促肝细胞生长素诱导人肝癌细胞（BEL－7402）凋亡

本文从细胞学、ＤＮＡ凝胶电泳、流式细胞术三方面研究促肝细胞生长素（ｐＨＧＦ）在体外对肝癌细胞增殖活性的影响。结果表明：ｐＨＧＦ对肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞增殖有抑制作用，并存在剂量和时间相关性。其４８ｈ的半数抑制浓度（ＩＤ５０）为０．３７ｍｇ／ｍｌ±０．０４ｍｇ／ｍｌ。而３７℃灭活的ｐＨＧＦ对ＢＥＬ－７４０２细胞增殖在１５ｈ无抑制作用，在２４和４８ｈ抑制作用很弱（ＩＤ５０＞１．５ｍｇ／ｍｌ）。ＤＮＡ凝胶电泳结果表明，ｐＨＧＦ可诱导ＢＥＬ７４０２细胞产生细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）。流式细胞术（ＦＣＭ）结果显示：ｐＨＧＦ抑制ＢＥＬ－７４０２细胞增殖过程是先使细胞停留在Ｇ０／Ｇ１期，继而诱导细胞产生凋亡。后两项结果均显示ｐＨＧＦ对人肝癌细胞凋亡的诱导里时间和剂量相关性。     

大蒜素诱导人肝癌BEL—7402细胞凋亡

目的　探讨大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡作用。　方法　MTT法检测大蒜素对BEL 740 2细胞的生长抑制作用 ,光镜、电镜、流式细胞术观察大蒜素诱导BLE 740 2细胞凋亡作用。　结果　 10、2 0、40ml L大蒜素皆能抑制BEL 740 2细胞生长 ,其抑制作用与剂量、作用时间呈正相关。 6 0mg L大蒜素作用 3h ,BEL 740 2细胞出现典型凋亡形态学变化 :细胞体积缩小 ,微绒毛消失 ,染色质浓聚、边集、裂解 ,细胞表面凸起多个小泡或小球状小体 ,凋亡细胞拒染台盼蓝等。台盼蓝染色计数对照组凋亡率 2 0 2± 0 37% ,诱导组凋亡率 78 48± 3 15 % ;流式细胞分析对照组凋亡率 1 78± 0 48% ,诱导组凋亡率 74 0 7± 3 94% ,对照组诱导前时G0 /G1 、S、G2 /M期细胞分别为47 6 6± 2 72 % ,2 2 0 6± 2 0 4% ,30 2 5± 3 78% ,皆低于 74 0 7± 3 94%。　结论　大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡 ,其诱导凋亡效果明显 ,并推测大蒜素诱导BEL 740 2细胞可能自细胞周期不同分期多点启动凋亡     

肝细胞提取物对肝癌细胞（BEL—7402）凋亡相关基因表达的影响

肝细胞提取物经ＨＰＬＣ，ＦＰＬＣ进一步分离纯化，得到了单一色谱峰，激光飞行时间质谱仪测分子量为４．０２０ｋＤ该单一组分（Ｓ４）对ＢＥＬ－７４０２肝癌细胞有增殖回落作用，半数抑制浓度（ＩＣ５０）为７．５８ｍｇ／Ｌ。对ＢＥＬ－７４０２细胞的基因表达影响研究，Ｓ４对Ｐ５３，Ｆａｓ表达有增强作用，而抑制Ｂｃｌ－２，ｃ－ｍｙｃ的表达，Ｓｏｕｔｈｅｒｍｂｌｏｔ技术表明，Ｓ４可抑制Ｂｃｌ－２的ｍＲＮＡ转录，提示     

人肝细胞癌细胞凋亡

原发性肝癌的发生发展是恶性细胞异常增殖和细胞凋亡异常的结果，虽存在着自发性凋亡，但肿瘤细胞的凋亡远不及其恶性增殖。肝癌瘤细胞的凋亡机制极为复杂。近年的研究提示，诱导肝癌肿瘤细胞凋亡是临床治疗的发展方向之一。     

人肝细胞癌细胞凋亡

原发性肝癌的发生发展是恶性细胞异常增殖和细胞凋亡异常的结果,虽存在着自发性凋亡,但肿瘤细胞的凋亡远不及其恶性增殖.肝癌瘤细胞的凋亡机制极为复杂.近年的研究提示,诱导肝癌肿瘤细胞凋亡是临床治疗的发展方向之一.     

促肝细胞生长素对肝坏死大鼠TNF产生的影响

国内外学者认为TNF与病毒性肝炎关系密切。Aderka认为TNF在重症肝炎的发病中起重要作用,是引发急性肝坏死的重要介质。本研究用D-GL诱发实验性大鼠急性肝坏死模型,观察促肝细胞生长素(HGF)对肝坏死大鼠TNF、转氨酶(ALT)和肝组织脂质过氧化物(LPO)的影响。 材料与方法 1.实验动物:健康大鼠系本校实验动物中心供给。体重180～210g,雌雄各半,在常温下饲养,实验前12h禁食,注射D氨基半乳糖(D-GL)后4h自由饮水进食。 2.D-GL:重庆医科大学化学教研室提供。临用前溶于灭菌生理盐水并调pH至6.8～7.0,终浓度为100g/L。     

去甲斑蝥素诱导人肝癌BEL—7402细胞凋亡的研究

目的 研究新型抗癌药物去甲斑螯素抑制人肝癌（ＢＥＬ－７４０２）细胞生长的机制。方法 从细胞的形态学观察和ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳等方面考察去甲斑螯素作用人肝癌细胞的特点，并进一步用免疫细胞化学及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ等分析手段研究癌基因蛋白Ｂｃｌ－２在此过程中的表达情况。结果 １０ｍｇ／Ｌ去甲斑螯素作用人肝癌细胞２４ｈ，部分细胞出现固缩、细胞质膜突起、核染色质异常凝集等，并伴有膜包被的凋亡小     

促肝细胞生长素及细胞因子对成纤维细胞增殖的作用

探讨了促肼细胞生长素及人重组白细胞介素和重组干扰素α－２ｂ对本外培养成纤维细胞增殖的作用。结果表明ＩＦＮ和ＩＬ－２均可促进成纤维细胞的增殖和核分裂增多，发挥丝裂原作用。     

促肝细胞生长素治疗肝炎后肝硬化疗效观察

目的 探讨“促肝细胞生长素”治疗肝炎后肝硬化的疗效。方法 72例肝炎后肝硬化患者随机分为两组。治疗组37例,采用威海赛洛金药业有限公司生产的“威佳促肝细胞生长素（pHGF)”加用护肝支持治疗;对照组35例,采用护肝支持治疗。结果 治疗组在降酶、退黄及临床疗效方面均优于对照组。两者有显著性差异。结论 “促肝细胞生长素”治疗肝炎后肝硬化有明显疗效。     

去甲斑蝥素诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究

目的研究新型抗癌药物去甲斑蝥素抑制人肝癌（ＢＥＬ－７４０２）细胞生长的机制。方法从细胞的形态学观察和ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳等方面考察去甲斑蝥素作用人肝癌细胞的特点,并进一步用免疫细胞化学及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ等分析手段研究癌基因蛋白Ｂｃｌ－２在此过程中的表达情况。结果１０ｍｇ／Ｌ去甲斑蝥素作用人肝癌细胞２４ｈ,部分细胞出现固缩、细胞质膜突起、核染色质异常凝集等,并伴有膜包被的凋亡小体的形成。ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳显示,处理组部分细胞的ＤＮＡ已降解成以约２００ｂｐ为基数的ＤＮＡ片断,呈现典型的“梯状”带纹。免疫细胞化学及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析显示该过程伴随癌基因蛋白Ｂｃｌ－２表达的减弱。结论新型抗癌药物去甲斑蝥素可以诱导人肝癌细胞发生凋亡,该凋亡过程与癌基因蛋白Ｂｃｌ－２表达下调相关     

肝细胞核因子4在肝细胞分化和成熟中的作用

肝细胞核因子4在肝脏发育及肝细胞的分化、成熟过程中有着重要的调控作用,通过与肝特异基因启动子结合而影响肝特异基因的表达,促进肝细胞极化结构的形成,调节肝细胞的物质代谢和生物转化,并且能够抑制肝脏肿瘤的发生。     

Localisation of Hepatocyte Growth Factor and its Receptor (c-met) Protein and mRNA in Human Term Placenta

Abstract

Successful pregnancy depends upon placental growth and development, which follows a specific spatial and temporal sequence. Hepatocyte Growth Factor (HGF) is a potent mitogen, morphogen and motogen to both endothelial and epithelial cell types and is linked to a tyrosine kinase, proto-oncogene, c-met receptor. In ‘normal’ third trimester placentae (n=5) full thickness biopsies (obtained at Caesarean section), immunolocalisation and in situ hybridisation studies were performed for HGF and c-met, respectively. HGF immunoreactive protein was present in mesenchymal core, the vaculosyncytial membrane (syncytotrophoblast) and the vascular endothelial cells of villous trophoblast. The HGF mRNA was present particularly strongly in the perivascular stromal cells surrounding the villous vasculature and the amnion/chorionic membranes. Immunoreactive c-met protein was strongly localised to the endothelial cells lining the villous vasculature and the vasculosyncytial membrane. A relatively weak and diffuse hybridisation signal for c-met mRNA was present throughout the villous trophoblast, most pronounced in the vasculosyncytial membrane. These results indicate that HGF may serve as a paracrine mediator to control placental development and growth.     

人肝癌细胞与成纤维细胞共育时细胞增殖率的动态变化

本文采用定位细胞培养技术，将人肝癌细胞和成纤维细胞有序地排列在同一容器内，用原位计数法分别测定两种细胞在培养１２、３６、６０、８４ｈ的细胞数，计算两种细胞在不同时相的增殖率，观察人肝癌细胞和成纤维细胞的相互影响。结果显示：肝癌细胞在１２～３６ｈ、３６～６０ｈ期间可刺激成纤维细胞的生长；在６０～８４ｈ则抑制成纤维细胞的生长。成纤维细胞在１２～３６ｈ刺激肝癌细胞的生长，在６０～８４ｈ则对肝癌细胞的生长起抑制作用。表明两种细胞之间存在着相互调控的关系     

基质刚度对肝癌细胞增殖及糖代谢的影响

目的研究不同基质刚度对肝癌细胞HepG2增殖和糖代谢的影响,探究细胞外基质(extracellular matrix,ECM)刚度对肝癌细胞代谢和生物学行为影响的相关性。方法采用CCK8和细胞计数法检测培养在不同刚度基质上HepG2细胞增殖的变化,利用2-(N-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑-4-氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(2-NBDG)并通过流式细胞术检测基质刚度对HepG2葡萄糖摄取的影响,利用荧光定量RT-PCR检测基质刚度对HepG2葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,Glut1)表达的影响,并利用糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)阻断糖酵解途径后检测基质刚度对HepG2细胞增殖的影响。结果随基质刚度增加,HepG2细胞增殖能力、葡萄糖摄取和Glut1表达都显著增加。糖酵解途径被阻断后,不同刚度基质上HepG2细胞增殖能力基本相同。结论肝癌细胞所处力学微环境对肝癌细胞的增殖有重要影响;较大的基质刚度可能通过调控糖代谢途径促进肝癌细胞的增殖。研究结果为肝癌的临床治疗以及糖代谢为治疗靶点的药物开发提供相应的实验依据。     

肝细胞提取物对正常肝和肝癌细胞作用的研究

取乳猪肝细胞提取物（HE）,用高效液相色谱分离纯化,观察HE及各组份对肝癌细胞BEL-7402和原代肝细胞的影响。结果显示,当 HE浓度大于 100mg/L时,对 BEL-7402细胞的 DNA合成和脱氢酶活力均有明显的抑制作用,IC_(50)（半数抑制浓度）分别为606mg/L和272mg/L。在各组分中,组分3和4的抑制作用最强,抑制活性比 HE高 10倍。50～500mg/L的 HE对正常肝细胞的酶活性和 DNA合成有明显的促进作用,其中组份1、2和5的促进作用明显。当HE浓度为1000mg/L时,对正常肝细胞的DNA合成和酶活力也有明显的抑制作用。提示,HE中存在正负双向生长调节因子。采用DNA电泳和流式细胞术结果显示,HE及组分3、4诱导BEL-7402细胞生长抑制的方式可能是细胞程序性死亡。     

碱性成纤维细胞生长因子在膀胱移行细胞癌中的表达

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)在膀胱移行细胞癌 (BTCC)中的表达及其意义。方法　SP法 ,对 5 5例BTCC及 10例正常膀胱组织中bFGF进行检测。结果　在正常移行细胞呈阴性表达 ,在BTCC中呈不同程度的阳性表达 ,且过表达率在不同病理分级、临床分期组间有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,复发组的阳性表达率明显高于初发组 (P <0 .0 5 )。结论　bFGF在BTCC侵润转移过程中起重要作用 ,BFGF表达可成为判断肿瘤预后的一项指标     

白血病抑制因子(LIF)与bFGF协同促进小鼠外胚间充质干细胞(EMSCs)体外自我维持

白血病抑制因子（leukemia inhibitor factor，LIF）可以抑制小鼠胚胎干细胞分化，维持其自我更新，因而用于该干细胞的体外扩增。由于不同的胚胎或成体干细胞分化特性相差很大，因此，LIF可能对不同的干细胞有不同的作用。对新鲜分离的小鼠外胚间充质细胞（ectomesenchymal cells，EMCs）在有或无LIF的培养条件下，观察了细胞生长的特性，表型变化等，并通过检测其中外胚间充质干细胞（ectomesenchymal stem cells，EMSCs）的水平，探讨UF与EMSCs的关系。结果表明：（1）LIF的受体gp130表达于未分化与早期分化的EMSCs表面，提示LIF对于EMSCs具有潜在的调节作用；（2）LIF促进小鼠EMSCs的自我维持，bFGF则对此具有协同作用。因此，UF与bFGF联合对体外培养和扩增小鼠外胚间充质干细胞，以及对其深入研究和应用具有重要意义。     

Apoptosis and Expression of the Proto-Oncogenes bcl-2 and p53 and the Proliferation Factor Ki-67 in Human Medullary Thyroid Carcinoma

Apoptosis and immunoreactivity forbcl-2, p53, and Ki-67 were studied in 21 patients with medullary thyroid carcinoma (MTC). The DNA nick end labeling method was used to assess apoptosis. The relationships between the different factors were analyzed, as were their relations to clinicopathological data, including survival. More than 80% of the tumors harbored apoptotic cells. Tumors in individuals who had died of the MTC disease had a higher percentage of apoptosis. All cases demonstrated immunoreactivity tobcl-2; disease-free individuals had a higher rate than those with recurrent disease. No obvious pattern could be discerned in the relation of p53 or Ki-67 to the outcome of the MTC disease. An inverse correlation betweenbcl-2 and apoptosis (r=−0.81;p<0.01) was demonstrated.bcl-2 was significantly (p=0.014) associated with apoptosis even after taking both p53 and Ki-67 into consideration, but these two factors were unrelated to apoptosis. None of the factors studied were correlated to crude survival, either in univariate or in multivariate analyses. This study established thatbcl-2 immunoreactivity is closely associated with apoptosis in MTC, suggesting that a downregulation of thebcl-2 protein is related to a more aggressive growth rate and might be a useful marker for the evaluation of MTC.