人ⅡA型磷脂酶A2衍生多肽M17杀菌作用的研究

目的: 研究和比较人ⅡA型磷脂酶A₂(phospholipase A₂,PLA₂)衍生多肽M17,P26和N_1-11对不同细菌在体外的杀菌效应。方法: 根据人ⅡA型PLA₂氨基酸顺序分别设计合成3个肽分子M17(p_51-67),P26(p_99-124),N_1-11(p_1-11)。采用琼脂铺板计数法测定杀菌活性,将不同浓度衍生肽分别与革兰阳性菌(G⁺)金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、屎肠球菌和革兰阴性菌(G^-)大肠杆菌、绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌在37℃孵育2.5 h,然后铺板并置于37℃恒温箱培养18~24 h,记录每一琼脂板上的菌落数(CFU),并计算多肽作用后的杀菌率。结果: ⅡA型PLA₂M17对枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌的杀菌回归方程分别为:Y=1.464X+3.795(ED₅₀ 6.65 mg·L^-1),Y=1.152X+3.419(ED₅₀ 23.57 mg·L^-1),Y 0.836X+3.832 (ED₅₀ 24.95 mg·L^-1);对大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、绿脓杆菌的杀菌回归方程分别为:Y=0.877X+4.054(ED₅₀ 12.00 mg·L^-1),Y=1.094X+3.371(ED₅₀ 30.83 mg·L^-1),Y=1.027X+3.626(ED₅₀ 21.77 mg·L^-1);M17肽分子对G⁺菌与G^-菌均有较强的杀菌活性。P26和N_1-11对金黄色葡萄球菌的杀菌回归曲方程分别为:Y=0.915X+2.766(ED₅₀ 276.39 mg·L^-1),Y=1.389X+1.668(ED₅₀ 250.52 mg·L^-1), P26和 N_1-11对大肠杆菌的杀菌回归方程为:Y=1.327X+1.437(ED₅₀ 484.18 mg·L^-1), Y=0.881X+2.903(ED₅₀ 240.02 mg·L^-1);N_1-11和P26对G⁺菌有较强的杀菌活性,但对G^-菌杀菌活性较弱。M17肽分子对金黄色葡萄球菌的杀菌活性强于P26及N_1-11,M17肽分子对大肠杆菌的杀菌活性明显强于P26及N_1-11。结论: 衍生自人ⅡA型PLA₂保守区域17个氨基酸残基的肽M17对G⁺菌和G^-菌均有较强的杀菌活性,这可能与M17肽分子更易于与细菌结合并发挥作用有关。     

参白解毒方抑制HCT116细胞增殖的药效及机制

目的 探讨参白解毒方（SBJDF）抑制结直肠癌（CRC）细胞HCT116增殖的药效及机制。方法 利用参白解毒方（0、0.25、0.5、1、2、4 g·L^-1）处理HCT116细胞48 h，噻唑蓝（MTT）比色法检测参白解毒方对HCT116细胞活力的影响，分别设置空白组、参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组，倒置显微镜观察参白解毒方对HCT116细胞形态的影响，克隆形成实验观察参白解毒方对HCT116细胞增殖能力的影响，JC-1探针检测参白解毒方对HCT116细胞线粒体膜电位（Δψm）的影响，流式细胞仪检测HCT116细胞周期分布和细胞凋亡率，蛋白免疫印迹法（Western blot）分析参白解毒方对细胞周期，抗凋亡以及核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白的影响。结果 参白解毒方有效抑制HCT116细胞活力，引起细胞形态改变，呈浓度依赖性；与空白组比较，参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组克隆形成率均明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（2、4 g·L^-1）组诱导HCT116细胞发生G₀/G₁期阻滞（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组周期蛋白D₁（CyclinD₁）表达明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（2、4 g·L^-1）组细胞周期蛋白A₂（CyclinA₂），周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）蛋白表达明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（4 g·L^-1）组周期蛋白依赖性激酶1（CDK1）表达显著下降（P<0.01）。与空白组比较，参白解毒方（2、4 g·L^-1）组课诱导HCT116细胞凋亡，并下调抗凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关xl蛋白（Bcl-xl）表达（P<0.05，P<0.01），降低HCT116细胞线粒体膜电位；与空白组比较，参白解毒方（2、4 g·L^-1）组可下调NF-κB信号通路相关蛋白IκB激酶α（IKKα）、NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、磷酸化p65蛋白（p-p65）的表达（P<0.05，P<0.01）。结论 参白解毒方有效抑制HCT116细胞增殖，其机制可能通过抑制HCT116细胞NF-κB信号通路的激活，引起细胞周期阻滞，诱导细胞凋亡。     

通莲汤对胃癌MGC803细胞周期及NF-κBs信号通路的影响

目的: 研究通莲汤对胃癌MGC803细胞形态、生长周期的调节作用及细胞核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响,以探讨该方抑制胃癌细胞增殖的机制。 方法: 将MGC803细胞以1×10⁴个细胞/孔的密度接种于96孔细胞培养板,以含5%胎牛血清DMEM培养液培养,37 ℃,5%饱和湿度的CO₂培养箱孵育,细胞贴壁24 h,分别加入浓度为25~800 mg·L^-1倍比梯度的通莲汤提取液,以10~160 mg·L^-1倍比浓度的氟脲嘧啶为阳性对照组,孵育48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT比色法检测细胞增殖变化,曲线拟合法计算通莲汤和氟脲嘧啶50%抑制浓度(IC₅₀);以两者48 h IC₅₀浓度处理细胞48 h,流式细胞技术(FCM)测定细胞周期,Western blot法测定细胞IκB激酶β(IKKβ),NF-κB,phosph-NF-κB蛋白水平。 结果: 通莲汤和氟脲嘧啶48 h IC₅₀值分别为192.74 mg·L^-1,23.61 mg·L^-1;与空白对照组相比,通莲汤显著影响MGC803细胞周期中G₂期,氟脲嘧啶显著影响MGC803细胞周期中G₁期(P<0.05);通莲汤和氟脲嘧啶均能显著抑制IKKβ与NF-κB的蛋白表达。 结论: 通莲汤抑制MGC803细胞生长与抑制细胞于G₂期,下调NF-κB通路中IKKβ,NF-κB蛋白的表达有关。     

甘草查尔酮A对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的 观察甘草查尔酮A对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。方法 细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测不同浓度甘草查尔酮A对MDA-MB-231细胞存活率的影响;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）作用MDA-MB-231细胞24 h,分别用细胞凋亡试剂盒（Annexin V-FITC/PI）检测细胞凋亡情况;荧光探针法（DCFA-DA）检测细胞内活性氧（ROS）水平,荧光探针（JC-1）法检测细胞线粒体膜电位（MMP）;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）的表达及内质网应激相关蛋白（CHOP）,转录激活因子4（ATF4）,蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）,磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶（p-PERK）,真核翻译起始因子2α（eIF2α）,磷酸化真核翻译起始因子2α（p-eIF2α）表达。结果 与空白组比较,随着甘草查尔酮A浓度增大,从甘草查尔酮A 5 μmol·L^-1开始,细胞存活率明显降低（P<0.05）,其半数抑制浓度（IC₅₀）为19.05 μmol·L^-1;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）组细胞凋亡明显升高（P<0.05）,甘草查尔酮A 40 μmol·L^-1时细胞凋亡率达30.2%（P<0.05）;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达明显降低（P<0.05）,促凋亡蛋白Bax表达明显升高（P<0.05）,且呈浓度依赖性;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）明显升高细胞内ROS水平（P<0.05）,降低线粒体MMP水平（P<0.05）,导致线粒体功能障碍,呈浓度依赖性;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）诱导内质网应激,使内质网应激相关蛋白CHOP,ATF4表达明显增多,磷酸化（p）-PERK,p-eIF2α表达明显升高（P<0.05）,呈浓度依赖性。结论 甘草查尔酮A可能通过增加细胞内ROS水平,降低MMP引起线粒体功能障碍和内质网应激诱导MDA-MB-231细胞凋亡。     

3种中药体外抗巨细胞病毒效应的比较

目的 :探讨中药金叶败毒注射液、板蓝根注射液、路边青注射液抗人巨细胞病毒 (HCMVAD16 9)作用的差异。方法 :采用细胞病变 (CPE)抑制法观察这 3种中药对HCMVAD169毒株的抑制作用。使用MTT法检测细胞的损伤程度 ,并利用A值评价 3种中药的抗HCMV的效应。结果 :金叶败毒注射液的半数中毒浓度 (TD₅₀ )为 20g·L^-1,半数有效浓度 (IC₅₀ )为 5.65g·L^-1,治疗指数 (TI)为 3.54 ;板蓝根注射液的TD₅₀ 为 10.23g·L^-1,ICsub>50 为 3g·L^-1,TI为 3.41;路边青注射液TD₅₀ 为 20 .23g·L^-1,IC₅₀ 为 5 .71g·L^-1,TI为 3.54。 3种中药均具有抗HCMV的作用 ,且随药物浓度的增高其作用也增强。但这 3种中药抗HCMV作用的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :在 1∶2 0 0 ,金叶败毒注射液、板蓝根注射液、路边青注射液均具有较强的抗病毒作用 ,都是理想的抗HCMV中药。     

高效液相色谱手性流动相添加剂法测定富马酸(R，R)-戊乙奎醚中3个光学异构体杂质的含量

 目的 建立拆分富马酸(R,R)-戊乙奎醚与其3个光学异构体的高效液相色谱分离方法,控制光学纯度。方法 选用C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾（含0.6%三乙胺和0.015 mol·L^-1β-环糊精,pH为2.3）为流动相,柱温25 ℃,检测波长206 nm,流速1.0 mL·min^-1。结果 3个光学异构体的检测灵敏度为9.0 ng,本方法可检出限量为0.09%的光学异构体杂质。结论 本法可有效分离富马酸(R,R)-戊乙奎醚及其3个光学异构体,可用于控制本品光学纯度。     

黄芪-白花蛇舌草抑制肺癌A549细胞增殖机制

目的 从细胞水平观察黄芪-白花蛇舌草对人肺腺癌A549细胞增殖及白细胞介素-6（IL-6）,磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）,蛋白激酶B（Akt）,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）,雷帕霉素靶蛋白（mTOR）,缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）,细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）表达量的影响,并探讨其作用的分子机制。方法 设立空白组（完全培养基）,黄芪-白花蛇舌草低、中、高质量浓度组（20,40,60 mg·L^-1）,顺铂低、中、高质量浓度组（5,10,20 mg·L^-1）,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测黄芪-白花蛇舌草（0,20,40,60 mg·L^-1）和顺铂（0,5,10,20 mg·L^-1）干预A549细胞24,48,72 h后的细胞活性,计算各组细胞增殖能力,筛选出各药物组最佳浓度;分别用完全培养基,黄芪-白花蛇舌草（40 mg·L^-1）,顺铂（10 mg·L^-1）,联合药物（40 mg·L^-1+10 mg·L^-1）干预肺腺癌A549细胞,设置为空白组、黄芪-白花蛇舌草组、顺铂组、联合组,计算各组在24,48,72 h后对A549细胞增殖抑制影响;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测各组72 h后细胞培养上清中IL-6的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测HIF-1α,Cyclin D₁ mRNA水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组蛋白PI3K,Akt,p-Akt,mTOR,HIF-1α,Cyclin D₁表达的变化情况。结果 在作用细胞24 h后,各黄芪-白花蛇舌草组对细胞增殖未表现出明显抑制,作用48 h,与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草组对肿瘤细胞有明显增殖抑制作用（P<0.05）,表现出时间依赖性,在作用细胞72 h,黄芪-白花蛇舌草各浓度组未表现出明显差异,故选用40 mg·L^-1为中药最佳浓度组,用于后续实验。与空白组比较,经过不同浓度顺铂干预后,细胞增殖均受到不同程度抑制（P<0.05）,表现出明显的时间依赖性,基于细胞存活率考虑,选用顺铂10 mg·L^-1为最佳浓度。与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草与顺铂联合应用明显抑制肺腺癌A549细胞增殖,增殖抑制率表现出明显的时间依赖性（P<0.05）,且药物作用72 h,联合组与其他两组比较差异更加显著（P<0.01）;与空白组比较,各用药组细胞培养液IL-6分泌显著降低（P<0.01）,以联合组下降更加突出。与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草、顺铂均能降低HIF-1α,Cyclin D₁ mRNA水平（P<0.05,P<0.01）,且联合用药降低幅度更加明显;各用药组PI3K,p-Akt,mTOR,HIF-1α,Cyclin D₁蛋白均明显降低（P<0.05,P<0.01）,且联合组各蛋白表达量明显低于顺铂组（P<0.01）。结论 黄芪-白花蛇舌草对肺癌A549细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其抑制IL-6/PI3K/Akt/mTOR-HIF-1α轴的表达与分泌有关。     

长穗桑中的α-葡萄糖苷酶抑制剂成分研究

 目的 研究长穗桑中具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的化学成分。方法 采用各种离子交换树脂对长穗桑水提取物进行分离纯化,通过NMR、MS等波谱分析手段鉴定化合物结构。结果 从长穗桑水提取物中分离到11个化合物,其中7个多羟基生物碱类化合物,2个酰胺类化合物,1个氨基酸以及甜菜碱。分别鉴定为1-deoxynojirimycin (1),fagomine (2),3-epi-fagomine (3),1,4-dideoxy-1,4-imino-D-arabinitol (4),2-O-α-D-galactopyranosyl-1-deoxynojirimycin (5),4-O-β-D-glucopyranosyl-fagomine (6),1,4-dideoxy-1,4-imino-(2-O-β-D-glucopyranosyl)-D-arabinitol (7),(2S)-citrullinamide (8),grateloupinamide (9),天冬氨酸(10),甜菜碱(11)。化合物1~10分别进行了α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选。结论 化合物1~11均为首次从该植物中分离得到。4个多羟基生物碱(1,5~7)以及1个酰胺类化合物(9)有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其中化合物1的IC₅₀为0.07 μmol·L^-1;化合物5的IC₅₀为0.39 μmol·L^-1,与阳性对照阿卡波糖(acarbose,IC₅₀=0.52 μmol·L^-1)相当;化合物6,7,9的IC₅₀值在1~5 μmol·L^-1。     

喘平方对哮喘豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β1及TNF-α的影响

目的: 探讨喘平方防治支气管哮喘的作用机制。 方法: 取白化豚鼠60只,随机分为正常组、模型组、麻黄组(0.20 g·kg^-1)、洋金花组(0.07 g·kg^-1)、喘平方组(0.32 g·kg^-1)、地塞米松组(7.5×10^-4 mg·kg^-1),通过对豚鼠ip卵蛋白致敏并雾化吸入激发,建立实验性哮喘豚鼠模型;治疗组自注射第14天起每天ig给药1次,连续7 d,正常组及模型组给予生理盐水。观察豚鼠的一般情况,豚鼠肺泡灌洗液中免疫球蛋白E(IgE),转化生长因子β₁(TGF-β₁),肿瘤坏死因子α(TNF-α)的变化,肺组织病理情况。 结果: 各组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α分别为:正常组IgE(68.25±5.92) mg·L^-1,TGF-β₁(78.72±10.92)ng·L^-1,TNF-α(388.02±55.61) ng·L^-1;模型组IgE(137.28±14.38) mg·L^-1,TGF-β₁(172.39±14.04)ng·L^-1,TNF-α(752.76±51.25)ng·L^-1;喘平方组IgE(76.35±6.22) mg·L^-1,TGF-β₁(115.76±9.17)ng·L^-1,TNF-α(569.32±39.7) ng·L^-1;哮喘组及喘平方组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量均高于正常组(P<0.05);喘平方组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量均低于哮喘组(P<0.05)。 结论: 喘平方能够通过下调豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量,可降低气道高反应性、减轻气道炎症症状、控制或延缓气道纤维化进程。     

乙肝转阴散对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用

目的 :研究乙肝转阴散(YGZYS)对HepG2.2.15细胞乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎E抗原(HBeAg)分泌的影响。 方法 :采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测YGZYS对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC₅₀)和最大无毒浓度(TC₀);在TC₀基础上观察药物5个不同浓度作用于HepG2.2.15细胞,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养4 d和8 d的细胞上清液HBsAg和HBeAg的滴度。 结果 :TC₅₀ 5.386 g ·L^-1,TC₀ 0.736 g ·L^-1。提示YGZYS对HepG2.2.15细胞毒性作用较低。在无毒浓度下,YGZYS能有效地抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg;且治疗指数(TI)均大于2,说明YGZYS为高效低毒的抗HBV药物。 结论 :YGZYS可有效地抑制HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的分泌,且毒性较低。     

连翘酯苷对PC12细胞增殖及其细胞损伤模型的保护作用

目的： 研究连翘酯苷对PC12细胞增殖及其损伤模型的影响。方法： 应用谷氨酸（20 mmol·L^-1）、低糖低血清培养基及β淀粉样蛋白_25~35（Aβ_25~35,10 μmol·L^-1）建立谷氨酸、低糖低血清及Aβ_25~35致PC12细胞损伤模型,观察连翘酯苷低、中、高浓度（0.1,1,5 μmol·L^-1）剂量对上述模型细胞存活率的影响,同时观察连翘酯苷低、中剂量对Aβ_25~35致PC12细胞凋亡的影响。结果： 连翘酯苷可提高PC12细胞存活率,提高谷氨酸、低糖低血清及Aβ_25~35致PC12细胞损伤模型的存活率,与模型组比较,有显著性差异（P<0.05）,并呈现一定量效关系。连翘酯苷（0.1,1 μmol·L^-1）可降低Aβ_25~35引起PC12细胞凋亡率（P<0.05,P<0.01）。结论： 连翘酯苷在体外实验具有神经细胞保护作用。     

基于Wnt/β-catenin调控EMT探讨氧化苦参碱联合贝伐珠单抗抗乳腺癌的体外活性机制

目的 观察氧化苦参碱（OM）联合贝伐珠单抗（BV）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的作用,并基于分泌型糖蛋白（Wnt）/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路对OM调控BV引起的上皮间质转化（EMT）的机制进行探讨。方法 采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）实验观察OM（0,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0 mmol·L^-1）及BV（0,0.25×10^-4,0.50×10^-4,1.00×10^-4,2.00×10^-4,4.00×10^-4,8.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞增殖的影响;通过侵袭小室法（transwell）和划痕损伤修复实验观察OM（4.0 mmol·L^-1）与BV（2.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞侵袭与迁移能力的影响;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）观察OM（4.0 mmol·L^-1）与BV（2.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞增殖相关蛋白的影响,并对Wnt/β-catenin信号通路及EMT相关蛋白的表达水平进行检测。结果 与空白组比较,OM（2.0,4.0,8.0,16.0 mmol·L^-1）可呈浓度依赖性地抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.05,P<0.01）,而BV未表现出抑制MCF-7细胞增殖的作用,两药联合对MCF-7细胞增殖的抑制作用与OM比较差异无统计学意义。与空白组比较,OM可显著减少MCF-7细胞的迁移距离和侵袭细胞数目（P<0.01）,BV可明显增加MCF-7细胞的迁移距离和侵袭细胞数目（P<0.05,P<0.01）。与BV比较,联合后OM可显著抑制BV引起的MCF-7细胞的侵袭和迁移（P<0.01）。与空白组比较,OM及两药联用可明显抑制MCF-7细胞中与细胞增殖相关蛋白激酶B（Akt）和细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）蛋白的磷酸化（P<0.01）;OM及两药联用后显著降低Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,原癌基因（c-Myc）,CD44,G₁/S-特异性周期蛋白-D₁（cyclin D₁）蛋白表达（P<0.05,P<0.01）;OM及两药联用可显著降低EMT中钙离子依赖的细胞N-钙黏蛋白（N-cadherin）,波形蛋白（Vimentin）蛋白表达,增加钙离子依赖的细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平（P<0.01）,BV组上述相关蛋白的表达相反（P<0.05,P<0.01）。结论 OM与BV联合后OM可通过有效抑制BV引起的Wnt/β-catenin通路激活逆转EMT机制发挥抗乳腺癌的作用。     

三七皂苷R1对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的: 探讨三七皂苷R₁对Aβ_1-42诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护机制. 方法: MTT法检测细胞存活率;PI/Annexin V双染流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中Bax,Bcl-2的表达;ELISA法检测caspase-3,caspase-8及caspase-9的酶活性. 结果: 6.25,12.5,25,50,100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁对Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡均有一定保护作用,并呈剂量依赖关系;PI/Annexin V双染流式细胞术检测结果表明Aβ_1-42可诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,6.25~100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁可显著降低细胞凋亡率.Western blot结果显示,6.25~100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁可下调Bax表达,上调Bcl-2表达;ELISA分析显示不同剂量的三七皂苷R₁可抑制Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞caspase-3和caspase-9的激活,但对caspase-8的激活没有影响. 结论: 三七皂苷R₁通过抑制线粒体相关的凋亡通路激活,减少Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡.     

白茅内生菌Chaetomium globosum的化学成分研究

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱等方法对白茅内生菌Chaetomium globosum固体发酵产物的化学成分进行分离纯化,获得9个化合物。利用高分辨质谱、核磁共振谱及文献比对的方法,将上述化合物分别鉴定为chaetoglobosin F(1),chaetoglobosin F_ex(2),chaetoglobosin E(3),cytoglobosin A(4),penochalasin C(5),isochaetoglobosin D(6),N-benzoylphenylalaninyl-N-benzoylphenylalaninate(7),尿嘧啶(8),5-甲基尿嘧啶(9),其中化合物 7 为首次从毛壳菌中分离得到。采用MTT法测定化合物的体外细胞毒活性,结果显示,化合物 1,3,4,5 对人宫颈癌细胞株HeLa具有明显的抑制活性,IC₅₀分别为99.43,23.77,97.92,86.25 μmol·L^-1,而阳性对照药顺铂的IC₅₀为24.33 μmol·L^-1。     

灯盏细辛与赤芍配伍组方对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用

目的：探讨灯盏细辛与赤芍配伍组方对H₂O₂诱导的PC12细胞氧化损伤的影响及其作用机制。方法：用H₂O₂（850 μmol·L^-1）处理PC12细胞6 h建立体外氧化应激模型,以不同质量浓度的灯盏细辛与赤芍配伍组方（6.25,12.5,25,50,100 mg·L^-1）预处理PC12细胞（3×10⁴~4×10⁴个/mL）24 h,采用MTT法检测细胞活力,比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性、细胞裂解液中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平,利用荧光探针DCFH-DA和罗丹明123流式细胞术分别检测细胞内活性氧（ROS）和线粒体膜电位（Δψm）。结果：与正常对照组比较,模型组的细胞存活率下降至52.78%,细胞上清液中LDH释放量上升110.13 U·L^-1,细胞内MDA和ROS水平显著增高,细胞内SOD和Δψm水平显下降（P<0.01）;与模型组比较,灯盏细辛与赤芍配伍组方可明显增加细胞存活率,降低LDH活性,降低MDA水平,抑制细胞内活性氧的生成,增加SOD活性和使线粒体膜电位升高（P<0.05,P<0.01）,且在一定范围呈剂量依赖性。结论：灯盏细辛与赤芍配伍组方对H₂O₂诱导的PC12细胞氧化损伤具有保护作用,其机制可能与其降低细胞脂质过氧化水平,提高抗氧化酶活力,抑制ROS生成和稳定线粒体膜电位有关。     

鳖甲煎丸通过Wnt/β-catenin信号通路逆转大鼠肝卵圆细胞EMT的机制

目的 研究鳖甲煎丸对转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导的大鼠肝卵圆细胞WB-F344上皮间质转化（EMT）的影响,探讨其逆转EMT改变的作用机制。方法 将WB-F344细胞随机分为空白组,TGF-β₁模型组（10 μg·L^-1TGF-β₁）,鳖甲煎丸低剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+0.55 g·kg^-1鳖甲煎丸）,鳖甲煎丸中剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+1.1 g·kg^-1鳖甲煎丸）,鳖甲煎丸高剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+2.2 g·kg^-1鳖甲煎丸）,除空白组外,均采用TGF-β₁诱导WB-F344细胞构建EMT模型,分别加入鳖甲煎丸低、中、高剂量含药血清处理细胞,采用细胞划痕实验检测WB-F344细胞迁移能力的改变;使用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）,N-钙黏蛋白（N-cadherin）,波形蛋白（Vimentin）表达的变化;使用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测β-连环蛋白（β-catenin）mRNA表达的改变;使用细胞免疫荧光法检测β-catenin的表达。结果 与空白组比较,TGF-β₁诱导WB-F344细胞4 d,WB-F344细胞间隙从紧密逐渐变得松散,细胞形态由鹅卵石状向成纤维样细胞转变,且E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin蛋白表达升高（P<0.01）,说明成功构建了WB-F344细胞EMT模型。划痕实验结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组WB-F344细胞的迁移能力增强（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸中、高剂量组可以明显抑制WB-F344细胞的迁移能力（P<0.05）。Western blot结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组E-cadherin蛋白表达水平降低,N-cadherin,Vimentin蛋白表达水平升高（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸中、高剂量组E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin,Vimentin蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）。Real-time PCR结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组中β-catenin mRNA表达升高（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸低、中、高剂量组中β-catenin mRNA的表达降低（P<0.01）。细胞免疫荧光结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组β-catenin在细胞核内荧光表达增强;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸低、中、高剂量组β-catenin在细胞核内荧光表达减弱,且鳖甲煎丸对细胞核内β-catenin抑制作用与其浓度呈正相关。结论 鳖甲煎丸可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,逆转TGF-β₁诱导WB-F344细胞的EMT进程,抑制WB-F344细胞的迁移能力。     

小槐花提取物对α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

目的: 评价小槐花Desmodium caudatum (Thunb.)DC.提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。方法: 通过建立体外α-葡萄糖苷酶抑制模型,对小槐花提取物进行活性筛选。结果: 小槐花提取物均有较好的α-葡萄糖酶抑制作用,其中以乙酸乙酯部位(DCEA) 和石油醚部位(DCPE) 活性较好(IC₅₀=9.79,39.2 mg·L^-1),其次为正丁醇部位 (DCBU) (IC₅₀=625.1 mg·L^-1),抑制活性均远远大于阳性对照阿卡波糖 (IC₅₀=1 103.01 mg·L^-1)。DCBU对α-葡萄糖苷酶抑制活性呈显浓度依赖性;DCPE和DCEA对α-葡萄糖苷酶抑制活性对浓度的变化较灵敏,随浓度的增加而急剧上升。结论: 小槐花石油醚部位和乙酸乙酯部位对α-葡萄糖苷酶活性抑制非常显著,具有开发治疗糖尿病降血糖药物的价值。     

三七皂苷通过抑制自噬减轻TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的 探讨三七皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）抗转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导的肾小管上皮细胞损伤的作用及机制。方法 培养NRK-52E肾小管上皮细胞,分为空白组、TGF-β₁组、TGF-β₁+12.5 mg·L^-1 PNS组、TGF-β₁+25 mg·L^-1 PNS组、TGF-β₁+50 mg·L^-1 PNS组,PNS干预48 h,收集细胞及上清,采用倒置显微镜观察细胞形态;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测上皮间质转化（EMT）相关蛋白、自噬相关蛋白表达;流式液相多重蛋白定量技术检测炎症因子含量;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 与空白组比较,TGF-β₁诱导后细胞呈梭形改变且呈明显的EMT表现,即E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达明显下调（P<0.05）,α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达明显上调（P<0.05）,PNS处理后,大部分细胞形态趋向正常并逆转EMT的发生。同时,与空白组比较,TGF-β₁组肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平明显升高,IL-10水平下降,凋亡率增加（P<0.05）,PNS作用后,TNF-α水平下降,IL-10水平升高,细胞凋亡率明显下降（P<0.05）。并且TGF-β₁能明显上调肾小管上皮细胞自噬相关蛋白Beclin1和自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）的表达（P<0.05,P<0.01）,而PNS抑制其表达。结论 PNS对TGF-β₁诱导的肾小管上皮细胞具有保护作用,其机制可能是通过抑制自噬来减轻炎症和凋亡,进而抵抗TGF-β₁诱导的损伤。     

培养基类型、植物生长物质浓度对王枣子愈伤组织诱导和继代的影响＊

目的 优化王枣子愈伤组织的诱导和探究疏松愈伤组织的继代条件，为王枣子悬浮细胞培养奠定初步基础。方法 以王枣子无菌苗幼叶为外植体，采用单因素试验研究不同培养基类型对愈伤组织诱导的影响；采用L₉(3² )正交试验设计，研究2，4-D、KT不同浓度配比对王枣子疏松愈伤组织的增殖培养的影响。结果 愈伤组织的诱导率在MS、1/2MS和B₅培养基上呈上升趋势。MS的出愈时间最晚，1/2MS的出愈时间次之；在B₅培养基上出愈时间最早，且愈伤组织的质地和生长状态较好。正交试验的结果显示，愈伤组织的在B₅培养基上添加2，4-D 2.5 mg·L^-1 +KT 1.0 mg·L^-1增殖倍数最小为19.78倍，添加2，4-D 1.5 mg·L^-1 +KT 0.2 mg·L^-1 达到最大增殖倍数27.34倍；王枣子疏松愈伤组织增殖试验中2，4-D(P<0.01)的影响效应比KT(P=0.091)大。结论 B₅培养基是最佳的王枣子愈伤组织诱导培养基，B₅培养基中添加2，4-D 1.5 mg·L^-1 +KT 0.5 mg·L^-1 为疏松愈伤组织增殖的最佳配比。     

当归补血汤含药血清对血管紧张素II诱导的 心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的: 探讨当归补血汤含药血清对血管紧张素II (Ang II) 诱导的心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法: 应用血清药理学方法制备含药血清。体外培养心肌细胞,收集对数期细胞分为4组:空白对照组、AngⅡ(10^-7mol·L^-1)组、缬沙坦(10^-6mol·L^-1)组、10%当归补血汤含药血清(0.84 g·L^-1)组,共同作用48 h后,用MTT 法测定细胞活性、单细胞电泳法检测细胞DNA损伤情况、激光共聚焦检测线粒体膜电位,Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白p53,Caspase-3表达变化。结果:与空白对照组相比,Ang II组心肌细胞活力(A)(0.159±0.024)、线粒体膜电位(170.19±16.15)Δψ_m明显降低(P<0.05),并且心肌细胞DNA损伤,p53(0.497±0.029)、Caspase-3(0.509±0.041)蛋白表达显著升高(P<0.05);与Ang II组相比,当归补血汤含药血清组心肌细胞活性(A)(0.197±0.035)、线粒体膜电位(242.39±18.27)Δψ_m明显升高(P<0.05),心肌细胞DNA损伤、p53(0.387±0.020),Caspase-3(0.385±0.029)蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论: 当归补血汤可抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与调节线粒体通路有关。