过氧化氢对小鼠睾丸支持细胞损伤机制的代谢组学研究

目的:应用基于气相色谱联用质谱(GC-MS)的代谢组学技术研究小鼠睾丸支持细胞氧化应激损伤机制。方法:以过氧化氢(H_2O_2)干预小鼠睾丸支持细胞TM4细胞,建立氧化损伤细胞病理模型。分别采用MTT方法检测存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡率,荧光分光光度计检测细胞内活性氧(ROS)水平;同时通过GCMS检测H_2O_2干预后各组细胞内源性代谢物的指纹图谱。结果:成功建立H_2O_2损伤模型,600μmol/L H_2O_2干预2 h后细胞存活率降至50%左右;低(100μmol/L)、中(300μmol/L)和高(600μmol/L)H_2O_2剂量组总凋亡率分别为(19.45±0.53)%、(20.12±0.58)%和(37.13±0.35)%,均显著高于不加H_2O_2的空白对照组[(10.28±0.35)%,P均0.05];中、高H_2O_2剂量组ROS水平[(1.27±0.10)%、(2.07±0.09)%]也显著高于对照组[(1.00±0.08)%,P0.05、P0.01];代谢组学结果显示:与对照组相比,高剂量组细胞内氨基酸类、糖类等代谢水平均出现明显变化,其中缬氨酸、正缬氨酸、亮氨酸、谷氨酸、阿拉伯糖、果糖、5-羟色胺和胆固醇等在内的15种代谢物差异显著(VIP1,P0.05)。结论:睾丸支持细胞在H_2O_2干预后产生的损伤或凋亡与细胞内的氨基酸代谢、糖代谢和能量代谢密切相关。     

基于Wnt信号通路探讨七氟烷预处理对高糖培养心肌细胞损伤的影响

目的基于Wnt信号通路探讨七氟烷预处理对高糖培养心肌细胞损伤的影响。方法 H9c2大鼠心肌细胞随机分为对照组、贫氧组、七氟烷组、高糖+七氟烷组、高糖+七氟烷+XAV-939组, 对照组细胞采用正常糖浓度(5.56 mmol/L葡萄糖)培养基进行培养, 贫氧组细胞细胞采用在正常培养基中厌氧培养, 高糖组细胞贫氧处理后采用高糖(33 mmol/L)培养基进行培养, 高糖+七氟烷组细胞贫氧处理后采用含2.2%七氟烷的高糖培养基培养, 高糖+七氟烷+XAV-939组细胞贫氧处理后采用含2.2%七氟烷和1 μm XAV-939的高糖培养基培养。5组细胞处理12 h后, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)试剂盒检测细胞活力;采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析细胞凋亡水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测细胞氧化应激指标;采用ROS试剂盒检测心肌细胞ROS水平;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路转录活性相关蛋白表达的影响。组间计量数据比较采用t检验。结果高糖+七氟烷组细胞活力(1.89±0.12)明显增加高糖组细胞(...     

氯喹抑制高糖环境下前列腺癌PC3细胞增殖机制研究

目的:研究氯喹是否能通过自噬和活性氧(ROS)通路抑制高糖诱导的前列腺癌PC3细胞的增殖.方法:PC3细胞培养后分为4组(正常糖组、高糖组、正常糖+氯喹组、高糖+氯喹组)予相应干预.运用CCK-8实验检测细胞的增殖能力;Western blot检测自噬相关蛋白LC3的表达;DCFH-DA活性氧荧光探针检测细胞中ROS水...     

MitoTEMPO通过调控PGC-1α/TFAM信号通路减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的研究

目的:探讨MitoTEMPO减轻高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤的作用机制。方法:人近端肾小管上皮细胞分为对照组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、实验组(10μmol/L的MitoTEMPO+30 mmol/L葡萄糖)。采用CCK-8法检测细胞生存率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA检测各组丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)表达水平,化学荧光法检测各组活性氧(ROS)含量,qRT-PCR检测各组PGC-1α、TFAM mRNA表达水平,Westernblot检测各组PGC-1α、TFAM表达水平。结果:与对照组相比,高糖组细胞活性降低,凋亡率增加(P<0.05),MDA、ROS表达水平明显升高(P<0.05),SOD和GSH表达水平明显降低(P<0.05),PGC-1α和TFAM蛋白和mRNA水平降低(P<0.05)。与高糖组比较,实验组细胞存活率升高,凋亡率下降(P<0.05),MDA、ROS表达水平明显降低(P<0.05),SOD和GSH表达水平明显升高(P<0.05),PGC-1α和TFAM蛋白和mRNA...     

缬沙坦联合CXCL16对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的机制研究

目的:探讨缬沙坦(Valsartan, Val)联合CXCL16对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的机制研究。方法:将MPC-5细胞分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)、高糖+缬沙坦低、中、高剂量组(HG+Val-L、HG+Val-M、HG+Val-H)、高糖+缬沙坦+pcDNA组、高糖+缬沙坦+CXCL16组(HG+Val+pcDNA、HG+Val+CXCL16)。通过CCK8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、活化的Cleaved cas9和CXCL16蛋白表达;ELISA检测ROS、MDA、GSH-Px、SOD的表达。结果:HG组能够抑制细胞的活力、GSH-Px、SOD表达,促进细胞凋亡、ROS、MDA表达,上调Bax、Cleaved cas9、CXCL16蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达;HG+Val-L组、HG+Val-M组、HG+Val-H组可以促进细胞的活力、GSH-Px、SOD表达,抑制细胞凋亡、ROS、MDA表达,下调Bax、Cleaved cas9、CXCL16蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达。过表达CXCL16可以部分回...     

p66~(Shc)对亚砷酸钠诱导心肌细胞氧化应激的影响

目的探讨p66~(Shc)在亚砷酸钠介导的心肌细胞氧化应激中的作用。方法利用亚砷酸钠诱导的H9C2心肌细胞氧化应激模型,分别用CCK-8比色法检测细胞活力;双氯荧光素探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western Blot法检测p66~(Shc)、磷酸化p66~(Shc)的表达变化;免疫荧光共聚焦检测p66~(Shc)的亚细胞定位。结果与对照组相比,5μM亚砷酸钠处理组细胞活力显著降低(P0.05),细胞内ROS水平显著升高(P0.001);砷引起了p66~(Shc)表达量增加,而且磷酸化p66~(Shc)与p66~(Shc)蛋白总量的比值也显著升高(P0.05),p66~(Shc)在砷刺激下从细胞浆向线粒体转位。过表达野生型p66~(Shc)质粒增加砷介导的心肌细胞内ROS水平,而过表达突变型p66~(Shc)质粒和敲低p66~(Shc)的表达都降低砷处理组细胞内ROS水平。结论研究显示亚砷酸钠可能通过上调p66~(Shc)的表达和磷酸化水平诱导心肌细胞ROS水平的升高。     

五子衍宗复方对睾丸支持细胞氧化应激损伤和细胞凋亡的影响

目的:探讨五子衍宗复方对睾丸支持细胞氧化应激损伤和细胞凋亡的影响。方法:在人睾丸支持细胞系TM4细胞培养液内分别加入H2O2(100 mmol/L)和五子衍宗复方提取液,分为空白组、模型组、低(0.2 mg/ml)、中(1 mg/ml)、高(5 mg/ml)剂量五子衍宗复方加药组。在作用24 h后,用MTT法检测各组的吸光度值,用硫代巴比妥酸比色法和黄嘌呤氧化酶法分别测定各组MDA含量及SOD活性,用流式细胞仪测定各组的细胞凋亡率和存活率,用实时PCR检测caspase-3 mRNA的表达。结果:五子衍宗复方低、中、高剂量组的吸光度值由模型组的0.23±0.01分别增加至0.27±0.02、0.30±0.01和0.35±0.01;SOD活性由(8.32±0.62)U/ml分别增加至(9.69±0.59)U/ml、(10.47±0.74)U/ml和(12.28±0.38)U/ml;MDA含量由(6.99±0.74)mol/L分别降低至(5.78±0.28)mol/L、(4.19±0.43)mol/L和(3.42±0.51)mol/L;细胞凋亡率由(21.63±1.38)%分别降低至(17.87±0.75)%、(14.10±0.50)%和(9.53±1.34)%;存活率由(65.67±7.48)%分别增加至(70.37±1.12)%、(72.57±1.95)%和(81.60±2.46)%;caspase-3 mRNA的相对表达量由2.69±0.16分别降低为2.47±0.12、2.38±0.16和1.96±0.11。结论:五子衍宗复方能改善睾丸支持细胞的氧化应激损伤,抑制细胞凋亡。     

沉默信息调节因子1对高糖诱导的足细胞凋亡的影响及机制研究

目的研究沉默信息调节因子1(silence information regulator 1,SIRT1)对高糖诱导的足细胞凋亡的影响和机制。方法取足细胞分别给予不同处理,分为5组:Control组(5.6 mmol/L葡萄糖培养液培养)、Osmotic-NC组(葡萄糖5.6 mmol/L+甘露醇25 mmol/L培养液培养)、HG组(30 mmol/L葡萄糖培养液培养)、HG+SIRT1组[SIRT1过表达载体(pcDNA3.1-SIRT1)转染+30 mmol/L葡萄糖培养液培养]、HG+NC组[阴性对照载体(pcDNA3.1)转染+30 mmol/L葡萄糖培养液培养],采用qRT-PCR和Western blot技术检测各组SIRT1表达效果,以试剂盒分别检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)、活性氧簇(ROS)水平,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡,采用Western blot检测各组细胞中Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达变化。结果高糖培养后的足细胞中SIRT1 mRNA及蛋白水平均降低。转染SIRT1过表达载体后的足细胞经过高糖处理以后,细胞中的SIRT1 mRNA及蛋白水平升高。高糖处理后的足细胞中SOD、CAT、GSH-Px活性降低,MDA和ROS水平升高,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白水平升高。上调SIRT1可以提高高糖条件下足细胞SOD、CAT、GSH-Px活性,减少细胞中MDA和ROS水平,减少细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达。结论上调SIRT1可以降低高糖诱导的足细胞凋亡,其作用机制可能与降低氧化损伤有关。     

脱氢抗坏血酸对高糖诱导系膜细胞产生氧自由基的影响

目的 探讨脱氢抗坏血酸(DHA)对高糖诱导系膜细胞产生氧自由基(ROS)的影响。 方法 (1)原代培养大鼠系膜细胞；(2)以Fe3+还原法检测细胞内抗坏血酸(AA)和DHA浓度，观察系膜细胞摄取AA和DHA的情况及葡萄糖、葡萄糖转运蛋白(GLUT)抑制剂细胞松弛素B对其的影响；(3)采用激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内ROS，观察高糖诱导系膜细胞ROS产生的情况及不同浓度DHA对其的影响；(4)采用凝胶电泳迁移率法(EMSA)检测活性蛋白1(AP-1)和DNA的结合活性，观察DHA对高糖诱导的系膜细胞内AP-1 活性的影响。结果 (1)AA不能由细胞外进入系膜细胞，而DHA可以进入，并且随着细胞外葡萄糖浓度的增加，其进入速度减慢；细胞松弛素B则完全抑制了DHA进入到系膜细胞。(2)高糖快速诱导系膜细胞ROS产生增多；DHA抑制了高糖的这种作用，并且该抑制作用在≤4 mmol/L的浓度范围内呈浓度依赖性。(3)DHA抑制了高糖诱导的系膜细胞内AP-1 的激活。 结论 (1)系膜细胞是依赖DHA利用Vit C的细胞型；DHA进入该细胞依赖GLUT介导，高糖可抑制其进入细胞。(2)DHA可有效抑制高糖诱导的系膜细胞ROS产生增多，并在一定范围内呈浓度依赖性。(3)DHA在抑制ROS产生的同时，也显著抑制了高糖诱导的AP-1 的激活。     

宝藿苷Ⅰ诱导子宫内膜癌线粒体依赖性凋亡的机制研究

目的探索宝藿苷Ⅰ(baohuoside I, BI)对子宫内膜癌Ishikawa细胞的诱导凋亡作用及其相关的分子机制。方法以0 μM及0 h未处理均作为空白对照组, BI处理(3、10、20、30、40 μM及3、6、12和24 h)后作为实验组;宝藿苷Ⅰ对Ishikawa细胞的增殖抑制作用通过CCK-8实验检测;宝藿苷Ⅰ对Ishikawa细胞的诱导凋亡作用和线粒体膜电位变通过Flow cytometry检测;通过蛋白免疫印迹实验检测细胞凋亡和信号通路相关蛋白。结果 CCK-8实验表明宝藿苷Ⅰ能以浓度梯度(3、10、20、30、40 μM)有效抑制Ishikawa细胞的增殖(存活率分别为89.56±0.96、74.69±1.21、60.28±1.09、43.51±2.17), 且对正常细胞的毒副作用低于5-FU。流式细胞术结果显示宝藿苷Ⅰ能通过降低线粒体膜电位水平, 有效诱导Ishikawa细胞凋亡, 各组凋亡细胞比例为(9.92±0.77)%、(14.01±0.83)%、(17.05±1.41)%、(28.21±1.73)%和(44.55±3.11)%。Western blot实验结...     

酸敏感离子通道1a在视网膜色素上皮细胞氧化损伤过程中的作用

目的 观察酸敏感离子通道1a( ASIC1 a)在视网膜色素上皮细胞(RPE)氧化损伤过程中的作用.方法 采用实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)以及Western blot的方法检测RPE在1 mmol/L H2O2诱导的细胞氧化损伤过程中(0.5 ～4.0 h),ASIC1a的表达变化;同时分别采用ASICs阻断剂amiloride和PCTx1,以及通过细胞转染ASIC1a,检测对该氧化损伤过程的影响,并应用噻唑蓝(MTT)比色法评价细胞的活性.结果 实时RT-PCR以及Western blot的结果均显示RPE中ASIC1a在mRNA及蛋白水平均有表达.1mmol/L H2O2处理RPE 1、2、4h后,RPE中ASIC1a的蛋白表达明显降低至(70.5±11.0)％、(40.6±5.6)％和(45.6±7.6)％.PCTx1阻断ASIC1a后,RPE细胞存活率明显降低,至4h细胞存活率为(76.2±5.0)％(与对照组比较,P＜0.05),而过表达ASIC1a能够提高RPE氧化损伤过程中细胞的存活率,与H2O2处理组比较,4h组为(38.0±6.0)％比(16.2±2.0)％(P＜0.05).结论 ASIC1a在RPE中具有表达并对RPE的氧化损伤具有一定的细胞保护作用.     

波叶青牛胆醇提物通过Wnt/β-catenin对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的:探讨波叶青牛胆醇提物对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响机制.方法:实验分为对照组、高糖组、低、中、高剂量药物组、LiCl组、高剂量药物组+LiCl组.细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase3)、β...     

川芎嗪对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响

目的 探讨川芎嗪对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞株,分对照组、高糖组和川芎嗪组,采用CCK-8细胞计数法测定系膜细胞增殖,以比色法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量的变化.结果 与对照组比较,高糖组出现系膜细胞增殖增加,上清液中SOD活性、GSH含量下降,MDA含量增加;与高糖组相比,川芎嗪组系膜细胞增殖减少,GSH含量、SOD活性上调,MDA含量下降.结论 川芎嗪能抑制高糖环境下的系膜细胞增殖,并显著减少高糖诱导的氧化应激水平.     

虫草益肾颗粒对高糖培养下人肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:研究虫草益肾颗粒对体外高糖培养下人肾小球系膜细胞(HMC)增殖的影响,探讨其在防治糖尿病肾病(DKD)中的意义。方法:将常规培养的HMC分为正常组、高糖组、虫草益肾颗粒高、中、低剂量组及福辛普利组,分别给予相应对照的动物含药血清处理后,用CCK-8法检测24 h、48 h及72 h细胞增殖情况。结果:HMC经高糖刺激后表现出明显的增殖现象,且在48 h增殖效果最明显,72 h时呈下降趋势。虫草益肾颗粒及福辛普利药物血清对高糖刺激下的HMC增殖均有抑制作用,其中虫草益肾颗粒高剂量组血清对HMC的抑制作用优于福辛普利组,且虫草益肾颗粒对HMC增殖的抑制作用呈时间与剂量依赖性关系。结论:高糖可促进HMC的增殖,虫草益肾颗粒能明显抑制高糖条件下HMC增殖,从而预防肾小球纤维化及硬化的发生、发展,延缓DKD病情进展。     

高糖对人肾小管上皮细胞和系膜细胞表达血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1的影响

目的研究高糖作用下人近端肾小管上皮细胞(HKC)和系膜细胞(HMC)中血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(SGK1)的表达,并初步探讨SGK1在介导高糖致肾细胞(HKC和HMC)过度合成细胞外基质(ECM)中的作用。方法将HKC和HMC细胞分别分为正常对照组(NG组,5.5mmol/LD-葡萄糖)、高糖组(HG组,25mmol/LD-葡萄糖)和渗透浓度对照组(MG组,19.5mmol/L甘露醇和5.5mmol/LD-葡萄糖)。SGK1mRNA水平及蛋白水平的检测分别采用RT-PCR方法和Western印迹方法。培养液中纤连蛋白(FN)水平检测采用ELISA方法。结果HKC和HMC中均存在SGK1基因和蛋白的表达。HMC中SGK1的表达明显高于HKC(P<0.01)。高糖刺激8h后,两种细胞SGK1表达均明显升高(P<0.01);同时,甘露醇也上调HKC和HMCSGK1的表达(P<0.01),但其作用明显弱于高糖(P<0.05)。FN在高糖环境下表达上调,且高峰出现时间滞后于SGK1。结论高糖能促进近端肾小管上皮细胞和系膜细胞SGK1的表达,并可能通过SGK1介导的信号转导途径在糖尿病肾病ECM积聚中发挥重要作用。     

蒲公英提取物通过miR-31抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤和炎症反应的作用研究

目的:探讨蒲公英提取物对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤和炎症反应的保护作用。方法:肾小管上皮细胞HRPTEpiC分为正常对照(NC)组、高渗对照(OSM)组、高糖(HG)组、不同浓度蒲公英提取物组、高剂量组+anti-miR-NC组、高剂量组+anti-miR-31组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TNF-α、IL-6水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-31表达水平。结果:高糖诱导的肾小管上皮细胞活性降低,细胞凋亡率升高,TNF-α、IL-6水平升高,miR-31表达水平降低(P<0.05)。不同浓度蒲公英提取物处理后,肾小管上皮细胞活性升高,细胞凋亡率降低,TNF-α、IL-6水平降低,miR-31表达水平升高(P<0.05)。抑制miR-31表达逆转了蒲公英提取物对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用。结论:蒲公英提取物可通过调控miR-31抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤和炎症反应。     

红细胞生成素对高糖诱导肾小管细胞凋亡的影响

目的 探讨红细胞生成素（EPO）是否可以抑制高糖诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞凋亡及其相关机制。 方法 传代培养大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E）,分为正常对照组（NC组）、渗透浓度对照组（OC组）、高糖组（HG组）、高糖+EPO 50 U/ml组（E1组）和高糖+EPO 100 U/ml组（E2组）。免疫荧光检测NRK-52E细胞有无EPO受体（EPOR）表达。Western印迹检测高糖对EPOR表达的影响。流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡指数。荧光探针CM-H2DCFDA检测细胞内活性氧（ROS）的水平。RT-PCR检测bcl-2、bax、capases-3 mRNA的表达。 结果 （1）NRK-52E细胞表达EPOR,且高糖可刺激EPOR表达增加。（2）高糖可诱导NRK-52E细胞凋亡,与葡萄糖相同渗透浓度的甘露醇不能明显诱导细胞凋亡。E1、E2组细胞早、晚期凋亡率显著低于HG组（P < 0.05）。（3）高糖刺激 NRK-52E细胞后,细胞内ROS产生增多,bcl-2 mRNA的表达下调,bax、caspase-3 mRNA的表达上调。EPO可以抑制细胞内ROS的产生,上调bcl-2 mRNA 表达,下调bax、caspase-3 mRNA 表达。 结论 EPO可能通过EPOR的介导,缓解高糖诱导的氧化应激,上调bcl-2 mRNA表达,下调bax、caspase-3 mRNA表达,抑制NRK-52E细胞凋亡。     

β肾上腺素受体激活诱导人系膜细胞凋亡

目的 探讨β肾上腺素受体(β-AR)激活对人肾小球系膜细胞(HMC)凋亡的影响及其机制.方法 HMC被分为空白对照(Ctrl)组;β-AR激活(NE/Pra)组;β-AR抑制(Prop)组;抗氧化剂(VC和NAC)组.采用反转录PCR法检测系膜细胞β肾上腺素受体的表达;激光共聚焦术测定细胞内钙信号变化;Tunel法检测细胞凋亡;Western印迹法检测细胞内半胱天冬酶3 (Caspase-3)的表达.结果 反转录PCR结果显示,人系膜细胞有β1-AR和β2-ARmRNA表达;激光共聚焦结果显示,β1-AR和β2-AR激动剂均能诱导系膜细胞内钙信号变化(P＜ 0.05);β-AR激活组诱导人系膜细胞产生活性氧类(ROS)增加,β-AR激动剂作用后ROS从0.5 h开始增多,4h达到高峰,之后减弱,但在12h时,细胞内ROS仍然超过对照组(P＜0.01).并且随着β-AR激动剂浓度增加,ROS生成增加.与对照组相比,β-AR激活组诱导人系膜细胞凋亡率增加,并随β-AR激动剂浓度增加和作用时间延长,凋亡细胞数随之增加(均P＜ 0.01).抗氧化剂维生素C和NAC可减轻由β-AR激活诱导的细胞凋亡(P＜0.01),β-AR阻断剂普萘洛尔可减轻细胞内ROS产生和β-AR激活诱导的细胞凋亡.与对照组相比,β-AR激活可诱导系膜细胞Caspase-3表达上调(均P＜ 0.01).结论 β-AR激活可诱导人系膜细胞凋亡,其机制可能是与β-AR激活增加细胞内氧化应激水平有关.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对高糖环境下体外小鼠足细胞活性氧的影响

目的　观察不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对高糖造成氧化应激状态下体外小鼠足细胞损害的作用并探讨其机制。 方法　以高糖（25 mmol/L）培养的小鼠足细胞为研究对象,维生素E培养为对照。首先以MTT法检测细胞活力,再在激光共聚焦显微镜下以CM-H2DCFDA荧光探针观察不同浓度EGCG（0.2、10、100 μmol/L）刺激足细胞6、12、24 h后活性氧（ROS）生成,并以流式细胞仪定量分析ROS平均荧光强度。RT-PCR法检测足细胞内ROS产生的主要通路NADPH氧化酶各亚基mRNA（ph22phox、p47phox、p67phox）的表达。 结果　高糖刺激下6 h,足细胞ROS生成显著增加（P < 0.01）。正常糖组和甘露醇组培养12 h ROS生成无显著增加（P > 0.05）。EGCG 0.2 μmol/L作用6 h可显著降低高糖环境下体外小鼠足细胞ROS水平（P < 0.01）。与高糖组比较,EGCG（100 μmol/L）显著减少NADPH氧化酶亚基p22phox和p67phox mRNA表达（均P < 0.05）。与维生素Ｅ组比较,EGCG（0.2 μmol/L）和维生素E（0.2 mmol/L）协同作用组显著减少p47phox mRNA表达（P < 0.05）。 结论　EGCG能缓解高糖环境下体外足细胞氧化应激状态,对高糖培养下足细胞有保护作用。     

乌索酸通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路改善高糖诱导的系膜细胞损伤

目的:探讨乌索酸(ursolic acid,UA)对高糖所致人肾小球系膜细胞(RMC)损伤的保护作用,明确是否通过抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路的活化,抑制细胞增殖及活性氧簇等活动。方法:将体外培养人系膜细胞分为正常葡萄糖组(NG)、高糖组(HG)、甘露醇高渗对照组(MA)及HG+不同剂量(0.5、1.0、2.0μmol/L)乌索酸干预组(UA),采用MTT法及DCFH-DA流式细胞仪分别检测系膜细胞增殖及活性氧簇产生;Westen-blot检测系膜细胞PI3K/AKT/m TOR信号通路活性及TGF-β1、FN表达;RT-PCR法检测TGF-β1、FN mRNA表达。结果:高糖刺激人肾小球系膜细胞48 h后,系膜细胞异常增殖,UA呈剂量依赖性抑制高糖诱导的系膜细胞增殖。UA抑制系膜细胞ROS的产生及氧化应激反应,减轻系膜细胞损伤。UA抑制高糖诱导的系膜细胞AKT、m TOR磷酸化水平及系膜细胞TGF-β1、FN蛋白及mRNA的表达(P0.05 vs.HG)。结论:乌索酸通过抑制高糖介导的PI3K/AKT/m TOR信号通路活化,抑制系膜细胞增殖及ROS的产生,减轻系膜细胞损伤。