银杏叶提取物对大鼠缺血脑组织的保护作用研究

为探讨银杏叶提取物(GBE)对缺血后脑组织的保护性机制，2002年7月我们进行了相关动物实验。现报告如下。     

不同脑温状态地西泮对大鼠脑缺血再灌注氧自由基的影响

目的观察轻度高温、常温、亚低温状态下,地西泮对大鼠脑缺血组织SOD、GSH-Px、GSH及MDA的影响。方法建立大鼠可复流大脑中动脉闭塞模型,诱导目标脑温,分别测定各组SOD、GSH-Px、GSH及MDA含量。结果①与常温假手术组比较,常温脑缺血对照组SOD、GSH-Px、GSH均显著降低（P〈0.001）,MDA显著增高（P〈0.001）。②与常温脑缺血对照组比较,常温地西泮组GSH-Px、GSH均显著增高（P〈0.01-0.001）,MDA显著降低（P〈0.001）。③与常温地西泮组比较,轻度高温地西泮组SOD、GSH-Px、GSH均显著降低（P〈0.001）,MDA显著增高（P〈0.001）;亚低温地西泮组SOD、GSH-Px、GSH均显著增高（P〈0.001）,MDA显著降低（P〈0.001）。结论①常温脑缺血组织SOD、GSH-Px、GSH降低,MDA增高,可能对缺血脑组织产生不利影响。②脑缺血时给予地西泮,在轻度高温状态下不能增高SOD、GSH-Px、GSH水平及不能降低MDA水平,在常温状态下可增高GSH-Px、GSH水平及降低MDA水平,在亚低温状态下可进一步增高SOD、GSH-Px、GSH水平及降低MDA水平。提示轻度高温状态下地西泮可能不具有抑制脑缺血再灌注损伤的作用,常温状态下地西泮可能具有抑制脑缺血再灌注损伤的作用,亚低温状态下地西泮可能具有显著的抑制脑缺血再灌注损伤的作用。     

银杏叶提取物对实验性2型糖尿病大鼠脑组织的保护作用

目的 观察银杏叶提取物对实验性2 型糖尿病大鼠脑损伤的保护作用.方法 采用小剂量链脲佐菌素加高脂高热量饲料喂养的方法建立Wistar 大鼠2型糖尿病模型,成模后治疗组按8 mg/kg/d剂量腹腔注射银杏叶提取物,对照组及糖尿病组腹腔注射等容积生理盐水,每日1次,连续8 w.检测血糖、血胰岛素、血内皮素(ET)、脑组织中ET含量及治疗前后脑组织内ET的表达.结果 治疗组能明显降低大鼠血糖、血胰岛素及血浆、脑组织中ET含量,RT-PCR检测结果显示ET mRNA表达明显下调.结论 银杏叶提取物对实验性2 型糖尿病大鼠脑组织损伤具有一定保护作用,可能与其对胰岛的修复及清除自由基,抗脂质过氧化作用及保护微血管,增加脑组织血供有关.     

银杏叶提取物对大鼠不同状态胃动力的影响及其机制

目的 探讨银杏叶提取物(Egb)对正常状态和冷束缚应激引起的胃肠功能紊乱的情况下大鼠胃动力的影响及可能机制.方法 采用冷束缚应激的方法建立胃肠功能紊乱模型,应用葡聚糖蓝2000(DB-2000)作为染料观察Egb在正常及应激状态对胃排空速率的影响;并利用比色法观察大鼠胃组织和血浆中一氧化氮(nitricoxide,NO)含量的变化.结果 在正常状态下,Egb对胃排空速率无显著性影响.冷束缚应激可导致大鼠胃排空减慢(P<0.05).Egb干预可明显拮抗应激引起的胃排空减慢(P<0.05).Egb对正常大鼠胃组织和血浆中NO含量没有影响;冷束缚应激可导致胃内NO含量降低(P<0.01),而血浆中NO升高(P<0.01).Egb可降低应激引起的血浆NO含量的升高(P<0.01).结论 Egb在不同状态下对大鼠胃动力的影响有所不同,具有正相调节作用.NO可能参与了Egb对大鼠胃动力的调节作用.     

银杏叶提取物对大鼠肝纤维化Activin A表达的影响

目的研究银杏叶提取物(EGB)对肝纤维化大鼠Activin A表达的影响及抗纤维化作用。方法2004-10~2005-4武汉大学人民医院消化内科将30只雄性大鼠随机分为3组:正常组、模型组及EGB干预组。模型组及EGB干预组给予四氯化碳(CCl4)腹腔注射造模,干预组同时每天给予EGB灌胃。8周后处死动物,取肝脏液氮冻存及甲醛固定,行HE染色,免疫组化及RT-PCR检测Activin A的表达。结果光镜下组织学检查纤维化分级EGB干预组低于模型组(P<0·05),免疫组化及RT-PCR检测Activin A的表达EGB干预组低于模型组(P<0·01)。结论EGB对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有良好的防治作用,作用机制可能与肝组织Activin A表达减少有关。     

银杏叶提取物对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究银杏叶提取物对抗视网膜缺血再灌注损伤的作用及机制。方法实验动物随机分为正常对照组(C)、缺血组(I)、缺血再灌注组(IR组)及银杏叶处理组(GBE组)。复制大鼠视网膜缺血及缺血再灌注模型,GBE组给予银杏叶提取物100 mg/kg,免疫组化染色方法检测c-fos和c-jun表达,TUNEL染色检测细胞凋亡。结果各组动物c-fos表达阴性。对照组和缺血组c-jun呈阴性表达,IR组和GBE组视网膜c-jun表达阳性。IR组c-jun和TUNEL双阳性细胞所占比例较大。GBE组TUNEL阳性细胞明显减少,双阳性染色细胞比例降低。结论银杏叶提取物能够对抗缺血再灌注诱导的视网膜细胞损伤,其抗损伤机制与调节c-jun的表达有关。     

地西泮对大鼠不同脑温脑缺血组织γ-氨基丁酸的影响

目的研究轻度高温、常温、亚低温状态下,地西泮对大鼠脑缺血组织γ-氨基丁酸（GABA）的影响。方法建立大鼠可复流大脑中动脉闭塞模型,诱导目标脑温,用HPLC荧光法检测脑缺血组织GABA含量。结果与常温假手术组比较,常温脑缺血对照组GABA无显著改变,而常温地西泮组GABA显著增高（P〈0.01）。与常温脑缺血对照组比较,常温及轻度高温地西泮组GABA无显著改变,而亚低温地西泮组GABA显著增高（P〈0.001）。与常温地西泮组比较,轻度高温地西泮组GABA无显著改变,而亚低温地西泮组GABA显著增高（P〈0.001）。结论常温脑缺血时,GABA无显著增高,可能对缺血脑组织产生不利影响。在常温及轻度高温状态下给予地西泮,均不能显著增高缺血脑组织GABA水平,且GABA水平随脑温的升高而稍有降低,没能显示出地西泮有“抑制性保护”作用,其“抑制性保护”作用似乎有限。亚低温状态下给予地西泮,可显著增高缺血脑组织GABA水平,显示出地西泮有“抑制性保护”作用,因此亚低温可能有利于增强地西泮的神经保护作用。     

银杏叶提取物对大鼠肝纤维化Activin A表达的影响

目的研究银杏叶提取物（EGB）对肝纤维化大鼠Activin A表达的影响及抗纤维化作用。方法2004-10-2005-4武汉大学人民医院消化内科将30只雄性大鼠随机分为3组：正常组、模型组及EGB干预组。模型组及EGB干预组给予四氯化碳（CCl4）腹腔注射造模，干预组同时每天给予EGB灌胃。8周后处死动物，取肝脏液氮冻存及甲醛固定，行HE染色，免疫组化及RT-PCR检测Activin A的表达。结果光镜下组织学检查纤维化分级EGB干预组低于模型组（P〈0．05），免疫组化及RT-PCR检测Activin A的表达EGB干预组低于模型组（P〈0．01）。结论EGB对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有良好的防治作用，作用机制可能与肝组织Activin A表达减少有关。     

银杏叶提取物对大鼠结肠炎的治疗效果及机理研究

目的观察银杏叶提取物对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的大鼠结肠炎的影响,探讨银杏叶提取物对结肠炎的治疗作用和可能机制。方法将大鼠随机分为3组:正常对照组、DSS模型组和治疗组(DSS 银杏叶提取物)。建立大鼠急性DSS结肠炎模型。治疗组在饮DSS水的同时给予银杏叶提取物灌肠至实验结束。每天观察各组大鼠疾病活动指数(DAI),并在实验结束后ELISA法检测各组大鼠血清及炎症肠段细胞因子TNFα、IL-6表达,TUNEL法检测结肠细胞的凋亡,RT-PCR法检测炎症肠段fas、fasL、bcl和bax的表达。结果自实验第4天开始,治疗组DAI明显低于DSS组。实验结束后,治疗组血清和炎症肠段中TNFα浓度分别为91.53±47.59pg/ml和182.06±115.86pg/ml,较DSS组明显降低(565.32±200.01pg/ml,735.11±205.45mg/ml,P<0.01)。治疗组血清和炎症肠段中IL-6的浓度分别为452.34±159.65pg/ml、559.38±100.77pg/ml,也较DSS组显著降低(939.29±163.93pg/ml、943.41±145.80mg/ml,P<0.01)。治疗组结肠细胞凋亡指数明显低于DSS组(P<0.05),其fas、fasL表达分别为0.049±0.072、0.031±0.085,与DSS组比较显著性降低(0.62±0.73、0.43±0.51,P<0.05);而bcl和bax表达在两组间比较无显著性差异(0.015±0.020vs0.013±0.014,0.23±0.31vs4.02±0.43,P>0.05)。结论银杏叶提取物灌肠能抑制大鼠结肠炎的炎性细胞因子的分泌,通过fas/fasL途径抑制结肠细胞的凋亡,减轻肠道炎症反应,减少肠黏膜的损伤。     

银杏叶提取物对局灶性脑缺血大鼠脑组织炎症信号TLR4表达的影响

目的 观察银杏叶提取物对局灶性脑缺血(FCI)大鼠脑组织Toll样受体4基因(TLR4)、蛋白表达的作用.方法 参照Longa等方法制造FCI大鼠模型,将60只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、和银杏叶提取物组,分别采用RT-PCR法及免疫组化法检测缺血灶周围脑组织TLR4基因、蛋白表达水平.结果 模型组TLR4基因相对表达均明显高于假手术组(P＜0.01) ;银杏叶提取物组TLR4相对表达量明显低于模型组(P＜0.01) ;TLR4蛋白表达类似于基因相对表达.结论 模型组大鼠缺血灶周围脑组织TLR4基因高表达,银杏叶提取物对TLR4表达有抑制作用,这可能是其抗炎作用的机制之一.     

银杏叶提取物对脑血栓栓塞大鼠血浆溶血磷脂酸和磷脂酸的影响

目的:观察大鼠脑血栓形成后血浆溶血磷脂酸(LPA)和磷脂酸(PA)浓度的变化,以及银杏叶提取物(GBE)对其影响。方法:采用颈内动脉直接插管注入凝血酶建立大鼠脑血栓栓塞模型,并预防性给予GBE,观察大鼠脑血栓栓塞后LPA和PA的水平。结果:与正常对照组相比,实验对照组血浆LPA和PA水平较高(P<0.05);预防性给予GBE可明显降低血浆LPA和PA水平,而安慰剂组与实验对照组相比无差异。结论:大鼠脑血栓栓塞后血浆LPA和PA水平有不同程度增高;预防性给予GBE可降低血浆LPA水平,同时还可抑制血浆PA水平的增高。     

IL—6对局灶性脑缺血再灌流鼠纹状体损害的影响

目的 为了研究鼠纹状体缺血损伤时ＩＬ－６对ＮＯＳ和ＦＯＳ阳性神经元表达的影响。方法 在２４只Ｗｉｓｔａｒ大鼠乙灶性大脑中动脉缺血再灌流模型的基础上分组,即经侧脑室事先注入ＩＬ－６的实验组（ｎ＝１６）,单纯制备再灌流的对照缄（ｎ＝８）。分别进行ＮＡＤＰＨ脱氯反应和ＦＯＳ免疫组化染色。观察了缺血再灌流１小时、２小时、４小时、和小时纹状体处一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳笥神经元及ＦＯＳ阳性神经元数量的变化。结     

Acute Ethanol Effects on Focal Cerebral Ischemia in Fasted Rats

The effects of acute ethanol intoxication were investigated in a rat model of unilateral middle cerebral artery occlusion. Groups of 5 to 8 male Sprague-Dawley rats were subjected to 4 hr of left middle cerebral artery occlusion. All groups were deprived of food overnight and were pretreated intraperitoneally with 5% dextrose solution (10 ml/kg), 20% ethyl alcohol in 5% dextrose solution (2 g/kg), or 30% ethyl alcohol in a 5% dextrose solution (3 g/kg) 1 hr before middle cerebral artery occlusion. Regional cerebral blood flow during ipsilateral occlusion was ˜9.1 to 10% of baseline in all groups. The mean % brain water content in control, 2 g/kg ethanol-treated groups, and 3 g/kg ethanol-treated groups were: in the ischemic core–81.6, 81.2, and 82.4; intermediate zone–80.5, 80.6, and 81.7; and outer zone–79.7, 79.7, and 80.8, respectively. Brain Na⁺ and K⁺ content in the three groups was related to water content, but much greater with ethanol pretreatment. The water content of the intermediate zones in the 3 g/kg ethanol-treated animals was significantly greater than in the control ( p < 0.01 and 0.001) and the 2 g/kg ethanol-treated groups. One-way analysis of variance indicated a significant dose–effect relationship in which the lower dose of ethanol tended to reduce ischemic core water content, and the larger dose increased ischemic core water, compared with the control. None of the overnight fasted groups had any significant hyperglycemia. The group given 3 g/kg ip ethanol 1 hr before had exacerbated edema formation with a mean whole blood level of ethanol of ˜230 mg/dl. The neurotoxic effects of high concentrations of ethanol were unrelated to any change in plasma glucose concentrations.     

Acute Ethanol Effects on Focal Cerebral Ischemia in Nonfasted Rats

Focal cerebral ischemia was induced in a rat model of middle cerebral artery occlusion. Three groups of adult male Sprague-Dawley rats, given food and water ad libitum, were subjected to 4 hr of middle cerebral artery occlusion. All were given vehicle control and ethanol pretreatments intraperitoneally 1 hr before. Mean ipsilateral brain water content in the control, 2 g/kg ethanol, and 2 g/kg ethanol + insulin-treated groups showed ischemia core: 81.1%, 82.5%, and 80.9%; intermediate zone: 81.0%. 81.9%, and 80.3%; and outer zone: 80.3%, 81.3%. and 80.1%, respectively. Brain Na⁺ and K⁺ content in these groups paralleled the water content. In addition to significantly ( p < 0.05) more brain edema, the 2 g/kg ethanol-treated animal group also had significant hyperglycemia. In contrast, the 2 g/kg ethanol + insulin-treated animals were normoglycemic and had ischemic, intermediate, and outer zone Na⁺, K⁺, and CI⁻ levels comparable with the control group ( p > 0.05). These results stress the importance of measuring and controlling plasma glucose levels in the in vivo studies of the neurotoxic effects of acute ethanol.     

阿司匹林预处理对大鼠局灶性脑缺血的神经保护作用

目的:探讨阿司匹林预处理对缺血性脑损伤的保护机制及最佳剂量。方法:将36只健康雄性 SD大鼠,随机分为假手术组(n=6)、缺血对照组(n=6)和阿司匹林预处理组(n=24)。阿司匹林预 处理组分为5、15、45和150mg/kg4个剂量组(每组6只)。以线栓法闭塞大脑中动脉制作脑缺血模 型。24h后进行神经功能评分并断头取脑制备组织匀浆测定一氧化氮合酶(NOS)活性。结果:阿司 匹林5mg/kg组和15mg/kg组的神经功能评分优于缺血对照组(P<0.01);NOS活性低于缺血对照 组(P<0.01)。阿司匹林45mg/kg组和150mg/kg组在神经功能评分及NOS活性方面与缺血对照 组无显著差异(P>0.05)。结论:阿司匹林预处理对随后的缺血性脑损伤具有保护作用,其机制可能 是抑制NOS活性,减少NO释放。最佳剂量为5mg/kg。     

银杏叶提取物脑保护液对兔脑的实验研究

目的探讨深低温停循环（DHCA）期间行间断顺行灌注含银杏叶提取物（GBE）的保护液对兔脑的保护作用和机制。方法纯种新西兰大白兔20只,随机分为DHCA组和GBE组,每组10只,建立体外循环模型,DHCA组在DHCA 90min内不做处理,GBE组在DHCA 30min、60min时顺行灌注一定量脑保护液。结果DHCA组静脉氧分压（PvO2）、脑氧摄取率（CEO2）在DHCA期间下降明显,在DHCA 90min降至最低,静脉二氧化碳分压（PvCO2）逐渐升高;GBE组PvO2、CEO2在DHCA 30min时降至最低,灌注脑保护液后升高,并保持一定水平,PvCO2在DHCA期间变化不明显;DHCA 60min、90min时两组间有统计学意义（P〈0.05）。乳酸含量和脑组织含水量比较两组间有统计学意义（P〈0.05）。结论深低温停循环间断灌注银杏叶提取物脑保护液能较好地向脑组织提供氧,减少停循环及恢复循环后颈内静脉血乳酸含量,减少脑组织含水量,减轻长时间DHCA造成的脑组织损伤。     

银杏叶提取物对兔动脉粥样斑块Bcl-2和Bax表达的影响

目的 观察银杏叶提取物对家兔动脉粥样斑块Bcl-2和Bax表达的影响.方法 将40只家兔随机分为正常对照组、模型组、立普妥组和银杏叶提取物组,对比观察各组家兔斑块面积大小及斑块Bax和Bcl-2的表达.结果 银杏叶提取物组和立普妥组动脉粥样斑块面积低于模型组(P<0.01);免疫组织化学染色显示,模型组平滑肌细胞内Bcl-2和Bax的阳性细胞表达与正常对照组相比增高(P<0.05),立普妥组和银杏叶提取物组平滑肌细胞、泡沫细胞Bax的阳性细胞表达下调,Bcl-2的阳性细胞表达轻度上调,银杏叶提取物组Bax/Bcl-2降低.结论 银杏叶提取物可通过下调Bax/Bcl-2表达而抑制细胞凋亡,减少内皮细胞受损,从而抑制动脉粥样硬化的发生.     

高血压对局部脑缺血及缺血后再灌流梗塞灶的影响

目的观察脑缺血后再灌流对脑梗塞灶的影响。方法用氯化三苯四氮唑（ＴＴＣ）染色技术结合电子计算机图像分析系统定量测定肾血管性高血压大鼠（ＲＨＲ）和ＳＤ大鼠（ＳＤＲ）局部脑缺血及脑缺血后再灌流梗塞灶体积。结果发现持续缺血组及缺血后再灌流组ＲＨＲ的梗塞体积分别为２１８．７３±３１．１２ｍｍ３和２０１．２９±３３．７１ｍｍ３而ＳＤＲ持续缺血组及缺血后再灌流组分别为１３１．６１±２０．８８ｍｍ３和１１９．４０±２７．１４ｍｍ３，ＲＨＲ和ＳＤＲ梗塞体积均存在显著差异。结论长期慢性高血压引起的脑侧支循环障碍对脑缺血及缺血后再灌流梗塞灶有重要影响。     

复方仙灵脾注射液对大鼠局灶性脑缺血血流变和自由基的影响

目的 :观察具有补肾益气、活血通络功效的中药复方仙灵脾注射液对脑缺血性大鼠模型的体重、神经症状、被动性条件反射、血液流变性、血小板聚集、自由基代谢、脑梗塞面积的指标影响。方法 :采用结扎大鼠右侧大脑中动脉 (RightMiddleCerebralArteryOcclusion ,R -MCAO )造成局灶性脑缺血模型。将SD大鼠 60只 (雌雄各半 ,6月龄 )随机分为 6组 ,每组 10只 ,即假手术组、模型组、川芎嗪对照组、复方仙灵脾大、中、小剂量组。结果 :复方仙灵脾注射液能明显改善MCAO大鼠神经学症状 ,显著延长被动性条件反射潜伏期 ,减少错误次数 ,降低全血粘度 ,降低血小板聚集率 ,使血浆SOD升高 ,MDA下降 ,缩小脑梗塞面积等。结论 :复方仙灵脾注射液在改善血液流变性 ,增加脑血流量的同时 ,又能清除自由基 ,改善脑功能 ,减轻急性脑梗塞时缺血损伤。用于治疗局灶性脑缺血疗效优于川芎嗪注射液