Apo A-对LDL受体的表达作用

Brown等证明细胞LDL受体的表达是受细胞内外环境LDL胆固醇浓度的调控,当细胞在缺乏脂蛋白血清(LDS)中培养,LDL受体表达加强。因此,体外观察脂蛋白受体一直沿用LDS方法。作者曾报导国产人清蛋白(HSA)代替LDS,观察到LDL受体作用,并进一步比较了HSA、LDS、BSA(牛清蛋白)的作用,发现HSA>LDS>BSA,经鉴定发现HSA试剂中无脂质而含Apo A-I,BSA有脂质而无Apo A-I。提示在缺脂前提下,Apo A-I可能加强LDL受体表达作用,这种作用是否由于Apo A-I有接纳细胞内胆固醇外流的功能,为此,作者同时观察了不同量的Apo A-I对细胞内胆固醇外流及LDL受体表达作用。     

高脂血清对易感和不易感动脉粥样硬化动物的动脉平滑肌细胞生长的影响

体外培养家兔和树鼩为主动咏平滑肌细胞,分别观察各自的高脂血清对平滑肌细胞生长的影构,以~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H—TdR)掺入细胞DNA,用液体闪烁计数器计数。结果表明:兔高脂血清对兔平滑肌细胞生长有显著的增殖作用,而树鼩高脂血清对树鼩平滑肌细胞的生长未见显著的促进增生作用。     

培养液中血清的含量对原代兔婴肾细胞生长的影响

组织培养技术应用广泛,但是组织培养成本高,特别是小牛血清,即价格昂贵又日趋短缺。培养原代兔婴肾细胞通常用含10%小牛血清的199培养液,培养2天左右换液,4～7天长成单层细胞。我们在实践中观察到细胞贴壁和生长速度似乎与培养液中血清含量关系密切,特进行本实验,探索节省血清的培养方法。按常规取出兔婴双侧肾脏,将肾皮质组织放入10 ml小瓶中,剪成约1mm~3大小的碎块,加入0.25%胰酶-0.02%EDTA液,于37℃消化20～30分钟。然后倾去消化液,用Hank′s液洗一次,加2～3 m1培养液,以毛细吸管将碎块吹打成乳糜状,再加培养液至10ml,静置数分钟,待未吹散的组织块沉降后,收集上部的细胞悬液。按此方法重复2次后,弃去沉降物,将几次收集的细胞悬液混合均匀,计数。培养采用含15%小牛血清的199培养液,其中含100u/ml青霉素和10ug/m1的链霉素。用该生长液把混合均匀的细胞悬液稀释     

川芎嗪对动脉平滑肌细胞形成粥样硬化的影响

目的 :探讨川芎嗪对动脉平滑肌细胞形成粥样硬化的防治机制。方法 :以高脂高胆固醇 (Ｃｈｏ)膳食制备大白兔高脂高Ｃｈｏ血清。贴块培养法进行ＶＳＭＣｓ原代培养及传代。原代培养到第 9～ 12天 ,组织块周围的细胞生长融合成片并铺满瓶底时 ,进行ＶＳＭＣｓ传代培养。实验选用第 3代传代培养的ＶＳＭＣｓ。实验分为正常组用含双抗和胎牛血清的ＲＰＭＩ16 40培养液培养 ,高脂组用含双抗和高脂血清的ＲＰ ＭＩ16 40培养液培养 ,秋水仙碱组用含双抗和高脂血清的ＲＰＭＩ16 40培养液加入秋水仙碱培养 ,川芎嗪低、中、高剂量组用含双抗和高脂血清…     

~3H-TdR掺入法检测SAC诱导全血B细胞转化的实验条件分析

<正> B淋巴细胞转化试验可反映B细胞识别抗原并转化为母细胞的能力。本文报道用~3H-TdR掺入法对含A蛋白的葡萄球菌菌体(SAC)诱导人全血B细胞转化试验的最适实验条件及有关影响因素进行分析。 材料和方法 取肝素抗凝静脉血0.1ml加含SAC(卫生部上海生物制品研究所产品)1mg/ml的1640培养液3ml,作为实验管。另取0.1ml全血加入3ml不含SAC的培养液中,作为对照管,每组二份。置37℃培养24小时。收     

脂质体(Apo A-Ⅰ:PC)的制备、鉴定及其功能研究

Apo A-I是血清HDL的主要载脂蛋白成分,它对脂蛋白胆固醇代谢起重要作用。它可激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶,体外细胞培养可以观察到Apo A-I能接纳细胞内胆固醇外流,临床流行病学调查Apo A-I/Apo B比值高的人群少见冠心病,并认为Apo A-I可作为预测冠心病指标之一。我们曾观察到Apo A-I可使LDL受体表达加强,以上促使我们有兴趣制备脂质体(Apo A-I:PC),并观察它对细胞内胆固醇外流及LDL受体表达作用。     

农吉利碱对HeLa细胞系的形态学影响

我们观察了农吉利碱对HeLa细胞系形态学的影响。HeLa细胞培养于含有RPMI 1640、10％小牛血清及青、链霉素的培养液中(pH 7.2),并置37℃恒温培养箱培养。实验时将细胞接种于培养瓶内,同时置入培养瓶中1张盖片。在接种后的第3天,将其分为不加药的对照组和加药的实验组。实验组按加药的浓度不同,再分为每ml培养液含农吉利碱100μg、300μg、500μg 3组,每组各2瓶。于加药后的第3天,由培养瓶内取出盖片,经FAA     

体外培养拟胚体条件的探讨

目的: 探讨体外拟胚体培养中获得优质拟胚体的条件。方法:分别使用6种EB培养液:(1)添加5％胎牛血清;(2)添加10％胎牛血清;(3)添加15％胎牛血清;(4)添加20％胎牛血清;(5)添加25％胎牛血清;(6)添加20％胎牛血清和0.1 mmol/L β-巯基乙醇。将ES细胞复苏后直接作EB培养和传代后再作EB培养,观察拟胚体生长的情况,并对各培养液中的胚体形成率和活细胞比率使用SPSS统计软件包进行统计学分析。结果:20％胎牛血清浓度和β-巯基乙醇的EB培养液胚体形成率最高,与其他培养液比较,差异显著(P＜0.05),小胚体和结构松散胚体更多见于低血清浓度培养液,但各培养液中活细胞比率差异无显著。ES细胞复苏后经1代传代后作EB培养与复苏直接作EB培养,胚体形成率更高,差异显著(P＜0.05),而活细胞比率差异无显著。另外,观察中发现,充分摇动不仅能保证细胞悬浮培养,而且可以防止胚体过早分化。结论:提供足够细胞营养,使用传代后代细胞作EB培养以及悬浮培养是获得较好细胞活力拟胚体的重要保证。     

无/低血清条件下杂交瘤细胞系生长和McAb产生的研究

将3G1/3F8细胞培养于血清浓度为20％、10％、17.5％、5％、2％、1％、0％的RPMI-1640中测定细胞生长曲线和McAb产生曲线。观察血清浓度对细胞生长和McAb产生的影响。用6种无血清培养基对3G1/3F8细胞做适应性培养,活细胞数为对照组的9.5％～55％;McAb产量为81.8％～106.8％。经驯化培养3G1/3F8细胞能够在血清含量1％、5％的培养液生长传代,冻存复苏,活细胞数达到对照组的71.2％～98.2％;McAb产量为104％和108％。对不同血清浓度下接种密度对细胞生长和McAb产量的作用做了实验观察。     

脂质过氧化对血管内皮细胞源性生长因子分泌的影响

脂质过氧化对血管内皮细胞源性生长因子分泌的影响杨向红陈铁镇一、材料和方法（１）牛主动脉内皮细胞的培养：于无菌条件下取牛主动脉，以消化法进行内皮细胞的原代培养。培养液为含１０％小牛血清的ＤＭＥＭ培养液。第２～５代继代细胞用于实验。（２）脂质过氧化实验：...     

新生家兔主动脉旁体细胞的原代培养及神经生长因子的影响

已知神经生长因子(NGF)可以促进体外培养的肾上腺嗜铬细胞神经突起的生长。本实验观察了NGF对原代培养的新生家兔的主动脉旁体细胞的影响。每次取5～8只新生家兔的主动脉旁体,以胶原酶消化制备成游离细胞悬液。以含10％胎牛血清的DMEM作为培养液,细胞接种于涂有2层鼠尾胶原的24孔培养板内。用含不同剂量NGF的培养液培养:1.每ml培养液含200 ngNGF;2.每ml含100ng NGF;3.每ml含50ng NGF;4.     

含辛伐他汀药物血清对兔血管平滑肌细胞增殖的直接作用及意义

目的 :探讨辛伐他汀对体外培养兔血管平滑肌细胞增殖的影响及意义。方法 :16只雄性新西兰兔随机分为血清对照组和三个不同剂量的辛伐他汀亚组 (每日分别给予辛伐他汀 5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg) ,7天后采血并混合每组 4只兔血 ,无菌分离制备三亚组的辛伐他汀含药血清。采用内皮素 1(ET 1)刺激正常喂饲原代培养兔主动脉血管平滑肌细胞的方法 ,建立血管平滑肌细胞增殖模型。采用MTT及3H TdR法检测各组辛伐他汀含药血清对血管平滑肌细胞增殖的作用。结果 :与不含药的正常对照组相比 ,不同亚组辛伐他汀含药血清呈剂量依赖性抑制血管平滑肌细胞增殖 (P <0 .0 1～0 .0 5 )。结论 :兔口服辛伐他汀后的血清具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用     

HPD-红光对离体人胃癌MGC80-3细胞DNA合成和细胞杀伤作用

血卟啉衍生物(HPD)光敏作用有明确的杀伤肿瘤效应,其作用机制已有不少报导;我们在研究离体人肿瘤和正常细胞对[~3H]-HPD的摄取和存留的基础上,用液闪计数及细胞计数方法,测定HPD-红光对离体人胃癌MGC80-3细胞DNA合成和细胞杀伤作用。 MGC80-3细胞用小方瓶培养,每瓶接种1.5×10~5细胞,加2ml培养液(含15％小牛血清的Eagle液),细胞在37℃温箱培养16～18小时,以5μg/mlHPD处理30分钟、红光(波长6300A±,功率密度50mw/cm~2)照射5分钟,换含[~3H]-胸苷(1μcl/ml)培养液,继续培养,用液闪计数方法,测定5和30分钟及2、6、10、24、48、72小时标本中掺入[~3H]-胸苷的cpm值。为测定HPD-红光的细胞杀伤效应,经     

029 川芎嗪对动脉平滑肌细胞形成粥样硬化的影响

目的: 探讨川芎嗪对动脉平滑肌细胞形成粥样硬化的防治机制. 方法: 以高脂高胆固醇(Cho)膳食制备大白兔高脂高Cho血清. 贴块培养法进行VSMCs原代培养及传代. 原代培养到第9～12天, 组织块周围的细胞生长融合成片并铺满瓶底时, 进行VSMCs传代培养. 实验选用第3代传代培养的VSMCs. 实验分为正常组用含双抗和胎牛血清的RPMI1640培养液培养, 高脂组用含双抗和高脂血清的RPMI1640培养液培养, 秋水仙碱组用含双抗和高脂血清的RPMI1640培养液加入秋水仙碱培养, 川芎嗪低、中、高剂量组用含双抗和高脂血清的RPMI1640培养液分别加入20、 200、 2000 μg/ml川芎嗪培养. 结果: 川芎嗪能明显减轻高脂血清诱导培养VSMCs之组织形态和超微结构改变, 含胎牛血清培养基培养的VSMCs具有典型收缩表型的VSMCs形态和超微结构, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs为典型合成表型的VSMCs源性泡沫细胞形态和超微结构, 在含川芎嗪的高脂血清培养基中培养VSMCs的细胞形态界于泡沫细胞与VSMCs之间. 川芎嗪能明显影响高脂血清诱导培养VSMCs之迁移距离, 含胎牛血清培养基培养的VSMCs能作一定的运动而具有一定的迁移距离, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs的迁移距离增加, 而含秋水仙碱和川芎嗪培养基中VSMCs迁移距离降低. 川芎嗪能明显影响高脂血清诱导培养VSMCs之生长计数, 含10%胎牛血清培养基培养的VSMCs能分裂增生而具有一定的生长计数, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs的生长计数增加, 而含秋水仙碱和川芎嗪培养基中VSMCs的生长计数降低. 川芎嗪能明显影响高脂血清诱导培养VSMCs之分裂指数, 含10%胎牛血清培养基培养的VSMCs能作一定程度的分裂而具有一定的分裂指数, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs生的分裂指数增加, 而含秋水仙碱和川芎嗪培养基中VSMCs分裂指数降低. 结论: 川芎嗪能通过抑制的VSMCs表型转换, 迁移速率, 生长速度, 分裂指数, 荷脂过程和损伤过程等多个环节, 逆转高脂血清诱导培养VSMCs的粥样硬化样细胞病变.     

花青素对小鼠巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响

目的：研究植物化学物质花青素对小鼠巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响，探讨花青素促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流的分子机制。方法： 制备乙酰化低密度脂蛋白（AcLDL），以其负载小鼠腹腔巨噬细胞形成巨噬泡沫细胞，观察不同浓度花青素Cy-3-G和Pn-3-G对巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响以及调节胆固醇外流有关的基因过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）表达的情况。结果：AcLDL可促进胆固醇在巨噬细胞中大量蓄积，造成泡沫细胞的形成。花青素Cy-3-G和Pn-3-G能引起巨噬泡沫细胞内胆固醇的大量外流，并且增加PPAR-γ基因的表达。结论：花青素Cy-3-G和Pn-3-G促进胆固醇外流的作用与其增加PPAR-γ基因的表达有关。     

肺微血管内皮细胞原代培养方法的建立

目的建立大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法,观察细胞生长状态并鉴定细胞性质。方法 4~5周龄大鼠随机分成3组,无菌状态下剥除胸膜,将肺组织边缘剪成1 mm3的大小,贴入一次性培养瓶,分别用含肝素钠的DMEM完全培养液、RPMI1640完全培养液以及含原代内皮细胞培养特制添加剂的完全培养液培养,在倒置显微镜下观察细胞生长和形态,免疫荧光组织化学染色观察细胞CD31的表达。结果与2组对照组相比,采用含原代内皮细胞培养特制添加剂的完全培养液培养,获得的肺微血管内皮细胞数量多,纯度高。内皮细胞于24 h迁移出肺组织块,14 d左右汇合,呈多角形,以铺路石样镶嵌状排列生长。传代细胞呈长梭形,生长迅速,具有自发形成血管的倾向。细胞为CD31免疫反应阳性,证实其为内皮细胞。结论采用组织块贴壁法,选择原代内皮细胞培养特制添加剂以及优化分离过程,可以获得高纯度原代大鼠肺微血管内皮细胞。     

胆固醇缴活补体的初步研究

本工作主要观察含胆固醇的脂质体(Liposome)及结晶胆固醇在体外对血清补体的激活作用。正常人及正常兔血清和含胆固醇37.5％的脂质体保温37℃半小时后,血清总补体活性分别由66.16 u/ml及27.93 u/ml降低至36.24u/ml及8.31 u/ml(P值皆小于0.001),以同样方法观察了胆固醇脂质体对正常人血清C_3和C_4活性的影响,C_3和C4活性分别由14.66 u/ml和1:200下降至8.32 u/ml和<1:20,P值均小于0.0010以免疫扩散法测定C3含量则由77.6 u/ml降至60 u/ml(P<0.05),而且,脂质体中的葡萄糖释放率由25.5％升至61.8％,表明在补体激活的同时脂质体膜也遭到破坏。用结晶胆固醇代替胆固醇脂质体,观察其对正常人血清C_3的影响,C_3由不加胆固醇的18.77 u/ml降至10.71 u/ml(P值<0.001)。     

小牛血清和胎牛血清对Sf9细胞生长和重组蛋白表达影响的比较

目的：比较小牛血清和胎牛血清对Sf9细胞生长的影响以及两种血清条件下重组蛋白表达的差异，探讨小牛血清用于Sf9细胞培养和重组蛋白工艺化生产的可行性。 方法： ①在细胞培养板中，分别以含10％小牛血清和10％胎牛血清的Grace培养液培养Sf9细胞，每天进行细胞计数和XTT比色分析，并绘制生长曲线。②重组杆状病毒感染两种血清培养下的Sf9细胞，培养72 h后收集细胞，ELISA检测细胞内重组蛋白的表达量。 结果： 胎牛血清培养液中Sf9细胞生长曲线好于小牛血清培养液中生长的Sf9细胞，但两种血清培养液中Sf9细胞增殖活力、重组蛋白的表达并无显著差别（P>0.05）。 结论： 胎牛血清能更好的促进Sf9细胞生长，小牛血清也可用于Sf9细胞的培养以及重组蛋白生产。     

无血清培养体系原代培养脐带间充质干细胞

背景：以含血清培养基培养的脐带间充质干细胞,存在着进一步应用的障碍。 目的：建立无血清培养体系原代培养脐带间充质干细胞。 方法：取脐带华通氏胶(Wharton’s Jelly),采用机械法将组织胶切碎,1-3 mm3大小,分别培养到含胎牛血清完全培养液中以及无血清培养液中。培养第11,14,17天收获细胞并进行相关检测。在符合2006年制定的干细胞最低评估标准的基础上,以集落形成单元指标评估何种培养体系能获得较多高质量的原代细胞。 结果与结论：无血清培养体系相对于经典的含血清的培养体系而言,细胞生长速度更快。另外,培养第11天,集落形成实验表明无血清培养体系下能获得更多的集落。因此,无血清培养体系可以保持间充质干细胞的特性,为替代含血清培养体系进行脐带间充质干细胞原代培养提供了可能。     

不同常规培养液对人肾小管上皮细胞的影响

目的： 通过4种常规培养液对人肾小管上皮细胞株（HKC）的培养及其细胞表型特征的观察,探讨目前肾小管上皮细胞体外培养存在的有关问题。方法： 采用DMEM（含10%新生牛血清）、DMEM/F12（含5%新生牛血清）、DMEM/F12（含5%胎牛血清）和keratinocyte-SFM（含rEGF和BPE）完全培养液分别进行HKC细胞的体外培养。应用细胞免疫荧光或Western blotting法分别检测传6代细胞cytoketatin-18、E-cadherin、α-SMA和vimentin的表达。结果： HKC细胞经过DMEM（10%新生牛血清）和DMEM/F12（含5%新生牛血清）完全培养液培养3代后,α-SMA和vimentin分别转为强阳性表达,而cytoketatin-18、E-cadherin则分别转为阴性或弱阳性;keratinocyte-SFM完全培养液则具有逆转HKC细胞的cytoketatin-18、E-cadherin阴性转化作用,与此相反,DMEM/F12（含5%胎牛血清）可使这种cytoketatin-18、E-cadherin阳性的HKC细胞发生cytoketatin-18阴性转化。结论： 不论是含血清还是无血清培养液培养的肾小管上皮细胞,均具有体外研究的局限性。