邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠甲状腺独特上调和下调基因的检测

我们以往的研究一再发现,荷瘤小鼠在肿瘤发生后,会自发形成证候及其演变,早期以邪毒壅盛证、气虚证多见,且发现邪毒壅盛证动物预后差,带瘤生存时间短.鉴于学术界以往的研究观察到中医证候的形成与甲状腺密切相关,那么,邪毒壅盛证发生时,甲状腺是否存在独特的基因表达特征,是否与该证候形成有关?因此,我们通过业已建立的小鼠四诊工作站及其系列标准[1-2],对H22荷瘤小鼠进行辨证,筛选出早期邪毒壅盛证、气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证等4个常见证型,继而采用GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术对以上各证候荷瘤小鼠甲状腺等组织的基因进行了检测,本文重点报道邪毒壅盛证甲状腺独特上调与下调且表达量较高的基因.     

荷瘤小鼠早期邪毒壅盛和气虚证睾丸下调的基因

目的:观察H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛和气虚证睾丸组织一致下调的基因。方法:采用荷瘤小鼠标准化四诊和辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和早期气虚证睾丸组织基因表达谱的差异,重点关注早期阶段2个证候一致下调且表达量较大的基因。结果:筛选出早期邪毒壅盛和气虚证一致下调的基因共150个,其中有11类可以简单归类的基因;气虚与邪毒壅盛证这些基因的表达量差异不大,前者略高于后者;中晚期荷瘤小鼠这些基因表达接近正常对照组,甚至上调。结论:肿瘤发生的早期睾丸基因改变以下调为主,一些基因涉及精子发生,提示荷瘤小鼠生殖受到影响;鉴于两个证候这些基因表达的差异不大,及中晚期表达有增加趋势,提示这些基因下调可能与肿瘤早期应激有关;多数基因在睾丸组织中的功能还不清楚,提示有大量探索工作。     

不同证候荷瘤小鼠睾丸差异表达基因的特征

目的：观察荷瘤小鼠肿瘤发生后不同阶段4个常见证候睾丸独特上、下调的基因。方法：采用荷瘤小鼠及其标准化四诊与辨证方法,及GeneChip Mouse Exon ST 1.0 Array等技术,检测早期邪毒壅盛证及气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证睾丸基因的差异表达,重点关注那些表达较高的基因。结果：共捡出独特上调和下调的基因28个,其中有5个基因在不同证候中上下调不一致。肿瘤发生后早期邪毒壅盛证上调的基因8个：Abpg、Pip、Muc10、Car6、2310057J18Rik、K1k1b3、K1k1、Wfdc12,下调的基因5个：Spcs1、Dtx3、Rasa3、Sec1113、F5;早期气虚证上调的基因4个：Gpx5、Wbp5、Lcn5、Ap1s2,下调的基因1个：K1k1b26;中期阳气虚证无上调基因,下调基因3个,分别为K1k1b27、Spag5、Gpx5（在早期气虚证上调）;中晚期气阴阳虚证上调基因2个,分别为Saa3、S100a8,下调基因5个;Abpg、Pip、Muc10、Car6、Cuzd1（前4个在邪毒壅盛证上调）。结论：荷瘤小鼠在早期阶段,邪毒壅盛证与睾丸基因表达的紊乱关系较为密切;中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证睾丸基因以下调为主,提示中、晚期虚实夹杂证的荷瘤小鼠其睾丸功能下降。     

邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织基因的表达特征研究

目的揭示H22荷瘤小鼠邪毒壅盛证肿瘤组织基因表达的特征。方法采用GeneChipMouseExon1．0STArray等技术及芯片分析方法,观察H22荷瘤小鼠邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异。结果筛选到邪毒壅盛证独特性高表达的基因32个,其中包括Tete3、Phf7、Ldhc等参与睾丸发育、精子或卵子发生的基因22个,Adipoq、Nream、Tnfaip6等与肿瘤有关的基因4个,以及Atp8b3、Pnpla3、Retn等其他功能的基因6个。筛选到邪毒壅盛证独特性低表达的基因2个,有Cort和LOC668417。结论邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量独特性表达的基因,可能是该证候与其他证候区别的内在特征。     

荷瘤小鼠常见证候在神经-内分泌-免疫网络组织基因转录的特征

目的:揭示邪毒壅盛证、气虚证、阳气虚证、气阴阳虚证等4个同病异证荷瘤小鼠在神经-内分泌-免疫网络组织差异转录基因的总体特征。方法:对2006和2009年2批实验所检测以上4个证候及正常对照小鼠下丘脑、垂体、肾上腺、睾丸、胸腺、脾脏等60张芯片,近100万个核心基因进行分析,观察其一致性上调或下调的基因数与量的特征。结果:肿瘤发生后脾脏、胸腺、睾丸等组织基因一致性差异表达的数量大,其次是垂体和肾上腺,与疾病的关系密切;早期气虚证荷瘤小鼠突出表现为下丘脑基因表达趋于活跃;而同期的邪毒壅盛证荷瘤小鼠则突出表现为肾上腺基因表达趋于抑制,这可能与该证候荷瘤小鼠预后差有关。结论:荷瘤小鼠同病异证在神经-内分泌-免疫网络组织转录组方面有其特征性的物质基础。     

荷瘤小鼠虚证、实证垂体基因表达的差异

目的:揭示荷瘤小鼠实证与虚证垂体基因表达的差异.方法:采用四诊计量检测方法及计量辨证方法,运用GeneChipMouseExon1.0 STArray等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候垂体基因表迭的差异,重点关注那些表达量大、差异显著的基因.筛选出邪毒壅盛证较其他三个证候一致上调或下调的基Igl.结果:筛选出邪毒壅盛较其他三证一致上调的基因121个.介绍了邪毒壅盛证芯片读数大于1500的9个基因:Gabra6、DOH4S114、Ales2、Pvalb、Plpl、Itprl、Narg2、LOC627016、Gpm6b;一致下调的基因340个.介绍了正常小鼠芯片读数大于1500的21个基因:Abpg、Pip、Dlkl、Car6、Eif3s5、Gnb2、Pcskln、Aplpl、S1c22a17、Dnpep、Rnfl87、IOC639100、Rablb、Aldh2、Pten、Tapbp、2310044H10Rik、Cxxc5、Gamdl、Renl、Lrpll.结论:H22荷瘤小鼠的实证与虚证.其垂体基因存在大量的表达差异.其中部分可能是实证与虚证的标志基因.     

气虚证H22荷瘤小鼠甲状腺独特上下调基因的表达特征

目的：揭示荷瘤小鼠气虚证甲状腺基因表达的特征。方法：采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,应用GeneChip Mouse Exon1.0STArray等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候甲状腺基因表达的差异,重点关注早期气虚证上下调且表达量高的基因。结果：气虚证荷瘤小鼠甲状腺独特上调基因有33个,其中表达较高的基因6个,分别为Mta2d1、Comd3、Ucp1、Psmc6、LOC665964、Cyp2j11;独特下调的基因有31个,其中正常组表达较高的基因有5个,分别为Lcn2、Arntl、Mansc1、Hk1、Rpl29。结论：肿瘤发生后,H22荷瘤小鼠甲状腺存在大量的基因表达改变,其中早期气虚证独特上调或下调基因,可能与气虚证本质有关。     

H22荷瘤小鼠肿瘤发生后睾丸表达改变显著的基因

目的:探讨H22荷瘤小鼠肿瘤发生后睾丸基因表达谱改变的特征。方法:采用荷瘤小鼠标准化四诊及辨证方法,以及Gene Chip Mouse Exon1.0 STArray等技术,检测H22荷瘤小鼠睾丸组织早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证3个阶段4个证候睾丸基因表达谱的差异,重点关注肿瘤发生后一致上调或下调明显且表达量大的基因。结果:肿瘤发生后三个阶段一致上调的基因5个;一致下调的基因12个,其中7个与性激素和生殖有关;早期上调、中期和中晚期下调的基因1个;早期和中期上调、中晚期下调的基因3个。在这些基因中,Saa3在晚期气阴阳虚证表达上调了近60倍,Abpg、Pip、Car6在早期邪毒壅盛证表达上调了40~80倍,值得关注。结论:肿瘤发生后荷瘤小鼠睾丸基因表达的改变以下调为主,性激素合成与生殖受到影响;一些表达显著改变的基因值得进一步研究。     

乳酸脱氢酶C4在早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织中的表达及意义

目的探讨乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)在邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织的表达水平及其意义。方法采用Affy-metrix Gene Chip Mouse Exon 1.0 ST Array及其方法检测乳酸转运和氧化相关基因在H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异,芯片重复两次;并采用实时荧光定量PCR对两种高乳酸亲和力的脱氢酶基因Ldhb和Ldhc在各种证候中的表达量进行检测。结果乳酸转运相关基因的表达要高于氧化相关基因,尤其以H22接种后早期最明显;Ldhb基因的表达在H22接种后早期、中期和晚期变化不明显,而Ldhc基因在H22接种后早期气虚、中期和晚期的表达也不明显,且与Ldhb表达量相近,但它在早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织中表达量显著升高。结论在荷瘤小鼠肿瘤组织中,尤其是H22接种后早期,肿瘤细胞产生的乳酸作用不仅在于氧化产能;LDH-C4可能代替LDH-B4参与了早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织缺氧肿瘤细胞的代谢拯救途径。     

不同证候H22荷瘤小鼠肿瘤ABC转运蛋白家族基因转录特征

目的:观察不同证候H22荷瘤小鼠肿瘤组织ABC转运蛋白家族基因表达的特征。方法:对来源于早期邪毒壅盛和单纯气虚、中期阳气虚和中晚期气阴阳虚四种证候小鼠H22肿瘤组织4张Affymetrix GeneChip Mouse Exon 1.0 STArray数据标准化处理后,筛选其中的ABC转运蛋白基因进行差异分析。结果:从芯片中共筛选出与ABC转运蛋白有关的基因47个,以邪毒壅盛小鼠肿瘤基因转录最活跃,气虚次之,阳气虚最低;四种常见证候间共有25个基因转录具有明显差异;Abce1和Abcf1等7个基因中在四种常见证候肿瘤中转录水平最高。结论:Tap1(Abcb2)和Abcd2等6个高表达基因可能是邪毒壅盛型小鼠肿瘤增长快的重要因素;不同证候荷瘤小鼠肿瘤组织中的ABC转运蛋白基因转录既存在一定共性又存在很大差异,进一步证明了H22荷瘤小鼠证候客观存在的物质基础,为中医辨证论治提供分子依据。