琼脂培养MTT法测定混合培养HeLa细胞和人胚肺纤维母细胞药物…

琼指培养ＭＴＴ法测定是结合人癌干细胞集落形成能力测定ＨＴＣＡ和ＭＴＴ比色法发展的一种新实验技术。应用这种方法测定了１：４比例混合培养ＨｅＬａ细胞和人胚肺纤维母细胞对顺氨氯铂、长春新碱、阿霉素、丝裂霉素和氟尿嘧啶的敏感性。这种方法与ＨＴＣＡ测得的ＩＣ５０值显著正相关，相关系数在０．８７４￣０．９８５间（Ｐ〈０．０１）；与ＭＴＴ法测得的药敏结果有显著差异（Ｐ〈０．０１）。提示：该法可用于测定人实体瘤细     

自体可溶性肿瘤抗原协同IL-2诱导外周血PBMC增殖及杀瘤

探讨自体可溶性肿瘤抗原（ＴＳＡ）与ＩＬ┐２共同诱导ＰＢＭＣ增殖及杀瘤作用。方法分三组用ＡＰＡＡＰ法观察细胞表型，ＭＴＴ法测定细胞增殖及杀瘤活性（靶细胞为ＭＮＫ４５系人胃低分化腺癌细胞）。结果培养第７天ＴＳＡ（１０μｇ／ｍｌ）协同ＩＬ┐２诱导ＰＢＭＣ增殖显著高于单独ＩＬ┐２诱导（Ｐ＜０．０１）。且ＣＤ＋８及ＣＤ＋２５表达率增高，差异有显著性（Ｐ＜０．０１０，当效／靶比为８０∶１时ＩＬ┐２诱导的ＰＢＭＣ杀瘤活性为４８．６％，而１０μｇ／ｍｌＴＳＡ协同诱导ＰＢＭＣ杀瘤活性为８６．３％。结论为研究ＴＡＫ细胞提供了实验依据，提示该类细胞具有临床过继免疫治疗应用的潜能     

CD_3单克隆抗体活化的杀伤细胞对人胃癌细胞株MNK_（45）体外杀伤及裸鼠体

用人的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）与抗ＣＤ３单克隆抗体和基因重组的人ＩＬ－２，共同培养制备ＣＤ３ＡＫ细胞（ＣＤ３ＭｃＡｂＡｃｔｉｖａｔｅｄＫｉｌｌｅｒＣｅｌｌｓ），ＰＢＭＣ与ｒＩＬ－２共同培养制备ＬＡＫ细胞，用单纯ＰＢＭＣ作为对照细胞。对这三种细胞的增殖及在体外和裸鼠体内的抗人胃癌细胞株ＭＮＫ４５作用进行了实验研究。体外试验结果表明，ＣＤ３ＡＫ对ＭＮＫ４５有明显杀伤作用，而ＬＡＫ细胞杀伤率较低，二者差异有非常显著性意义（Ｐ＜０．０１）；用的ＭＴＴ法和台盼蓝活细胞计数法测定这三种细胞的增殖能力和细胞数量的增加，表明ＣＤ３ＡＫ的增殖能力和扩增数量均明显高于ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。裸鼠体内试验结果显示，对照组及ＬＡＫ组全部长出瘤结节，而ＣＤ３ＡＫ组无一例长出皮下结节，且生存期明显长于前者。     

骨髓增生异常综合征患者体外CFU-GM、CFU-L培养和细胞遗传学研究

研究了４２例骨髓增生异常综合征患者体外ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｌ培养和细胞遗传学改变。结果显示，患者ＣＦＵ－ＧＭ明显低于正常对照组（Ｐ＜０．０１），但高于再生障碍性贫血（ＡＡ）（Ｐ＜０．０１），ＣＦＵ－Ｌ高于正常对照组和ＡＡ组（Ｐ＜０．０１）。患者５２．４％存在染色体异常，常见为：＋８、－２２、－Ｘ、－Ｙ、－２０、－７／７ｑ－。ＣＦＵ－ＧＭ减低、ＣＦＵ－Ｌ增高和染色体异常者疗效较正常者差。表明ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｌ体外培养和细胞遗传学检查可作为ＭＤＳ协助诊断和预测疗效的指标之一。     

CD3单克隆抗体活化的杀伤细胞对人胃癌细胞株MNK45体外杀伤及…

用人的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）与抗ＣＤ３单克隆抗体和基因重组的人ＩＬ－２，共同培养制备ＣＤ３ＡＫ细胞，ＰＢＭＣ与ｒＩＬ－２共同培养制备ＬＡＫ细胞，用单纯ＰＢＭＣ作为对照细胞。对这三种细胞的增殖及在体外和裸鼠体内的抗人胃癌细胞株ＭＮＫ４５作用进行了实验研究。体外试验结果表明，ＣＤ３ＡＫ对ＭＮＫ４５有明显杀伤作用，而ＬＡＫ细胞杀伤率较低，二者差异有非常显著性意义（Ｐ＜０．０１）；用ＭＴＴ法和台盼蓝     

HTLV—I相关抗原及其抗体在AML细胞表面的表达

应用直接免疫金银染色法和直接酶免疫法分别检测３７例急性髓系白血病（ＡＭＬ）患者白血病细胞培养前后其表面ＨＴＬＶ－Ｉ相关抗原及其抗体的变化。结果表明，培养前ＨＴＬＶ－Ｉ相关抗原的患者阳性率、细胞阳性率（％，ｘ±ｓ）分别为２７．０％（１０／３７）、１６．８９±２７．７４，培养６天后分别上升至７８．４％（２９／３７）、４３．４４±３０．０６，分别经χ２检验和ｔ检验表明均有显著性差异（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．００１）。培养前ＨＴＬＶ－Ｉ相关抗体的患者阳性率、细胞阳性率（％，ｘ±ｓ）分别为７３．０％（２７／３７）、４８．２１±３４．３０，培养６天后未能检测出ＨＴＬＶ－Ｉ相关抗体。２０例对照采用相同的细胞分离、培养和检测手段无阳性发现。进一步分析表明，培养前ＡＭＬ细胞表面ＨＴＬＶ－Ｉ相关抗原及其抗体表达的细胞阳性率之间呈明显负相关（ｒ＝－０．５６，Ｐ＜０．０１）。从而推论ＡＭＬ可能与外源性、且与ＨＴＬＶ－Ｉ有部分同源性逆转录病毒感染有关     

三氟拉嗪逆转肺癌细胞多药耐药性研究

目的研究三氟拉嗪（ＴＦＰ）逆转肺癌细胞多药耐药的作用。方法应用ＭＴＴ比色法体外实验研究三氟拉唪对多药耐药性人肺癌细胞株Ａ５４９／阿霉素（ＡＤＭ）耐药性的逆转作用。结果（１）ＴＦＰ对细胞具有药物浓度依赖性毒性作用，ＩＰＰＣ浓度的ＴＦＰ细胞抑制率可达２９．７％±８．７％。（２）ＴＦＰ可显著逆转细胞对顺铂、长春新碱、阿霉素的耐药性，与单独化疗药物比较，有显著差异（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。其作用同样具有药物浓度依赖性，各药物浓度间细胞抑制率有显著差异（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。结论三氟拉嗪具有逆转肺癌细胞耐药的作用。     

硒酸酯多糖对癌症患者血清MDA含量及CuZn-SOD活性的影响

目的：了解硒酸酯多糖对肿瘤患者体内ＭＤＡ及ＣｕＺｎ－ＳＯＤ活性的影响。方法：对６０例肿瘤病人随机分成３组：不服硒组，服硒４００μｇ／ｄ组及服８００μｇ／ｄ组并与１５名正常人对照比较。结果：癌症患者血清ＭＤＡ明显高于正常人（Ｐ＜０．０１），血清Ｓｅ及ＣｕＺｎ－ＳＯＤ活性明显低于正常人（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）；服硒酸酯多糖者化疗后血清Ｓｅ较不服者明显升高（Ｐ＜０．０５），ＣｕＺｎ－ＳＯＤ也明显升高（Ｐ＜０．０１），ＭＤＡ含量显著下降（Ｐ＜０．０５）；服４００μｇ／ｄ组与服８００μｇ／ｄ组之间上述各指标均无明显差异。结论：肿瘤病人摄入适量（４００μｇ／ｄ）硒酸酯多糖可能增加体内ＣｕＺｎ－ＳＯＤ活性，减轻了化疗药物对正常细胞的过氧化损伤。     

生长抑素 SMS201-995 对小鼠结肠腺癌肝转移瘤的实验研究

目的本研究观察生长抑素衍生物ＳＭＳ２０１┐９９５对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠结肠腺癌（ＣＴ２６）肝转移瘤细胞周期的影响，检测血清ＣＥＡ水平的变化，并观察小鼠生存期的改变。方法采用流式细胞术。结果与对照组相比，ＳＭＳ２０１┐９９５治疗组的瘤细胞增殖指数和Ｓ期细胞百分比明显降低（Ｐ＜０．０１），而Ｇ０／Ｇ１期细胞百分比则明显增加（Ｐ＜０．０１）。治疗组血清ＣＥＡ水平较对照组显著降低（Ｐ＜０．０５），生存期明显延长。治疗组细胞增殖指数，Ｓ期和Ｇ０／Ｇ１期细胞百分比与血清ＣＥＡ的变化密切相关（相关系数与Ｐ值分别为：ｒ＝０．６６７７，Ｐ＜０．０５；ｒ＝０．７１７０，Ｐ＜０．０１；ｒ＝－０．６７０３，Ｐ＜０．０５）。结论ＳＭＳ２０１┐９９５对结肠腺癌（ＣＴ２６）肝转移性肿瘤的生长具有一定的抑制作用。     

肿瘤坏死因子α和干扰素α明显增强人肝癌肿瘤浸润性淋巴细胞的抗瘤活性

应用乳酸脱氢酶释放实验观察人肝癌肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）对经肿瘤坏死因子Ａｌｐｈａ（ＴＮＦ）和干扰素Ａｌｐｈａ（ＩＦＮ）培养过的人肝癌细胞体外抗瘤活性。结果显示经ＴＮＦ（１００Ｕ／ｍｌ）或ＩＦＮ（１００Ｕ／ｍｌ）培养过的人肝癌细胞对人肝癌ＴＩＬ的敏感性明显增强（Ｐ＜０．０５），两者合用，结果更显著（Ｐ＜０．０１）；应用ＭＴＴ法观察ＴＮＦ和ＩＦＮ对人肝癌细胞增殖能力的影响，发现ＴＮＦ对人肝癌细胞的增殖具有抑制作用（Ｐ＜０．０５），而ＩＦＮ无此现象（Ｐ＞０．０５），两者合用时抑制作用明显（Ｐ＜０．０１）。上述结果表明ＴＮＦ和ＩＦＮ可以通过直接或／和间接的方式增加肝癌细胞时其ＴＩＬ的敏感性，进一步的研究将具有潜在价值。     

C6胶质瘤细胞培养上清诱导神经干细胞迁移的初步研究

背景与目的:研究发现胶质瘤细胞中存在着诱导神经干细胞迁移的物质,本实验旨在观察体外培养的胶质瘤细胞在体外能否引起神经干细胞的迁移,从而为研究胶质瘤细胞中存在促进神经干细胞迁移的物质打下基础;并进一步分离、纯化该物质。方法:分别培养神经干细胞、星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞。以星形胶质细胞为对照,做细胞迁移实验,观察其结果;将C6胶质瘤细胞、星形胶质细胞的无血清培养上清分别浓缩,并行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,观察其结果;转膜,测序,初步测定这种能诱导神经干细胞迁移的信号物质。结果:(1)C6胶质瘤细胞的培养上清引起神经干细胞迁移的数目明显多于星形胶质细胞的培养上清和新鲜无血清培养基(P<0.05)。(2)将无血清培养的等浓度的C6胶质瘤细胞、星形胶质细胞的上清浓缩蛋白进行SDS-PAGE,可见二者蛋白条带存在明显差异。结论:(1)从新生大鼠大脑皮层组织可以培养出神经干细胞和星形胶质细胞。(2)C6胶质瘤细胞无血清培养的上清中存在着能够诱导神经干细胞迁移的物质。     

钙离子载体与树突状细胞的诱导

树突状细胞(dendritic cells,DC)是目前发现的功能最强的专职抗原递呈细胞(antigen-presenting cells,APC),为惟一能刺激初始型T淋巴细胞应答的APC,在肿瘤免疫中起重要的作用.近来的研究发现:处于各个阶段的正常或转化的髓系细胞经钙离子载体(calcium ionorphore,CI)处理后能够迅速获得成熟DC的许多特征.CI可提高细胞内Ca2 浓度,从而引起转录因子活化,诱导生成成熟DC.一些特征性的Ca2 信号通路拮抗剂可明显阻断CI诱导的分化.     

树突状细胞与肿瘤细胞融合后对肿瘤发生和生长的抑制作用

目的研究树突状细胞（ＤＣ）与肿瘤细胞（ＳＰ２／０）融合后在体内的抗肿瘤效应。方法体外分离诱导扩增ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨髓ＤＣ,然后与ＳＰ２／０细胞进行融合,将融合细胞接种于同基因小鼠皮下,观察肿瘤的生长及组织病理学特征。结果ＤＣ与ＳＰ２／０细胞融融后接种于小鼠能抑制肿瘤的生长,肿瘤的发生、生长速度及病理组织学改变的显示出ＤＣ－ＳＰ２／０融合细胞的抑制效应。结论ＤＣ与肿瘤细胞融合后在体内可产生抗肿瘤免疫     

Expansion of Lung Vα14 NKT Cells by Administration of α-Galactosylceramide-pulsed Dendritic Cells

NKT cells, a novel murine lymphoid lineage bearing an invariant T cell receptor encoded by Vα14 and Jα281 gene segments, recognize a specific ligand glycolipid, α-galactosylceramide (α-GalCer) in a CDld-dependent manner. Recent research has revealed that activated Vα14 NKT cells have dramatic antitumor effects against a wide variety of tumor cell lines in vivo and in vitro. Here, we demonstrate strong in vivo antitumor effects brought about by treatment with α-GalCer-pulsed dendritic cells in comparison with in vitro -activated Vα14 NKT cells. Furthermore, we show a significant expansion of endogenous Vα14 NKT cells in the lung following the administration of α-GalCer-pulsed dendritic cells. The feasibility of immunotherapy with α-GalCer-pulsed dendritic cells is discussed.     

The Comparison of Biologic Characteristics between Mice Embryonic Stem Cells and Bone Marrow Derived Dendritic Cells

OBJECTIVE This research was to induce dendritic cells (DCs)from mice embryonic stem cells and bone marrow mononuclear cells in vitro, and then compare the biologic characteristics of them.METHODS Embryonic stem cells (ESCs) suspending cultured in petri dishes were induced to generate embryonic bodies (EBs).Fourteen-day well-developed EBs were transferred to histological culture with the same medium and supplemented 25 ng/ml GM-CSF and 25 ng/ml IL-3. In the next 2 weeks, there were numerous immature DCs outgrown. Meantime, mononuclear cells isolated from mice bone marrow were induced to derive dendritic cells by supplementing 25 ng/ml GM-CSF and 25 ng/ml IL-4, and then the morphology, phenotype and function of both dendritic cells from different origins were examined.RESULTS Growing mature through exposure to lipopolysaccharide (LPS), both ESC-DCs and BM-DCs exhibited dramatic veils of cytoplasm and extensive dendrites on their surfaces, highly expressed CD11c, MHC-Ⅱ and CD86 with strong capacity to stimulate primary T cell responses in mixed leukocyte reaction (MLR).CONCLUSION ESC-DC has the same biologic characteristics as BM-DC, and it provides a new, reliable source for the functional research of DC and next produce corresponding anti-tumor vaccine.     

人急性早幼粒细胞性白血病细胞诱导分化生成树突状细胞的体外研究

树突状细胞(dendritic cells,DC)在激发机体抗白血病T细胞免疫应答中具有重要作用,有报道DC可以由单核细胞及粒细胞分化生成,本研究应用细胞因子在体外诱导了急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞向DC的分化.从M3型APL患者外周血分离白血病细胞,加入GM-CSF(100ng/ml)或GM-CSF(100ng/ml) rhIL-4(500U/ml)体外培养14天,并于培养结束前3天加人TN-α(100ng/ml).结果表明,GM-CSF可以促进白血病细胞体外增殖,并从幼稚状态逐渐分化成熟,表达高水平的CD45分子,其中部分为CD14~ 的单核细胞,部分为CDla~ 的DC(M3DC);培养后期加入TNF-α,可以促进DC生成,约占35%;以GM-CSF IL-4培养也诱导了幼稚细胞的成熟,2周后DC约占10%,但较少单核细胞生成,培养至3周时DC约占60%;而在培养后第11天加入TNF-α则可以加速DC生成,3天后生成的白血病型DC达90%.电镜观察到M3DC具有与单核细胞来源的DC相似的超微结构,但具有的突出特征是部分细胞存在少量胞浆颗粒;M3DC高表达HLA-DR、B7-2、CD40、CD54分子,体外可以强烈刺激同种T细胞增殖.此类由白血病细胞诱导生成的DC可被用于体内外诱导生成肿瘤特异性CTL,在APL的免疫治疗中具有一定的应用价值.     

联合过继免疫细胞输注小鼠后DC、NK分布的研究

目的：观察自然杀伤（NK）细胞／树突状细胞（DC）联合过继免疫治疗小鼠皮下黑色素瘤时效应细胞在荷瘤小鼠体内的分布。方法：建立C57BL/6小鼠皮下黑色素瘤模型。体外培养增殖小鼠NK细胞、DC并标记，以不同比例混合两种细胞，分别以静脉注射和瘤内注射的方式回输荷瘤小鼠体内．于注射后不同时间点取肿瘤、肝、脾、肺组织进行切片，观察各组织中效应细胞的数量及分布。结果：静脉注射组NK细胞、DC主要分布在肿瘤微循环及实质组织中，各时间点NK细胞、DC的浸润数量有显著差异（P〈0．01），注射后4h浸润的效应细胞最多．12h最少，在脾脏中见少量NK细胞的分布，在肝脏及肺组织中偶见。瘤内注射组NK细胞、DC主要分布在肿瘤实质组织中，各观察时间点NK细胞、DC的浸润数量有显著差异（P〈0，01）．注射后1h浸润的效应细胞最多，12h最少，在肝、脾、肺组织中未见NK细胞、DC分布。两种注射方式下按不同比例混合进行NK细胞、DC的过继治疗，各组间差异具有显著性（P〈0.01），混合注射组效应细胞在肿瘤组织内的浸润多于单独注射组。结论：NK细胞、DC免疫过继后能够“靶向性”聚集在肿瘤周围及肿瘤内部，对肿瘤具有治疗作用．NK细胞、DC联合过继免疫治疗效果优于单独注射，提示NK细胞、DC联合输注可能成为肿瘤生物治疗的新模式。     

脑肿瘤干细胞的研究

大量事实表明,包括脑肿瘤在内,所有肿瘤细胞群落之间在形态和功能上存在很大差异,其异质性与肿瘤干细胞的分化潜能有关.脑肿瘤干细胞的分离和培养获得了成功.脑肿瘤干细胞具有增殖、自我更新以及多向分化的特点;但其在肿瘤组织中所占的比例很低,却是肿瘤保持恶性特征的关键所在.     

替沃扎尼抑制甲状腺癌细胞和血管内皮细胞的增殖

目的 研究新型酪氨酸激酶抑制剂替沃扎尼对甲状腺癌细胞株SW579和血管内皮细胞株HUVEC增殖的影响及作用机制。方法 SW579和HUVEC暴露于不同浓度（1、2、4、8和16 μM）的替沃扎尼至72 h,无药物处理的细胞作为对照。采用CCK-8细胞活度测定、图像分析技术及分裂细胞荧光免疫染色观察评价替沃扎尼对细胞增殖的影响,应用流式细胞仪进行细胞周期时相分析。结果细胞活度测定显示,替沃扎尼对两种细胞的生长增殖均有明显的抑制作用（P<0.05）,并呈浓度依赖性及时间依赖性,两种细胞半数抑制浓度（IC50）分别约为4 μM和8 μM。图像分析显示,在IC50作用下,替沃扎尼使两种细胞的细胞密度降低,分裂指数下降（P<0.05）。细胞周期时相分析表明,替沃扎尼可使SW579和HUVEC发生细胞周期休止,但分别休止于G1期和G2/M期（P<0.05）。结论 替沃扎尼对甲状腺癌细胞和血管内皮细胞的增殖均有显著的抑制效应,其作用是籍细胞周期休止作用而实现,但在两种细胞所诱发的细胞周期休止时相不同。替沃扎尼作为一种新型酪氨酸激酶抑制剂可通过靶向癌细胞和血管内皮细胞来治疗甲状腺癌。     

肿瘤干细胞研究新进展

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病。肿瘤的转移与复发是治疗所面临的两大难题,但其机制还不清楚。肿瘤干细胞理论对此提出新的解释,其认为肿瘤中存在一小群具有自我更新和不定潜能的肿瘤细胞,可能是肿瘤转移和复发的根源。目前为止,研究人员已经在白血病、多发性骨髓瘤、乳腺癌、中枢神经系统肿瘤、肺癌分离并鉴定出了肿瘤干细胞,在胃癌和肝癌中也发现了肿瘤干细胞存在的证据。肿瘤干细胞学说的提出与证实使人类对肿瘤的转移、复发有了新的认识,必将对肿瘤转移、复发的治疗及预防产生重大影响。