蛋白酶体抑制剂诱导多巴胺能神经元变性伴包涵体形成

目的 观察蛋白酶体抑制剂诱导黑质多巴胺(DA)能神经元变性伴胞浆内包涵体形成，探讨蛋白酶体功能在帕金森病发病机制中的作用。方法将蛋白酶体抑制剂Lactacystin立体定向注射至大鼠黑质部位。免疫荧光观察黑质区DA神经元变性缺失及胶质细胞变化。免疫荧光双标法观察DA能神经元内蛋白聚集的包涵体及其主要成分α-共核蛋白(α-synuclein)、Parkin和泛素(ubiquitin)的表达。同时观察。DA能神经元发生细胞凋亡。结果注射Lactacystin第7天大鼠开始出现自发性活动减少，阿扑吗啡可诱导出旋转行为；3周后黑质部位酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞减少，呈剂量依赖性；小胶质细胞增生明显。TH与硫磺素、硫磺素与α-synuclein、硫磺素与Parkin、以及硫磺素与ubiquitin复合染色呈阳性；TH与TUNEL双染亦呈阳性。结论Lactacystin对多巴胺能神经元具有毒性作用，且导致蛋白聚集，包涵体形成。蛋白酶体功能异常可能在帕金森发病机制中起重要作用。     

6-羟基多巴胺单侧纹状体注射对大鼠双侧多巴胺能神经元的影响

目的探讨帕金森病大鼠模型中6-羟基多巴胺（6-OHDA）单侧纹状体注射对双侧黑质纹状体多巴胺能神经元的影响。方法大鼠随机分成模型组和对照组，模型组自一侧纹状体注射6-OHDA，对照组注射PBS；用免疫组织化学方法分别检测大鼠双侧黑质和纹状体区酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞和纤维的表达；高效液相色谱检测双侧纹状体多巴胺（DA）及其代谢产物3，4-二羟基苯乙酸（DOPAC）和高香草酸（HVA）含量。结果模型组大鼠双侧（毁损侧与其对侧）黑质致密区TH阳性细胞数量均少于对照组（P〈0．01），模型组双侧纹状体区TH阳性纤维密度均低于对照组；模型组大鼠双侧纹状体区DA含量均低于对照组（P〈0．01）；双侧DOPAC和HVA含量也降低。结论6-羟多巴胺单侧纹状体注射制作的帕金森病大鼠模型的对侧黑质纹状体也有损伤。     

立体定向下恒河猴偏侧部分损伤性帕金森病模型的制作

目的　制作一种能保留内侧前脑束 (MFB)内的多巴胺 (DA)神经纤维的偏侧部分损伤性帕金森病(PD)猴模型。方法　以 6 羟多巴 (6 OHDA)溶液对 12只恒河猴右侧黑质致密部行多靶点毁损。术后进行行为学观察、MR、PET、SPECT检查及酪氨酸羟化酶 (TH)的免疫组织化学染色。结果　猴术后符合帕金森病表现。MR示靶点准确位于黑质 ,PET示毁损侧黑质纹状体区代谢减低。TH染色示黑质致密部DA能神经元毁损达 80 %以上 ,而中脑腹侧被盖区和MFB区的DA能神经纤维保留较好。结论　用立体定向注射 6 OHDA毁损一侧黑质致密部的方法可制作出偏侧部分损伤性帕金森病恒河猴模型     

丘脑腹内侧核高频电刺激改善帕金森病模型大鼠前肢使用不对称行为的研究

目的探讨丘脑腹内侧核高频电刺激能否改善帕金森病模型大鼠前肢使用不对称行为。方法将33只SD大鼠随机分为实验组22只和对照组11只。利用立体定向的方法将刺激电极埋入右侧丘脑腹内侧核,用于注射6-羟基多巴胺的套管埋入右侧内侧前脑束。实验组大鼠右侧内侧前脑束内注射12μg的6-OHDA,对照组注射相同体积的生理盐水。对造模前、造模后和给予DBS时的大鼠进行前肢使用不对称测试。黑质酪氨酸羟化酶免疫组化染色检测黑质多巴胺能神经元毁损程度。尼氏染色确定刺激电极尖端位置。结果从22只大鼠中获得了15只成功的PD大鼠模型。与毁损前相比,模型大鼠毁损后的不对称指数显著增大(P=0.000)。给予高频VM-DBS后,不对称指数显著下降,与毁损后未给予VM-DBS时比较,差异有统计学意义(P=0.009);而与毁损前相比,差异不显著(P=0.214)。给予低频VM-DBS后,不对称指数无明显改变,与毁损后未给予VM-DBS时比较,差异无统计学意义(P=0.4);而与毁损前相比,差异显著(P=0.036)。结论丘脑腹内侧核高频电刺激能够改善6-羟基多巴胺偏侧帕金森病模型大鼠的前肢使用不对称行为,丘脑腹内侧核可能是帕金森病深部脑刺激治疗的潜在有效靶核团。     

蛋白酶体功能与帕金森病相关性实验研究

目的 观察蛋白酶体抑制剂诱导大鼠黑质多巴胺能神经元α-突触核蛋白（α-synuclein，α-Syn）的表达及聚集．探讨蛋白酶体功能在帕金森病（PD）发病中的作用机制。方法采用立体定向将蛋白酶体抑制剂Lactacystin注射至大鼠黑质部位。以免疫荧光法观察黑质区多巴胺能神经元变性缺失，并应用免疫荧光双标法观察多巴胺能神经元内蛋白聚集的包涵体及其主要成分α-Syn的表达．然后通过原位杂交分析α-Syn mRNA表达及Western印迹法检测黑质α-Syn表达量改变。结果注射Lactacystin第7天大鼠开始出现自发性活动减少．阿扑吗啡尚可诱导出旋转行为；3周后患侧黑质部位酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞明显减少。TH与硫磺素、硫磺素与α-Syn复合染色呈阳性。α-Syn mRNA表达量升高，蛋白表达水平增加。结论Lactacystin诱导大鼠黑质细胞α-Syn表达升高并出现蛋白聚集可能是导致PD发病的机制之一。     

泛素-蛋白酶体系统与帕金森病

帕金森病(PD)的病因和发病机制与遗传因素和环境因素共同作用有关,但其内在联系尚不清楚。泛素-蛋白酶体系统功能的损害可能是不同病因作用的共同途径,故泛素-蛋白酶体在PD发病机制中的作用倍受关注,本文就泛素-蛋白酶体系统与帕金森病发病机制的关系做一文献综述。     

立体定向技术注射6-OHDA至内侧前脑束建立帕金森病大鼠模型

目的 建立大鼠帕金森病模型,观测其行为学和多巴胺能神经元的变化.方法 利用立体定向技术,注射6-OHDA至大鼠脑的内侧前脑束,于注射后2、4、6、8周观测阿朴吗啡诱导的大鼠旋转行为学变化;采用免疫组化染色检测TH的表达,了解中脑黑质多巴胺能阳性神经元变化.结果 所有大鼠分别于第2、4、6、8周的进行阿朴吗啡诱导旋转行为测试,67只大鼠中出现16只大鼠(23.8%)旋转圈数＞7r/min,并且＞210r/30min,为合格的PD大鼠模型.第8周时,大鼠旋转次数平均为10.48±1.91/分.免疫组化检测,成功模型光镜下分别计数双侧黑质TH阳性神经元,损毁侧黑质TH阳性神经元占正常侧的3.8%,即毁损侧TH阳性神经元减少96.2%.结论 利用立体定向技术,选择内侧前脑束为靶点,可建立6-OHDA大鼠PD模型.     

丝氨酸/苏氨酸激酶通路参与促红细胞生成素保护帕金森病大鼠的实验研究

目的观察促红细胞生成素(EPO)对帕金森病(PD)模型大鼠的保护作用并探讨其机制。方法实验大鼠分为3组,1 PD组:6-羟基多巴(6-OHDA)定向注射至右侧前脑内侧束建立PD模型;2 EPO组:在模型制备前持续1周给予腹腔注射EPO 10 000 U·kg-1·d-1;3假手术组:大鼠脑内立体定向注射生理盐水。采用ELISA法检测大鼠脑脊液EPO含量变化,术后3周评估大鼠行为学改变,免疫组化学、免疫荧光及蛋白印迹法分别检测酪氨酸羟化酶(TH)、EPO受体(EPO-R)及丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)磷酸化(Ser473)的表达。结果 1 EPO组脑脊液内EPO含量[(416.59±9.34)μU·L-1]增加,与假手术组[(2.20±1.92)μU·L-1]比较,差异有统计学意义(P0.05);2 EPO组的行为学改善,黑质多巴胺能神经元的丢失减少,黑质EPO-R的表达增加,与PD组及假手术组比较,差异有统计学意义(P0.05);3 EPO组黑质Akt磷酸化(Ser473)的表达明显增加,与PD组及假手术组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论 EPO腹腔注射可以改善PD大鼠的运动症状,与EPO增加PD大鼠的磷酸化Akt(Ser473)表达可能有关。     

单侧内侧前脑束注射6-羟基多巴建立帕金森病大鼠模型的实验研究

目的 6-羟基多巴(6-OHDA)两点单侧注射内侧前脑束建立帕金森病(PD)大鼠模型,寻求简单高效的模型制备方法。方法 105只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=10),生理盐水对照组(n=20)和模型组(n=75)。模型组SD大鼠以立体定向两点单侧注射6-OHDA至内侧前脑束。术后不同时间点观察行为学改变,术后1周开始,每周1次腹腔注射阿朴吗啡(Apo)诱发大鼠旋转行为,连续4周,分别计数完全成功大鼠模型只数。此后2周1次Apo诱发大鼠旋转行为,记录转数。结果模型组大鼠最早于术后1周内可出现异常行为姿势。第1、2、3、4周成功模型只数分别为7、23、17、2只。第10周成功模型大鼠的旋转次数与4周前相比有显著差异(P<0.01)。结论单侧内侧前脑束注射6-OHDA诱发大鼠的行为学改变与PD患者临床表现有相似之处。PD大鼠模型诱发旋转次数较为稳定,随损毁时间延长有增加趋势。     

蛋白酶体抑制剂诱导大鼠运动行为改变的研究

目的 观察蛋白酶体抑制剂诱导大鼠黑质变性及大鼠运动行为改变,探讨蛋白酶体功能下降在帕金森病发病机制中的作用.方法 将蛋白酶体抑制剂立体定向注射入大鼠左侧黑质致密部,对照组注射等体积的生理盐水.观察大鼠自主行为和阿朴吗啡诱导的旋转行为的改变.开野实验观察大鼠自发运动行为改变.免疫组织化学法观察黑质致密部及纹状体内酪氨酸羟化酶的表达.结果 Lactacystin组大鼠给药一周后出现自发性活动减少,动作缓慢,震颤、对外界刺激不自主竖毛,且症状逐步加重;阿朴吗啡可诱导出向健侧的旋转运动.开野实验中,Lactacystin组大鼠自发运动行为出现改变.三周后黑质部位酪氨酸羟化酶免疫阳性细胞及纹状体内酪氨酸羟化酶免疫阳性神经纤维减少.结论 蛋白酶体抑制剂Lactacystin单侧黑质致密部微量注射可以诱导大鼠黑质变性并出现运动行为改变,蛋白酶体抑制剂在帕金森病动物模型制备上有潜在价值,蛋白酶体功能下降可能在帕金森病发病机制中起重要作用.