MTT法与CCK-8法检测兔视网膜色素上皮细胞活性的比较研究

目的:探讨MTT法和CCK-8法对细胞活性检测的最佳实验条件,并比较二者的优缺点。方法:取传至第5代的兔视网膜色素上皮细胞为研究对象,分别用MTT试剂和CCK-8试剂检测兔视网膜色素上皮细胞的增殖情况。结果:MTT法最佳检测波长为570nm,最佳检测时间在加入试剂后4h,细胞数量在1.25×103~2×104之间检测较好;CCK-8法最佳检测波长在450nm,最佳检测时间在加入试剂4~6h,适宜的细胞检测范围为1.25×103~1×104。结论:MTT法较CCK-8法细胞检测范围更广,孵育时间更短,是一种优于CCK-8法的细胞活性检测方法。     

澳洲茄边碱对大肠癌RKO细胞增殖和凋亡作用

目的观察澳洲茄边碱对人大肠癌RKO细胞增殖及凋亡作用。方法不同浓度澳洲茄边碱作用RKO细胞。CCK-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖,平板法检测克隆形成,Annexin V-APC/PI标记流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测Caspase-3活性。结果澳洲茄边碱可抑制RKO细胞增殖,呈剂量与时间依赖性。澳洲茄边碱可抑制RKO细胞克隆形成,呈剂量依赖性。澳洲茄边碱可促RKO细胞凋亡。澳洲茄边碱同时可增强RKO细胞Caspase-3活性。结论澳洲茄边碱可以抑制RKO细胞增殖和克隆形成,促RKO细胞凋亡,其机制与活化Caspase-3相关。     

蛇葡萄素对人前列腺癌PC3细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究蛇葡萄素对人前列腺癌PC3细胞的细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:利用MTT比色法检测蛇葡萄素对PC3细胞的抑制作用,并计算IC50;流式PI单染法检测细胞周期;流式Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。结果:蛇葡萄素能明显抑制PC3细胞增殖,并呈剂量依赖关系;使细胞增殖阻滞于S期,G0/G1期细胞数减少;蛇葡萄素对PC3细胞作用72小时后的凋亡率随剂量增加而加大。结论:蛇葡萄素显著抑制PC3细胞的增殖,引起细胞S期阻滞,诱导细胞凋亡。     

体外抗AD药物筛选中MTT、Edu和RTCA法的比较研究

目的比较MTT、Edu和RTCA三种检测细胞增殖方法的重复性、稳定性和灵敏性,探讨使用三种方法进行抗AD药物体外筛选的适应性。方法采用谷氨酸诱导的PC12细胞损伤模型作为阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)的体外模型,运用以上3种方法观察补肾益智方提取部位对谷氨酸导致的PC12细胞损伤的增殖变化。结果 MTT法检测药物浓度在100μg/ml时细胞活力和增殖达到47%;Edu法检测药物浓度在25μg/ml时细胞活力和增殖达到36.7%;RTCA法检测药物浓度在25μg/ml比在100μg/m L和6.25μg/ml浓度时细胞活力和增殖能力高,且在不同的时间段增殖率有所不同。结论 MTT法简单、快速、经济,结果与细胞中线粒体酶活性有关,间接反映细胞的增殖状态;Ed U标记技术灵敏、客观,特异性标记分裂期细胞,直接反映细胞的增殖状态;RTCA法方便、宏观、可信,通过细胞与电极板的相互作用,直观反应细胞的增殖趋势。     

仙茅总黄酮提取纯化工艺及其抗氧化、抗肿瘤活性

目的 优化仙茅总黄酮提取纯化工艺,并评价其抗氧化、抗肿瘤活性.方法 采用单因素试验结合正交试验优化提取纯化工艺,DPPH、ABTS法检测总黄酮抗氧化活性,CCK-8法检测它对Hela、HCCC、MG-63、M231细胞增殖的抑制作用,Hoechst33258法染色检测上述4种细胞凋亡形态的变化.结果 最佳条件为以25倍...     

黄芩苷对前列腺癌细胞增殖和侵袭能力的抑制作用及其机制研究

目的:探究黄芩苷对人前列腺癌细胞(PC3)细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法:通过CCK-8检测黄芩苷对PC3细胞增殖的作用,Transwell实验检测黄芩苷对PC3细胞侵袭能力的作用,Western blot检测黄芩苷处理后PC3细胞E-钙黏蛋白和促凋亡基因bax,caspase-3,抗凋亡基因bcl-xl以及自噬相关基因beclin-1和LC3B-Ⅱ的表达。结果:黄芩苷抑制PC3细胞的增殖和侵袭能力,且呈浓度依赖趋势;黄芩苷能促进PC3细胞E-钙黏蛋白表达;黄芩苷能上调PC细胞促凋亡基因bax和caspase-3的表达,抑制抗凋亡基因bcl-xl表达。黄芩苷能促进PC3细胞中自噬相关基因beclin-1和LC3B-Ⅱ的表达。结论:黄芩苷可以通过促进凋亡和自噬发生,增加E-钙黏蛋白的表达,抑制PC3细胞的增殖和侵袭能力。     

苦豆碱通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路调控前列腺癌细胞自噬与凋亡

目的：探讨苦豆碱对前列腺癌PC3、LNCaP细胞的抑制作用及其可能机制。方法：采用不同浓度(0、25、50、100、200、400、800、1 600μmol)苦豆碱处理前列腺癌PC3、LNCaP细胞。CCK-8法及克隆形成实验检测PC3、LNCaP细胞增殖活性;光学显微镜观察细胞形态改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫荧光检测自噬指标LC3Ⅱ表达;Western Blot检测凋亡和自噬相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2、LC3Ⅱ、Beclin 1、P62及PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白表达。结果：CCK-8及克隆形成实验结果提示苦豆碱以浓度依赖性抑制PC3、LNCaP细胞活力,与空白对照组(0.1%DMSO)比较,100、200μmol苦豆碱处理后的PC3、LNCaP细胞形态发生明显变化,流式细胞术结果显示细胞凋亡率升高,免疫荧光染色结果显示PC3和LNCaP细胞胞质LC3Ⅱ绿色荧光点状表达数量增多,自噬加强,Western Blot结果显示凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax表达显著升高,Bcl-2表达显著降低;自噬相关蛋白Beclin 1表达及LC3Ⅱ/LC...     

槐耳清膏抑制人前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭作用及其机制研究

该研究探讨槐耳清膏对人前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭的抑制作用及其相关分子机制。采用CCK-8法检测槐耳清膏对PC3细胞的增殖抑制作用。采用流式细胞术分析槐耳清膏给药后PC3细胞凋亡及细胞周期的变化。采用细胞划痕实验及Transwell侵袭实验分析给药后PC3细胞侵袭与迁移能力的变化。通过Western blot法,检测槐耳清膏给药后与侵袭迁移相关的EMT蛋白标志物表达水平的变化及MAPK信号通路中关键蛋白磷酸化水平的变化。结果显示,槐耳清膏可以明显抑制人前列腺癌PC3细胞的增殖。槐耳清膏8 g·L~(-1)作用于PC3细胞48 h后,细胞凋亡率较对照组明显升高,且细胞发生明显的S期阻滞。槐耳清膏给药后可以明显降低PC3细胞的侵袭与迁移能力,并且能够下调N-cadherin和TCF8/ZEB1的表达水平和上调E-cadherin的蛋白表达水平,表明槐耳清膏能够促进PC3细胞MET的发生,同时还发现MAPK信号通路中的关键蛋白JNK和ERK的磷酸化水平明显下降。因此,槐耳清膏能够抑制人前列腺癌PC3细胞增殖和迁移侵袭能力,这可能与其调控EMT及抑制MAPK信号通路有关。     

4种细胞毒活性方法评价紫草素体外肿瘤细胞抑制作用效果

目的研究4种细胞毒活性测定方法对紫草素体外肿瘤细胞抑制作用的评价效果,对紫草萘醌为代表的天然色素在细胞毒活性评价中常出现的假阴性现象进行对比分析。方法将紫草素与其高敏感株急性早幼粒白血病HL-60细胞和低敏感株人非小细胞肺癌A549细胞体外共培养,通过台盼蓝法、磺酰罗丹明B(SRB)法、Cell Counting Kit-8(CCK-8)法和四甲基偶氮唑盐(MTT)法进行平行实验,测定紫草素在0.4～128μmol/L抑制细胞生长的量效关系曲线。结果台盼蓝法、SRB法、CCK-8法、MTT法测得紫草素对HL-60细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为0.57、0.77、1.36、1.01μmol/L,对A549细胞的IC50分别为6.30、10.38、13.48、15.24μmol/L。紫草素浓度分别在3.2、32μmol/L以下时,4种检测方法得到其对2种细胞的抑制率均呈线性增长,超过此浓度即出现差异。其中台盼蓝法与SRB法结果一致性良好,而MTT法与CCK-8法测得的抑制率较低。对于HL-60细胞,紫草素12.8μmol/L时,CCK-8测得抑制率为81%,台盼蓝法为96%;对于A549细胞,紫草素128μmol/L时,MTT法测得抑制率为89%,台盼蓝法为99%。紫草素的吸收光谱与甲臜在波长400～600 nm存在重叠,最大重叠峰在550～570nm,CCK-8试剂与紫草素对HL-60细胞存在协同抑制效应。台盼蓝法结果显示高浓度紫草素几乎完全杀死板孔内细胞,相比对照组差异显著,但MTT法和CCK-8法结果出现假阴性。结论紫草萘醌为代表的天然色素的细胞毒活性评价不建议使用MTT法和CCK-8法,推荐使用SRB法和台盼蓝法。     

基于AEP/PI3K/AKT信号通路探讨温肾散结方对人前列腺癌细胞的调控作用和分子机制

目的：基于天冬酰胺内肽酶（AEP）/磷酸酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(PKB/AKT),探讨温肾散结方（WSSJ方）对人前列腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,并进一步探讨其潜在的分子机制。方法：制备WSSJ方冻干粉;体外培养人前列腺癌PC3、DU145和22RV1细胞,CCK-8法检测WSSJ方对前列腺癌细胞相对活力的影响并测定最佳给药浓度;集落形成实验检测WSSJ方对单细胞增殖能力的影响;划痕实验检测WSSJ方对前列腺癌细胞迁移能力的影响;RT-qPCR检测细胞内AEP mRNA、PI3K mRNA及AKT mRNA表达;Western blotting检测细胞内AEP、PI3K及AKT蛋白表达。结果：WSSJ方组前列腺癌细胞增殖活力随给药浓度升高逐渐降低;WSSJ方组细胞计数与细胞融合情况均低于对照组;WSSJ方低、中、高剂量组细胞集落形成数量均少于对照组;WSSJ方组细胞迁移率显著低于对照组（P<0.01）;WSSJ方组PC3细胞AKT蛋白相对表达量低于对照组,DU145细胞、22RV1细胞AEP、PI3K蛋白相对表达量均低于对照组,差异均有统计学意义（P<0....     

青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:研究青蒿琥酯对人结肠癌HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响.方法:实验分为10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组,阴性对照组和空白对照组.采用透射电镜和流式细胞仪检测青蒿琥酯对HCT-8细胞的凋亡诱导效果;采用流式细胞仪分析青蒿琥酯对HCT-8细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测青蒿琥酯对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响.结果:经青蒿琥酯处理后,电镜下可见HCT-8细胞膜皱缩、染色质凝聚、核碎裂、凋亡小体形成.10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组凋亡率分别为17.1％±3.8％,29.5％±5.1％,41.4％±5.8％,显著高于空白对照组5.1％±1.4％.P＜0.05.在20 μmol· L-1青蒿琥酯处理组,HCT-8细胞G0/G1期所占比例随着药物作用时间延长而增加,S期与G2/M期细胞所占比例则下降.10,20,30 μmol·L -1青蒿琥酯处理组Bax蛋白表达水平分别为0.20±0.03,0.40±0.05和0.50±0.08显著高于空白对照组(0.06 ±0.02),P＜0.05;Bcl-2蛋白表达水平未见明显变化,Bcl-2/Bax呈下降趋势.结论:青蒿琥酯可以抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用机制可能与其阻滞结肠癌细胞周期和上调促癌基因Bax表达有关.     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞周期及周期相关蛋白表达的影响

目的 研究淫羊藿苷（icariin．ICA）对同型半胱氨酸（homocysteinemia,HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth musckle cell．VSMC）细胞周期的影响及其机制。方法建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48h后,用流式细胞仪检测VSMC细胞周期变化及细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达。结果0．2mg／L、0．4mg／L ICA组G0／G1期细胞数明显增多,s期细胞数明显减少,与HCY组相比有统计学意义（P〈0．01）;CyclinDl和CDK4的表达量均随ICA剂量增加而减少。结论 ICA桔抗HCY诱导的兔VSMC增殖．其主要机制可能与Cyclin D1及CDK4的低表达所致的细胞周期抑制有关。     

富于T/组织细胞型的弥漫大B细胞性淋巴瘤的误诊分析

目的：探讨富于T细胞/组织细胞型的弥漫大B细胞性淋巴瘤（TCRBCL）的病理形态、预后和免疫组化的特点及鉴别诊断。方法：根据WHO淋巴瘤分类（2008版）的标准对4例TCRBCL进行临床、组织病理和免疫组化分析,应用全自动免疫组化仪（DAKO）检测瘤细胞及背景细胞的免疫表型,抗体包括CD20,CD79a, CD3,CD15,CD68,CD30、CD10,BCL-6,CD21。结果：少量肿瘤性大细胞分布于小淋巴细胞及组织细胞背景中,免疫组化肿瘤性大细胞CD20阳性,背景小细胞CD3阳性,组织细胞CD68阳性。结论：TCRBCL是一个独立的组织学类型,是弥漫大B细胞性淋巴瘤的形态学变异体,易误诊为霍奇金淋巴瘤、反应性淋巴组织增生、淋巴瘤样肉芽肿病等,诊断应结合形态学和免疫表型特征。     

健脾化瘀方对胃癌细胞SGC-7901凋亡和周期的影响

目的:观察健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:①采用MTT法观察不同浓度健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制作用;②用Annexin V/PI荧光双染法检测健脾化瘀方诱导肿瘤细胞进入凋亡的影响;③用流式细胞仪检测健脾化瘀方对SGC-7901细胞周期的阻滞效应。结果:①健脾化瘀方能抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,随着药物浓度的增大以及作用时间的延长,其对细胞的抑制率也明显增强,呈现剂量及时间依赖性。②当2mg/ml和4mg/ml健脾化瘀方作用于人胃癌SGC-7901细胞48h可显著诱导细胞凋亡的产生。③细胞周期方面,健脾化瘀方作用于人胃癌细胞SGC-7901后G2/M期比例与阴性对照组相较显著上升,G0/G1期稍有上升,而S期比例下降,表明细胞被阻滞于G2/M期。结论:健脾化瘀方可明显抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖作用并能够诱导该细胞凋亡,改变细胞周期。     

"精"学说与干细胞辨识

成体干细胞功能不足则会导致生长发育障碍或人的早衰现象,中医认为此为先天之精不足,临床以补肾填精法来治疗如五软五迟和早衰等病证.故今后或许可从调控干细胞增殖分化角度来研究中医学中由于先天之精不足所导致的一系列病证.从干细胞角度来阐述中医学"精"学说,讨论了它们的相似之处.认为全能干细胞蕴藏了全部先天之精,这是精的来源.并将全能干细胞及已发现的多种成体干细胞的功能,与"精"的繁衍生殖、生长发育、生髓化血等功能相比较,认为"精"与干细胞的基本属性较相似.试图为中医基础理论现代化研究提供一个新的思路.     

细胞凋亡机制概述

细胞凋亡是一种重要的生物学过程,是在基因调控下所发生的一系列细胞主动死亡过程。就近几年细胞凋亡信号传递机制、酶学机制以及基因调控机制的研究作一概述。     

细胞凋亡机制概述

细胞凋亡是一种重要的生物学过程,是在基因调控下所发生的一系列细胞主动死亡过程。就近几年细胞凋亡信号传递机制、酶学机制以及基因调控机制的研究作一概述。     

通莲Ⅰ号方及其拆方对食管癌Eca109细胞增殖及细胞周期的影响

目的:研究通莲Ⅰ号方及其拆方在不同浓度下对食管癌Eca109细胞形态和生长周期的调节作用;探讨该方抑制食管癌细胞增殖的机制.方法:将Eca109细胞以l x106个／皿密度接种于Φ100 mm培养皿中,以10％小牛血清DMEM培养液培养,37℃,5％饱和湿度的CO2培养箱孵育,细胞贴壁24 h,分别加入浓度为25～3 200 mg·L-1倍比梯度的通莲Ⅰ号方(T)、清热解毒拆方(Q)、活血行气拆方(H)、滋阴养血拆方(Z)等4方提取液,孵育48 h后,MTT比色法检测细胞增殖变化、光镜观察细胞形态、流式细胞技术(FCM)测定细胞周期.结果:T,Q,H的1C50值分别为386,771,729 mg·L-1;与空白对照组(C)相比,T,Q,H3方显著影响Eca109细胞周期变化:G1期细胞所占比率分别为69.43％,60.84％,61.90％.同时,T,Q,H组细胞的S期与C组比较,均有显著性差异(P＜0.05),T方作用最强.而Z方对细胞的抑制作用较弱,与C组无显著性差异.结论:通莲Ⅰ号方通过抑质细胞进入S增殖期从而干预食管癌Eca109细胞生长,各拆方具有协同作用,全方作用最优.     

通莲I号方及其拆方对食管癌Eca109细胞增殖及细胞周期的影响

目的: 研究通莲I号方及其拆方在不同浓度下对食管癌Eca109细胞形态和生长周期的调节作用;探讨该方抑制食管癌细胞增殖的机制。 方法: 将Eca109细胞以1×10⁶个/皿密度接种于Φ100 mm培养皿中,以10％小牛血清DMEM培养液培养,37 ℃,5%饱和湿度的CO₂培养箱孵育,细胞贴壁24 h,分别加入浓度为25~3 200 mg·L^-1倍比梯度的通莲I号方(T)、清热解毒拆方(Q)、活血行气拆方(H)、滋阴养血拆方(Z)等4方提取液,孵育48 h后,MTT比色法检测细胞增殖变化、光镜观察细胞形态、流式细胞技术(FCM)测定细胞周期。 结果: T,Q,H的IC₅₀值分别为386,771,729 mg·L^-1;与空白对照组(C)相比,T,Q,H 3方显著影响Eca109细胞周期变化:G1期细胞所占比率分别为69.43%,60.84%,61.90%。同时,T,Q,H组细胞的S期与C组比较,均有显著性差异(P<0.05),T方作用最强。而Z方对细胞的抑制作用较弱,与C组无显著性差异。 结论: 通莲I号方通过抑制细胞进入S增殖期从而干预食管癌Eca109细胞生长,各拆方具有协同作用,全方作用最优。     

白花丹素对人舌癌Tca细胞增殖及凋亡作用的探讨

目的 探讨白花丹抑制舌癌细胞Tca的增殖及对细胞凋亡的影响.方法 将舌癌细胞Tca按5×10(3)个/孔的浓度接种于96孔细胞培养板,置于37℃,5% CO2的培养箱中预培养24 h,待细胞80%长满孔底,24 h后将白花丹分别按0.025,0.1,0.2,0.3 mg/ml和0.4 mg/ml分别加入各培养组中,每组5复孔.置37℃、5% CO2培养箱中培养.分别培养48,72,96,120 h后,用酶标仪在490 nm下,MTT染色法测定细胞增殖情况,计算白花丹对肿瘤细胞的抑制率.同时,Hoe-chest33342荧光染色法测定细胞核变化情况,观察细胞凋亡的形态学变化情况.结果 随着白花丹浓度的增大和作用时间的延长,白花丹对人舌癌细胞增殖的抑制作用越明显.当药物浓度达0.4 mg/ml时,培养48 h时与其他各组比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01),当药物浓度在0.3 mg/ml细胞培养达96h时,与小于0.3 mg/ml和小于96h培养时间的其他各组比较均有显著性差异(P<0.05),说明此点是白花丹有效成分抑制肿瘤细胞的一个关键点.细胞培养72 h后Hoechst33342染色发现,随着药物浓度的不断增加,凋亡细胞的数量越来越多.当药物浓度达到0.4 mg/ml时,镜下几乎很少见到完整的细胞核出现,相反出现了大量的细胞和碎片和不完整的细胞核.结论 白花丹提取物可以有效抑制肿瘤细胞增长,导致肿瘤细胞大量地细胞凋亡,说明其在肿瘤治疗中具有很大的应用价值.