CD3AK细胞过继免疫治疗的实验研究

目的: 分析抗CD3分子的单克隆抗体 (mAb)yCD3的免疫学特性和生物学活性, 观察其激活的免疫活性细胞CD3AK体外及动物体内的抑瘤作用。方法: 用流式细胞术(FCM)测定yCD3的特异性, 以及CD3AK细胞的免疫表型和产生细胞因子的情况。用 3H -TdR法测定yCD3对淋巴细胞转化的作用; 乳酸脱氢酶法 (LDH)测定CD3AK细胞的体外细胞毒活性。建立荷瘤小鼠模型, 观察静脉注射CD3AK细胞后肿瘤生长的情况、转移灶数量和小鼠存活天数。结果: yCD3与T细胞呈特异性反应, 5μgyCD3可竞争抑制 70%的标准抗CD3抗体与细胞表面CD3分子的结合。yCD3刺激外周血淋巴细胞增殖的有效浓度为 8μg/L, 并与IL- 2、抗CD28抗体有协同作用。活化的CD3AK细胞中CD3 、CD8 和CD25 细胞增多; 产生IL- 2和IFN γ的CD3 细胞均有不同程度的增加, 在抗CD28抗体协同刺激下分别增加 3. 29和 2. 47倍。当效靶细胞比为 80∶1时, CD3AK细胞对体外肿瘤细胞杀伤的百分率为 57. 54%。分组观察荷瘤动物, CD3AK细胞治疗组的抑瘤率为 33. 17%, 对小鼠肿瘤肺转移的抑制率为39. 70%, 与LAK细胞联合治疗的疗效更显著。结论: yCD3可活化T细胞, 诱导的CD3AK细胞在体外及动物体内显示抑制肿瘤的作用, 在临床抗肿瘤过继性免疫治疗中具有重要意义。     

CD3AK细胞的研究进展

ＣＤ３ＡＫ细胞是ＣＤ３单抗起始激活的杀伤细胞，不同的诱导方法可导致两种不同的细胞亚类，即ＣＤ３ＡＫ＾＋和ＣＤ３ＡＫ＾－，前者介导ＰＫＣ非依赖性快溶解细胞毒作用；后者介导ＰＫＣ依赖性慢溶解胞毒作用，本文归纳了在两种ＣＤ３ＡＫ细胞的诱导过程中，单核巨噬细胞，各种细胞因子以及谷胱苷肽等因素对其活化增殖，细胞毒活性的免疫调节作用。     

CD3AK细胞的诱导及其抗肿瘤作用机制的初步探讨

采用两种状态的IgG2型小鼠抗人CD3单抗,辅以小剂量外源性IL-2刺激诱导CD3AK细胞,测定其对K562,Raji及P815细胞的杀伤作用。结果发现,0.1μg/ml浓度的游离状态抗CD3单抗和10μg/ml浓度的粘附状态抗CD3单抗刺激人PBMC增殖达最强效果,其中粘附状态抗CD3单抗诱导的PBMC增殖活性明显强于激离状态抗CD3单抗;外源性IL-2能协同增强抗CD3单抗诱导PBMC增殖,但当粘附状态抗CD3单抗处于最强激活浓度时,其协同作用并不明显。实验结果显示,CD3AK细胞对三种不同性质的肿瘤细胞均具有较强的杀伤作用,其杀伤活性既有效靶细胞直接接触杀伤,又有杀伤因子介导。     

肿瘤患者自体CD3AK与LAK细胞生物学特性研究

目的：ＣＤ３ＡＫ细胞是由抗ＣＤ３单克隆抗体和ＩＬ－２共同激活诱导的肿瘤杀伤细胞。对３０例肿瘤患者自体ＤＣ３ＡＫ细胞及ＬＡＫ细胞进行了比较性研究。方法：采用ＭＴＴ法检测ＣＤ３ＡＫ细胞及ＬＡＫ细胞的杀瘤活性,应用流工细胞术进行免疫标志物分析。结果与结论：肿瘤患者ＰＢＭＮＣ诱导后产生的ＣＤ３ＡＫ细胞较ＬＡＫ细胞有更强的增殖能力,但对Ｒａｊｉ、Ｋ５６２细胞的生长抑制作用无明显区别;４０％～６０％ＣＤ３ＡＫ     

自身CD3AK细胞治疗乙型肝炎的临床观察（附58例报告）

目的 :探讨CD3AK细胞治疗慢性乙型肝炎的临床治疗效果。方法 :将 1 0 8例慢性乙型肝炎患者随机分为两组。治疗组 5 8例患者接受CD3AK细胞治疗 (1疗程回输细胞总数为 1 1～ 8×1 0 1 0 ) ,对照组 5 0例。结果 :5 8例患者经CD3AK细胞治疗后 ,HBeAg转阴率 36 .3% ,ALT复常率达86 .1 % ,HBVDNA转阴率 6 2 .1 % ,与对照组相比较有显著差异 ;随访一年后HBeAg转阴率 6 7.9% ,HBeAg转换率为 2 0 .7% ,ALT复常率达 97.2 % ,HBVDNA转阴率 86 .2 % ,与对照组相比较仍有显著差异。治疗组CD3和CD8T淋巴细胞绝对值在CD3AK细胞治疗后均增加在 85 %以上 ,前后对比有显著性差异 (P <0 .0 1 )。结论 :自身CD3AK细胞过继免疫治疗乙型肝炎可有效提高患者HBeAg阴转率和ALT的复常率 ;能明显增强患者的细胞免疫功能     

自体CD3AK细胞过继免疫治疗晚期恶性肿瘤的临床观察

目的观察抗CD3单克隆抗体（anti—CD3 mAb）激活的杀伤细胞（cD3AK）过继免疫治疗晚期恶性肿瘤的疗效。方法从51例恶性肿瘤患者自体外周血分离单个核细胞,加入anti—CD3mAb、重组人IL-2（rhIL-2）体外诱导后扩增培养,制备自体CD3AK细胞。待细胞培养至第10～12天时取样用于质控检测。收集质控检测合格的CD3AK细胞,调整至终浓度为（4．0～6．0）×10^9/L,静脉回输至患者体内,每例患者治疗3个疗程,每疗程回输5次（每2d回输1次）,每次回输细胞数不低于1×10^9,每疗程回输细胞总数大于5×10^＊。应用人T细胞亚群检测试剂盒和流式细胞仪测定治疗前后患者外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T细胞以及CD16＋56＋细胞（NK细胞）比例;观察治疗前后患者的相关化验指标、生活质量以及不良反应;评定疗效,计算有效率和临床受益率。结果分离制备的CD3AK细胞符合理想活性细胞质量要求,可用于进一步实验治疗。CD3AK细胞过继免疫治疗后,患者外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T细胞以及CD16＋56＋细胞（NK细胞）比例分别为（48．88±9．42）％、（35．09±4．11）％、（28．17±4．97）％、（20.31±6．98）％]均显著升高（均P〈0．05）。51例患者中,45例患者治疗后全身症状改善明显;所有患者治疗后相关化验指标均未出现异常变化,也未出现其他全身毒副反应;其中完全缓解6例、部分缓解14例、微效11例、稳定12例、进展8例,总有效率达60．8％,临床受益率达84．3％。结论CD3AK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤疗效确切、安全且无副作用,能有效改善和提高患者的机体免疫功能。     

人脐带血清不同组分对CD3AK细胞增殖的影响

人脐带血清有很好的支持ＣＤ３ＡＫ细胞增殖的活性，本文证明这种活性主要在大分子血清物质中。用截留分子量为１０５的滤膜超滤合并的人脐带血清，分成上下两部分，各占全血清的１／４和３／４。膜上部分为＞１０５血清；膜下部分为＜１０５血清。促进ＣＤ３ＡＫ细胞增殖的活性，主要在＞１０５血清；＜１０５血清的活性较低，尤其是对４天以上的增殖，即使增加浓度，添加＜１０５血清组的ＣＤ３Ａ细胞数目还是随培养天数下降。培养液中添加全脐带血清、＞１０５血清或重混合脐血清、ＣＤ３单抗和白细胞介素－１（ＩＬ－１），促进ＣＤ３ＡＫ细胞增殖；若培养液中改加＜１０５血清，则ＣＤ３单抗和ＩＬ－１反而使ＣＤ３ＡＫ细胞减少。此外，这两部分血清组分对ＣＤ３ＡＫ细胞合成ＤＮＡ和ＲＮＡ、对其表型、细胞表面分子表达和其杀伤活性均有不同影响。上述结果提示，人脐带血清中有分子量超过１０５的促进ＣＤ３ＡＫ细胞增殖的物质。     

抗CD3单抗和rIL－2共刺激法诱生扩增的人CD3AK的免疫生物学特征

抗ＣＤ３单抗和ｒＩＬ－２共刺激法诱生扩增的人ＣＤ３ＡＫ是异质性细胞群，其细胞表型以ＣＤ３＋Ｔ淋巴细胞和ＣＤ５６＋ＮＫ细胞表型为主，具有活化的淋巴母细胞形态学特征，常形成集落，并表达活化淋巴细胞的表面标记，如ＩＬ－２受体和ＭＨＣⅡ类抗原。     

抗CD3单抗和rIL－2共刺激法诱生扩增的人CD3AK的免疫生物学特征

抗ＣＤ３单抗和ｒＩＬ－２共刺激法诱生扩增的人ＣＤ３ＡＫ是异质性细胞群，其细胞表型以ＣＤ３＋Ｔ淋巴细胞和ＣＤ５６＋ＮＫ细胞表型为主，具有活化的淋巴母细胞形态学特征，常形成集落，并表达活化淋巴细胞的表面标记，如ＩＬ－２受体和ＭＨＣⅡ类抗原。     

B7-H1阻断对CD3AK细胞体外生物学活性的影响

目的: 探讨B7-H1阻断对CD3AK细胞增殖活化及其抗肿瘤免疫效应的影响.方法: 利用CD3单克隆抗体(mAb)刺激健康人外周血淋巴细胞诱导产生CD3AK细胞,然后利用B7-H1阻断型抗体阻断B7-H1通路,3H-TdR渗入法检测阻断后CD3AK细胞的增殖能力,ELISA法检测阻断后CD3AK细胞分泌IFN-γ、 TNF-α和IL-10的水平,同时将CD3AK细胞作用于膀胱肿瘤BIU-87细胞,MTT法检测阻断后CD3AK细胞的杀伤活性.结果: B7-H1阻断后,CD3AK细胞的增殖能力明显增强,体外存活时间明显延长;其分泌IFN-γ、 TNF-α的水平明显提高,而分泌IL-10的水平明显下降;同时CD3AK细胞对BIU-87细胞的杀伤活性亦明显升高.结论: 阻断B7-H1通路可以促进和维持CD3AK细胞的增殖和活化,并增强其抗肿瘤的免疫效应.阻断B7-H1通路将有望成为肿瘤免疫治疗的新策略.     

汉黄芩素提高人CD3AK细胞杀伤肝癌细胞的实验研究和机理探讨

目的:观察汉黄芩素对人CD3AK细胞增殖及对肝癌细胞SMMC-7721杀伤活性的影响,并探讨其发生的机制。方法:分离健康者外周血PBMC;在体外用多种细胞因子联合诱导培养CD3AK细胞。收集培养第7天的CD3AK细胞给予不同浓度汉黄芩素诱导48 h:CCK-8法检测人CD3AK细胞增殖率;MTT法检测汉黄芩素对SMMC-7721细胞生长的影响;流式细胞术(FCM)检测汉黄芩素作用前后CD3AK细胞穿孔素(PFP)、颗粒酶B(Gr B)、CD107a的表达;乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定汉黄芩素对CD3AK细胞杀伤肝癌细胞SMMC-7721活性;Western blot检测药物诱导前后CD3AK细胞胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白表达。用transwell chambers小室进行药物诱导前后肝癌细胞SMMC-7721迁移率检测。划痕愈合实验观察药物诱导后肝癌细胞SMMC-7721生长融合情况。结果:汉黄芩素能明显促进CD3AK细胞增殖,汉黄芩素浓度为3.2 mg/L时,细胞增殖率比对照组(0 mg/L)高23%,两者比较有统计学差异(P0.05)。在汉黄芩素为3.2 mg/L时诱导的CD3AK细胞对靶细胞SMMC-7721杀伤活性最高(60.4%),与对照组(42.7%)比较差异有统计学意义(P0.05)。经汉黄芩素诱导后的CD3AK细胞PFP、Gr B、CD107a表达显著高于对照组(P0.05)。汉黄芩素作用48h后的CD3AK细胞其ERK1/2蛋白表达较对照组均有所上调,浓度在12.5~0.8 mg/L时,ERK1/2蛋白表达高于对照组(P0.05)。经浓度为50、12.5、3.2、0.8、0.2mg/L汉黄芩诱导48 h后,肝癌细胞SMMC-7721通过transwell小孔细胞数以汉黄芩浓度为12.5 mg/L时最低、肝癌细胞SMMC-7721的融合率以3.2 mg/L时最低,与对照组比较有统计学意义(P0.05)。结论:汉黄芩素在一定浓度范围内能够促进CD3AK细胞增殖,增强其对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤活性,抑制SMMC-7721细胞生长、迁移和细胞的融合。汉黄芩素促进CD3AK细胞增殖和功能改变可能与活化细胞ERK1/2蛋白,上调CD3AK细胞表面PFP、Gr B、CD107a的表达有关。     

异体CD3AK细胞对白血病细胞的体外杀伤作用

肿瘤生物治疗是近年来肿瘤治疗中的重要进展之一 ,有关免疫效应细胞在自体造血干细胞的体外净化中的应用也引起了国内外学者的兴趣。我们观察了ＣＤ3ＡＫ细胞对残留ＣＭＬ细胞系及原代白血病细胞的体外杀伤作用 ,以期ＣＤ3ＡＫ细胞应用于自体移植体外净化。材料与方法材料 :正常人外周血由健康志愿男性提供 ;ＣＭＬ患者骨髓由东南大学附属中大医院血液科提供。ＣＤ3ＡＫ细胞的制备 :取正常人肝素抗凝全血10ｍｌ,常规分离单个核细胞 ,调整浓度为 10 6 ｍｌ,加入包被有 3μｇＣＤ3单抗的 2 4孔板中 ,加入 2 0 0Ｕ ｍｌＩＬ 2 ,每 2～ 3ｄ换液 …     

LAK、CD3AK和PHA-LAK细胞体外增殖和杀瘤活性比较

本文对LAK、CD3AK、PHA-LAK细胞的体外增殖能力、杀伤谱进行了同步比较.结果表明,三种效应细胞对悬浮和贴壁的肿瘤细胞系及新鲜分离的脑胶质瘤细胞均有较高的杀伤活性.由于LAK细胞增殖慢、IL-2用量大,PHA-LAK细胞体外存活时间短,而CD3AK细胞扩增倍数最高、细胞存活时间长、培养体系总的杀伤单位明显高于LAK和PHA-LAK细胞,且IL-2用量少.因此,我们认为CD3AK细胞是优于LAK和PHA-LAK细胞的较为安全、有效、经济的用于过继免疫治疗的抗癌效应细胞.     

CD28单抗对CD3AK细胞增殖及表型的影响

CD3AK细胞是用小剂量CD3单抗交联CD3分子而活化的T细胞 ,它具有较强的细胞增殖和细胞毒效能。CD2 8分子则是T细胞激活过程中所需的协同刺激分子 ,可提供T细胞活化所需的第二信号。本文利用CD2 8单抗作为CD2 8分子的配体 ,观察了CD2 8信号途径的激活对CD3AK细胞的影响。结果显示CD2 8单抗可增强CD3AK细胞的增殖活性和趋化团聚形成集落的能力 ,并优先引起CD4+T细胞的增殖。     

PIK3CA、PIK3CB、PIK3CD在胶质瘤中的表达及其意义

目的应用在线公共数据集,研究胶质瘤中PIK3CA、PIK3CB、PIK3CD表达及与预后的关系。方法通过ONCOMINE在线数据库对临床癌症样本中PIK3CA、PIK3CB和PIK3CD mRNA表达进行分析;应用GEPIA分析TCGA和GTEx数据库中的PIK3CA、PIK3CB和PIK3CD在胶质瘤和正常样本中的表达及与病人生存期的关系。通过cBioportal分析TCGA胶质瘤数据库中PIK3CA、PIK3CB、PIK3CD的突变、共表达以及调控网络。结果PIK3CA在胶质母细胞瘤(GBM)和低级别胶质瘤(LGG)中表达增加,其表达与GBM和LGG患者总体生存率(OS)和无病生存率(DFS)无显著相关。PIK3CB在GBM中表达水平下降,但差异不显著,在LGG中表达无明显变化,与GBM和LGG患者OS和DFS无显著相关。PIK3CD在GMB和LGG中表达水平下降,但差异不显著(P0.05),其表达与GBM患者的DFS显著相关,与LGG患者的DFS和OS显著相关(P0.05)。PIK3CA在GBM和LGG病例中突变比例较高,分别为12%和10%,PIK3CB和PIK3CD的突变较低;在GBM和LGG病例中,PIK3CB与PIK3CA的表达存在正相关;表达调控网络分析结果显示,此调控网络中包含51节点,包含PIK3CA和其它50个相关基因,IK3CA主要通过I3K/AKT发挥生物学作用。结论 PIK3CD在胶质瘤中表达下降,且与胶质瘤的预后密切相关。     

c-myc反义寡核苷酸对肿瘤细胞表面抗原和对CD3AK杀伤敏感性的调节作用

目的：观察c-myc反义寡核苷酸上调人高转移性肺巨细胞腺癌PG细胞表面抗原分子的表达水平，提高免疫效应细胞杀伤敏感性的作用和机制。方法：PT－PCR方法检测c-myc mRNA表达水平的变化。MTT法检测细胞增殖活性和CD3AK杀伤活性的变化。流式细胞术检测细胞表面抗原表达的变化以及c-myc蛋白表达水平的变化。结果：c-myc反义寡核苷酸（1μmol/L）明显地抑制PG细胞c-myc mRNA和蛋白表达水平，显著提高细胞表面HLA－ABC、ICAM－1分子的表达，其表达率分别从68．44％、38．40％增高到83．16％和42．09％（P＜0．01）。CD3AK对反义寡核苷酸处理的PG细胞的不同效靶比杀伤活性，分别从40．0％、65．0％、74．0％增高到52．0％、74．0％、91．0％（P＜0．01）。结论：c-myc反义寡核苷酸通过抑制PG细胞c-myc mRNA和蛋白表达，上调PG细胞表面HLA－ABC、ICAM－1分子的表达水平，提高其对免疫效应细胞的杀伤敏感性。     

免疫治疗在脑胶质瘤中的研究进展

脑胶质瘤是神经系统最常见的恶性颅内肿瘤.传统的治疗方式虽然能有效的抑制脑胶质瘤的生长,但是由于其高恶性程度和高复发率,恶性胶质瘤患者的术后生存期没有显著改善.研究证实,免疫治疗不仅发挥肿瘤杀伤作用,还能提升宿主的抗肿瘤免疫反应应答,被认为是难治性肿瘤的重要的辅助治疗策略.     

AKT和GSK3β在人脑胶质瘤中的表达

目的通过观察AKT和GSK3β蛋白在人脑胶质瘤中的表达变化,探讨AKT和GSK3β在脑胶质瘤发生中的关系及临床意义。方法应用免疫组织化学(IHC)SP法检测90例脑胶质瘤组织及15例正常脑组织中AKT和GSK3β蛋白的表达变化。结果正常脑组织与胶质瘤组织中AKT蛋白阳性率分别是30.00%与85.71%,两者差异有统计学意义(P0.05);AKT蛋白在低级别胶质瘤和高级别胶质瘤中的阳性率分别是65.71%与98.18%,两者之间差异有统计学意义(P0.05);GSK3β蛋白在低级别胶质瘤和高级别胶质瘤中的阳性率分别是48.57%与21.82%,两者之间差异有统计学意义(P0.05)。结论胶质瘤组织中AKT蛋白表达明显增加,且随着胶质瘤恶性程度的增加而增加,胶质瘤组织中GSK3β蛋白表达明显降低,且随着胶质瘤恶性程度的增加而降低,提示AKT和GSK3β蛋白在胶质瘤发生中相互作用。     

淫羊藿甙逆转转化生长因子β2对LAK,CD3AK细胞的免疫抑 …

目的 探讨淫羊藿甙逆转转化生长因子β２（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ β２ＴＧＦβ２）对ＬＡＫ、ＣＤ３ＡＫ细胞的免疫抑制作用及其机制。方法 采用ＭＴＴ法,ＲＴ－ＰＣＲ和流式细胞术。结果 淫羊藿降转受ＴＧＦβ２抑制的ＬＡＫ和ＣＤ３ＡＫ细胞的杀伤活性,并能部分恢复受ＴＧＦβ２抑制的ＬＡＫ细胞表面ＩＬ－２Ｒα表达和ＣＤ３ＡＫ细胞内穿孔素ｍＲＮＡ水平,以及ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖活性。