柴芩肾安方对IgA肾病大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响

目的：探讨柴芩肾安方对IgA肾病（IgAN）大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响。方法：通过切除单侧肾并反复静脉注射葡萄球菌肠毒素B（SEB）复制大鼠IgAN模型,分为正常组、切肾组、IgAN组、柴芩肾安方组和氯沙坦组。第12周末,检测各组大鼠24h尿蛋白量（Upr）,观察肾小球形态学和超微结构变化,并采用免疫组化和实时定量PCR法检测肾小球足细胞nephrin蛋白及mRNA的表达。结果：与正常组相比,IgAN组大鼠Upr显著升高（P〈0.01）,肾小球系膜增生,足突融合明显,足细胞nephrin蛋白及mRNA表达均明显下调（P〈0.01）。经柴芩肾安方治疗后上述指标均明显改善,与IgAN组比较差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）。结论：柴芩肾安方能减轻IgAN大鼠蛋白尿及肾小球病变,这可能与其恢复肾小球足细胞nephrin表达有关。     

益气活血化湿方及其拆方对足细胞的保护作用

目的:本研究探讨益气活血化湿方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导的足细胞损伤的保护作用。方法:培养足细胞并鉴定,建立PAN诱导的足细胞损伤模型。实验分为对照组(Con)、模型组(Model)、环孢素组(CsA)、全方组(QF)、益气组(YQ)、活血组(HX)、化湿组(HS)。分别利用RT-PCR与Western Bloting分析各组细胞CD_2AP、α-actinin4 mRNA和蛋白表达水平。结果:(1)Synaptopodin阳性表达,确立稳定的细胞培养条件;(2)明确造模浓度及各组用药浓度;(3)与Con比较,Model组α-actinin4 mRNA与蛋白表达均升高(P0.05),CD_2AP mRNA与蛋白表达均下调(P0.05);与Model比较,各用药组均能下调α-actinin4 mRNA与蛋白表达(P0.05),上调CD_2AP mRNA与蛋白表达;QF与HS均能下调α-actinin4 mRNA与蛋白表达(P0.05),二者差异无统计学意义(P0.05);QF与YQ均能上调CD_2AP mRNA与蛋白表达(P0.05),下调α-actinin4蛋白表达(P0.05),二者差异无统计学意义(P0.05)。结论:益气活血化湿方及其拆方能够通过修复骨架蛋白CD_2AP和抑制α-actinin4表达从而发挥足细胞保护作用,其中益气方和化湿方分别在修复CD_2AP表达与抑制α-actinin4表达方面作用显著。     

复方积雪草2号对IgA肾病大鼠肾组织电镜形态及Nephrin表达的影响

目的：观察复方积雪草2号对IgA肾病（IgAN）大鼠肾组织病理电镜及Nephrin表达的影响。方法：复合免疫法制造IgAN大鼠模型,分设正常对照、模型、模型＋缬沙坦、模型＋复方积雪草2号高剂量、模型＋复方积雪草2号中剂量、模型＋复方积雪草2号低剂量6组。观察各组大鼠肾脏病理及肾组织Nephrin表达的变化。结果：（1）造模各组大鼠尿蛋白、镜下红细胞增多;免疫荧光镜下造模各组肾小球系膜区有不同程度IgA荧光,提示造模成功;（2）电镜下模型组系膜细胞增生,基质明显增多、有足突融合;而各治疗组足突融合情况均较模型组明显改善（P〈0.05）;（3）免疫组化法检测Nephrin显示模型组几乎没有阳性表达;RT-PCR显示模型组NephrinmRNA表达明显弱于正常组和其他各治疗组（P〈0.01）。结论：（1）Nephrin的下降可能是IgAN足细胞损伤、产生蛋白尿的病理机制之一;（2）Nephrin可能是复方积雪草2号、缬沙坦发挥肾小球足细胞保护作用的分子靶点之一。     

通络益肾方不同给药时期对DN大鼠足细胞损伤的影响

目的:观察通络益肾方对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞超微结构及骨架蛋白表达的影响。方法:60只SD大鼠随机抽取10只为假手术组,余大鼠采用右肾切除+腹腔注射链脲佐菌素制备DN模型。成模后的大鼠随机分为DN模型组(模型组),缬沙坦治疗组(西药组),通络益肾方早期给药组(中药早期组)、6周给药组(中期给药组)、8周给药组(晚期给药组)。每组10只。西药组予缬沙坦7.2 mg/kg灌胃,中药组予通络益肾方水煎液13.6 g/kg灌胃。中药早期组在造模成功后即予中药灌胃,中药中期和晚期组分别在造模成功后第6周、第8周开始中药灌胃。假手术组及模型组予蒸馏水灌胃。每日1次,共6周。检测大鼠24 h尿蛋白定量(24 h PRO)、尿白蛋白、肾功能;透射电镜观察足细胞超微结构,免疫组化法检测α-actintin-4、synaptopodin、F-actin表达,RT-PCR检测Nephrin、CD_2AP、α-actinin-4、synaptopodin、F-actin mRNA的表达。结果:(1)与假手术组比较,模型组24 h PRO、尿白蛋白、血尿素氮、血肌酐均明显升高(P0.01)。与模型组比较,西药组、中药早期组、中药中期组上述指标均明显下降(P0.01);与中药早期组比较,中药中期和晚期组各检测指标均不同程度升高(P0.01,P0.05);(2)足细胞超微结构的变化:模型组足细胞结构不清、数目减少、密度降低,骨架纤维排列紊乱;西药组及中药各治疗组足细胞病变减轻,足细胞较为完整,足突排列相对整齐,细胞骨架纤维排列相对整齐,足突融合减轻;中药早期组优于中药中期组和中药晚期组;(3)免疫组化结果显示:与假手术组比较,模型组α-actintin-4、synaptopodin、Factin表达显著下降(P0.01)。与模型组比较,西药组、中药早期组、中期组上述指标均明显升高(P0.01,P0.05),中药晚期组差异无统计学意义(P0.05);(4)与假手术组比较,模型组Nephrin、CD2AP、α-actinin-4、synaptopodin、F-actin mRNA表达均明显下降(P0.01)。与模型组比较,西药组及中药早期、中期组的各基因表达均显著升高(P0.01,P0.05),中药晚期组synaptopodin和F-actin表达差异无统计学意义(P0.05)。结论:通络益肾方可通过上调DN大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白及骨架蛋白的表达而发挥其保护足细胞,抑制DN进展的作用,且给药时间越早,持续时间越长,效果愈显著。     

马兜铃酸损伤大鼠肾小球足细胞的研究

目的 探讨马兜铃酸是否能损害肾小球足细胞.方法 用关木通浸膏水溶液间断灌胃制作马兜铃酸肾损害大鼠模型,分别于第1、4周末检测早期马兜铃酸肾损害大鼠24 h尿蛋白量,并以十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳观察尿蛋白成分.随后处死大鼠取肾组织,用激光显微切割捕获技术分离肾小球;用实时荧光定量PCR检测肾小球中nephnn、podocin、CD2AP、podocalyxin、podoplanin的mRNA表达;电镜下测量肾小球足突的平均宽度.结果 模型大鼠4周末尿蛋白量较对照组显着增多(P＜0.01),其中白蛋白含量明显增加.电镜结果显示肾小球足突平均宽度较对照组显著增宽(P＜0.01).肾小球中nephrin、podocin、CD2AP、podocalyxin、podoplanin的mRNA表达均较对照组显著减少,分别下调34％、62％、56％、50％(P＜0.01)及27％(P＜0.05).结论 马兜铃酸能损伤肾小球足细胞,导致足细胞相关蛋白mRNA表达下调,足突节段增宽,并出现白蛋白尿.     

雷公藤内酯醇对IgA肾病大鼠蛋白尿和nephrin、podocin蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察雷公藤内酯醇(TP)对IgA肾病(IgAN)大鼠尿蛋白和足细胞nephrin、podocin蛋白及mRNA表达的影响。方法:采用牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖的方法建立IgAN大鼠模型。将60只大鼠随机分为正常组、模型组、洛丁新组、TP剂量组、TP中剂量组、TP高剂量组,每组10只。于0,10,14周收集血尿标本,并处死大鼠留取肾组织标本。检测24 h尿蛋白定量,血生化指标,分别采用实时定量PCR及ELISA法检测肾组织nephrin、podocin mRNA和蛋白表达。结果:(1)实验前各组大鼠尿蛋白差异无统计学意义(P>0.05),第10周末各造模组蛋白尿均明显高于正常组(P<0.01),第14周末TP各剂量组及洛丁新组蛋白尿均较模型组明显减少(P<0.01),TP高剂量组Alt值高于其余各组(P<0.05);(2)与正常组相比,模型组nephrin、podocin蛋白、mRNA表达明显降低(P<0.01);TP各剂量组及洛丁新组nephrin、podocin蛋白、mRNA表达均较模型组明显增高(P<0.05);TP中、高剂量组较洛丁新组nephrin、podocin蛋白浓度显著增高(P<0.05);TP各剂量组与洛丁新组及TP各剂量组间nephrin、podocin mRNA表达均差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TP能够明显减轻IgAN大鼠的蛋白尿,且能明显提高肾组织nephrin、podocin mRNA及蛋白的表达。提示TP能调节IgAN足细胞相关分子nephrin、podocin基因及蛋白的表达,减少足细胞损害,减少尿蛋白。     

通络泄浊方对糖尿病肾病大鼠Nephrin和Podocin表达的影响

目的：观察通络泄浊方对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织Nephrin和PodocinmRNA的影响。方法：采用链脲佐菌素（STZ）法制作DN大鼠模型,随机分为正常组、模型组、通络泄浊方组（中药组）、氯沙坦组（西药组）和通络泄浊方＋氯沙坦组（中西药组）。采用荧光定量PCR法检测肾组织Nephrin和Podocin mRNA表达。结果：与模型组比较,3个治疗组Nephrin和Podocin mRNA表达明显升高（P〈0.01）,且中西药组Nephrin和Podocin mRNA水平高于中药组和西药组（P〈0.01）。结论：通络泄浊方通过促进DN大鼠肾组织Nephrin和Podocin mRNA表达而对肾脏起保护作用。     

他克莫司对2型糖尿病大鼠ANGPTL2在肾脏中表达的影响

目的:通过观察他克莫司(tacrolimus,FK506)对2型糖尿病大鼠(T2DM)肾脏中血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)表达的影响,探讨其对肾脏的保护机制。方法:50只SD雄性大鼠随机分为正常对照组(NC,10只)和实验组(40只),实验组予高糖高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素(STZ 30 mg/kg),建立T2DM大鼠模型。成功模型(32只)再随机分为两组:糖尿病对照组(DM,16只)及他克莫司组(DT,16只)。他克莫司干预8周后,测体重、血压、肾重、血糖、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白(UAL)的排泄量;镜下观察肾组织病理改变、免疫组化染色技术、实时定量PCR及Western blot法检测肾组织ANGPTL2、Nephrin、Podocin mRNA及蛋白表达的变化。结果:DM组24 h UAL排泄量及足细胞损伤明显高于NC组,同时ANGPTL2 mRNA及蛋白表达量明显升高(P均0.05),Nephrin及Podocin的mRNA及蛋白表达量明显降低(P0.05),DT组较DM组24 h UAL排泄量降低,足细胞损伤改善,ANGPTL2 mRNA及蛋白表达量降低(P0.01),Nephrin及Podocin的mRNA及蛋白表达量升高(P0.01),且ANGPTL2 mRNA及蛋白表达量与尿白蛋白呈正相关,其与Nephrin及Podocin的mRNA及蛋白表达量呈负相关(P均0.01)。结论:他克莫司可通过下调ANGPTL2在肾脏的表达,保护足细胞。     

温阳活血利水方对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响

目的观察温阳活血利水法治疗微小病变肾病综合征的疗效,并观察对足细胞nephrin表达的影响,以探讨其作用机制。方法用阿霉素（ADR）诱导一种类似人类微小病变肾病模型,一周后用温阳活血方（治疗组）治疗,持续4周。并设空白对照组（正常组）、病理对照组（造模组）。观察实验大鼠的一般情况;检测大鼠24小时尿蛋白定量;检测总蛋白、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的水平;采用RT-PCR和免疫荧光染色测定大鼠肾小球Nephrin的mRNA和蛋白表达水平;光学显微镜观察肾组织形态学变化;电镜下观察足细胞足突的变化。结果模型组24小时尿蛋白定量明显升高（P〈0．01）,血清总蛋白、白蛋白明显降低（P〈0．01）,血清脂质水平升高（P〈0．01）,NephrinmRNA与蛋白表达明显减少,足突融合明显。两个治疗组均能降低24小时尿蛋白定量,升高血清总蛋白、白蛋白水平（P〈0．01）。温阳活血利水方能降低血清脂质水平（P〈0．01）。两个治疗组均能改善肾组织中NephrinmRNA与蛋白的表达的减少,改善其肾组织的病理改变。结论温阳活血利水方减少蛋白尿,可能与改善阿霉素肾病大鼠肾小球Nephrin的表达减少有关。     

水蛭素对被动型Heymann肾炎模型大鼠足细胞Nephrin表达的影响

目的:探究水蛭素对被动型Heymann肾炎模型大鼠足细胞Nephrin表达的影响。方法:成功建立被动型Heymann肾炎模型,将实验动物分为空白对照组、模型安慰剂组、贝那普利组和水蛭素干预组,每组10只,实验观察周期为4周。于4周后观察大鼠24 h尿蛋白定量、血肌酐(Scr)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血小板(PLT)的变化情况,且取出SD大鼠肾脏,采用RT-PCR法测定大鼠肾皮质中Nephrin m RNA的相对表达水平,Western印迹测定Nephrin蛋白的相对表达量,免疫组化法对Nephrin蛋白进行半定量分析。结果:与模型组相比,贝那普利组在Nephrin m RNA和Nephrin蛋白方面差异无统计学意义(P0.05),但水蛭素干预后可增加Nephrin m RNA和Nephrin蛋白的表达(P0.05)。相比于贝那普利组,水蛭素组可增加Nephrin m RNA的表达,但在Nephrin蛋白方面差异无统计学意义。免疫组化半定量分析:空白组Nephrin蛋白的表达量最高,贝那普利组、水蛭素组的Nephrin蛋白表达量强于模型组,水蛭素组大鼠肾脏Nephrin蛋白的表达量高于贝那普利组,其差异均有统计学意义(P0.01)。生化指标显示:与正常组比较,贝那普利组和水蛭素组的24 h尿蛋白、PLT升高,模型组、贝那普利组和水蛭素组Scr显著降低;与模型组比较,贝那普利组的Scr、ALT降低;与贝那普利组比较,水蛭素组Scr偏高。结论:水蛭素可上调被动型Heymann肾炎模型大鼠足细胞Nephrin m RNA和蛋白的表达。     

益肾通络方对膜性肾病大鼠肾组织Nephrin、Podocin mRNA表达的影响

目的:观察益肾通络方对膜性肾病大鼠肾组织Nephrin、Podocin mRNA表达的影响,为临床治疗膜性肾病(MN)提供依据。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、贝那普利组、中药组,各组按相应剂量灌胃,于第4周末观察24 h尿蛋白定量(UTP)、血清总蛋白(TP)、血白蛋白(Alb)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr),留取肾脏组织,用免疫荧光、光镜、电镜来观察大鼠肾组织病理变化,Real-time PCR法测Nephrin、Podocin mRNA在肾脏中的表达情况。结果:与正常组相比,其余三组TP、Alb均明显降低而TC、TG、UTP均明显升高,肾脏病理出现损害,肾组织中Nephrin、Podocin mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05);与模型组相比,治疗组UTP、TC、TG均明显降低,TP、Alb均明显升高,肾脏病理损害较轻,肾组织Nephrin、Podocin mRNA表达有所升高(P0.05)。贝那普利组与中药组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:益肾通络方可明显降低膜性肾病大鼠的尿蛋白、升高血白蛋白水平、改善血脂代谢,对膜性肾病大鼠肾小球基底膜免疫复合物的沉积及基底膜的增厚有抑制作用,可减少肾脏病理损伤,能够上调膜性肾病大鼠肾组织Nephrin、Podocin mRNA的表达,延缓膜性肾病进一步发展。     

糖肾平通过TGF-β1-Smad2/3-ILK信号通路干预高糖＋LPS诱导足细胞上皮间质转分化的分子机制研究

也页目的：探讨糖肾平对高糖环境下脂多糖（ lipopolysaccharide,LPS）刺激足细胞上皮间质转分化的影响,并探讨其作用机制。方法：以体外培养大鼠肾小球足细胞为研究对象,以高糖（25 mmol/L）、LPS（1μg/mL）刺激足细胞建立模型,分为正常组、高糖组、高糖＋LPS组、厄贝沙坦组、抑制剂组、糖肾平小、中、大剂量组。采用Western blotting及RT-PCR方法检测足细胞中转化生长因子-β1（ transforming growth factor-β1,TGF-β1）、Smad2/3、整合素连接激酶（ integrin-linked kinase, ILK）、CD2相关蛋白（CD2AP）、α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin,α-SMA）的表达水平。结果：与正常组比较,高糖组和高糖＋LPS组足细胞TGF-β1、ILK、α-SMA蛋白及其mRNA表达明显增加（P〈0.01）,P-Smad2/3蛋白及Smad2/3 mRNA表达明显增加（P〈0.01）,CD2AP蛋白及其mRNA表达明显减少（P〈0.01）;与高糖＋LPS组比较,厄贝沙坦组足细胞P-Smad2/3、α-SMA蛋白表达明显减少（P〈0.01）,TGF-β1蛋白表达减少（P〈0.05）,TGF-β1,Smad2/3,α-SMAmRNA表达明显减少（P〈0.01）,ILK mRNA表达减少（P〈0.05）,CD2AP蛋白及其mRNA表达明显增加（P〈0.01）;糖肾平大、中、小各剂量组足细胞TGF-β1蛋白表达明显减少（P〈0.01）,糖肾平大剂量组足细胞TGF-β1 mRNA表达减少（P〈0.05）,小、中剂量组表达明显减少（P〈0.01）;糖肾平小、中、大各剂量组足细胞P-Smad2/3蛋白及Smad2/3mRNA表达均明显减少（P〈0.01）;糖肾平小、大剂量组足细胞ILK mRNA表达减少（P〈0.05）,中剂量组表达明显减少（P〈0.01）;糖肾平大剂量组足细胞α-SMA蛋白及其mRNA表达减少（P〈0.05）;糖肾平小、中、大各剂量组足细胞CD2AP蛋白及其mRNA表达均明显增加（P〈0.01）。结论：糖肾平能够降低足细胞TGF-β1、ILK蛋白及mRNA表达,降低P-Smad2/3蛋白及Smad2/3 mRNA表达,升高足细胞标志物CD2AP蛋白及mRNA表达,降低间充质细胞标志物α-SMA蛋白及mRNA表达,通过抑制TGF-β1-Smad2/3-ILK信号通路的激活减少足细胞转分化,保护足细胞,可能是其防治糖尿病肾病的作用机制之一。     

雷公藤甲素抑制阿霉素肾病大鼠足细胞凋亡的机制研究

目的:观察雷公藤甲素对阿霉素肾病(ADRN)大鼠足细胞凋亡的影响并初步其可能机制。方法:将45只Wistar大鼠随机分为对照组(N)、模型组(ADR)及治疗组(T)。其中ADR组和T组给予一次性尾静脉注射阿霉素6.5 mg/kg构建ADRN模型大鼠,T组给予雷公藤甲素(200μg·kg~(-1)·d~(-1))干预8周。于2、4、6、8周分别检测24 h尿蛋白定量,观察各组大鼠的生化指标及肾组织学改变,TUNEL法测足细胞凋亡,WT-1免疫组织化学染色检测肾小球足细胞数,RT-PCR检测Synaptopodin、p53、Notch1 mRNA表达变化,western印迹测定Synaptopodin、Notch1、Hes1的蛋白表达。结果:(1)ADR组各时间点24 h尿蛋白定量、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)胱抑素C(Cys C)均高于N组,而足细胞计数显著降低,肾小球系膜区增宽,且系膜细胞增生,T组Scr、Cys C低于ADR组(P0.05),足细胞数明显增加(P0.05),同时病理改变较其减轻。(2)8周末时ADR组Synaptopodin mRNA和蛋白表达降低,p53 mRNA表达升高,足细胞体积肿胀增大,凋亡足细胞数目比N组明显增多(P0.05);与ADR组相比,T组Synaptopodin mRNA和蛋白表达增加,p53 mRNA表达下降,凋亡足细胞数目较ADR组明显减少(P0.05)。(3)ADR组Notch1 mRNA和蛋白的表达以及Hes1蛋白的表达均高于N组(P0.05),T组Notch1mRNA和蛋白的表达及Hes 1蛋白的表达低于ADR组(P0.05)。结论:雷公藤甲素可抑制ADRN的足细胞凋亡,其保护足细胞的作用可能与降低Notch信号通路的表达有关。     

参芪膜肾颗粒对膜性肾病大鼠的治疗作用及机制初探

目的:观察参芪膜肾颗粒对膜性肾病大鼠的疗效,探讨其对足细胞保护方面的作用。方法:将30只SD大鼠随机分成10只空白对照组和20只造模组,利用兔抗大鼠Fx1A抗血清建立被动型海曼肾炎(PHN)模型,造模成功后再将20只造模大鼠随机均分成模型组、参芪膜肾组。其中参芪膜肾组予每日一次性灌服参芪膜肾颗粒,共4周。于治疗前(0周后)、2周后、4周后留取24 h尿,测定各组大鼠24 h尿蛋白定量。4周后处死大鼠取双肾,行光镜HE、PASM染色,免疫荧光及电镜检测,观察各组大鼠肾脏一般病理形态学及肾小球超微结构改变情况。RT-PCR检测肾组织Podocin、Podocalyxin和Nephrin的mRNA表达量。结果:治疗2周及4周后,参芪膜肾组24 h尿蛋白定量较模型组明显下降(P0.01)。模型组大鼠肾小球基底膜(GBM)可见弥漫不规则增厚伴上皮侧电子致密物沉积,足细胞足突广泛融合、消失;参芪膜肾组上述病理损伤有一定程度减轻。经治后参芪膜肾组Podocin、Podocalyxin的mRNA表达量较模型组明显增高(P0.01)。结论:参芪膜肾颗粒可以通过上调Podocin、Podocalyxin等的mRNA表达量,从一定程度上缓解PHN大鼠足细胞足突融合、GBM增厚等病理损伤并降低患病大鼠的24 h尿蛋白,具有一定的足细胞保护作用。     

滋肾通络方对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA表达影响的实验研究

目的:观察滋肾通络方含药血清对高糖环境下LPS刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA的影响,并探讨其在防治糖尿病肾病(DN)中的机制。方法:以高糖环境下LPS刺激大鼠肾小球系膜细胞生长建立模型,分为以下8组:(1)正常组;(2)高糖组;(3)高糖+LPS组;(4)苯那普利组;(5)滋肾通络方小剂量组;(6)滋肾通络方中剂量组;(7)滋肾通络方大剂量组。采用RT-PCR技术从分子生物学水平检测各组系膜细胞中TGF-β1、MMP-2及MMP-9mRNA表达。结果:与正常组相比,高糖组、高糖+LPS组TGF-β1mRNA的表达明显升高(P<0.01),MMP-2及MMP-9mRNA的表达明显降低(P<0.01);与模型组相比较,滋肾通络方大、中、小剂量组对大鼠肾小球GMCs TGF-β1mRNA表达显著降低(P<0.05),MMP-2、MMP-9mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论:滋肾通络方含药血清能够抑制大鼠肾小球GMCs TGF-β1mRNA的表达,增加MMP-2、MMP-9mRNA的表达,从而通过增加肾小球系膜细胞细胞外基质的降解以延缓DN进展。     

保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的作用研究

目的:探讨保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的影响。方法:将KK-Ay小鼠高脂饲料喂养建立糖尿病模型,造模成功后随机分为模型组(10只)与保肾通络方组(10只),另设10只C57BL/6J小鼠作为对照组;根据培养条件不同将体外小鼠肾小球足细胞(MPC5)分为正常对照组、高糖组、保肾通络方含药血清组。测定小鼠24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)水平并进行肾组织病理学检查,CCK-8法检测足细胞活力,Western blot检测足细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3及p53、p-p53的表达,TUNEL染色观察各组足细胞凋亡情况。结果:与对照组相比,模型组小鼠24 h-UTP显著升高(P<0.01),肾小球系膜细胞增生,细胞外基质增多,肾小球凋亡细胞比例及cleaved-caspase3蛋白表达增加(P<0.05),肾组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增加,p53磷酸化水平增加(P<0.01);保肾通络方干预使KK-Ay小鼠24 h-UTP显著降低(P<0.01),肾脏病理改善,肾小球凋...     

糖肾平对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin与CD2AP蛋白及其mRNA表达的影响

目的：观察糖肾平对糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子nephrin和CD2AP表达的影响,探讨其防治DN的作用机制.方法：雄性Wistar大鼠74只,按体重随机分组为正常组10只,造模组64只.造模组大鼠腹腔一次性注射链脲佐菌素（STZ）（45 mg/kg）,72 h后检测大鼠血糖和尿糖,以血糖≥16.7 mmol/L、尿糖（＋＋＋＋）者为DN大鼠造模成功.模型成功的大鼠按体重随机分为模型组、厄贝沙坦组、糖肾平小、大剂量组,各组分别干预14周.于第14周处死大鼠,无菌取肾,采用原位杂交和免疫组化技术观察肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和CD2AP蛋白及其mRNA的表达水平.结果：模型组与正常组相比,nephrin和CD2AP蛋白及mRNA表达水平明显下调（P〈0.01）;与模型组相比,厄贝沙坦、糖肾平干预后糖尿病大鼠肾小球足细胞nephrin和CD2AP蛋白及mRNA水平表达明显增加（P〈0.05）.结论：糖肾平可能通过维持足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和CD2AP的稳定性,从而发挥对DN肾脏的保护作用.     

火把花根对实验性肾炎大鼠肾脏病理改变的影响

目的:观察中药火把花根对肾炎大鼠模型肾脏病理改变的影响,评价火把花根对肾炎的治疗作用.方法:用兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清(ATS),复制大鼠系膜增生性肾炎模型即抗-Thy1肾炎,将实验动物分为3组:对照组、模型组及火把花根治疗组.于治疗第1、2及4周末,各组动物留尿测定尿蛋白,并取肾组织进行常规肾脏病理检查,免疫组织化学方法测定肾小球系膜区纤维连接蛋白(FN)表达,透视电镜观察肾脏超微病理变化,尤其是足细胞变化.结果:实验第1周末模型组尿蛋白明显增多,第4周末仍显著高于对照组(P＜0.01).治疗组在各时间点尿蛋白量均较模型组显著下降(P＜0.01).肾脏病理学检查见模型组肾小球系膜细胞增生,基质增多,治疗组系膜增生明显减轻;免疫组织化学染色表明见模型组肾小球系膜基质成分FN蛋白表达明显增高,治疗组FN蛋白表达较模型组显著下降(P＜0.01).超微病理检查见模型组肾小球足细胞肿胀,大部分节段足突弥漫性融合,系膜基质轻-中度增生,治疗组足细胞无明显肿胀,大部分节段足突排列整齐,少数节段足突部分融合,系膜基质无明显增生.结论:抗-Thy1肾炎模型肾小球存在足细胞病变,主要表现为足细胞肿胀及足突融合,足细胞病变可能是引起蛋白尿的原因之一;火把花根可能部分通过改善足细胞病变而减少蛋白尿;火把花根可以改善其肾脏病理变化,延缓肾硬化的发展.     

温阳活血利水方对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞podocin表达的影响

目的：观察温阳活血利水法治疗微小病变肾病综合征的疗效并探讨其作用机制。方法：SPF级雄性Wistar大鼠50只,随机分为正常组、模型组、泼尼松组、中药组。正常组尾静脉一次性注射生理盐水1ml,其余各组均采用阿霉素5.5mg/kg一次性尾静脉注射。1周后开始药物干预,持续4周。观察实验大鼠的一般情况;检测大鼠24h尿蛋白定量;检测总蛋白、白蛋白、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白的水平;采用RT-PCR和免疫荧光染色测定大鼠肾小球podocin的mRNA和蛋白表达水平;光学显微镜观察肾组织形态学变化;电镜下观察足细胞足突的变化。结果：模型组24h尿蛋白定量明显升高（P〈0.01）,血清总蛋白、白蛋白明显降低（P〈0.01）,血清脂质水平升高（P〈0.01）,podocin mRNA与蛋白表达明显减少,足突融合明显。两个治疗组均能降低24h尿蛋白定量,升高血清总蛋白、白蛋白水平（P〈0.01）。温阳活血利水方能降低血清脂质水平（P〈0.01）。两个治疗组均能改善肾组织中podocin mRNA与蛋白的表达的减少,改善其肾组织的病理改变。结论：温阳活血利水方能改善阿霉素肾病大鼠肾小球podocin的表达减少,减轻肾组织的病理改变,这可能是温阳活血利水方减少蛋白尿的重要作用机制。     

苯那普利、氯沙坦对糖尿病肾病大鼠Nephrin表达的影响

目的 探讨苯那普利、氯沙坦对糖尿病肾病大鼠Nephrin蛋白表达的影响。方法 建立糖尿病大鼠模型,分别使用苯那普利、氯沙坦治疗及联合治疗4、8周后,取出肾脏,采用逆转录聚合酶链式反应（RTPCR）检测肾皮质Nephrin mRNA的表达。结果 与对照组相比,糖尿病组Nephrin mRNA表达下调,苯那普利、氯沙坦治疗组较糖尿病组表达增加,两者联合治疗后增加更为明显。结论 苯那普利和氯沙坦联合应用,可以完全阻断血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）,从而使Nephrin mRNA表达上调;肾小球足细胞损伤明显减轻、蛋白尿明显减少。