β2 GP1诱导的EAPS小鼠Treg/Th17细胞比率变化的研究

目的:观察EAPS疾病进展过程中小鼠外周血Th17细胞与CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的比率变化。方法:以重组人β2糖蛋白1(rhβ2GP1)主动免疫BALB/c小鼠建立EAPS模型,免疫12周后检测外周血浆抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2GP1)、抗心磷脂抗体(a CA)、IL-17、IL-2、IL-6、TGF-β、活化部分凝血活酶时间(APTT)和血小板计数(PLT)及流产率。流式细胞术(FCM)检测小鼠PBMC中CD4+CD25+Treg及Th17细胞的比率。结果:与对照组相比,模型小鼠anti-β2GP1、a CA、IL-17、IL-2、IL-6水平明显升高,APTT延长,TGF-β降低,PLT升高,流产率提高,差异有统计学意义(P<0.05)。PBMC中CD4+CD25+Treg细胞频率8周前与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),12周后逐渐减少,明显低于对照组(P<0.05);Th17细胞频率逐渐升高,明显高于对照组(P<0.05);CD4+CD25+Treg/Th17比值明显低于对照组(P<0.05)。结论:EAPS小鼠外周血Th17/Treg细胞比率失衡可能在EAPS的发生发展中起重要作用。     

RSV毛细支气管炎患儿血液CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg与CD40/CD40L关系的研究

探讨CD40/CD40L信号通路对不同病原体毛细支气管炎(以下简称:毛支炎)患儿血液CD4~+CD25~+Foxp3~+ Treg的增殖分化及其分泌抑制性细胞因子TGF-β1、IL-10的影响。取呼吸道合胞病毒(RSV)及非RSV感染毛支炎患儿血液并检测CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg的百分率;并将血液中分离的单个核细胞(PBMC)接种于24孔板内,加入CD40L McAb进行阻断,作用72h后采用流式细胞仪检测培养板内CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg的百分率,激光共聚焦检测CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞表面Foxp3的平均密度,酶联免疫吸附法检测培养上清中TGF-β1、IL-10的含量。RSV毛支炎患儿血液中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg百分率显著低于非RSV毛支炎患儿及正常对照组(P<0.05);RSV毛支炎患儿体外培养PBMC中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg百分率均显著低于非RSV毛支炎患儿、正常对照组和抗CD40L McAb组(P<0.05)。毛支炎患儿PBMC经过体外培养72h后,抗CD40L McAb组培养的细胞中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg表面Foxp3的平均密度显著高于RSV毛支炎患儿组(P<0.05)。PBMC培养上清中IL-10和TGF-β1的水平抗CD40L McAb组明显高于非RSV毛支炎组,非RSV毛支炎组明显高于RSV毛支炎组,差异有统计学意义(P<0.05)。RSV毛支炎患儿体内存在严重的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg数量不足;体外用抗CD40L McAb阻断CD40/CD40L通路可促进RSV毛支炎PBMC中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg的增殖。     

宫颈癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞及血清中IL-10、TGF-β的表达及其临床意义

目的 探讨宫颈癌患者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T淋巴细胞(regulatory T cells,Treg)、T淋巴细胞亚群以及血清IL-10、TGF-β1、TGF-β2细胞因子的表达及其临床意义.方法 选取32例宫颈癌患者和24位健康体检者为研究对象,采用流式细胞术检测受试者外周血中CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg占CD4+T淋巴细胞的比例、T淋巴细胞亚群细胞比例;采用ELISA方法检测血清中细胞因子IL-10、TGF-β1、TGF-β2的含量.结果 与健康对照组相比,宫颈癌组外周血中CD4+CD25+ Foxp3+ Treg占CD4+T淋巴细胞的比值明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01),T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4 +/CD8+、CD19+)比例差异无统计学意义(P＞0.05),血清IL-10含量明显增高,TGF-β2含量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01),TGF-β1的含量差异无统计学意义(P＞0.05);宫颈癌组手术后、化疗后CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg占CD4+T淋巴细胞的比例,血清IL-10、TGF-β1、TGF-β2含量均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01),CD4+ CD25+ Foxp3+Treg与TGF-β1之间存在正相关(r=0.673,P＜0.01).结论宫颈癌患者CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg占CD4+T淋巴细胞的比值增高,且与TGF-B1含量呈正相关,可能在宫颈癌的肿瘤发生发展及肿瘤免疫逃逸中起着重要作用.     

不明原因复发性流产小鼠模型CD4~+CD25~+ Treg的比例及Foxp3表达的变化

目的分析比较小鼠正常妊娠模型和流产模型中CD4+CD25+调节性T细胞CD4+CD25+Treg的比例、Foxp3蛋白表达水平及胎盘吸收率,探讨CD4+CD25+Treg与不明原因复发性流产的关系。方法以雌性CBA/J×雄性Balb/c为对照组,以雌性CBA/J×雄性DBA/2J为流产组,各10对,于妊娠第14天采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析CD4+CD25+Treg在CD4+细胞中所占比例,Western blot检测并比较2组CD4+T细胞中Foxp3的表达,并观察2组小鼠的胎盘吸收情况。结果流产组CD4+CD25+Treg所占比例为(10.1±0.59)%低于对照组(15.5±0.78)%(P<0.05)。流产组胚胎吸收率为(25.6±3.5)%,明显高于对照组(2.4±1.6)%(P<0.01)。流产组Foxp3谱带密度相对值为0.30±0.018,低于正常组的0.68±0.025(P<0.05)。结论小鼠的自然流产模型建立成功,流产组孕鼠CD4+CD25+Treg的比例和Foxp3蛋白表达水平明显低于正常妊娠组,提示流产组高流产率可能与CD4+CD25+Treg数量和Foxp3的表达减少有关,CD4+CD25+Treg细胞的数量减少和功能缺陷可能是不明原因复发性流产的发生机制之一。     

浆细胞性乳腺炎患者外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞变化

目的:观察浆细胞性乳腺炎(Plasma cell mastitis,PCM)患者外周血CD4+ CD25+ CD127-调节性T细胞(CD4+CD25+ CD127-Treg)数量和功能变化,以探讨PCM免疫病理机制.方法:将58例浆细胞乳腺炎患者分成三组:其中急性组13例(22％)、亚急性组25例(43％)和慢性组20例(34％).并设正常对照组20例及乳腺癌对照组16例.以流式细胞术检测各型PCM患者外周血中CD4 +CD25+ CD127 Treg细胞百分率;实时荧光定量RT-PCR检测转录因子Foxp3表达及ELISA检测TGF-β水平.结果:三组PCM组与正常组相比,外周血CD4+ CD25+ CD127 Treg数量,外周血PBMC中Foxp3表达及血浆TGF-β水平均下降(P＜0.05),其中急性PCM组下降最为明显(P＜0.01),乳腺癌组三项指标均升高(P＜0.05).结论:浆细胞性乳腺炎患者的CD4+ CD25+ CD127-Treg数量及功能有所下降.     

CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞在子宫内膜癌患者外周血中的表达及意义

探讨在子宫内膜癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的表达情况及意义。采用流式细胞术检测84例术前子宫内膜癌患者及40例子宫肌瘤患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+细胞比例及Foxp3平均荧光强度,采用qRT-PCR检测两组患者外周血中Foxp3的mRNA表达情况,同时采用ELISA检测外周血中TGF-β1和IL-17含量。与子宫肌瘤组比较,子宫内膜癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例虽略有升高但没有统计学意义(P=0.08),而CD4+CD25+细胞内Foxp3的平均荧光强度明显升高(P<0.001)。子宫内膜癌患者外周血中Foxp3的mRNA表达要明显多于子宫肌瘤组(P<0.001)。子宫内膜癌患者外周血中TGF-β1、IL-17的含量要多于子宫肌瘤组。子宫内膜癌患者外周血中的Foxp3+Treg细胞表达增多,这些细胞可能通过增加细胞因子TGF-β和IL-17的分泌从而调节机体对肿瘤细胞免疫反应的方向,最终促进子宫内膜癌的发生和发展。     

抗ICOS抗体体外对哮喘大鼠血液和淋巴液CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞数量及其功能影响

目的:研究抗ICOS抗体对哮喘大鼠外周血和淋巴液来源CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)数量及其功能的影响。方法:抗ICOS抗体处理血液和淋巴液中单个核细胞(MNC),流式细胞仪检测MNC中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MNC培养液上清IL-10和TGF-β1含量。结果:末次激发后各个时间点收集MNC,体外培养96 h,各组淋巴液来源MNC体外培养体系中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分率均显著高于血液(P<0.05),哮喘组淋巴液和血液来源MNC体外培养体系中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分率均显著低于正常对照组(P<0.05),抗ICOS抗体组淋巴液和血液来源MNC体外培养体系中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分率显著低于哮喘组(P<0.05)。末次激发后0 h收集淋巴液来源和血液来源MNC培养上清中抗ICOS抗体组IL-10显著低于哮喘组和正常对照组(P<0.05);末次激发后不同时间点收集MNC培养上清中各组TGF-β1无明显差别。结论:用抗ICOS抗体阻断ICOS/ICOSL信号通路加重哮喘大鼠Treg细胞缺陷,并在哮喘激发早期0 h抑制血液和淋巴液来源MNC体外培养体系中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分泌IL-10,但对于TGF-β1分泌无显著影响。     

Lewis肺癌细胞通过TLR9对CD4~+CD25~+Treg细胞影响的研究

目的:本研究以Lewis肺癌细胞为研究对象,探讨肿瘤细胞通过TLRs对CD4+CD25+Treg细胞的影响。方法:我们采用流式细胞术检测了Lewis肺癌细胞与脾淋巴细胞共培养系统中CD4+CD25+Treg细胞数量变化;通过RT-PCR方法检测了共培养对Foxp3和TLR1-9mRNA表达的影响;采用TLR9受体阻断剂氯喹阻断Lewis肺癌TLR9的表达。结果:与对照组相比,共培养组CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达均明显增高(P0.05);Lewis肺癌细胞与淋巴细胞共培养后可影响多种TLRs表达,其中TLR9 mRNA表达与对照组相比明显增高(P0.05),阻断Lewis肺癌细胞TLR9可明显降低CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达(P0.05)。结论:Lewis肺癌细胞可通过TLR9促进CD4+CD25+Treg细胞产生及功能增强,参与诱导肿瘤的免疫耐受,从而促进肿瘤的发生和发展。     

内毒素耐受状态下脾脏CD4~+Foxp3~+调节性T细胞的比例变化及意义

以5mg/kg浓度LPS腹腔注射C57BL/6小鼠建立内毒素耐受模型,观察注射72h及8d后脾脏大小、重量及总细胞数;HE染色观察脾脏病理学变化;FACS检测CD4+Foxp3+Treg细胞比例并计算其细胞总数;同时检测CD4+Foxp3+Treg细胞功能相关膜分子CTLA-4的相对表达;Ki-67染色法检测CD4+Foxp3+Treg细胞的增殖情况;PI染色法检测CD4+Foxp3+Treg细胞的凋亡情况;Real-time PCR技术检测脾脏中TGF-β的相对表达。结果发现与对照组相比,LPS注射72h后脾脏大小、重量及细胞总数显著增加(P0.05),且发生病理学改变;脾脏中CD4+Foxp3+Treg细胞比例和数量显著减少(P0.05),CTLA-4表达水平显著降低(P0.05);同时,增殖比例明显减少,凋亡比例增加(P0.05);最后,脾脏中TGF-β的相对表达水平显著减少。LPS注射8d后脾脏大小、重量及细胞总数均与对照组相比无差异(P0.05),且脾脏组织结构未见改变;脾脏中CD4+Foxp3+Treg细胞比例及数量仍减少(P0.05),而其表达CTLA-4水平增加(P0.05),且凋亡和增殖比例无明显差异(P0.05);最后,脾脏组织中TGF-β的相比表达显著增加。结果表明,内毒素耐受状态下,CD4+Foxp3+Treg细胞比例发生明显改变,可能与细胞凋亡和增殖变化有关。     

小鼠乳腺癌模型中CD4~+CD25~(bright)CCR6~+Treg的检测及其意义

为检测CD4+CD25brightCCR6+Treg在小鼠乳腺癌实验动物模型中的分布,并探讨其意义。采用FACS检测正常小鼠和4T1荷瘤小鼠中CD4+CD25brightTreg的记忆分子CCR6的表达水平,同时检测CD4+CD25brightTreg的CCR6+和CCR6-两个亚群的Foxp3表达情况;用增殖抑制实验观察了两个亚群分别对CD4+CD25-T细胞增殖的抑制作用;用FACS检测CD4+CD25brightCCR6+Treg在正常小鼠和4T1荷瘤小鼠中PBMC、LN和TIL中的分布情况。结果:4T1荷瘤小鼠中CD4+CD25brightTreg的记忆分子CCR6的表达水平较正常小鼠增加;CD4+CD25brightTreg的CCR6+和CCR6-两个亚群均高表达Foxp3,均能在体外有效抑制CD4+CD25-T细胞的增殖;与正常对照相比,CD4+CD25brightCCR6+Treg在4T1荷瘤模型的引流淋巴结中比例明显增加,并在肿瘤局部存在显著的富集。上述结果提示在肿瘤免疫中存在CD4+CD25brightCCR6+Treg,其具有效应/记忆样表型,并在肿瘤局部有明显的富集,这可能是肿瘤长期免疫逃逸的重要机制。     

小鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞体外扩增

目的:本研究旨在探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞体外扩增的方法。方法:采用磁珠分选小鼠CD4+T细胞,αCD3单克隆抗体包被24孔板,加入αCD28单克隆抗体、雷帕霉素、rhIL-2,培养3周后,流式细胞仪测定培养细胞中CD4+CD25+T细胞的含量,实时定量PCR检测CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达;单向混合淋巴细胞反应和增殖抑制试验测定扩增的CD4+CD25+T细胞的增殖及其抑制功能;ELISA检测培养上清中IL-10和TGF-β1的含量。结果:小鼠CD4+T细胞培养3周后,CD4+CD25+T细胞达(76.05±2.73)%,高于未加雷帕霉素组(52.17±1.36)%(P<0.001),磁珠分选的CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达是未加雷帕霉素组的5倍(P<0.001),增殖能力是未加雷帕霉素组的0.29倍(P<0.001),对CD4+T细胞增殖抑制能力是未加雷帕霉素组的3.6倍(P<0.001),培养上清中IL-10和TGF-β1分别是对照组的1.8倍和1.6倍(P<0.001)。结论:小鼠CD4+T细胞在含有1μg/ml的αCD28、rhIL-2 100 U/ml和终浓度为10 nmol/L雷帕霉素的培养体系中培养3周后能有效扩增CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞。     

卡介苗多糖核酸对哮喘大鼠淋巴液和血液CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的影响

目的:探讨卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)对哮喘大鼠淋巴液和血液调节性T细胞数量及功能的影响。方法:将SD大鼠随机分为对照组、哮喘组和BCG-PSN组,分别收集不同时间点大鼠淋巴液和血液,采用流式细胞仪(FCM)检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg)百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测淋巴液和血浆白介素10(IL-10)和转录生长因子β1(TGF-β1)浓度。结果:各组在各时间点其淋巴液中CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率、IL-10水平均较血液明显升高。哮喘组大鼠淋巴液和血液中CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率、IL-10、TGF-β1浓度均较对照组显著降低(P0.05)。BCG-PSN组淋巴液和血液中CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率和IL-10水平较哮喘组明显升高(P0.05),与对照组比较无显著性差异;而TGF-β水平在48小时较对照组和哮喘组明显升高(P0.05)。结论:哮喘大鼠淋巴液和血液存在明显CD4+CD25+Foxp3+Treg数量及功能不足。BCG-PSN可能通过增加哮喘大鼠外周血和淋巴液中CD4+CD25+Foxp3+Treg的数量及其产生IL-10和TGF-β水平,增强免疫抑制效应,从而发挥抑制哮喘炎症的作用。     

铜绿假单胞菌群体感应系统对CD4~+CD25~+Treg细胞的影响

目的 探讨铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)群体感应系统(quorum sensing system,QS)对CD4+CD25+Treg细胞的影响及作用机制.方法 60只雄性SD大鼠,随机分为铜绿假单胞菌野生菌株PAO1组,变异菌株PAO-JP2组(lasⅠ、rhlⅠ基因双变异)和空白对照组.将PA包被的硅胶管置入大鼠一侧主支气管建立慢性肺部感染模型,对照组置入无菌硅胶管.28 d后,FACs测外周血CD4+CD25+Treg细胞数量,ELISA测血清IL-10、TGF-β,RT-PCR测脾Foxp3mRNA表达水平,肺组织行HE染色.结果 CD4+CD25+Treg/CD4+T淋巴细胞的百分比:PAO1组(19.79±6.45)%,PAO-JP2组(11.03 ±3.92)%,对照组(5.15±0.47)%,PAO1组的百分比明显高于PAO-JP2组和对照组(P<0.05).IL-10:PAO1组(231.52±54.48)pg/mL,PAO-JP2组(60.10±29.64)ps/mL,对照组(35.43±23.56)PS/mL,PAO1组表达水平高于JP2、对照组(P<0.05).TGF-β:PAO1组、JP2组、对照组水平分别为(121.05±7.98)PS/mL、(63.11±5.73)ps/mL、(36.02±8.94)Pg/mL,PAO1组与PAO-JP2、对照组比较均有统计学意义.Foxp3mRNA相对含量:PAO1组(0.80±0.044),PAO-JP2组(0.41±0.044),对照组(0.25±0.054),PAO1组较其他两组含量显著升高(P<0.05).HE染色可见,PAO1组肺组织大量淋巴细胞聚集、纤维增生明显,脓肿形成;PAO-JP2组炎症细胞浸润叫PAO1组明显减轻,对照组未见明显异常.结论 PA群体感应系统通过提高IL-10、TGF-β和Foxp3mRNA的表达水平,上调CD4+CD25+Treg细胞的数量及功能,在慢性肺部感染中发挥重要作用.     

CD4~+CD25~+调节性T细胞/Th17细胞失衡与婴幼儿脓毒症

目的 观察不同免疫状态下婴幼儿脓毒症CD4~+CD25~+Foxp3~(high)岫调节性T细胞(Tr)/Th17细胞的变化,探讨婴幼儿脓毒症适应性免疫紊乱可能的机制.方法 婴幼儿脓毒症48例,健康同龄儿童对照组26例.用流式细胞术榆测CD14~+单核细胞HLA-DR表达率,CD4~+CD25~+Foxp3~(high)Tr 比例及Th17细胞比例;用ELISA法检测细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β及IL-17A等浓度,计算IL-10/TNF-α比值;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测CD4~+T细胞Foxp3、ROR-γt mRNA表达及IL-17A mRNA表达.以CD14~+单核细胞HLA-DR表达＞或＜30%为阈值,将患儿分为免疫激活组(DR-H组)和免疫抑制组(DR-L组).结果 DR-L组IL-10/TNF-α比值明显高于DR-H组(P＜0.05)及对照组(P＜0.05).CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞比例及转录因子Foxp3基因表达DR-L组明显高于对照组及DR-H组(P＜O.05).Th17细胞比例、IL-17A血浓度、Th17细胞IL-17A基因表达及转录因子ROR-γt基因表达DR-H组及DR-L组均明显高于对照组(P＜0.05),两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).DR-H组和DR-L组Th17细胞主要分化调控因子IL-6、IL-1β血清浓度明显高于正常对照组(P＜0.05),两组问IL-6、IL-1β浓度差异无统计学意义(P＞0.05),DB-L组CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞主要调节因子TGF-β血浓度明显高于DR-H组及对照组(P＜0.05).结论 Th17持续过度活化可能是导致脓毒症前炎症细胞因子/趋化因子持续增高的原因之一;CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞/Th17细胞失衡可能参与脓毒症混合性拮抗反应综合征(MARS)的发生发展,婴幼儿脓毒症细胞因子微环境变化可能是导致CD4~+CD25~+Foxp3~(high) Tr细胞/Thl7细胞失衡的原因之一.     

慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+CD25~+Treg与CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞亚群的相关研究

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的含量和CD4+CD8+T淋巴细胞亚群分布,两者之间相关性及与HBV的相关性。方法:采用流式细胞术检测50例慢性乙型肝炎患者和20例健康对照者外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达及CD3/CD4/CD8 T淋巴细胞亚群,荧光定量PCR法检测HBV DNA含量。结果:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25highTreg明显高于健康对照组(P0.01),且随HBV DNA载量增加,患者外周血中CD4+CD25highTreg细胞的水平逐渐升高。慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞也相应增高,且与CD4+CD25highTreg细胞的变化成正相关(r=0.890,P0.001)。与健康对照组比较,患者组CD4+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值均降低,而CD3+T细胞和CD8+T细胞百分率差异无显著性(P0.05)。CD4+CD25highTreg细胞与HBV DNA取对数后成正相关(r=0.782,P0.001),与谷丙转氨酶(ALT)成正相关(r=0.432,P0.005);与CD3+、CD4+、CD8+T细胞水平及CD4+/CD8+比值均无相关性(P0.05)。CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+比值与HBV DNA载量之间亦无相关性(P0.05)。结论:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞增高,且与HBV的复制水平及ALT增高具有一致性,而T细胞亚群是否可作为监测CHB患者免疫状态的指标需进一步探讨。     

子宫内膜异位症患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的变化

观察子宫内膜异位症患者外周血单个核细胞CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的数量变化,初步探讨其意义。采用流式细胞术检测20例健康对照者(对照组)及46例子宫内膜异位症患者(疾病组临床r-AFS分期:Ⅰ～Ⅱ期26例,Ⅲ～Ⅳ期20例)外周血单个核细胞(PBMC)中CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞数目,并计算CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞占CD4~+T淋巴细胞的百分率;分析不同分期子宫内膜异位症患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的变化。结果显示,与健康对照组相比,疾病组PBMC中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T淋巴细胞的百分率及CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg绝对数均明显升高(P<0.01,P<0.05);疾病组中,Ⅲ～Ⅳ期的PBMC中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T淋巴细胞的百分比及CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg绝对值较Ⅰ～Ⅱ期均明显升高(P<0.01,P<0.05)。提示子宫内膜异位症患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞数目和比例增多,可能存在自身免疫调节功能的紊乱,且与病程发展紧密相关。     

不同原位肝移植模型大鼠的CD4~+CD25~+调节性T细胞数量变化的研究

目的建立稳定的大鼠原位肝移植模型,并检测大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)比例的变化。方法采用近交系成年雄性BN、LEW大鼠,改良"二袖套"法建立肝移植模型31例。术前随机分为3组:排斥组(LEW→BN,n=9),耐受组(BN→LEW,n=11),同基因组(BN→BN,n=11)。存活的受体分别于术后5 d、10 d、30 d取外周血,分离外周血中的单个核细胞,由流式细胞仪检测CD4+CD25+Treg比例。并于相应时间点每组随机各处死2只,取肝脏标本观察病理学变化。每组选取5例来观察生存期,存活>100 d时各处死2只,取肝脏标本。结果中位生存期:排斥组14 d,耐受组112 d,同基因组129 d。耐受组与同基因组术后未见明显排斥反应。术后7 d,排斥组肝脏病理Banff评分Ⅲ级。肝移植早期,排斥组和自发耐受组的外周血中CD4+CD25+Treg比例均增加,术后10 d耐受组CD4+CD25+Treg比例明显高于同基因组(P<0.01)。术后30 d,耐受组CD4+CD25+Treg比例仍维持在较高水平。结论 BN与LEW大鼠组合可建立稳定可靠的急性排斥模型与自发耐受模型。CD4+CD25+Treg可能参与自发免疫耐受的形成。     

MOG诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢及外周神经系统CD4~+ T及CD8~+ T调节性细胞变化

目的:观察实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢及外周CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25+ Treg),CD8+ CD28-调节性T细胞(CD8+ CD28- Treg)表达的变化情况,并探讨相关的细胞免疫学机制。方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为未使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MEVGWYR-SPFSRVVHLYRNGK)(MOG35-55)免疫的对照组和使用MOG35-55免疫诱导的EAE小鼠模型组,采用临床症状评分记录小鼠行为学变化、HE染色观察CNS炎症细胞浸润及病理改变,使用流式细胞术(FCM)检测小鼠中枢及外周CD8+ CD28- Treg,CD4+ CD25+ Treg细胞表达水平。结果:MOG35-55诱导的EAE模型组动物出现典型的EAE临床行为学及病理学表现,FCM检测EAE模型组小鼠脾细胞CD4+ CD25+ Treg较对照组升高但无统计学差异,CD8+ CD28- Treg表达水平明显低于对照组(P0.01),EAE模型组中枢有CD4+ CD25+ Treg,CD8+CD28-Treg淋巴细胞的浸润,且CD4+ CD25+ Treg,CD8+ CD28- Treg在中枢的表达均高于外周,对照组中枢神经系统未检测到淋巴细胞浸润。结论:CD4+ CD25+ Treg,CD8+ CD28- Treg均参与调控EAE的病理过程,CD4+ CD25+ Treg,CD8+ CD28- Treg在EAE小鼠中枢及外周分布及变化的不同,提示其进入中枢神经系统(CNS)并参与调节中枢局部炎症。     

免疫磁珠两步法分离小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞

体外分离CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)并进行初步鉴定.用磁性细胞分离器(MiniMACS)分离CD4+CD25+Treg细胞,流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析细胞纯度和Foxp3蛋白表达,体外检测细胞因子.MACS分离的CD4+CD25+Treg细胞纯度大于90%,细胞存活率大于93%,并且特异性表达Foxp3蛋白,体外能抑制CD4+CD25-Treg分泌IFN-γ,同时CD4+CD25+Treg能分泌抑制性细胞因子TGF-β1、IL-10.结果显示,通过MACS可分离高纯度、高活性的CD4+CD25+Treg细胞.     

特发性血小板减少性紫癜患者CD4~+ CD25~+ Treg细胞和TGF-β1的相关研究

目的:研究特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)及相关细胞因子转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平,探讨二者在ITP发病机制中的作用。方法:流式细胞术(FCM)检测31例ITP患者及25例健康志愿者外周血Treg细胞的数量,ELISA方法检测血清中TGF-β1的含量,并进行相关性分析。结果:ITP患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞数量显著低于正常对照组(P0.05),血清TGF-β1的含量也较正常对照组明显减低(P0.05),差异有统计学意义。但CD4+ CD25+调节性T细胞比例与TGF-β1的含量无相关性(P0.05)。结论:ITP患者CD4+ CD25+调节T细胞数量减少与ITP的细胞免疫失调有关,CD4+ CD25+调节性T细胞和TGF-β1在ITP中作用机制复杂,还需要进一步研究。