显微镜观察药物敏感性技术快速检测结核分枝杆菌研究

目的 建立显微镜观察药物敏感性(MODS)技术并应用其进行结核分枝杆菌(MTB)的快速检测.方法 用24孔细胞培养板液体培养方法建立MODS技术,并对其方法学进行探讨和用于MTB及非结核分枝杆菌(NMT)的检测,同时与传统罗氏培养和鉴定法结果进行比较.结果 菌液浓度为3×10~3 CFU/ml时运用MODS技术检测判读结果时间为7 d;4种NMT标准株(草分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、龟分枝杆菌、海分枝杆菌)在液体培养基中观察到卫索状结构生长,镜下难于和MTB形成的特征索状结构区分;以对硝基苯甲酸800μg/ml、噻吩-2-羧酸肼2.5μg/ml为检测条件,能提高检测的正确率;临床分离株检测结果表明,该法与传统罗氏培养和鉴定法结果符合率为97.0%,如以罗氏培养、鉴定法为判断标准,则MODS检测MTB的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、正确性分别为95.7%,100.0%、100.0%、99.9%、97.0%.结论 MODS技术检测MTB与传统罗氏培养和鉴定法结果符合率较高,且具有快速、操作简便、价廉等优点,可作为MTB快速检测的新方法之一.     

MODS法在结核分枝杆菌检测和药物敏感性实验中的临床应用评价

目的:评价MODS(显微观察药敏分析)技术在痰中结核分枝杆菌检测以及药物敏感性实验中的临床应用价值。方法:分别应用MODS法、L-J培养基培养和比例法(MOP)对涂阳肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌进行检测和药敏实验,并对实验结果进行比较分析。结果:128份涂阳痰标本培养,MODS法与L-J培养的结核分枝杆菌阳性检出率分别为92.8%和84.13%(χ2=4.62,P<0.05);不同药物浓度(INH0.4μg/ml,INH0.1μg/ml;RIF1μg/ml,RIF0.5μg/ml)MODS法药敏实验结果与比例法(INH0.2μg/ml,RIF40μg/ml)的一致率分别为96.8%、95.2%、98.4%、96.8%,一致性程度Kappa值分别为0.91、0.87、0.94、0.90,两法在不同药物浓度下差异均无统计学意义(McNemar’sχ2分别为2、0.33、1和0,P值均大于0.1)。MODS法中分枝杆菌检测和药敏实验结果平均所需时间最短(9 d和9.5 d)。结论:MODS是一项符合发展中国家的廉价、快速、简便、高效的结核病培养诊断和药敏检测新技术。     

二线抗结核分枝杆菌药物耐药分子机制

结核病是威胁人类3大感染性疾病之一,是仅次于艾滋病的第2大致死性感染性疾病。根据药物的作用机制、毒副作用,将抗结核药物划分为一、二线药物,常见药物有异烟肼、     

河南省多药耐药结核分枝杆菌对二线抗结核药物的耐药性分析

目的了解河南省肺结核患者耐药(尤其对二线药物耐药)现况及其危险因素,为制定合理的化疗方案和控制措施提供依据。方法对河南省2009年1-12月15个市(县)结核病预防治疗机构确诊的肺结核患者进行菌种鉴定和一线抗结核药物敏感性检测;经菌种鉴定为结核分枝杆菌,且对一线药物确定为多药耐药(MDR)的菌株进行二线抗结核药物敏感性检测,分析耐药结核病患者二线抗结核药物耐药谱和危险因素。结果经一线抗结核药物敏感性测定,筛选出167例MDR患者,167株MDR菌株中,34.75%对所检测的4种二线药物中任1种具有耐药性,检出泛耐药菌株19株,占11.38%;其中耐药率最高为氧氟沙星,达31.14%;3种注射类药物中,耐药率最高为卷曲霉素,达14.97%。结论河南省结核分枝杆菌的耐药情况较为严重,在结核病预防治疗工作中应给予充分重视。     

新合成抗结核药物研究进展

目前,世界范围内结核病仍是广泛流行的重要传染病,多重耐药结核分枝杆菌的出现和艾滋病合并结核感染的致死性协同作用使得这种情况雪上加霜。因此,临床渴求新的抗痨药物以满足耐药结核治疗的需求。现主要对喹啉类、硝基咪唑吡喃类、嗯唑烷酮类、吡咯类等新合成的抗结核药物作综述。     

广东省结核分枝杆菌二线药物敏感性试验室间质量控制结果分析

目的在广东省地级市结核病实验室开展结核分枝杆菌药物敏感性试验,分析评价二线药敏实验室室间结果,规范和完善药敏试验熟练度测试室间质量保证体系。方法对广东省6个地级市的结核病实验室进行药敏熟练度测试室间质量控制,采用WHO推荐的药敏比例法,对结核病4种二线药物卡那霉素（KM）、阿米卡星（AKM）、卷曲霉素（CPM）、氧氟沙星（OFLX）进行药物敏感性测定。结果6个地级市结核病实验室药敏试验总的敏感性平均值为87．5％（189／216）,总的特异性平均值为96．4％（486／504）,4种二线药物平均一致率分别为：KM 91．7％,AKM 96．7％,CPM 92．8％,OFLX 92．8％,总的一致性平均值为93．5％（673／720）。其中5号实验室KM、OFLX的敏感性试验一致率,以及6号实验室KM、CPM的一致率均〈90％。结论6个地级市结核病实验室的二线药敏试验结果总体上基本达到WHO跨国参比实验室的要求,但有个别实验室对某种药物的检测水平还有待进一步提高。     

2012～2016年黔东南州结核分枝杆菌一线抗结核药物敏感性结果分析

目的:了解结核分枝杆菌分离株对一线抗结核药物的耐药情况。方法:收集2012～2016年五年间分离的281株结核分枝杆菌,采用比例法检测菌株对一线抗结核药物结果。结果:281株结核分枝杆菌中耐药54株,总耐药率19. 22%,耐多药率为5. 70%。结论:结核病人耐药情况比较严重,需要更严格执行结核病防控策略,防止耐药病人及耐药菌株的产生和传播。     

西藏地区217株结核分枝杆菌的药物敏感性检测分析

期间不规则用药和不满规定疗程自行停药共占71.6%,是耐药产生的主要原因.结论 耐药的主要原因为不规则治疗所致,抓好初治病例合理化疗和贯彻全程治疗原则是防止耐药和耐多药的关键.     

465株结核分枝杆菌药物敏感试验二种方法比较

目的：应用绝对浓度法和比例法对４６５例结核分枝杆菌作药物敏感试验比较研究。方法：采用绝对浓度法和比例法检测４６５株结核分枝杆菌对四种抗结核药物（ＩＮＨ、ＳＭ、ＲＦＰ、ＥＭＢ）的敏感性。结果：４６５株结核分枝杆菌四种抗结核药物总耐药率分别为１８．５％和２０．９％,无显著性差异（ｐ〈０．０５）。两种药敏测定法符合率为９５．３％～９７．８％。结论：绝对浓度法和比例法对结核分枝杆菌药物敏感试验无显著性差异,两种方法目前均可在实际工作中应用。     

矽肺患者结核分枝杆菌临床分离培养与抗结核药物敏感检测

目的分析矽肺患者结核分枝杆菌临床检验结果,并对分离菌株进行药敏检测。方法以2011年10月至2013年10月临床诊断为矽肺合并肺结核的127例患者(矽肺结核组)和53例无合并肺结核矽肺患者(矽肺组)为研究对象,收集患者的痰标本,分别进行结核分枝杆菌痰涂片检查和BACTEC-MGIT 960培养,并对培养阳性的结核分枝杆菌菌株作一线抗结核药物的药敏分析。结果矽肺结核组患者痰涂片检查和BACTEC-MGIT 960培养的阳性率均高于矽肺组(47.2%vs 0.0%,67.7%vs 5.7%,P<0.01);矽肺结核组患者BACTEC-MGIT 960培养的阳性率高于同组患者的痰涂片检查阳性率(67.7%vs 47.2%,P<0.01)。180例患者痰标本经BACTEC-MGIT 960培养检出结核分枝杆菌阳性者共89株,该89株分离株均对一线抗结核药物耐药,总耐药率为100.0%,耐多药率为28.0%。耐药顺序从高到低依次为异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和利福平。结论矽肺患者标本中分离出的结核分枝杆菌对抗结核药物呈现较高的耐药率,对矽肺患者定期进行结核分枝杆菌感染的检查是防治耐药结核分枝杆菌菌株传播的有效措施。     

结核杆菌初始耐药对化疗效果的影响

目的 了解结核杆菌初始耐药对化疗的影响。方法将我院2001年1月-2005年12月4年间未用过抗结核药或用药未超过1月、有药物敏感性测定、门诊随访记录资料完整的肺结核患者分为耐药组(134例)及敏感组(162例),进行对比分析。结果痰菌阴转率前者为77.6%、后者为96.9%,2年细菌学复发率10.8%及3.5%。耐1药者痰菌阴转率89.1%;耐2药及3药者各为72.7%及54.5%。结论初始耐药,尤其耐多药是化疗失败的主要原因。     

结核分支杆菌rpoB基因突变与耐利福平的研究

目的：研究结核分支杆菌耐利福平（RFP）分离株rpoB基因突变情况并评价其应用价值。方法：采用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)方法对355株结核分支杆菌临床分离株（其中敏感株109株，耐RFP或含耐RFP株246株）rpoB基因进行检测，并对其中31株耐药株用双脱氧末端终止法进行测序分析。结果：以结核分支杆菌标准株H37Rv为对照，所有109株药物敏感株rpoB基因均无突变；246株耐药株中，225株rpoB基因SSCP图谱异常，其敏感性为91.5％。31株耐药株（其中SSCP异常25株，正常6株）PCR扩增产物经测序证实，19株在531位密码子TCG-TTG，7株526位密码子CAC-TAC，3株在516位密码子GAC-GTC，2株未改变。结论：rpoB基因突变是耐 RFP结核分支杆菌耐药性的主要分子机制；其最常见的突变位点是531位色氨酸和526位组氨酸，PCR-SSCP可快速检测结核分支杆菌RFP耐药性。     

四川省自贡市结核分枝杆菌耐药性监测结果初步分析

目的了解自贡市结核分枝杆菌的耐药状况及其影响因素,为制定耐药结核的防治对策提供科学的依据。方法对全市各区县结核病防治机构2010年4月至2011年8月从肺结核患者分离培养的阳性菌株进行菌型鉴定及采用比例法对8种抗结核药物(INH、SM、RFP、EMB、KM、AMK、CPM和OFLX)进行药物敏感性测定。结果本研究组共对285株结核分枝杆菌临床分离菌株进行了药物敏感性检测,总耐药率为27.02%(77/285),其中初治患者菌株耐药率为21.94%(52/237),复治患者菌株耐药率为52.08%(25/48);总的耐多药率为11.58%(33/285),其中初治患者菌株耐多药率为6.33%(15/237),复治患者菌株耐多药率为37.50%(18/48),对8种抗结核药物INH、RFP、OFLX、SM、EMB、KM、AMK和CPM的耐药率分别为17.19%、12.98%、11.93%、11.23%、5.61%、0.35%、0.35%和0%;耐单药者31例(10.88%),耐2药20例(7.02%),耐3种及以上药者26例(9.12%)。结论本次耐药监测结果表明自贡市结核分枝杆菌耐药率处于较高的水平,耐药菌传播较为严重,应进一步加强耐药结核病的监测和防治。     

结核菌耐药pncA和embB基因突变与临床治疗的研究

目的 分别了解结核分枝杆菌耐吡嗪酰胺和乙胺丁醇的pncA和embB基因突变情况，研究其治疗对策。方法 通过传统药敏实验和聚合酶链反应(PCR)一单链构象多态性(SSCP)技术初步鉴定106株临床分离株的药敏和embB、pncA基因。结果 与结核菌标准株H37RV对照分析94例TB菌耐吡嗪酰胺(PZA)的pncA基因突变率为44．69％(42／94)，分析83例耐乙胺丁醇(EMB)的embB基因突变率为54．2％(45／83)，两种基因同时突变率为11．8％(11／94)，其中embB基因均在传统药敏的高耐药区域。根据上述分析建立的个体化化疗方案治疗，痰菌转阴率为65．9％(62／94)，病灶治疗有效率为69．1％(65／94)，空洞治疗有效率为56．4％(53／94)。结论 临床部分结核分枝杆菌耐EMB和PZA是由于其embB、pncA基因突变所致，临床根据传统药敏的高、低耐药浓度和基因突变的情况制定的治疗方针，对多耐药结核疗效显著。     

结核杆菌相关性肾炎的实验研究

目的探讨结核杆菌可引起肾小球肾炎的证据,及可能的发生机制. 方法应用免疫组织化学方法检测了26份肾穿刺活检石蜡包埋组织中的结核菌抗原抗体复合物,将其中合并肺结核的17例作为实验组,未合并结核病的9例作为肾病对照组. 结果 26份肾穿刺活检石蜡包埋肾组织中均未发现结核菌抗原抗体复合物. 结论单纯应用免疫组织化学方法不能为结核杆菌能否引起肾小球肾炎提供确切的证据.     

结核分支杆菌药敏和耐药基因检测的临床应用和分析

目的 采用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（PCR－SSCP）检测结核分支杆菌耐药基因（rPOB、katG和rPSL),评估它的临床应用价值。方法 通过Bactec-960快速培养,PCR－SSCP和药物敏感试验了解114例肺结核病人结核分支杆菌耐药情况,分析了临床治疗效果。结果 近1／3的初治肺结核病人至少耐一种抗结核药物,RFP、INH和SM敏感株rPOB、katG和rPSL基因突变率分别为6．5％、11．4％和27．2％,耐药株基因突变率分别为60．2％、45．7％和62．7％,耐药基因突变率随着耐药浓度增而高而增高。药敏试验联合耐药基因检测指导治疗效果满意。结论 耐药基因检测指导治疗是一种新探索,与药敏试验联合应用可互相弥补,可能成为临床指导用药的好方法。     

金华地区结核分枝杆菌耐药谱变化分析

[目的]探讨金华地区1980—1986年(A年段)和1999--2003年(B年段)结核菌耐药谱的变化。[方法]对两个年段1300例住院病人按《全国结核病细菌学检验规程》的要求,用改良罗氏法进行痰结核菌培养、菌种鉴定和药物敏感性试验。[结果]两个年段结核菌耐药谱变化的特征：结核菌总耐药率下降,耐利福平跃居首位,耐多药率和中老年肺结核耐药率均呈上升趋势,其中以耐多药率升高为甚。[结论]我市B年段结核菌总耐药率比A年段呈下降态势,但与全国比较还处于较高水平,尤其值得警示的是耐多药现象相当严重。     

反向斑点杂交技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用研究

目的利用反向斑点杂交技术，建立结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药相关基因突变的快速检测方法。方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列，自行设计针对rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因中常见耐药突变区的系列寡核苷酸探针，制成膜芯片，并对64例结核分枝杆菌临床株的基因突变情况进行检测。结果在36株RFP耐药菌中，有32株被检出在rpoB基因上发生突变，突变检出率为88．89％（32／36）；在39株INH耐药菌中，有30株被检出在katG或inhA基因上发生基因突变或缺失，检出率为76．92％（30／39）；在34株SM耐药菌中，有25株被检出在rpsL基因分析部位发生突变，检出率为73．5％（25／34）；在32株EMB耐’药菌中，有19株在embB基因分析部位发生突变，检出率为59．4％（19／32）。膜芯片检出的突变与基因测序结果一致。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）四种主要一线抗结核药的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可作为常规药敏方法的补充，用于指导开展早期、有效的临床化疗。     

莫西沙星抗结核分枝杆菌浓度标准的研究

目的 通过比较新患者与复治患者分离结核分枝杆菌的莫西沙星最低抑菌浓度(MIC)的差异,确定莫西沙星的临床耐药界限.方法 根据患者治疗史,选取109例肺结核病新患者分离出的菌株以及使用过莫西沙星治疗复治患者31例分离出的菌株,共140株,以罗氏含药培养基测定MIC,并分析MIC分布状况,比较MIC累计百分比,通过新患者菌株和复治患者菌株差值最大时的MIC作为耐药界限.结果 来自既往未用过莫西沙星治疗新患者的临床分离株中,94.50％的菌株MIC＜0.4 μg/ml,既往曾接受莫西沙星治疗的临床分离株中,MIC＞1.0 μg/ml占93.55％.结论 根据MIC分布,两类患者分离的结核分枝杆菌对莫西沙星MIC的差异,提示使用罗氏培养基的莫西沙星药敏试验耐药界限采用1 μg/ml为宜,复治患者中仍有6.45％对莫西沙星敏感.     

2015-2018年陕西某医院结核分枝杆菌耐药趋势分析

目的分析本院结核分枝杆菌的耐药情况及趋势,为耐药结核病的预防及治疗提供参考依据。方法对2015-2018年本院门诊、住院病人,共9050例结核分枝杆菌的一线和二线抗结核药物耐药情况进行回顾性分析。结果:四年中,本院结核菌培养的阳性率有所上升,但是总体耐药率基本不变(平均35.03%)。单耐药的耐药率有所下降(X²=13.76,P=0.003),而耐多药和一线4种耐药的耐药率有所上升(耐多药X²=19.84,P<0.001;一线4种耐药X²=18.97,P<0.001)。异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、利福平、阿米卡星和丙硫异烟胺的耐药率都有所上升(分别为X²=12.57,P=0.006;X²=17.02,P=0.001;X²=13.68,P=0.003;X²=25.60,P<0.001;X²=12.82,P=0.005;X²=11.19,P=0.011)。结论单耐药减少,但耐多药...