组蛋白脱乙酰化酶抑制剂对Kasumi-1细胞血管新生相关因子表达的影响

目的 研究组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸钠(VPA)及曲古菌素(TSA)对白血病细胞系Kasumi-1细胞血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF受体(KDR或FLK-1)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响,探讨其抗白血病血管新生的可能机制.方法 采用RT-PCR及Western blot方法 分析不同浓度VPA、TSA处理Kasumi-1细胞3 d后VEGF及其受体KDR mRNA及蛋白水平的变化,RT-PCR检测bFGF mRNA水平的变化.结果 VPA能够下调VEGF mRNA(3 mmol/L时处理组VEGF121 0.034±0.004、VEGF165 0.015±0.001,对照组分别为0.632±0.014、0.526±0.021)、KDRmRNA(3 mmol/L组0.038±0.000对0.258±0.034)及蛋白的表达,下调bFGF mRNA(3 mmol/L组0.086±0.015对0.228±0.017)的表达;TSA对VEGF、KDR mRNA及蛋白表达的影响与VPA相似,较高浓度的TSA能够下调bFGF mRNA的表达.结论 HDAC抑制剂可能通过调节血管新生相关因子及受体的表达,阻碍白血病患者的血管新生,从而抑制白血病的进展.     

三氧化二砷抑制NB4细胞增殖机制的探讨

目的 通过检测NB4细胞活化JAK1蛋白水平探讨三氧化二砷(As2O3)对其增殖抑制的分子生物学机制.方法 利用Western blot检测NB4细胞JAK1蛋白表达及磷酸化水平;用小分子RNA(siRNA)干扰NB4细胞JAK1蛋白的表达及转染JAK1质粒使NB4细胞内JAK1过表达;应用MTF法及锥虫蓝拒染法观察在JAK1基因沉默或过表达的状态下,As2O3抑制NB4细胞增殖的变化情况;在此基础上利用Western blot方法进一步检测磷酸化JAK1蛋白(P-JAK1)及细胞周期抑制蛋白P21的变化.结果 NB4细胞内可检测到JAK1蛋白稳定表达,但未检测到其磷酸化;As2O3作用NB4细胞后,JAK1磷酸化水平增强;JAK1 siRNA转染NB4细胞后JAK1蛋白表达水平明显低于非特异性siRNA转染组(即lamin siRNA转染组)及空白对照组;且在JAK1 siRNA转染组As2O3抑制NB4细胞增殖作用减弱,4μmol/L As2O3对JAK1 siRNA转染组NB4细胞增殖抑制率为49.12%,较非特异性siRNA组(74.58%)及空白对照组(72.33%)明显下降;JAK1质粒转染NB4细胞后野生型及突变型JAK1质粒组较空质粒组JAK1蛋白表达水平显著升高,且在野生型JAK1质粒转染组,As2O3抑制NB4细胞增殖作用增强,4 μmol/L As2O3对野生型JAK1质粒转染组NB4细胞增殖抑制率为69.53%,较突变型JAK1质粒组(37.26%)及空质粒组(39.61%)明显升高;As2O3作用NB4细胞后P21蛋白的表达水平上调.结论 JAK1蛋白在NIM细胞内稳定表达但没有活性;As2O3通过激活JAK1蛋白抑制NB4细胞增殖;As2O3激活JAK1蛋白后通过上调P21的表达而抑制NB4细胞增殖.     

砷剂和维甲酸对 NB4细胞组织因子和凝血酶调节蛋白mRNA及促凝活性的影响

为了研究三氧化二砷(As203)和全反式维甲酸(ATRA)对NB4细胞组织因子(TF)和凝血酶调节蛋白(TM)mRNA及其表达的影响,本研究采用体外细胞培养方法,以As2O3、ATRA处理NB4细胞,用ELISA动态测定其TF、TM抗原表达及促凝活性(PCA)变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TF和TM的mRNA转录.结果表明1 μmol/L的As2O3和1 μmol/L ATRA均可使NB4细胞TF抗原及mRNA表达呈时间依赖性渐进性下调;在24、48、72、96和120小时时间点,As2O3组TF抗原的表达水平分别为13.3±1.8,8.6±1.9,10.8±1.5,2.0±0.6和2.6±0.9 ng/107;ATRA组TF抗原的表达水平分别为12.4±1.1,11.3±1.8,5.7±1.7,2.8±0.8和2.0±0.6 ng/107,与对照组比较具有显著性(P＜0.05);在不同的时间点As2O3和ATRA,均可使其PCA下降,As2O3组血凝时间分别为123.5±10.5,156.3±11.6,179.3±15.3,248.9±20.1,312.0±29.8(秒);ATRA组血凝时间分别为76.4±5.6,146.8±10.9,198.2±15.6,265.8±20.6和363.8±31.9(秒);ATRA使NB4细胞TM抗原表达及其mRNA转录上调.结论As2O3、ATRA可降低TF mRNA转录,下调TF蛋白表达,降低NB4细胞PCA;ATRA增高TM转录及表达,缓解APL患者凝血功能异常.     

血管内皮生长因子对胎鼠肺组织基质金属蛋白酶2及基质金属蛋白酶9表达的影响

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)对胎鼠肺组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响及调控作用.方法:取孕龄16 d清洁SD大鼠30只,随机分为3组,生理盐水对照组(对照组)、VEGF低剂量组和VEGF高剂量组,每组10只.VEGF低剂量组每只孕鼠给予VEGF0.5 μg,VEGF高剂量组每只孕鼠给予VEGF 1μg,对照组给予生理盐水1 mL/kg,术后置于清洁笼中常规喂养.于用药后3 d,剖宫取出胎鼠.应用免疫组织化学和半定量RT-PCR方法分别检测胎鼠肺组织MMP-2和MMP-9蛋白及mRNA的表达情况.结果:对照组MMP-2蛋白和mRNA的表达相对值分别为120.23±10.93和0.33±0.08;MMP-9蛋白和mRNA的表达相对值分别为113.07±8.11和0.21±0.04.VEGF低剂量组MMP-2蛋白(138.17±12.32)、mRNA(0.65±0.15)和MMP-9蛋白(130.22±11.12)、mRNA(0.60±0.09)表达有一定程度的增高(P＜0.05);VEGF高剂量组的各项表达量均明显增高(P＜0.01).结论:VEGF可上调胎鼠肺组织中MMP-2和MMP-9蛋白及mRNA的表达水平,可促进胎鼠的肺部发育.     

HOXA9在髓系白血病细胞HL-60中的表达及药物对其干预作用

本研究旨在观察同源盒基因(HOX)HOXA9在髓系白血病细胞HL-60中的表达和药物干预对其表达的影响,在mRNA水平和蛋白水平探讨HOX介导白血病的发病机制。用实时荧光定量PCR法观察HOXA9 mRNA的表达,Western blot法观察HOXA9蛋白的表达,以及全反式维甲酸(ATRA 1μmol/L)或三氧化二砷(As2O3 1μmol/L)对HOXA9表达的调节作用。结果表明:ATRA组和As2O3组的HOXA9基因表达都呈先上升后下降趋势,第1天就有表达,在第2天表达上升,而在第3天表达降低。ATRA组和As2O3组的HOXA9蛋白第1天就有表达,对照组与ATRA处理组HOXA9蛋白表达呈先上升后下降趋势;As2O3处理组HOXA9蛋白表达呈逐渐下降趋势。ATRA组HOXA9基因的表达在第1-3天均较对照组高(P<0.05);As2O3组HOXA9基因表达水平与对照组比较,第2天增高(P<0.05),第1,3天差异无统计学意义。ATRA组HOXA9蛋白的表达水平在第1-3天均较对照组高(P<0.05);As2O3组HOXA9蛋白表达量与对照组比较,第1天增高(P<0.05),第2天降低(P<0.05),第3天变化无统计学差异。结论:HOXA9在人髓系白血病细胞HL-60中有表达,1μmol/L ATRA能上调HL-60细胞中HOXA9mRNA和蛋白的表达,ATRA、As2O3治疗白血病的机制可能与调节HOXA9 mRNA和蛋白的表达有关。     

As2O3和／或TGF-β1诱导NB4细胞凋亡中P27^Kip1、cyclin E、内源性TGF-β1的变化及其意义

本研究探讨三氧化二砷（As2O3）和／或转化生长因子-β1（TGF-β1）作用于NB4细胞后的细胞凋亡情况、P27^Kip1、cyclin E及内源性TGF—β1 mRNA水平的变化及其意义。用MTT法检测As2O3对NB4细胞的细胞毒性及IC50用瑞氏-姬姆萨染色观察凋亡细胞形态学的变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,半定量RT—PCR检测P27^Kip1、cyclin E以及内源性TGF-β1的mRNA水平。结果表明：As2O3、TGF-β1均能明显抑制NB4细胞的生长,促进NB4细胞的凋亡;As2O3对NB4细胞的抑制及促凋亡作用均呈剂量-时间依赖关系,24小时的IC50约为12μmol／L,48小时的IC50约为5μmol／L,72小时的IC50约为3μmol／L。As2O3和／或TGF—β1均可使NB4细胞出现细胞周期阻滞,5μmol／L As2O3使NB4细胞阻滞在G2／M期,5ng／ml TGF-β1使NB4细胞阻滞在G1期,两者联合处理组主要使S期阻滞。As2O3、TGF-β1分别作用于NB4细胞时均可见P27^Kip1及内源性TGF-β1的mRNA表达上调,而cyclin E的mRNA表达下调;联合处理组结果显示TGF—β1可增强As2O3上述作用。结论：As2O3及TGF-β1均可诱导NB4细胞凋亡,引起细胞周期分布异常;As2O3及外源性TGF—β1可能通过上调内源性TGF-β1使P27^Kip1高表达以诱导细胞凋亡;TGF-β1可能直接抑制了cyclin E的表达,或者通过上调P27^Kip1的表达而反馈抑制cyclin E的活性,从而导致NB4细胞周期阻滞。     

As2O3影响慢性粒细胞白血病细胞VEGF,MMP-2 mRNA表达的实验研究

目的研究As2O3对慢性粒细胞白血病（CML）骨髓单个核细胞，血管内皮生长因子（VEGF），基质金属蛋白酶2（MMP-2）mRNA及培养上清VEGF蛋白表达的影响作用，从而对白血病的发病机制及As2O3的作用机制进行探讨。方法用RT—PCR技术检测20例CML患者与5例正常人骨髓细胞MMP-2，VEGFmRNA的表达。用ELISA方法检测20例CML患者骨髓单个核细胞经As2O3作用前、后培养上清液VEGF水平的变化，用RT—PCR法检测VEGF，MMP-2mRNA表达阳性患者骨髓单个核细胞mRNA含量的变化。结果CML患者VEGF，MMP-2mRNA水平明显高于正常对照者，5&#215;10^-6mol／L As2O3可明显下调CML患者骨髓单个核细胞培养上清VEGF蛋白的表达（P〈0．05）；As2O3对骨髓单个核细胞VEGF，MMP-2mRNA的表达有下调作用，并为剂量依赖性。结论CML中VEGF与MMP-2mRNA表达异常增高。As2O3下调白血病细胞VEGF，MMP-2的表达可能是其抗白血病作用的机制之一。     

丙戊酸钠对Kasumi-1细胞细胞周期的阻滞作用及其机制探讨

目的 研究组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸钠(VPA)对白血病细胞系Kasnmi-1细胞周期的影响并探讨其分子机制.方法 不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞不同时间,碘化丙锭染色流式细胞术分析细胞周期的变化.RT-PCR及Western blot方法 分析细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21 WAF1/CIP mRNA或蛋白水平变化.结果 ①VPA抑制Kasumi-1细胞的细胞周期,使其阻滞于G0/G1期.3 mmol/L VPA处理3 d,G0/G1期细胞由(50.7±2.8)%上升至(80.7±1.7)%.②以3 mmol/LVPA处理Kasumi-1细胞不同时间,与对照组比较,3 mmol/L VPA组cyclin D1 mRNA表达水平下调;以不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞3 d,结果 发现随着VPA药物浓度增加cyclin D1 mRNA表达水平降低,呈现剂量依赖性.③VPA诱导p21WAF1/CIP mRNA表达明显增加,呈现时间及剂量依赖性.不同浓度VPA处理细胞3 d时,随着用药浓度的增加,p21WF1/CIP蛋白相对表达水平增加,3 mmol/L VPA处理细胞2 d与0 d比较,p21 WAF1/CIP蛋白相对表达水平明显增加(2.498±0.240对0).结论 VPA可以通过对cyclin D1及周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21WAF1/CIP调节使Kasumi-1细胞周期阻滞于G0/G1期.     

丙戊酸抗裸鼠Kasumi-1细胞移植瘤血管新生的作用研究

本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸（VPA）体内、体外抑制急性髓系白血病血管新生及其作用机制。用不同浓度的VPA处理人t（8;21）急性白血病细胞株Kasumi-1细胞3d后用RT-PCR及Westernblot分析细胞Angl、Ang2mRNA及蛋白水平的变化;建立Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤模型,采用RT-PCR、Westernblot的方法分析对照组和VPA治疗组瘤组织ang]、Ang2、VEGFmRNA及蛋白水平的变化,免疫组织化学的方法分析瘤组织CD34及Angl、An蛇蛋白水平的改变。结果表明,VPAl-3mmol／L处理3d能够下调Kasumi-1细胞AnglmRNA（3mmol／L组0．040±0．008,对照组O．360±0．116）、Ang2mRNA（3mmol／L组0．146±0．038,对照组0．540±0．049）及蛋白的相对表达,呈浓度依赖性;VPA500mg／kg,ip,处理14d能够明显降低裸鼠瘤组织Angl、Ang2、VEGFmRNA及蛋白的相对表达（P〈0．01）,并能明显减少荷Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤微血管密度（8．470±0．3001352．600±O．200）。结论：VPA可能通过调节血管生成素及VEGF的表达,阻碍白血病的血管新生,从而抑制白血病细胞浸润、迁移。     

As2O3抑制人淋巴瘤Raji细胞增殖及VEGF表达

本研究探讨在As2O3作用下人淋巴瘤Raji细胞的增殖及VEGF mRNA表达的变化.采用改良MTT方法观察As2O3对Raji细胞的增殖抑制效应;采用半定量RT-PCR方法检测As2O3对Raji细胞VEGF121和VEGF165 mRNA表达的影响.结果表明As2O3对Raji细胞的作用表现时间、剂量依赖性的增殖抑制效应,建立回归方程为IR＝0.531dose+0.481time(P＜0.05).半定量RT-PCR方法检测显示,Raji细胞同时表达VEGF121和VEGF165两种剪切变异体,二者的表达水平相当(VEGF1211.17±0.14;VEGF1651.31±0.19,P＞0.05).VEGF121和VEGF165 mRNA表达量与As2O3作用时间呈负相关关系(rsv121=-0.547,P＜0.05;rsv165=-0.632,P＜0.05),且VEGF的各异构体对药物的反应具有差异性,VEGF165 mRNA表达下调早且有持续性.但在所选浓度组中未发现类似的相关关系(P＞0.05).结论As2O3既可抑制Raji细胞生长增殖,亦可通过下调VEGF mRNA表达而产生抗血管新生效应,且小剂量、长时程给药时结果亦然.     

通心络对糖尿病小鼠视网膜组织血管内皮生长因子及色素上皮衍生因子表达的影响

目的 观察通心络胶囊对自发糖尿病KK/Upj-Ay小鼠视网膜组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和色素上皮衍生因子(pigment epitheliumderived factor,PEDF)基因及蛋白表达的影响.方法 KK/UN-Ay小鼠40只随机分为模型组、通心络低(1 g/kg)、中(2 g/kg)、高(4 g/kg)剂量4组,通心络灌胃给药12周.以C57BL/6小鼠为对照组.应用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测各组小鼠视网膜组织中VEGF和PEDF的基因表达;蛋白印迹(western blot)法检测视网膜组织中VEGF和PEDF蛋白的表达.结果 与对照组比较,模型组VEGF mRNA、蛋白表达明显增高(P＜0.01),PEDF mRNA、蛋白则明显下降(P＜0.01);通心络治疗12周后,与模型组比较,低、中、高剂量组VEGF mRNA和蛋白表达水平均明显下降(P＜0.01),而PEDFmRNA和蛋白表达水平明显增高(P＜0.01).结论 通心络胶囊可通过抑制自发2型糖尿病小鼠视网膜组织VEGF的表达及提高PEDF的表达来改善视网膜病变.     

槐耳清膏对结肠癌SW480细胞生长抑制作用及机制研究

目的:探讨槐耳清膏对体外培养人结肠癌SW480细胞生长抑制作用及其作用机制。方法:采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测槐耳清膏对SW480生长抑制作用并探求最佳作用浓度;体外培养SW480细胞48 h,随机分为常氧组(NC组)、低氧组(HC组)和低氧槐耳组(HH组)。半定量RT-PCR检测SW480细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达水平。结果:槐耳清膏对SW480细胞抑制率随药物浓度增加而上升,1mg/ml时抑制率最大(66.7%),与5-FU组(浓度为10μg/ml)相比无统计学意义。HH组和HC组VEGF mRNA表达均显著高于NC组4.71±0.07,4.54±0.02和1.19±0.03(P0.05),但HH组与HC组比较差异无统计学意义。HC组VEGF蛋白表达显著高于NC组0.66±0.03和0.38±0.02(P0.05),HH组较HC组VEGF蛋白表达均显著下降0.37±0.03和0.66±0.03(P0.05)。结论:槐耳清膏可抑制SW480细胞生长,1 mg/ml时抑制率最大。机制为槐耳清膏下调SW480细胞内VEGF蛋白表达抑制肿瘤。     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠心脏移植缺血再灌注损伤时基质金属蛋白酶的影响

目的观察N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理对心脏移植缺血再灌注损伤（IRI）时基质金属蛋白酶（MMP）的影响,并探讨其可能的机制。方法健康雄性Lewis大鼠60只,随机分为3组。对照组：摘取供体心脏前30 min经供体大鼠腹腔静脉注射生理盐水0.5 ml;供体预处理组：摘取供心前30 min经供体大鼠腹腔静脉注射NAC 300 mg/kg;受体预处理组：受体于移植前30 min经受体大鼠腹腔静脉注射NAC 300 mg/kg。供心冷藏于4℃组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液（HTK）18 h后建立大鼠腹腔异体异位心脏移植模型。移植后24 h光镜下观察心肌胶原含量的变化;免疫组织化学法检测心肌组织中MMP2/9蛋白表达;采用实时PCR检测MMP2和基质金属蛋白酶抑制剂2（TIMP2）mRNA表达。结果 NAC供体/受体预处理组心肌胶原含量明显低于对照组（4.49±0.62/5.88±0.96 vs.10.43±0.93,P〈0.01）;免疫组织化学法半定量评分显示NAC供体/受体预处理组MMP2/9蛋白含量明显低于对照组（1.60±0.22/2.13±0.23,1.63±0.18/2.78±0.16 vs.3.00±0.15/3.78±0.15,P〈0.01）,受体预处理组心肌组织中MMP2 mRNA明显低于对照组（1.45±0.72vs.2.77±1.62,P〈0.05）,而供体预处理组TIMP2 mRNA明显高于对照组（2.59±2.12 vs.0.63±0.50,P〈0.05）。结论在大鼠心脏移植中NAC对供心IRI具有保护作用,可能是通过NAC直接抑制活性氧所致的MMP2/9升高,激活TIMP2,减轻了心肌IRI。     

Staurosporine诱导维A酸耐药早幼粒细胞白血病细胞株分化的研究

目的:研究蛋白激酶C抑制剂staurosporine对全反式维A酸(ATRA)耐药的急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株的诱导分化作用及其可能的机制。方法:以ATRA耐药的APL细胞株NB4-R1为模型,通过检测细胞表面分化抗原CD11b,并进行四唑氮蓝(NBT)还原实验和形态学观察,分析Staurosporine对NB4-R1细胞分化的影响;应用蛋白印迹法检测staurosporine对C/EBPβ、C/EBPε和PML-RARα蛋白表达水平的影响。结果:与对照组相比,staurosporine处理72 h后,细胞CD11b阳性率从(5.84±1.89)%上升到(65.90±2.00)%,差异有统计学意义(P     

2型糖尿病合并脑梗死患者血清脂联素、血管内皮生长因子、高敏C反应蛋白及其颈动脉内膜粥样硬化关系的研究

目的 观察2型糖尿病(T2DM)合并脑梗死患者中血清脂联素(APN)、血管内皮生长因子(VEGF)、高敏C反应蛋白(hsCRP)与颈动脉内膜粥样硬化的关系.方法 选取住院的T2DM患者105例,糖尿病合并脑梗死(DACI)组的患者72例,单纯T2DM 33例和同期健康体检者正常对照(NC)组30例.分别检测各组颈动脉内膜中层厚度(IMT),APN,VEGF和hsCRP水平的变化.结果 对NC组、T2DM组和DACI组研究对象进行了相关项目的测量,IMT(0.72±0.13) mm、(0.89±0.19) mm vs (1.13±0.37) mm,Crouse积分(1.22±1.06)分、(3.52±1.73)分vs (4.68±2.28)分,VEGF( 112.96±11.27) ng/L、(143.83±15.86) ng/L vs (160.32±19.43) ng/L,hsCRP(1.52±0.98) mg/L、(6.58±2.83)mg/L vs (14.56±4.73) mg/L水平和颈动脉斑块检出率从NC组、T2DM组和DACI组依次增高(33.3％、63.6％ vs 83.3％),而APN水平依次降低(8.76±3.07)μmol/L、(5.17±2.87)μmol/L vs(3.28±1.87) μmol/L,差异有统计学意义(P＜0.01).DACI组患者血清VEGF和hsCRP水平随着颈动脉斑块严重程度的增加而增加,而APN出现依次降低(P＜0.01).结论 VEGF、APN和hsCRP参与了DACI的颈动脉粥样硬化过程,并且与动脉粥样硬化斑块的不稳定性密切相关.     

槐耳清膏对结肠癌SW480细胞增殖能力影响及其机制探讨

目的：探索槐耳清膏对体结肠癌SW480细胞增殖能力影响及其机制。方法：采用噻唑蓝（MTT）比色法检测槐耳清膏对SW480细胞增殖能力的作用,并探求最佳作用浓度;将体外培养细胞随机分为常氧组（NC组）、低氧组（HC组）和低氧槐耳组（HH组）,逆转录聚合酶链反应（RT PCR）检测各组血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达水平。结果：槐耳清膏对SW480细胞抑制率随药物浓度增加而上升,1 mg/mL时抑制率最大（66.7%）,与氟尿嘧啶组（浓度为10μg/mL）相比无统计学意义。HH组和HC组VEGF mRNA表达均显著高于NC组,分别为4.71±0.07,4.54±0.02和1.19±0.03（P〈0.05）,但HH组与HC组比较差异无统计学意义。HC组VEGF蛋白表达显著高于NC组,分别为0.66±0.03和0.38±0.02（P〈0.05）,HH组较HC组VEGF蛋白表达均显著下降,分别为0.37±0.03和0.66±0.03（P〈0.05）。结论：槐耳清膏可抑制SW480细胞增殖,1 mg/mL时抑制率最大。其机制为槐耳清膏下调细胞内VEGF蛋白表达,从而抑制肿瘤生长。     

抗CD44单克隆抗体IM7在体外诱导慢性髓系白血病干/祖细胞的凋亡

本研究探讨抗CD44单克隆抗体IM7在体外诱导慢性髓系白血病干/祖细胞(leukemic stem/progenitor cells,LSPC)凋亡情况及其可能的作用机制。取20例初诊的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)病人骨髓液5-10ml,用免疫磁株分离法分离出CD34+、CD38-、CD123+LSPC。利用Annexin-V试剂盒检测IM7诱导CML-LSPC凋亡情况;荧光实时定量PCR及RT-PCR检测CML-LSPC中原癌基因c-myc、NF-κB表达水平;Western-blot检测IM7孵育后CML-LSPC中BCL-2蛋白表达变化。结果表明:经IM7孵育后CML-LSPC的早期凋亡率由对照组(5.42±1.84)(升高至(12.58±2.84)((p0.05)。IM7孵育后CML-LSPC中原癌基因c-myc、NF-κB mRNA表达水平明显降低,IM7能有效抑制CML-LSPC中BCL-2蛋白表达下调,CML-LSPC中NF-κB的活性受到抑制。结论:抗CD44单克隆抗体IM7能有效诱导CML-LSPC凋亡,其可能机制为NF-κB的活性降低,作为下游靶基因c-myc及bcl-2表达下调,从而诱导LSPC凋亡。     

黄芪甲甙对Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax基因和蛋白表达的影响

[目的]探讨黄芪甲甙对Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax基因与蛋白表达的影响.[方法]Balb/C小鼠50只随机分5组（每组10只）,A组空白对照组：腹腔无菌注射不含病毒的Eagle＇s培养基0.1 mL,30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;B组病毒性心肌炎对照组：小鼠每只腹腔注射0.1 mL内含50%组织感染率（TCID50） 为1×10^5的CVB3病毒Eagle＇s培养基,30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;黄芪甲甙低、中、高剂量干预组（分别为C、D、E组）,在腹腔注射0.1 mL内含TCID50 为1×10^5的CVB3病毒Eagle＇s培养基,30 min后,用黄芪甲甙[具体剂量分别为0.07、0.2、0.6 mg/（kg·d）]0.1 mL灌胃,共7 d.采用缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌凋亡细胞,免疫组织化学检测Bcl-2、Bax蛋白的表达,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Bcl-2、Bax基因的表达,并利用图像分析系统测量平均光密度值进行半定量分析.[结果]与A组比较,B组心肌细胞凋亡发生率增高（0.57±0.16vs 0.06±0.02,P〈0.01）;抑制凋亡因子Bcl-2基因（0.52±0.12 vs 0.76±0.11,P〈0.01）及蛋白（6.08±1.15 vs 12.38±3.05, P 〈0.01）表达下降,而促进凋亡因子Bax基因（0.79±0.12 vs 0.61±0.14, P 〈0.01）及蛋白（6.21±1.52 vs 3.01±0.75, P 〈0.01）表达增强,Bcl-2/Bax mRNA比值降低（0.58±0.14vs0.87±0.12,P〈0.05）.与B组比较,E组CVB3病毒性心肌炎心肌细胞的凋亡指数（0.09±0.03vs 0.57±0.16,P〈0.05）降低,Bcl-2基因（0.74±0.12 vs 0.52±0.12,P〈0.05）及蛋白水平（11.82±2.96 vs 6.08±1.15, P 〈0.05）表达增强,Bax基因（0.63±0.13 vs 0.79±0.12,P〈0.05）及蛋白（3.15±0.72 vs 6.21±1.52,P〈0.05）水平表达下降.[结论]黄芪甲甙在Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎中抗凋亡作用机制可能是促进抑制凋亡基因Bcl-2表达,而抑制促凋亡Bax基因表达.     

肥胖患者外周血单个核细胞Toll样受体4表达及活性研究

目的研究肥胖患者外周血单个核细胞（PBMCs）Toll样受体4（11LR4）表达及活性。方法收集16例肥胖患者和16例正常对照者的PBMCs,蛋白印迹法检测PBMCsTLR4及IKBct蛋白表达,实时荧光定量PCR检测PBMCsTLR4及白细胞介素6（IL-6）mRNA表达,并测定空腹血糖、空腹胰岛素、血游离脂肪酸（FFA）、IL-6及肿瘤坏死因子仪（TNF-a）。结果与正常对照组比较,肥胖组血FFA、IL-6、TNF-a及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）明显增高[FFA：（879±64）、（458±48）umoL／L,t=24．613、P=0．000;IL-6：（2．20±0．35）、（1．264-0．25）ng／L,t=14．993、P=0．000;TNF—a（1．964-0．32）、（1．384-0．24）ng／L,t=9．128、P=0．000;HOMA．IR：1．84-0．2、0．44-0．1,t=32．254、P=0．000];肥胖组PBMCsTLR4mRNA及蛋白表达显著升高（TLR4mRNA：3．13±0．21与0．99±0．03,f=54．758,P〈0．05;TLR4蛋白：7．04±0．42与2．53±0．17,t：77．450,P〈0．05）;肥胖组PBMCsIKBet蛋白表达显著降低（2．52±0．16与4．00±0．30,t=23．284,P〈0．05）,IL-6mRNA表达显著升高（2．55±0．15与1．03±O．11,t=53．981,P〈0．05）。结论肥胖患者PBMCsTLR4表达及活性显著增加,可能在肥胖患者胰岛素抵抗的发生、发展中具有重要作用。