强氧化剂脱黑色素对免疫组化染色影响的评估

黑色素瘤是临床上较为常见的皮肤黏膜和色素膜恶性肿瘤,也是发病率增长最快的恶性肿瘤之一[1].免疫组化染色是黑色素瘤病理学诊断常用的检查方法.富含黑色素的瘤组织行免疫组化染色时,组织中沉积的大量黑色素与免疫组化阳性所显示的DAB棕黄色颗粒互相干扰,影响结果判读[2].     

内源性生物素对免疫组化染色的影响及消除方法

免疫组织化学技术因其结果定位明显,操作简单,实验条件及设备要求不高,又能将形态、代谢和机能密切结合起来,使纯形态的病理学发展成了形态与免疫信号相结合的现代病理学,已被广泛应用于临床病理诊断及各种科研工作.然而在免疫组化的实际应用过程中常会遇到的非特异性染色,从而对实验结果的判定造成严重影响.使用生物素-卵白素或生物素-链霉卵白素检测系统,热修复抗原后的组织中内源性生物素着色(假阳性)影响染色结果,特别是富含线粒体的组织,如甲状腺、肝脏、肾脏组织中,其定位于细胞质极易引起误判,非免疫动物血清封闭无效[1],为此我们进行了实验摸索,总结出一种消除非特异性染色的方法.     

S-P法免疫组化染色探讨

免疫组化技术是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点,通过化学反应使标记于结合后的抗体上的显色剂,如酶、金属离子、同位素等,显示一定的颜色。检测系统持续快速的发展,使免疫组化技术在现代病理诊断中的应用日益广泛,已成为常规病理诊断中不可缺少的辅助手段。但是免疫组化染色方法众多,对不同检测系统的认识和掌握,对取得好的实验结果至关重要。S-P法（链霉卵白素一过氧化物酶连结法）是20世纪90年代出现的检测系统,     

用微波的黑色素染色方法

目前常用Ｍａｓｓｏｎ Ｆｏｎｔａｎａ黑色素染色法效果、着色感观良好 ,但是其浸染时间太长 ,需 12～ 18ｈ ,甚至更长的时间 ,给快速诊断带来诸多不便。作者在日常染色中 ,以Ｇｏｍｏｒｉ氨银液代替Ｍ Ｆ液配合微波进行染色 ,操作简便 ,着色时间短 ,取得了满意的效果 ,现介绍如下。1　材料与方法1.1　染液及其配制1.1.1　Ｇｏｍｏｒｉ氨银液　用小量杯取 3ｍｌ 10 %硝酸银水溶液 ,逐滴加入 10 %氢氧化钾水溶液 1ｍｌ,产生棕黑色沉淀。以蒸馏水洗涤沉淀物、吸去上层清液 ;再加入蒸馏水重复洗涤共 3次 ,然后留下底层沉淀物及部分蒸馏水共 4ｍ…     

肾穿刺标本的免疫组化二步法染色

多年来我们在国内积极推广肾穿刺免疫组化染色,这是因为肾穿组织免疫组化染色较免疫荧光法更适合我国国情。肾穿组织免疫组化染色与免疫荧光法比较具有以下特点：①不需新鲜组织;②不需冷冻切片机及荧光显微镜;③可重复及进行回顾性研究;④最大限度保留了标本资源;⑤适合于远程邮寄病理检验。目前,不少单位已将免疫组化法应用于肾穿标本 ,但普遍认为肾穿刺免疫组化染色难度大。笔者曾报道过免疫组化二步法用于肾穿刺标本染色,近年来通过不断摸索与改进,方法学已相当稳定,染色效果满意。     

内源性生物素对免痰组化染色的影响及消除方法

免疫组织化学技术因其结果定位明显，操作简单，实验条件及设备要求不高，又能将形态、代谢和机能密切结合起来，使纯形态的病理学发展成了形态与免疫信号相结合的现代病理学，已被广泛应用于临床病理诊断及各种科研工作。然而在免疫组化的实际应用过程中常会遇到的非特异性染色，从而对实验结果的判定造成严重影响。     

免疫组化染色中剩余DAB的处理方法

免疫组化技术是一项基于对过氧化物酶检测的技术,其机制为利用过氧化物酶催化DAB(3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐)产生不溶于水的棕色物质[1],达到显色的目的.再通过显微镜观察或图像分析系统分析该棕色物质的光密度值,定量判断被检测成分的含量[2].DAB属于联苯胺类化合物,联苯胺类化合物能通过多种途径进入人体,对人体也具有多方面的毒性作用,包括免疫毒性[3]、生殖毒性[4]、遗传毒性[5]以及致癌作用[6].此外,DAB对环境的危害也是相当大的.而在做免疫组化时,为了达到比较准确的实验效果,DAB的用量通常是过量的.这样对DAB的处理将变的十分必要.本文旨在介绍几种处理DAB的方法,以及本科室采用的处理方法.     

DAB显色后去黑色素法在免疫组化中的应用

<正>在病理科的日常工作中,经常会遇到含有黑色素的组织,由于未经染色的黑色素呈棕褐色或深褐色的颗粒,特别是在免疫组化的诊断中,DAB的显色与黑色素的颜色相近,会影响免疫组化结果的判读。去除黑色素的方法有很多,文献报道比较常用的是高锰酸钾草酸法和过氧化氢脱色法[1],但两者均为强氧化剂,在先去除黑色素后再进行相关免疫组化染色时,对抗原有一定的损伤。为解决上述问题,本科室     

双重免疫组化染色在肿瘤内微血管密度测定中的应用

微血管密度是许多恶性肿瘤的重要预后因素。研究肿瘤内微血管密度，一般采用免疫组化法［1］。用FⅧUEAl、CD31、CD34抗体均可标记血管内皮细胞。有人认为FⅧ是血管内皮标记的“金标准”，但不能区分血管和淋巴管［2］。为了客观准确地区分血管和淋巴管，我们用生物素化荆豆凝集素（UEA1／BIO）和四型胶原（collagenⅣ）单克隆抗体，采用双重免疫组化染色取得了明显的效果。1材料和方法1．1材料舌粘膜鳞癌60例，舌粘膜白斑10例。1．2试剂第一抗体UEA1／BIO和collagenⅣ以及双重染色试剂盒（Zymed公司产品，USA）。1．3方法（1）石…     

新型黑色素脱色利的配制和应用

某些人体和肿瘤组织中存在着内源性黑色素，常常影响病理医师对组织切片的观察和诊断，尤其是干扰免疫组化染色的定位表达，在实践工作中，我们结合文献资料，经过不断摸索，配制了一种新型黑色素脱色剂，能有效地脱去组织中的内源性黑色素，现介绍如下。     

新型黑色素脱色剂的配制和应用

某些人体和肿瘤组织中存在着内源性黑色素,常常影响病理医师对组织切片的观察和诊断,尤其是干扰免疫组化染色的定位表达.在实践工作中,我们结合文献资料[1,2],经过不断摸索,配制了一种新型黑色素脱色剂,能有效地脱去组织中的内源性黑色素,现介绍如下.     

免疫组化染色中骨组织脱钙方法

由于骨组织的特殊性,制备好的骨组织标本免疫组化并不是一件容易的事。由于骨组织中60％以上为钙盐组成的羟基磷灰石结晶,因而脱钙是制备标本的重要一环。一些强酸如盐酸,硝酸等虽能快速有效除去骨组织中钙盐,但对其中的抗原蛋白也产生了致命性破坏。本实验仿照目前国外利用EDTA低温脱钙方法,取得了比较满意的结果。     

Pan-TRK免疫组化染色方法比较分析

WHO(2020)软组织和骨肿瘤分类介绍了一类新肿瘤,称为神经营养性- 原肌球蛋白受体酪氨酸激酶基因(neurotrophic tropomyosin-tyrosine receptor kinase, NTRK)重排梭形细胞肿瘤(NTRK-rearranged spindle cell neoplasm)[1] .该...     

冷冻切片的快速黑色素染色法

在恶性黑色素瘤的冷冻切片中 ,仅靠形态学诊断非常困难 ,Ｍａｓｓｏｎ Ｆｏｎｔａｎａ染色有一定帮助 ,对冷冻切片上黑色素形成不明显 ,黑色素颗粒细小、散在或棕色颗粒难与含铁血黄素相鉴别时尤为有用〔1〕,但常规的Ｍａｓｓｏｎ Ｆｏｎｔａｎａ染色需要时间长 (12ｈ)不能用于快速冷冻切片的诊断。我院采用一种快速黑色素染色法 ,全部过程仅需 11ｍｉｎ ,取得了满意效果。1　材料与方法1.1　氨银液的配制　取 5 %硝酸银水溶液 40ｍｌ,逐滴加入浓氨水至产生棕黑色沉淀 ,再继续缓慢地逐滴加入浓氨水 ,边加边震荡 ,当沉淀几乎接近溶解 ,仅有少…     

降低肾脏免疫组化染色背景着色的方法

传统的免疫组织化学染色从最初的PAP法发展到S-ABC法和SP法[1],特异性和灵敏度越来越高.最近几年发展的PV法又称为两步法使得免疫组化更加简单快速,背景更加清晰.但是有时还是因为染色背景过高而影响结果判定.本文介绍一种新的染色方法,在两步法基础上大大降低肾脏组化片的染色背景,从而提高结果判定的准确性.     

免疫组化染色前抗原修复方法的合理选择

由于组织在福尔马林或其他固定液中固定,经常会引起蛋白质空间结构的改变而导致抗原决定簇被封闭,阻碍了抗原与抗体的结合,随着免疫组化技术在临床病理诊断中不断深入和广泛应用,抗原修复技术在免疫组化操作过程中成为了一个极其重要的环节。我们针对不同的抗原,采取不同的修复     

介绍一种冷冻切片快速免疫组化染色法

对淋巴瘤、癌、恶性黑色素瘤及慢性炎症的冷冻切片 ,仅靠形态学诊断有时非常困难 ,免疫组化能有所帮助。但常规的免疫组化染色需时较长 ,因此对手术中冷冻切片的诊断是不适用的 ,我们应用Ｅｎｈａｎｃｅｄｐｏｌｙｍｅｒｏｎｅ ｓｔｅｐｓｔａｉｎｉｎｇ (Ｅ ＰＯＳ)法进行冷冻切片快速免疫组化染色 ,全部过程可在 13ｍｉｎ内完成 ,对确定或排除肿瘤有明确的辅助诊断作用 ,并能发现周围哨卡淋巴结内的微小转移灶 ,这对淋巴结冷冻切片的诊断尤为重要 ,可指导手术医师确定手术范围。1　材料与方法1.1　材料　手术切除 10ｍｉｎ内的新鲜标本 ,…     

弹性蛋白免疫组织化学染色与醛复红弹性纤维染色方法的比较

传统的显示弹性纤维的Gomori醛复红染色法(简称醛复红法)步骤简单、结果稳定,故使用较为广泛。弹性蛋白免疫组织化学染色法特异性强,但需要昂贵的抗体,且操作过程耗时长。我们发现,这两种方法的染色结果具有相同性,又具有一定的差异,特作此比较。