来铬氰Ｒ液染…     

一种可用于支持细胞功能判定的染色法

在光学显微镜下对支持细胞(Sertoli细胞)的功能进行快速直接的判定,一直缺少客观有效的方法.通过数年的摸索,找到了一种通过特异地对残余体及其前体进行染色来判定支持细胞功能状况的染色方法.具体的染色方法如下:1 材料与方法1.1 动物成年雄性Wilster大鼠.1.2 染色方法1.2.1 染色液的配制天青Ⅱ号0.5g、美蓝0.5g、伊红1g,加少量水顺次溶解后,加水至100ml,于瓶中敝口静置48小时,过滤、留上清液备用.最好于用前1周内配制.1.2.2 染色步骤动物睾丸用Bouin液或4%甲醛固定24～72小时,石蜡包埋,切片4～5μm厚.切片脱蜡至水,置染色液中染色12～24小时.染色后蒸馏水冲洗,晾干,切片置装有五氧化二磷干燥瓶中干燥24～48小时,直接入二甲苯透明,中性树胶封片.     

油红o显示培养平滑肌细胞中的脂类

关于用油红O方法显示脂类,在国内外已被广泛应用。但用油红O方法显示培养的平滑肌细胞国内仍未见报导,也难以显示。国外虽有报导,但必须经过DMPA(N-N-demethyl-1,3-propa-mediaine)处理后才能使培养的平滑肌细胞中的脂类被油红O染色。从文献报导中多用家兔主动脉平滑肌进行培养,未见用人胎儿主动脉平滑肌进行培养,观察其脂类的分布。本室在抗衰老研究中以油红O显示整体主动脉染色基础上,进一步在细胞水平上观察细胞内脂质堆积情况和动脉粥样硬化病变状态。1培养液:用浓度为10%的高脂血清和LDL(低密度脂旦白)作培养液。2材料:引产或流产5个月胎儿主动脉平滑肌,HAO2-6(人动脉平滑肌细胞第二例第六代)。3步聚:(1)在无菌条件下将主动脉平滑肌剪成小块贴在盖玻片上,然后放入培养瓶中,于37℃温箱中培养:在10%的高浓度高脂血清中分别培养96,144,192小时;在LDL培养液中培养24和48小时。(2)将培养成活的平滑肌细胞(盖玻片上)从培养瓶中取出,必须用蒸馏水彻底洗掉浮在盖玻     

普通墨汁对中、小血管行荧光染色

自发荧光的生物物质或经荧光染料标记的物质可在荧光显微镜下发荧光。但市售普通墨汁对组织结构可行荧光染色 ,经查未见报告。我们给小鼠、大鼠、幼兔注射普通墨汁 ,分别取肺、肾、肝、肠系膜 ,均可见其中、小血管显现很强的黑色荧光 ,其他组织无荧光。碘化钾对血管荧光有很强的猝灭作用。现报道如下 :1　材料与方法1 .1　材料　 ( 1 ) A液　即市售普通墨汁原液。( 2 ) B液　取墨汁 1 0 0 ml,明胶 3g,隔水加温 ,使明胶溶解于墨汁中即成。 ( 3) C液蒸馏水 1 0 0 ml,明胶 3g,加温溶解。1 .2　动物　实验动物分三组 ,每组小鼠、大鼠、幼兔各…     

疏松结缔组织铺片法改良

疏松结缔组织分布广泛,其中含有三种纤维和六种细胞.为使一张铺片中两种纤维和三种细胞呈现不同颜色,我们对Weigeyt方法进行改良,同时选用伊红Y和番红花O显示胶原纤维和肥大细胞,又选用健康妊娠期小白鼠、并给炎症刺激.制出的铺片满意,方法稳定可靠.1 材料和方法1.1 动物和试剂(1)选用健康妊娠期小白鼠并给刀割伤一次.(2)试剂:1注射液0.5%台盼兰生理盐水.2 固定液1:9甲醛90%乙醇混合液.3染色液 碱性复红染液:碱性复红4g间苯二碱4g蒸馏水200ml.配后加浓硫酸4ml即可应用;1%伊红水溶液(染前滴几滴冰醋酸促染);1%番红花O水溶液(染前滴几滴苯胺油促染).     

显示肥厚性瘢痕组织中胶原纤维和基质的方法

肥厚性瘢痕（Hypertrophicscar．HTS）为皮肢真皮损伤后结缔组织过渡增生而形成的病理结构，以创伤局部胶原纤维和细胞外基质（ExtracellularmatrixECM）过渡沉积为病理特征。传统的结缔组织胶原纤维和ECM的染色方法不甚适应于HTS的结构显示，且不能反映两者的关系。为此我们结合组织化学和组织学染色技术，摸索出同时显示胶原纤维和ECM及其相互关系的方法。。取正常人皮肤3例，HTS3个月、半年、一年皮肤各5例，福尔马林固定，普通石蜡切片6Pm，脱蜡下行至蒸馏水。进行两种菜色：1．切片入PHZ5阿新兰溶液哪①新兰ig＋3％醋酸100ml）染色smin，蒸馏水洗，Harris苏木精染胞核，脱水至95％酒精，染伊红，脱水，透明，封固。结果胶原纤维粉红色，酸性粘液（主要为酸性粘蛋白）为蓝色，位于胶原纤维周围，胞核染紫红色。2．切片经常规PAS反应，蒸馏水洗，人甲基绿酒精液（甲基绿ig十蒸馏水100ml十无水酒精25ml）染色Zmin，苯胺蓝水溶液smin，常观脱水透明封片。结果胶原纤维染蓝色，粘多粘粉红色位于胶原纤维周围，胞核呈绿色。该方法显示出HTS中胶原纤维和基质的关系，为瘢痕组织研究提供形态学观察依据。