丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及意义

目的 了解丙肝患者血清和外周血单个核细胞(PBMC)中HCV RNA存在情况及其临床意义。方法 应用套式PCR检测46例急性丙型肝炎(丙型肝炎以下简称丙肝)和42例慢性丙肝患者血清和PBMC中HCV RNA.结果 慢性丙肝患者PBMC中HCV RNA检出率显著高于急性丙肝患者(P<0.001);急、慢性丙肝患者血清和慢性丙肝患者PBMC中HCV RNA检出率显著高于ALT正常的抗-HCV阳性者(P<0.001);2例患者血清中HCV RNA阴性,PBMC中可测及,12例患者血清抗-HCV阴性,而血清HCV RNA阳性。结论 血清HCV RNA检测有助于抗-HCV阴性丙肝的诊断和早期诊断;丙肝的肝损害可能与HCV RNA血症有关;PBMC中HCV感染在丙肝的慢性化和慢性肝损害中可能起一定作用,PBMC中可贮存HCV RNA。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中Foxp3的表达及意义

摘要 目的：探讨转录因子Foxp3在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)患者外周血单个核细胞中的表达水平及其在SLE发病中的作用及意义。方法：选择SLE活动性、SLE非活动性患者和正常对照，运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术检测SLE患者和正常对照组外周血单个核细胞中Foxp3mRNA和蛋白的表达水平。结果：活动期SLE组Foxp3mRNA和蛋白的表达水平明显低于SLE非活动性患者和正常对照（P<0.05），SLE非活动性患者Foxp3mRNA和蛋白的表达水平明显低于正常对照（P<0.05）。结论：SLE患者外周血单个核细胞中Foxp3mRNA和蛋白的表达水平显著低于正常对照，随着SLE患者病情的好转，Foxp3mRNA和蛋白的表达水平逐渐增高。提示Foxp3与SLE疾病的活动性呈一定的线性相关关系。     

HLA-GmRNA在肝癌患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的：了解肝细胞癌（HCC）患者外周血单个核细胞（PBMC）、人类白细胞抗原 G mRNA（HLA-G mRNA）的表达水平及其意义。方法收集44例 HCC患者、21例肝硬化患者和40例健康查体者的 PBMC,建立逆转录-实时荧光 PCR相对定量体系检测PBMC HLA-G mRNA相对表达量。结果 HCC组、肝硬化组和健康对照组的 HLA-G mRNA相对表达量分别为1.71±0.39,1.05±0.38和1.01±0.47,HCC组高于肝硬化组和对照组,差异有统计学意义（F＝33.657,P＜0.001）。HLA-G mRNA高表达的 HCC患者生存率低于 HLA-G mRNA低表达者,差异有统计学意义（χ2＝5.972,P＝0.015）。结论 PBMC HLA-G mRNA相对表达量与肝癌发生发展密切相关,检测 PBMC HLA-G mRNA有助于肝癌的诊断与研究。     

重型乙型肝炎患者外周血单个核细胞microRNA表达及其意义

目的探讨microRNA(miRNA,miR)在重型乙型肝炎(SHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及意义。方法用RNA-DNA嵌合探针液态芯片(flexible multiple analyte profiling,xMap)技术检测40例慢性乙型肝炎(CHB)患者、30例SHB患者和40例体检健康对照者(NC)PBMC中miR-191、-223、-222、-145、-21、-31、-126、-20a、-372的表达水平。结果 CHB组、SHB组、NC组PBMC中miR-191、-222、-145、-31、-372表达无统计学差异(P均>0.05);而miR-21、-126和-223有统计学差异(F分别为64.607、86.412和54.648,P均<0.05)且均在SHB组表达最低[(1.417±0.580),(2.801±0.631),(6.658±0.545)]。3组间miR-20a表达有统计学差异(F=69.163,P<0.05),SHB组miR-20a表达最高(0.586±0.065)。结论 SHB组miR-21、-126、-223表达下调和miR-20a表达上调可能参与SHB的发生、发展。     

miR-205在ITP患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的 研究micro-RNA(miR-205)在原发性免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia,ITP)患者外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells,PBMC)中的表达和意义。方法 收集43例ITP患者和38例健康人的外周静脉血2 ml,分离PBMC,提取细胞总RNA,逆转录合成cDNA,以U6为内参,应用实时荧光定量PCR(Real time PCR)的方法检测miR-205的表达量; 分析miR-205与血小板计数结果之间的相关性。结果 ITP初诊患者(Naive ITP)PBMC miR-205的表达水平与健康对照组相比上调(1.81±0.48 vs 0.92±0.25,t=10.31,P<0.01); 治疗后不完全缓解组(incmplete remissiongroup,IR group)和初诊患者相比,miR-205的表达水平差异无统计学意义(P=0.112),和正常对照组相比,则表达升高(1.63±0.65 vs 0.92±0.25,t=7.2,P<0.01); 14例治疗后完全缓解组(complete remission group,CR group)治疗后(After treatment)PBMC miR-205的表达低于治疗前(before treatment)的表达水平(1.07±0.43 vs 1.91±0.34,t=5.68,P<0.01); ITP患者PBMC中miR-205的表达量与血小板计数呈负相关(r=-0.0696,P<0.05)。结论 miR-205在ITP初诊患者PBMC中高表达,而治疗完全缓解后表达水平又降低,并且表达水平与血小板数量呈负相关,表明其可能与ITP的发生发展相关,或许会成为ITP诊疗新的标志物。     

乙型肝炎病毒感染不同时期外周血单个核细胞微小RNA表达变化及其意义

目的 探讨微小RNA( microRNAs,miRNAs)在乙型肝炎病毒(HBV)感染不同时期表达谱的变化及其意义.方法 建立检测miRNA的RNA DNA嵌合探针液态芯片(xMAP)法,对其特异性、重复性、准确性进行评估;2010年10月至201 1年10月收集苏州大学附属第一医院住院和门诊急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、乙型肝炎后肝硬化及肝癌患者各40例,健康对照40名;采用xMAP液态芯片技术检测外周血单个核细胞(PBMC)中miR-191、-223、-222、-145、-21、-31、-126、-20a、-372的表达水平,以miR-103为内参,将(靶miRNA分子平均荧光强度-对应本底平均荧光强度)/(miR-103平均荧光强度-对应本底平均荧光强度)的比值作为有效数据分析各组miRNAs表达特征,采用SPSS 17.0统计软件,组间比较用单因素方差分析,若差异有统计学意义,用LSD-t法行组间两两比较.结果 xMAP液态芯片法检测miRNAs特异性为100％;重复性实验证实高值参比品的检测信号CV值均小于5％,低值参比品的检测信号CV值均小于10％;准确性实验证实9种miRNA的回收率为(100±5)％;miR-222(F=1.32,P＞0.05)、-191 (F=1.98,P＞0.05)、-145 (F=0.78,P＞0.05)、-21(F=0.64,P＞0.05)、-31(F=0.83,P＞0.05)、-372(F=1.75,P＞0.05)组间表达差异无统计学意义;miR-223组间表达差异有统计学意义(F=14.56,P＜0.05),在急性乙型肝炎组表达最高(15.37±4.01),肝癌组表达最低(6.91±3.18);组间miR- 126表达差异有统计学意义(F=17.43,P ＜0.05),在健康对照组表达最高(6.33±2.75),肝癌组表达最低(2.38±1.07);组间miR-20a表达差异有统计学意义(F=19.48,P ＜0.05),健康对照组表达最低(0.33±0.18),肝癌组表达最高(0.81±0.24).结论 xMAP液态芯片法检测miRNA特异性强、准确度高、重复性好,适合大通量临床检测;miRNA的检测可为HBV感染的慢性化进展机制提供一个新的研究线索.     

多发性骨髓瘤患者外周血单个核细胞微小RNA-202的表达及意义

目的 建立SYBR Green Ⅰ FQ-PCR检测人外周血单个核细胞(PBMC)中miR-202表达的方法,并初步探讨其检测MM的意义.方法 采用特异miR-202茎环引物逆转录后,用FQ-PCR对21例MM患者及20名健康人PBMC中miR-202表达水平做相对定量分析;结果用Mann-Whitney法进行两组间miR-202表达差异比较.此外,用1份1∶125稀释标本重复检测5次;及同一标本连续检测3d,每天检测1次,每次重复5管,根据循环阈值(Ct)计算标准差和变异系数(CV),以评价所建方法的重复性.结果 FQ-PCR检测PBMC中miR-202的扩增曲线呈标准的S型,熔解曲线峰值单一,未见杂峰,显示其特异性较好.批内CV为1.2％,批间CV为3.2％,当标本miR-202浓度被稀释为12.8 pmol/μl时,仍可稳定地得到扩增曲线.FQ-PCR检测MM组中miR-202表达量为1.844(0.162 ～3.966),健康对照组表达量为0.014(0.007～0.221),MM组中miR-202表达明显高于健康对照组(U=48.000,P＜0.01).结论 FQ-PCR是一种快速简便、特异性和重复性较好的检测miR-202的方法,MM患者PBMC中miR-202表达升高,其可能参与MM的发生过程,并有可能成为MM诊断和治疗的新指标.     

肝癌患者外周血单个核细胞HLA-G表达研究

目的了解肝细胞癌（HCC）患者外周血单个核细胞（PBMC）人类白细胞抗原G（HLA—G）的表达水平。方法收集38例HCC患者、25例肝硬化患者和40名健康查体者的PBMC,分别用逆转录一聚合酶链反应（PCR）和流式细胞术（FCM）检测其HLA—GmRNA和HLA—G蛋白表达水平。结果HCC组、肝硬化组和健康对照组PBMCHLA—GmRNA表达率分别为94．7％、84．0％和87．5％,差异无统计学意义（P=0．359）;HCC组HLA—G蛋白表达率高于肝硬化组和健康对照组,差异有统计学意义（P=0．002）。HCC组PBMCHLA—G蛋白主要表达于CD4^＋细胞上。结论HCC患者PBMCHLA—G蛋白表达率升高,其机制与临床意义尚待进一步研究。     

原发性舍格伦综合征患者外周血单个核细胞中TIM-3表达增高及意义

目的：探讨T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3（TIM-3）在原发性舍格伦综合征（pSS）发病机制中的作用。方法收集2012年10月～2013年7月期间上海长征医院和长海医院门诊及住院 pSS患者33例,同期纳入健康对照者33例。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测33例 pSS患者及33例健康对照组外周血单个核细胞（PBMCs）中TIM-3的相对表达量,并分析TIM-3与 pSS患者特征性实验室指标（血清 RF,CRP,抗 SSA和抗 SSB抗体）的相关性;对12名接受2个月糖皮质激素治疗的患者进行随访,分析TIM-3 mRNA在 pSS患者治疗前后的表达变化情况。结果pSS患者外周血 PBMCs 中 TIM-3 mRNA 的表达较健康对照组显著升高（0.55±0.12 vs 0.13±0.10,t＝15.44,P＜0.0001）,但在抗 SSA和抗 SSB抗体阳性和阴性患者之间,TIM-3水平差异无统计学意义（0.45±0.21 vs 0.54±0.31;0.46±0.15 vs 0.51±0.24;P值均＞0.05）。进一步分析发现,pSS患者外周血 PBMCs 中 TIM-3 mRNA的表达与血清RF,CRP水平呈正相关（R＝0.5585,0.4147;P值均＜0.05）;12名 pSS患者经过糖皮质激素治疗后,TIM-3的表达较治疗前下降（0.62±0.10 vs 0.38±0.13,t＝5.07,P＜0.05）。结论 TIM-3可能参与了pSS的发病机制,是pSS潜在的标志物。     

急性乙型肝炎患者外周血单个核细胞颗粒溶素表达增高的意义

目的研究急性乙型肝炎患者外周血颗粒溶素的表达及其意义。方法收集确诊急性乙型病性毒肝炎患者、无症状乙肝病毒(HBV)携带者和体检健康者全血,分离外周血单个核细胞(PBMC),抽提总RNA,采用MGB探针,以18sRNA为内参,经荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,检测其颗粒溶素mRNA的表达水平。对照组为90例体检健康者和90例无症状HBV携带者。结果急性期乙肝患者PBMC颗粒溶素表达水平(拷贝/μg)(2.8±3.1)×109显著高于体检健康者(2.2±1.4)×107和HBV携带者缓解期病人(4.5±5.2)×108(P<0.05)。结论采用FQ-PCR检测颗粒溶素的表达水平,有助于临床上监测感染性疾病的病情,为临床诊治提供一些依据。     

溃疡性结肠炎患者外周血单个核细胞中TREM-lmRNA 的表达水平

目的 通过比较髓系细胞触发受体-1(TREM-1)mRNA在活动期和缓解期溃疡性结肠炎(UC)患者以及健康体检者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平,探讨TREM-1与UC疾病活动性的关系.方法 依据结肠镜检和病理活检结果,将UC患者分为活动期和缓解期2组,采用实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR检测70例UC患者(活动期患者38例,缓解期患者32例)和20名健康体检者PBMC中TREM-1 mRNA的表达水平,采用相对定量ACt值比较基因表达水平的高低,并比较TREM-1 mRNA表达水平与ESR和C反应蛋白(CRP)的相关性.结果 UC活动期患者PBMC中TREM-1 mRNA的表达水平(4.19±1.86)显著高于uC缓解期患者(5.29±1.71,P=0.007)和健康体检者(5.19±1.04,P=0.032),而UC缓解期患者与健康对照组差异无统计学意义(P=0.892);TREM-1 mRNA表达的受试者操作特性曲线(ROC)下面积为0.763(P<0.001),表明TREM-1 mRNA表达水平对UC疾病活动性具有诊断价值;当△Ct值为4.63时,是判断UC活动性的最佳临界点,其诊断的敏感度和特异度分别为73.7%和68.7%;UC活动期患者中TREM-1 mRNA的表达与ESR显著相关(r=0.582,P=0.03),而与血清中CRP水平不相关(r=0.447,P=0.055).结论 TREM-1mRNA的表达与UC的活动程度明显相关,TREM-1可能参与了UC的炎症进程.TREM-1 mRNA的表达水平可能与ESR相关,而与血清中CRP水平不相关.     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞microRNA-206表达水平的变化及意义

目的：探讨外周血单个核细胞microRNA-206在类风湿关节炎发生中的作用。方法收集2012年12月～2013年11月确诊的类风湿关节炎患者27例及25例健康对照外周血标本,分离 PBMCs。采用实时定量 PCR（qRT-PCR）方法检测PBMCs中microRNA-206及锌指样转录因子4（KLF4）、孤儿核受体γt（RORγt）mRNA相对表达量。统计学处理采用非配对t检验和 Spearman相关分析。结果类风湿关节炎患者外周血单个核细胞 microRNA-206表达的水平显著低于健康对照组（0.056±0.019 vs 0.138±0.057,t＝3.103,P＜0.01）,KLF4 mRNA和RORγt mRNA表达水平显著高于健康对照组（0.604±0.183 vs 0.098±0.027,t＝6.651,P＜0.01;0.583±0.271 vs 0.069±0.018,t＝7.438,P＜0.01）,类风湿关节炎患者外周血单个核细胞microRNA-206表达水平与 KLF4及 RORγt相对表达量均呈负相关（r＝-0.639,P＜0.01;r＝-0.842,P＜0.01）。结论类风湿关节炎患者外周血单个核细胞 microRMA-206表达的水平下降,与疾病的发生发展关系密切。     

Tim-3在T1DM患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的探究T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)在1型糖尿病(T1DM)患者中的表达情况及其在T1DM发病过程中可能的作用。方法流式细胞术检测32例T1DM患者与26例健康对照者Tim-3+细胞比例;Real Time-qPCR方法检测外周血单个核细胞(PBMC)中Tim-3mRNA表达水平,同时检测糖化血红蛋白(HbA1C),胰岛素自身抗体(ICA)和谷氨酸脱羧酶65(GAD65)等临床相关指标。结果T1DM患者Tim-3+细胞比例为7.91±4.35,明显高于对照组1.73±1.77;Tim-3mRNA相对含量0.80±0.06,明显高于对照组相应检测值10.25±0.04,各项检测指标两组之间比较差异均有统计学意义(P0.05);Tim-3mRNA水平与T1DM患者GAD65呈显著正相关性,与HbA1C及ICA无显著相关性。此外,Tim-3+细胞比例与T1DM患者HbA1C及GAD65均呈显著正相关性,与ICA无显著相关性。结论Tim-3在T1DM患者中表达明显上升,并与相关临床症状相关,提示Tim-3在T1DM发生发展中发挥一定的作用。     

人纤维介素在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及意义

我们用免疫组化方法检测了32例系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMNC)中人纤维介素(hfg12)蛋白表达情况，探讨hfg12在SLE发病中的作用及其与SLE疾病的关系。     

强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞PBMC中IP-10、IL-17和miR-125a表达及意义

[目的]探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中诱导蛋白10(IP-10)、白细胞介素-17(IL-17)和miR-125a水平及意义.[方法]在本院治疗的AS患者110例为观察组,同时选取健康体检者100例作为对照组,检测比较其PBMC中IP-10 mRNA、IL-17 mRNA和miR-125a表...     

TIPE2、IP-10、miR-570在肝癌患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的 分析肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)、γ干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、微小核糖核酸-570(miR-570)在肝癌患者外周血单个核细胞中的表达及意义。方法 选取该院2020年4月至2021年4月收治的60例肝癌患者为肝癌组,另选取同期于该院进行健康体检的体检健康者60例为对照组。通过实时荧光定量聚合酶链反应对TIPE2、IP-10、miR-570表达水平进行检测,分析TIPE2、IP-10、miR-570在肝癌演进过程中的表达变化及三者间的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析TIPE2、IP-10、miR-570及3项联合检测对肝癌的诊断价值。结果 与对照组相比,肝癌组的外周血单个核细胞中TIPE2、miR-570表达水平降低,IP-10表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。外周血单个核细胞中TIPE2、IP-10、miR-570表达水平与患者性别、年龄、病理类型无关(P>0.05),与肿瘤最大径、病理分化程度、病理分期、远处转移有关(P<0.05),肿瘤最大径≥3 cm、低分化、Ⅳ期、有远处转移的肝癌患者TIPE2、mi...     

SOCS-3在脓毒症患者外周血单个核细胞中表达的研究

目的探讨细胞因子信号转导抑制因子-3（SOCS-3）在脓毒症发病机制中的作用。方法选择36例脓毒症患者,30例健康志愿者为对照组,应用RT-PCR方法测定SOCS-3在外周血单个核细胞中的表达,并和患者APACHEⅡ评分进行相关分析。结果SOCS-3在脓毒症组和对照组的外周血单个核细胞中均有表达,脓毒症组较对照组表达显著增加（P〈0．001）,SOCS-3 mRNA的表达和脓毒症A—PACHEⅡ评分呈负相关,相关系数（r）为-0．746（P〈0．01）。结论SOCS-3参与了脓毒症的发病过程,SOCS-3的表达在脓毒症患者中可能起着保护作用。     

肝损伤患者外周血单个核细胞中白细胞介素8mRNA的表达

目的　探讨肝损伤患者外周血单个核细胞 (PBMCs)中白细胞介素 8(IL 8)mRNA的表达水平及其意义。方法　采用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测 36例慢性肝病患者、17例急性重型肝炎患者、11例原发性肝癌患者和 18名正常对照者PBMCs中IL 8mRNA的表达水平。结果　在肝损伤患者中 ,IL 8mR NA的表达较正常人明显增高 ,且与胆红素浓度、内毒素血症和病情轻重相关。结论　IL 8可能促进肝脏的炎性损害 ,导致严重的肝细胞损伤 ,检测IL 8mRNA的表达水平 ,对了解肝损伤患者的肝损害程度、早期诊断和预后具有重要的意义。