高糖对小鼠精母细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨高糖对小鼠精母细胞增殖和凋亡的影响并初步探讨其机制。方法体外培养小鼠精母细胞GC-2spd,分为正常对照组和高糖组,分别采用CKK-8法和流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期和凋亡情况,实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测GC-2spd细胞caspase3、caspase9、Notch1、Jagged1和Hes1基因mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常对照组比较,高糖组GC-2spd细胞生长速度显著降低,G0/G1期细胞比例显著增多,早期、晚期凋亡率均显著增多,caspase3、caspase9mRNA及蛋白相对表达量显著上调(P均0.05),Notch、Jagged1、Hes1mRNA及蛋白相对表达量显著下调(P0.05)。结论高糖可促进小鼠精母细胞凋亡,可能通过抑制Notch信号通路实现。     

缬沙坦联合CXCL16对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的机制研究

目的:探讨缬沙坦(Valsartan, Val)联合CXCL16对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的机制研究。方法:将MPC-5细胞分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)、高糖+缬沙坦低、中、高剂量组(HG+Val-L、HG+Val-M、HG+Val-H)、高糖+缬沙坦+pcDNA组、高糖+缬沙坦+CXCL16组(HG+Val+pcDNA、HG+Val+CXCL16)。通过CCK8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、活化的Cleaved cas9和CXCL16蛋白表达;ELISA检测ROS、MDA、GSH-Px、SOD的表达。结果:HG组能够抑制细胞的活力、GSH-Px、SOD表达,促进细胞凋亡、ROS、MDA表达,上调Bax、Cleaved cas9、CXCL16蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达;HG+Val-L组、HG+Val-M组、HG+Val-H组可以促进细胞的活力、GSH-Px、SOD表达,抑制细胞凋亡、ROS、MDA表达,下调Bax、Cleaved cas9、CXCL16蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达。过表达CXCL16可以部分回...     

上调NICD对人牙周膜干细胞增殖及迁移能力的影响

目的:研究上调Notch胞内区域(Notch Intracellular Domain,NICD)对人牙周膜干细胞增殖及迁移能力的影响。方法:将细胞分为上调组、对照组及空白组,使用MTT比色法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,采用细胞划痕实验检测细胞迁移情况,并使用Western blot检测人牙周膜干细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白(TGF-β、BMP-2、β-caten、LEF-1、Cyclin D1、Caspase-3、Bax、Bcl-2)表达量。结果:对照组各时间点的人牙周膜干细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、迁移、黏附个数、TGF-β、BMP-2、β-caten、LEF-1、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量均低于空白组,且凋亡率、Caspase-3、Bax蛋白表达量高于空白组,差异具有统计学意义(P<0.05)。上调组各时间点人牙周膜干细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、迁移、黏附个数、TGF-β、BMP-2、β-caten、LEF-1、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量均高于空白组和对照组,且凋亡率、Caspase-3、Bax蛋白表达量均低于空...     

SHH信号通路参与FOXQ1基因对胃癌细胞凋亡诱导作用的实验研究

目的 :探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路是否参与转录因子叉头框Q1(FOXQ1)基因诱导的胃癌细胞凋亡。方法:采用q RT-PCR检测永生化胃黏膜上皮细胞及不同胃癌细胞系中FOXQ1的表达情况,FOXQ1 siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞设为si-FOXQ1组,同时设置转染正常对照组(Normal)和阴性对照组(si-Control),q RT-PCR和Western blot检测FOXQ1基因和蛋白表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax和Cleaved Caspase3蛋白及SHH信号通路相关蛋白SHH、Smo及下游分子Gli1和Gli3蛋白表达水平。结果:FOXQ1在胃黏膜上皮细胞GES-1中的表达显著低于胃癌细胞(P0.05),胃癌SGC-7901细胞中FOXQ1的表达最高,作为后续实验研究对象。转染FOXQ1 siRNA后SGC-7901细胞中FOXQ1的表达显著下降(P0.05)。si-FOXQ1组凋亡率及Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达显著高于si-Control组(P0.05),而SHH、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达显著低于si-Control组(P0.05)。Normal组和si-Control组间以上各指标差异无统计学意义(P0.05)。SHH特异性激活剂purmorphamine能够逆转转染FOXQ1 siRNA诱导的SGC-7901细胞凋亡。结论:FOXQ1基因在胃癌细胞中呈高表达,SHH信号通路参与FOXQ1基因对胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用,通过上调Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达来实现。     

沉默信息调节因子1对高糖诱导的足细胞凋亡的影响及机制研究

目的研究沉默信息调节因子1(silence information regulator 1,SIRT1)对高糖诱导的足细胞凋亡的影响和机制。方法取足细胞分别给予不同处理,分为5组:Control组(5.6 mmol/L葡萄糖培养液培养)、Osmotic-NC组(葡萄糖5.6 mmol/L+甘露醇25 mmol/L培养液培养)、HG组(30 mmol/L葡萄糖培养液培养)、HG+SIRT1组[SIRT1过表达载体(pcDNA3.1-SIRT1)转染+30 mmol/L葡萄糖培养液培养]、HG+NC组[阴性对照载体(pcDNA3.1)转染+30 mmol/L葡萄糖培养液培养],采用qRT-PCR和Western blot技术检测各组SIRT1表达效果,以试剂盒分别检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)、活性氧簇(ROS)水平,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡,采用Western blot检测各组细胞中Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达变化。结果高糖培养后的足细胞中SIRT1 mRNA及蛋白水平均降低。转染SIRT1过表达载体后的足细胞经过高糖处理以后,细胞中的SIRT1 mRNA及蛋白水平升高。高糖处理后的足细胞中SOD、CAT、GSH-Px活性降低,MDA和ROS水平升高,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白水平升高。上调SIRT1可以提高高糖条件下足细胞SOD、CAT、GSH-Px活性,减少细胞中MDA和ROS水平,减少细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达。结论上调SIRT1可以降低高糖诱导的足细胞凋亡,其作用机制可能与降低氧化损伤有关。     

CIP4对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响

目的 观察骨架调节蛋白CIP4（Cdc42 interacting protein 4）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的人肾小管上皮细胞-间充质转分化（EMT）的影响,并探讨其产生的机制。 方法 10 ?滋g/L TGF-β1刺激72 h诱导人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）向间充质转分化。Western印迹法检测各组细胞内E-cadherin和α-SMA蛋白的表达。倒置显微镜观察细胞形态的变化。根据GenBank人CIP4的完全cDNA序列,设计1条特异性干扰CIP4表达的RNA片段（CIP4-siRNA）和含野生型CIP4的重组真核表达质粒（pcDNA3.1-hCIP4）,利用lipofactamine 2000将其转染HK-2细胞。Western 印迹法检测对照组、TGF-β1刺激组、CIP4-siRNA转染组、pcDNA3.1-CIP4转染组细胞内CIP4、E-cadherin和α-SMA蛋白的表达,共聚焦显微镜观察 E-cadherin和α-SMA蛋白的分布改变;用PI3K-Akt特异性抑制剂渥曼青霉素（wortmannin） 1 μmol/L干预TGF-β1刺激的HK-2细胞48 h,Western 印迹法检测对照组和干预组CIP4表达的变化。 结果 TGF-β1干预后HK-2细胞E-cadherin蛋白表达显著减少（P ＜ 0.05）,α-SMA蛋白表达显著增多（P ＜ 0.05）,细胞形态由典型的上皮细胞向肌成纤维细胞转变,表明TGF-β1诱导肾小管上皮细胞EMT模型成功。CIP4-siRNA抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞表达CIP4后,E-cadherin蛋白表达显著增多（P ＜ 0.05）,α-SMA蛋白表达显著减少（P ＜ 0.05）,部分逆转了上述TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT。pcDNA3.1-hCIP4转染使CIP4高表达后,HK-2细胞E-cadherin蛋白表达显著减少（P ＜ 0.05）,α-SMA蛋白表达显著增多（P ＜ 0.05）,诱导了肾小管上皮细胞EMT。用渥曼青霉素干预TGF-β1刺激的HK-2细胞48 h,CIP4可能蛋白表达显著减少（P ＜ 0.05）。 结论 TGF-β1通过PI3K-Akt途径上调CIP4表达,CIP4可能进一步参与TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT过程。     

lncRNA FER1L4调控Wnt/β-catenin信号通路对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨lncRNA FER1L4调控Wnt/β-cate nin信号通路对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法：检测人甲状腺滤泡上皮正常细胞和甲状腺癌细胞中FER1L4的表达水平。将SW579细胞分为control组、s i-NC组、s i-FER1L4组、Li Cl+s i-FER1L4组;检测各转染组细胞FER1L4的表达水平,细胞增殖,细胞凋亡率,细胞迁移和侵袭;检测细胞Cleaved caspase3、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达水平。结果：SW579细胞中FER1L4表达水平最显著;干扰FER1L4后,其细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率和Cleaved caspase3表达显著升高（P<0.05）;与si-FER1L4组相比,Li Cl+si-FER1L4组细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、β-catenin、c-Myc和Cyclin D1蛋白表达显著升高,细胞凋亡率和Cleaved cas pas e3表达显著降低（P<0.05）。结论：干扰FER...     

天麻素通过调控Klotho基因表达对高糖诱导的足细胞损伤的影响

目的:探讨天麻素对高糖诱导的足细胞损伤的影响及分子机制。方法:将小鼠肾脏足细胞MPC5分为对照组、高糖组、高糖+天麻素低、中、高剂量组、高糖+pcDNA组、高糖+pcDNA-Klotho组、高糖+天麻素+si-NC组、高糖+天麻素+si-Klotho组。蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Klotho mRNA表达水平。结果:天麻素低、中、高剂量处理后,高糖诱导的足细胞中nephrin和podocin蛋白表达水平升高,细胞凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达水平升高,Bax蛋白表达水平降低,Klotho mRNA和蛋白表达水平升高,且呈剂量依赖性(P0.05)。过表达Klotho可抑制高糖诱导的足细胞凋亡,提高nephrin、podocin蛋白表达水平。抑制Klotho表达逆转了天麻素对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的保护作用。结论:天麻素通过上调Klotho表达抑制高糖诱导的足细胞损伤。     

虫草素通过下调TGF-β抑制高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化

目的：探讨虫草素对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响。方法：体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞株（NRK52E细胞株）,分为正常对照组（葡萄糖5.5 mmol/L,NG组）、高糖组（葡萄糖30 mmol/L,HG组）、高糖＋虫草素组（葡萄糖30 mmol/L＋虫草素10μg/ml,HG＋C组）。分别于刺激12 h,24 h,48 h后收集细胞。应用定量RT-PCR测定NRK52E TGF-β,E-cadherin,α-SMA mRNA的表达;Western印迹方法检测TGF-β、E-cadherin、α-SMA蛋白的表达。结果：高糖刺激后NRK52E细胞的TGF-β和α-SMA mRNA及蛋白表达明显高于正常糖组（P〈0.01）,而虫草素组TGF-β和α-SMA mRNA及蛋白表达显著低于高糖组（P〈0.05）;高糖诱导的NRK52E细胞E-cadherin mRNA及蛋白水平明显降低（P〈0.01）;而虫草素组NRK52E细胞E-cadherin mRNA及蛋白水平显著高于高糖组（P〈0.05）。结论：虫草素可以明显抑制高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化,其机制可能是通过下调TGF-β实现。     

坐骨神经损伤对背根节细胞凋亡及细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的：观察大鼠坐骨神经条件性损伤后对背根节细胞凋亡及细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法：将45只成年Wistar大鼠,按手术的不同随机分为3组;正常对照组（A组,n=5）;坐骨神经压榨伤组（B组,n=20);坐骨神经切断组（C组,n=20)。B、C两组又按术后3d,2周,1个月和2个月取材时间分为4个时间组,每组5只大鼠。各时间组取鼠的L5背根神经节后,以TUNEL法检测细胞的凋亡数,以免疫组化技术检测Bcl-2和Bax的表达。结果：正常组及B、C两组伤后3d时未检出凋亡细胞;B、C两组的细胞凋亡率在伤后2周达到高峰,以后随时间的推移而逐渐降低。C组的细胞凋亡率明显高于B组。背根节细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达,伤后2周达到高峰。B组中Bcl-2和Bax的表达呈现从低到高而后逐渐恢复正常的规律;而C组的表达始终保持在高水平。结论：细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax参与外周神经损伤后背根节细胞凋亡的调节。外周神经的不同损伤方式对背根节细胞凋亡及细胞凋亡相关蛋白的表达影响不同。     

异丙酚对急性肺栓塞大鼠肺细胞凋亡的影响

目的 评价异丙酚对急性肺栓塞大鼠肺细胞凋亡的影响.方法 健康雄性SD大鼠40只,体重280～300 g,随机分为5组(n=8):假手术组(S组)、急性肺栓塞组(APTE组)、异丙酚4 mg·kg-1 ·h-1 组(P1组)、异丙酚8 mg·kg-1 ·h- 1组(P2组)和异丙酚16 mg·kg-1 ·h-1 组(P3组).取尾静脉血样0.2 ml,37℃水浴箱内过夜,分割成直径1 mm ,长5 mm的栓子,颈静脉注射混有15个栓子的2 ml生理盐水制备大鼠肺栓塞模型.S组静脉输注生理盐水2 ml/h 4 h;APTE组、P1组、P2组和P3组制备肺栓塞模型,然后APTE组静脉输注5%葡萄糖2 ml/h4 h,P1 组、P2组和P3组分别静脉输注异丙酚4、8、16 mg·kg-1 ·h-1 (用5%葡萄糖稀释至2 m1)4 h.给药结束后,处死大鼠,取肺组织,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测caspase-3、Bcl-2、Box、Fas和FasL的mRNA表达水平,采用Western blot法检测caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas和FasL的蛋白表达水平,计算Bcl-2/Bax的mRNA和蛋白表达比值.结果 与S组比较,AVIE组、P1组、P2组和P3 组肺组织细胞凋亡率升高,caspase-3、Bax、Fas、FasL的mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2的mRNA和蛋白表达下调,Bcl-2/Bax的mRNA和蛋白表达比值降低(P＜0.05或0.01);与APTE组比较,P1组、P2组和P3 组肺组织细胞凋亡率降低,caspase-3、Bax、Fas、FasL的mRNA和蛋白表达下调,Bcl-2的mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2/Bax的mRNA和蛋白表达比值升高(P＜0.05或0.01);P.组、P2组和P3组间肺组织细胞凋亡率、caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas、 FasL的mRNA和蛋白表达、Bcl-2/Bax的mRNA和蛋白表达比值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异丙酚可抑制急性肺栓塞大鼠肺细胞凋亡,其机制与下调肺组织caspase-3、Fas和FasL的表达,调节Bcl-2/Bax的平衡有关.     

LncRNA NORAD通过调节miR-451a对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT的影响

目的:探讨lncRNA NORAD对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞HK-2上皮间充质转分化(EMT)的影响及作用机制。方法:HK-2细胞分为对照组、高糖组、si-NORAD+高糖组、si-NC+高糖组、miR-451a+高糖组、miR-NC+高糖组、si-NORAD+anti-miR-451a+高糖组及si-NORAD+anti-miR-NC+高糖组,RT-qPCR检测各组细胞中NORAD和miR-451a表达水平,Western Blot检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证NORAD与miR-451a调控关系。结果:与对照组比较,高糖组NORAD、α-SMA和Vimentin水平升高(P0.05),miR-451a和E-cadherin水平降低(P0.05)。与si-NC+高糖组比较,si-NORAD+高糖组NORAD、α-SMA和Vimentin水平降低(P0.05),E-cadherin水平升高(P0.05)。与miR-NC+高糖组比较,miR-451a+高糖组α-SMA和Vimentin水平降低(P0.05),miR-451a和E-cadherin水平升高(P0.05)。与si-NORAD+anti-miR-NC+高糖组比较,si-NORAD+anti-miR-451a+高糖组α-SMA和Vimentin水平升高(P0.05),miR-451a和E-cadherin水平降低(P0.05)。NORAD在HK-2细胞中负调控miR-451a表达。结论:下调NORAD表达可抑制高糖诱导的HK-2细胞发生EMT,其作用机制与上调miR-451a表达有关。     

高糖对大鼠肾间质成纤维细胞PINCH-1表达的影响

目的研究高糖对大鼠肾间质成纤维细胞(NRK49F)表达PINCH-1(Particulary interesting new cysteine-histicline rich protein-1)和整合素连接激酶(Integrin-linked kinase,ILK)的影响,探讨PINCH-1在糖尿病肾病中的作用机制。方法 (1)体外培养大鼠NRK49F细胞,分别采用高糖(25 mmol/L)和低糖(5.5 mmol/L)培养基培养6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后,检测各组细胞不同时间点PINCH-1、ILK、α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)mRNA及蛋白表达的动态变化,ELISA法检测各组细胞上清液纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原(collagen type I,Col I)的表达。(2)采用不同浓度葡萄糖(5.5 mmol/L、15.0 mmol/L、25.0 mmol/L)作用于大鼠NRK49F细胞48 h后,检测各组细胞PINCH-1、ILK、α-SMA mRNA及蛋白的表达。结果 (1)与低糖组相比,高糖组PINCH-1、ILK、α-SMA mRNA及蛋白的表达明显上调,高糖刺激早期呈一定时间依赖性增加,FN、Col I蛋白的分泌水平随着高糖刺激时间的延长,呈持续升高,差异均有统计学意义(P0.05)。(2)不同浓度葡萄糖培养大鼠NRK49F细胞48 h后,PINCH-1、ILK、α-SMA mRNA及蛋白的表达呈浓度依赖性增加,FN、Col I的分泌水平随着葡萄糖浓度的增加持续升高。结论高糖能够促进NRK49F中调节蛋白PINCH-1和ILK的表达,促进肾脏成纤维细胞表型转化以及纤维化蛋白FN、Col I的分泌。PINCH-1可能通过与ILK相互作用,在糖尿病肾病肾间质纤维化的发生发展中发挥重要的作用。     

过度训练可通过破坏Bax/Bcl-2平衡激活caspase依赖的凋亡通路诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡

目的 观察过度训练大鼠肾组织Bax、Bcl-2及 caspase-3的表达及其与肾小管上皮细胞凋亡的关系,探讨caspase依赖的凋亡信号途径在其中的作用及其机制。 方法 将48只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组（CN）、力竭运动组（ES）、旋覆花素干预组（IB）。CN组为安静对照;ES组又根据力竭后恢复时间分为力竭后即刻（ESI）、力竭后6 h（ES 6 h）和力竭后24 h（ES 24 h）组;IB组于力竭运动前24 h 给予旋覆花素25 ml/kg分3次灌胃后进行力竭运动,分为IB 6 h和IB 24 h组。采用大鼠游泳至力竭建立过度训练模型。TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡。免疫组织化学法检测肾组织Bax、Bcl-2及 caspase-3的表达。Western印迹法测定肾组织caspase-3蛋白的表达。用图像分析系统测定肾小管凋亡细胞、Bax、Bcl-2及 caspase-3表达的平均吸光度并计算Bax和Bcl-2的比值。用Pearson法分析Bax和Bcl-2的比值与caspase-3之间的相关性。用非参Spearman法分析Bax/Bcl-2的比值和caspase-3与细胞凋亡之间的相关性。 结果 TUNEL法显示,过度训练大鼠肾组织凋亡细胞主要分布在肾小管上皮细胞,力竭后即刻、6 h及24 h肾小管上皮细胞凋亡数呈进行性增多（P < 0.01）;免疫组化显示,过度训练大鼠肾组织caspase-3的表达及分布与Bax/Bcl-2比值变化及凋亡细胞的分布一致。图像分析显示,大鼠肾小管上皮细胞Bax/Bcl-2比值与caspase-3的表达于力竭后即刻、力竭后6 h、力竭后24 h逐渐增高（均P < 0.05）,均显著高于对照组（均P < 0.05）。Western 印迹测定结果也显示caspase-3蛋白表达的变化趋势。过度训练大鼠肾小管上皮细胞Bax/Bcl-2比值与caspase-3的表达呈正相关（r = 0.865,P < 0.05）;Bax/Bcl-2比值和caspase-3的表达与肾小管上皮细胞凋亡之间均呈正相关（r = 0.674,r = 0.837,均P < 0.05）。用旋覆花素干预后,过度训练引起的肾小管上皮细胞Bax/Bcl-2比值增高和caspase-3的过度表达及肾小管上皮细胞的过度凋亡均被显著抑制（均P < 0.05）。 结论 过度训练可通过破坏肾小管上皮细胞Bax/Bcl-2的平衡,激活caspase依赖的凋亡信号通路,进而诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡。这可能是过度训练引起肾小管上皮细胞凋亡的分子机制之一。     

下调PAR基因表达对前列腺癌PC3细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的:本研究以RNA干扰技术下调PAR(prostate androgen regulated)基因表达,探讨其对前列腺癌PC3细胞增殖、凋亡及其相关蛋白Bcl-2/Bax表达水平的影响。方法:PC3细胞转染靶向PAR基因的siRNA,MTT法检测细胞增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果:PC3细胞PAR基因表达水平下调,此时处于G2-M期的细胞增加,为(29.95±3.25)%;细胞凋亡率亦明显增加,为(20.61±2.73)%,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01),同时Bcl-2蛋白表达下降,Bax表达水平升高,Bax/Bcl-2比值升高。结论:PAR基因表达下调可诱导细胞G2-M期阻滞和凋亡,其机制为抑制凋亡相关蛋白Bcl-2表达,同时促进Bax表达。     

保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的作用研究

目的:探讨保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的影响。方法:将KK-Ay小鼠高脂饲料喂养建立糖尿病模型,造模成功后随机分为模型组(10只)与保肾通络方组(10只),另设10只C57BL/6J小鼠作为对照组;根据培养条件不同将体外小鼠肾小球足细胞(MPC5)分为正常对照组、高糖组、保肾通络方含药血清组。测定小鼠24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)水平并进行肾组织病理学检查,CCK-8法检测足细胞活力,Western blot检测足细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3及p53、p-p53的表达,TUNEL染色观察各组足细胞凋亡情况。结果:与对照组相比,模型组小鼠24 h-UTP显著升高(P<0.01),肾小球系膜细胞增生,细胞外基质增多,肾小球凋亡细胞比例及cleaved-caspase3蛋白表达增加(P<0.05),肾组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增加,p53磷酸化水平增加(P<0.01);保肾通络方干预使KK-Ay小鼠24 h-UTP显著降低(P<0.01),肾脏病理改善,肾小球凋...     

MiR-490-3p靶向HMGA2在骨肉瘤细胞凋亡中的作用

目的以人骨肉瘤MG-63细胞为研究对象,探讨miR-490-3p诱导MG-63细胞凋亡的作用及其分子机制。方法分别设立miR-490-3p mimics组(对照组)、慢病毒lenti-sh miR-490-3p组(药物组),每组设6个复孔。采用MTT法检测miR-490-3p对细胞生长抑制作用;采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测不同实验条件下miR-490-3p对MG-63细胞凋亡率的影响;Western blot检测miR-490-3p对HMGA2、Bcl-2、BAX和Caspase-3蛋白表达的影响。结果 MiR-490-3p能抑制MG-63细胞增殖,药物组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。经3次实验结果,药物组的早期凋亡的细胞比例为58.90%±0.89%,明显高于对照组的5.34%±0.34%,差异有统计学意义(P0.05)。通过Western blot检测MG-63细胞中HMGA2、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Survivin蛋白表达,结果显示miR-490-3p转染后,促进凋亡蛋白Bax表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,Bax或Bcl-2比率增高,而线粒体凋亡途径下游的Caspase-3蛋白被激活,表达量降低。结论 MiR-490-3p能显著抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与靶向HMGA2的表达、上调Bax/Bcl-2蛋白表达比例、激活Caspase-3蛋白级联反应和调控Survivin蛋白表达有关。     

肝糖原贮备对热缺血再灌注大鼠肝细胞凋亡的影响

目的探讨肝糖原贮备对热缺血再灌注肝细胞凋亡及肝损伤的影响。方法建立大鼠肝热缺血模型。实验分组:术前24h静脉注射25%葡萄糖组,2ml/只,每6h1次,高糖饮食(H组);术前禁食24h,饮水不限(L组);正常饮食对照组(N组)和假手术组(S组)。缺血45min,再灌注2、24h取材。流式细胞术检测细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白。同时进行肝酶学检测、肝组织形态学观察。结果1.细胞凋亡及蛋白表达:(1)24h细胞凋亡百分率。S组N组(P<0.01)。2.肝酶学指标:各时相点4组间比较差异有统计学意义(P<0.05),S组相似文献   

虾青素对人源增生性瘢痕成纤维细胞的作用及机制研究

目的:探讨虾青素对人源增生性瘢痕成纤维细胞的作用以及机制研究。方法:体外培养人源增生性瘢痕成纤维细胞分别加入0、10、50、100μmol/L浓度的虾青素作用24h,MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中的TIMP-1、MMP-1、COL-I及COL-Ⅲ的浓度;Western-blotting检测Bcl-2、α-SMA、TGF-β1及Bax等蛋白的表达。结果:不同浓度的虾青素使人源增生性瘢痕成纤维细胞活力降低而凋亡率增加;促凋亡蛋白Bax表达上调,抑制凋亡蛋白Bcl-2表达下调,同时抑制α-SMA、TGF-β1的表达及TIMP-1、MMP-1、COL-I、COL-Ⅲ合成。结论:虾青素能诱导人源增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡并抑制HSF细胞增殖、转化,减少胶原分泌,促进胶原酶解,继而有效改善增生性瘢痕的发生与发展。     

瑞芬太尼对大鼠肾缺血再灌注时细胞凋亡的影响

目的 评价瑞芬太尼对大鼠肾缺血再灌注时细胞凋亡的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠75只,体重220～ 250 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=25)∶假手术组(S组)、肾缺血再灌注组(I/R组)和瑞芬太尼组(R组).I/R组和R组采用夹闭双侧肾动脉45 min时恢复灌注法建立肾缺血再灌注损伤模型.R组于缺血前15 min至再灌注30 min经尾静脉输注瑞芬太尼1.0μg· kg-1·min-1,S组和I/R组给予等容量生理盐水.于缺血前15 min(T0)、再灌注3 h(T1)、6 h(T2)、12h(T3)及24 h(T4)时取肾组织标本.采用流式细胞术检测肾细胞凋亡率及Bax、Bcl-2蛋白表达,采用RT-PCR检测Bax和Bcl-2的mRNA表达,计算Bcl-2/Bax蛋白及mRNA表达比值,采用Paller法行肾小管损伤评分.结果 与S组比较,I/R组和R组T1-4时肾小管损伤评分和肾细胞凋亡率升高,Bcl-2/Bax蛋白及mRNA表达比值T12时升高,T3,4时降低(P＜0.01);与I/R组比较,R组T1-4时肾小管损伤评分和肾细胞凋亡率降低,Bcl-2/Bax蛋白及mRNA表达比值升高(P＜0.05或0.01);与T0时比较,I/R组和R组T1-4时肾小管损伤评分和肾细胞凋亡率升高,Bcl-2/Bax蛋白及mRNA表达比值T1,2时升高,T3,4时降低(P＜0.01).结论 瑞芬太尼减轻大鼠肾缺血再灌注损伤的机制与其调节Bcl-2/Bax蛋白表达,抑制肾组织细胞凋亡有关.