实验感染大、小鼠和临床疑似病例肺孢子虫mt LSU rRNA基因检测

为探讨PCR技术对实验感染大、小鼠肺孢子虫肺炎(PCP)和临床疑似病例诊断的可行性。用皮下注射地塞米松法诱导SD大鼠和ICR小鼠PCP并收集临床疑似病例24h深部痰液。受试动物解剖后,制备肺印片,经瑞姬氏复合染色镜检确定肺孢子虫(Pc)感染的阳性率;同时,以针对虫体mtLSUrRNA基因设计的引物,PCR扩增鼠肺组织和支气管灌洗液(BALF),以及痰液样本中的DNA;比较实验动物样本镜检和PCR两种方法的检测结果;测定PCR的敏感性和特异性。结果表明,SD大鼠和ICR小鼠肺印片的阳性率分别为68.8%(1116)和85.7%(1821),肺组织PCR检测的阳性率分别为75%(1216)和80.9%(1721),肺泡灌洗液PCR的阳性率分别为81.2%(1316)和23.8%(521)。肺印片镜检和PCR技术检测结果无显著性差别;可见,PCR对虫体mtLSUrRNA基因的检测具有显著的特异性和敏感性,至少可以检测出0.6pg的肺孢子虫DNA;6例临床疑似病例样本中2例显示肺孢子虫PCR阳性反应。     

犬隐孢子虫和隐孢子虫病的研究进展

隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是由隐孢子虫（Cryptosporidium）起的一种重要的人畜共患病。近年来，隐孢子虫病的检出率逐年增高，已被列为世界最常见的6种腹泻病之一。犬隐孢子虫病世界各地均有报道，严重威胁着人类和动物的健康。本文对犬隐孢子虫病的病原分类、虫体形态和寄生部位、流行病学特点、诊断、防治等方面研究状况进行了综述，为犬隐孢子虫病的有效防制提供参考。     

寡核苷酸探针RNA原位杂交法检测肺孢子虫的研究

目的探讨RNA原位杂交法在肺孢子虫病理检测中的应用。方法采用小亚单位RNA位点来源的寡核苷酸探针、地高辛加尾标记、Wistar雌性大鼠皮下注射地塞米松建立肺孢子虫肺炎动物模型,取肺组织制备石蜡标本进行RNA原位杂交,并将结果与瑞氏-吉姆萨染色法进行比较。结果 RNA原位杂交法于感染后第3周检到虫体,呈游离分布;7～8周时检测到大量包囊;9～10周时滋养体大量出现;组织内肺孢子虫的检出率（32/32）高于瑞氏-吉姆萨染色法（25/32）。结论 RNA原位杂交法是一种敏感特异的肺孢子虫病理检测方法。     

PCR扩增利什曼原虫kDNA动物实验研究对内脏利什曼病早期…

本文报道了用ＰＣＲ扩增Ｌ．ｄｏｎｏｖａｎｌ种特异性ｋＤＮＡ片段来检测不同时间采集的感染金地鼠组织样品，结果表明在腹腔接种感染后第４天就可以从金地鼠外周血和脾组织内检测到病原体ｋＤＮＡ的存在，感染后第４８天，５只金地鼠的外周血和脾组织样品ＰＣＲ检测结果都为阳性，扩增产物经与地高辛标记的重组质粒ｐＬＫ２探针斑点杂交得到进一步证实。由此可见，用ＰＣＲ技术检测外周血或肝、脾组织进行内脏利什曼病的早期诊断是     

PCR扩增利什曼原虫kDNA动物实验研究对内脏利什曼病早期诊断的价值

本文报道了用ＰＣＲ扩增Ｌ．ｄｏｎｏｖａｎｌ种特异性ｋＤＮＡ片段来检测不同时间采集的感染金地鼠组织样品，结果表明在腹腔接种感染后第４天就可以从金地鼠外周血和脾组织内检测到病原体ｋＤＮＡ的存在，感染后第４８天，５只金地鼠的外周血和脾组织样品ＰＣＲ检测结果都为阳性，扩增产物经与地高辛标记的重组质粒ｐＬＫ２探针斑点杂交得到进一步证实。由此可见，用ＰＣＲ技术检测外周血或肝、脾组织进行内胜利什曼病的早期诊断是可行的。     

双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响

目的：检测双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响。方法：以醋酸可的松皮下洲Wistar大鼠建立PCP动物模型，对60mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠，杀鼠取肺，用胶原酶消化法分离肺泡巨噬细胞，可PI和TUNEL法检测其凋亡，同时设有正常大鼠对照组。结果：感染组和治疗组大鼠肺泡巨噬．细胞凋亡率显著高于正常对照组，治疗组大鼠肺泡巨噬细胞凋亡率明显低于感染组。结论：卡氏肺孢子虫感染引起大鼠肺泡巨噬细胞发生凋亡，经双氢青蒿素治疗后PCP大鼠肺泡巨噬细胞凋亡降低。     

血管免疫母细胞性淋巴结病及血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤

为了深入调查血管免疫母细胞性淋巴结病（ＡＩＬＤ）和血管免疫母细胞性Ｔ细胞淋巴瘤（ＡＩＴＬ）的临床病理、病变性质诸方面，采用了免疫组化和聚合酶链反应（ＰＣＲ）等方法对５例进行了分析。该５例患者均有全身淋巴结肿大（但直径多小于１ｃｍ），肝脾肿大、发热和多项血液指标改变。ＡＩＴＬ时在ＡＩＬＤ病变背景上出现异型的透明Ｔ细胞浸润为诊断和鉴别依据。５例中４例行ＴＣＲ－β重排分析均呈现克隆性改变。并对４例埃泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）感染情况进行分析，其中３例ＥＢＶＤＮＡ阳性。认为ＡＩＬＤ可能是一种与ＥＢＶ感染相关的瘤前病变，发展为淋巴瘤的比例较高。     

mtLSU-巢式PCR检测实验大鼠卡氏肺孢子虫的实验研究

目的对mtLSU-巢式PCR方法检测大鼠卡氏肺孢子虫的应用价值以及基因序列进行评价。方法采用地塞米松免疫抑制法诱导大鼠感染肺孢子虫;实验组10只,对照组1只;诱导至第7周时收集实验组及对照组大鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液（BALF）标本,采用mtLSU-巢式PCR方法对人源与鼠源肺孢子虫共有的基因进行扩增和序列测定,同时采用镜检法对实验组大鼠肺组织和肺泡灌洗液标本进行检测,评估两种方法的敏感性。结果采用mtLSU-巢式PCR方法对实验感染大鼠肺组织和BAL进行检测,卡氏肺孢子虫DNA阳性率分别为100%（10/10）、90%（9/10）。而GMS染色镜检法检测的阳性率分别为80%（8/10）、60%（6/10）。所测Wistar大鼠卡氏肺孢子虫mtLSU基因序列长度为155bp,与GenBank的大鼠源肺孢子虫（U20170）及人源肺孢子虫（DQ473446）同源性均为100%（154/154、155/155）。结论 mtLSU-巢式PCR方法应用于大鼠卡氏肺孢子虫检测敏感性高,特异性强;获得与人源耶氏肺孢子虫相同的Wistar大鼠卡氏肺孢子虫mtLSU的基因序列。     

多种方法检测HBV血清标志物结果分析

ＰＣＲ技术直接检测血清中的ＨＢＶ－ＤＮＡ［１］，并与反向间接血凝法（Ｒ－ＩＨＡ）、乳胶凝集法（ＬＡＴ）和酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测乙型肝炎血清标志物进行对比观察，以探讨ＰＣＲ技术在乙型肝炎病原诊断中的应用及ＨＢｖ－ＤＮＡ与乙肝五项标志物（ＨＢＶ－ｍ）之间的关系。材料与方法检测对象：１４６例肝炎患者，其中急性肝炎９１例，慢性肝炎４１例，肝炎后肝硬化１１例，重症肝炎３例，均符合１９９０年上海全国病毒性肝炎会议制订的诊断标准。方法：１４６例均用ＰＣＲ技术俭测血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，用Ｒ－ＩＨＡ检测…     

不同的样本处理方法对乙型肝炎病毒DNA检测的影响

目的探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）常规检测中血清样本的最佳处理方法。方法分别用不同缓冲液（ＰＢＳ与ＴＥ）对血清进行１：１或１：１０稀释，不同浓度去污剂（ＴｒｉｔｏｎＸ－１００与ＮＰ４０）及巯基乙醇处理血清样本，以及用硫氰酸胍－酚－氯仿抽提、蛋白酶Ｋ消化、碱裂解、辛酸钠裂解等方法处理血清样本，比较这些方法对ＰＣＲ法检测血清ＨＢＶＤＮＡ敏感度的影响，并进行了辛酸钠最适浓度实验。结果在所比较的１８种方法中发现硫氰酸胍－酚－氯抽提法、碱裂解法及辛酸钠法有较高的检测敏感度，而辛酸钠法有更好的重复性，方法最为简便。结论终浓度３０～５０ｍｍｏｌ／Ｌ辛酸钠最适用于ＰＣＲ法常规检测ＨＢＶＤＮＡ的血清处理     

卡氏肺孢子虫的分类、命名、体外培养及其动物模型的建立

以往所称的“卡氏肺孢子虫” (Pneumocystiscarinii,Pc)能感染包括人和实验动物在内的多种哺乳动物 ,免疫力低下的宿主感染后能引起致命的卡氏肺孢子虫肺炎 (Pneumocystiscariniipneumonia,PCP )或称肺孢子虫病(Pneumocystosis)。国际上已将原感染人体的卡氏肺孢子虫 (Pneumocystiscarinii)更名为Pneumocystisjeroveci,国内张瑞娟、朱淮民( 2 0 0 3)将其译为耶氏肺孢子虫 ,然尚未被广泛应用。其生物学分类也由原来动物界的原虫定为真菌界的真菌类。重新命名和跨界的分类归属具有重要意义 ,然而 ,国内有关“卡氏肺孢子虫”的报道 ,尚未启…     

心肺移植病理形态分析

为了观察心肺移植病理形态特点，对３例心或／及肺移植患者心内膜心肌活检（ＥＭＢ）、支气管镜肺活检（ＴＢＬＢ）及２例尸检材料进行组织形态学研究。结果显示：心、肺移植排异反应及其分级与该器官间质、血管周围淋巴细胞浸润及浸润细胞多少有关，可无或伴有实质细胞损伤。例１原位心移植患者术后７个月猝死原因为移植心冠状动脉病变及急性重度排异反应。例２心肺联合移植患者术后早期并发冠状动脉血栓栓塞而死亡。例３单肺移植患者至今１６个月情况尚好，术后第１１、１３个月ＴＢＬＢ发现受体原发肺结节病在移植肺再发。ＥＭＢ及ＴＢＬＢ是心、肺移植排异监测的可靠有效的方法，组织学诊断排异反应对临床治疗及预后观察有重要意义。     

实验性卡氏肺孢子虫肺炎的病理学研究

Ｗｉｓｔａｒ大鼠皮下注射醋酸考的松诱发卡氏肺孢子虫肺炎，自第６～１２周，每周解剖病鼠２只观察，全部给药鼠均发病。肺部病变表现为：（１）肺印片查见卡氏肺孢子虫包囊和滋养体。（２）组织病理学改变：第６～８周ＨＥ染色切片呈间质性肺炎伴中度淋巴细胞浸润，肺泡内缺乏泡沫样渗出物，第９～１２周肺泡内出现泡沫样渗出物，ＰＡＳ染色该渗出物呈阳性反应，ＧＭＳ染色查见染成黑色的包囊。（３）停用醋酸考的松后４～６周，肺部炎症明显好转，提示大鼠卡氏肺孢子虫肺炎有自愈可能。电镜显示包囊、滋养体及受损肺泡上皮细胞的超微结构。     

EB病毒潜伏感染在不同部位T细胞淋巴瘤中的表达

目的：探讨不同部位Ｔ细胞淋巴瘤（ＴＭＬ）与ＥＢ病毒（ＥＢＶ）感染的关系。方法：对１００例不同部位的ＴＭＬ（结内４０例、结外６０例），采用原位杂交法检测肿瘤细胞ＥＢＶ编码的ＲＮＡ（ＥＢＥＲ１／２）。结果：（１）１００例中ＥＢＥＲ１／２检出率４８％（４８／１００），结内ＴＭＬ检出率３０％（１２／４０），结外ＴＭＬ检出率６０％（３６／６０），结内、结外ＥＢＶ检出率差异有非常显著意义（Ｐ＜０．０１）。（２）结外呼吸道ＴＭＬＥＢＥＲ１／２检出率鼻腔、鼻咽、口咽和肺分别是８８．９％（１６／１８）、７１．４％（５／７）、４７．６％（１０／２１）、３３．３％（１／３）。（３）胃肠道、软组织ＴＭＬＥＢＥＲ１／２检出率分别是１６．７％（１／６）、３３．３％（１／３）。结论：ＥＢＶ感染在不同部位ＴＭＬ中的表达具有明显部位限制性，特别是鼻腔、鼻咽的ＴＭＬ与ＥＢＶ关系最密切，其ＥＢＥＲ１／２检出率明显高于身体其它部位Ｔ细胞淋巴瘤     

EB病毒感染及感染拷贝数与肺癌的关系

ＥＢ病毒与鼻咽癌、Ｂｕｒｋｉｔｔ淋巴瘤等恶性肿瘤的发生密切相关，但与肺癌的关系目前仍不清楚。我们收集８７例外科手术切除，同时含有肺癌及癌旁正常肺的石蜡包埋组织，用多聚酶链反应及斑点杂交技术对其中的ＥＢ病毒感染情况及感染的拷贝数进行检测。ＰＣＲ检测结果：肺癌５２例，对应癌旁肺组织３９例ＥＢ病毒阳性，统计学上无显著差异；斑点杂交结果：肺癌３８例，相应癌旁肺组织７例有ＥＢ病毒高拷贝感染，两者在统计学上存有非常显著的差异。结果提示：ＥＢ病毒在肺及肺癌组织中有较高的感染率，但肺癌组织中ＥＢ病毒感染拷贝数明显高于癌旁肺组织并有非常显著的差异；高拷贝数的ＥＢ病毒感染在肺组织细胞的恶性转化过程中可能起一定的作用。     

B7／CD28和ICAM—1／LFA—1共刺激信号对T及B细胞功？…

目的 研究共刺激途径Ｂ７／ＣＤ２８和ＩＣＡＭ－１／ＬＦＡ－１对Ｔ细胞活化以及Ｂ细胞效应的作用。方法 在体外建立ＡＰＣ：Ｔ：Ｂ细胞反应系统,用Ｂ７－１单抗和ＩＣＡＭ－１单抗分别阻断Ｂ７／ＣＤ２８和ＩＣＡＭ－１／ＬＦＡ－１共刺激途径,利用＾３Ｈ－ＴｄＲ法检测Ｔ细胞增殖,ＥＬＩＳＡ法测定Ｂ细胞分泌的杭体,用ＲＴ－ＰＣＲ法检测细胞因子基因的表达。结果 Ｂ７－１单抗和ＩＣＡＭ－１单坑均可抑制Ｔ细胞增殖及ＩＬ     

多聚酶链反应(PCR)检测不典型结核杆菌的 DNA

本文采用ＰＣＲ技术检测结核杆菌的ＤＮＡ（ＴＢ－ＤＮＡ），其中临床诊断为结核或可疑结核者９例，肿瘤６例，结节病３例，淋巴结炎４例，共２２例。病理诊断确诊为不典型结核者１４例，不能除外结核者４例，结节病２例，瘤样病变２例。所有病例经抗酸染色均未查到结核杆菌。ＰＣＲ检测结果表明，２２例中１８例呈阳性（占８１．８２％），４例呈阴性。ＰＣＲ技术敏感、特异，对于不典型结核病例检查ＴＢ－ＤＮＡ片段用于辅助诊断颇有实用价值。     

广东地区何杰金病EB病毒BNLF1基因片段及其表达产物的检测和意义

目的研究爱泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）与恶性淋巴瘤的关系。方法对广东地区５１例何杰金病（ＨＤ）进行了ＥＢＶ的检测。结果ＥＢＶ－ＢＮＬＦ１基因片段ＰＣＲ扩增阳性率为８０．４％，明显高于淋巴结反应性增生组（Ｐ＜０．０１）。ＰＣＲ产物经克隆测序证实为ＢＮＬＦ１基因片段，但未发现突变。原位杂交检测结果为４１例ＰＣＲ阳性的ＨＤ中１５例阳性，阳性信号可见于肿瘤和非肿瘤细胞的核上。ＢＮＬＦ１基因的表达产物潜在膜蛋白（ＬＭＰ１）的表达局限在ＨＤ的肿瘤细胞上，５１例中２５例阳性（４９％）。１５例２０岁以下ＨＤ中ＥＢＶ－ＢＮＬＦ１片段及其表达产物的检出率明显高于２０岁以上ＨＤ组及同年龄段淋巴结反应性增生组（Ｐ＜０．０１）。结论结果表明广东地区半数以上ＨＤ肿瘤细胞中有ＥＢＶ感染并表达ＬＭＰ１，可能与肿瘤的发生发展有一定关系。还提示青少年何杰金病与ＥＢＶ潜伏感染的关系更为密切。     

多聚酶链反应技术在NHL基因诊断中的应用研究

收集非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ）标本５９例。用全Ｔ（ＵＣＨＬ一１）与全Ｂ（Ｌ２６）ＭｃＡｂ作免疫组化分型。然后应用ｌｇＨ单轮和半重叠基因引物，Ｔ细胞受体β（ＴＣＲ＿β）基因引物进行多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增检测克隆性基因重排。检测阳性结果：新鲜组织ｌｇＨ７１．４％（１０．／１４），ＴＣＲ＿β８３．３％（１０／１２）。石蜡包埋组织ＩｇＨ（半重叠扩增）８０％（１２／１５），ＴＣＲ＿β７３．３％（１１／１５）。无假阳性。其中有６例有争议的疑难病例明确了诊断。结果表明ＰＣＲ技术是当前最特异、敏感而快速的ＮＨＬ克隆性基因重排检测方法。     

应用巢式PCR方法诊断微小隐孢子虫感染的实验研究

目的应用巢式PCR扩增方法诊断微小隐孢子虫感染。方法用昆明种小鼠通过免疫抑制方法建立动物模型，通过不连续蔗糖密度梯度离心法分离、纯化隐孢子虫卵囊。抽提DNA后，用巢式PCR扩增隐孢子虫的18S核糖体DNA，电泳、割胶回收后测序。结果成功建立隐孢子虫的小鼠免疫抑制动物模型，纯化后的隐孢子虫卵囊形状均一，呈圆形或椭圆形，大小在3-6um左右。经巢式PCR扩增，在840bp左右有一条特异性条带。通过测序和生物信息学分析，证实该基因序列与微小隐孢子虫18S具有高度同源性。结论巢式PCR方法扩增18S基因是诊断微小隐孢子虫感染的敏感方法。