过表达HMGR催化结构域以优化酵母工程菌原人参二醇代谢途径的研究

目的 过表达3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)催化结构域提高酵母工程菌中原人参二醇的产量.方法 分别克隆酿酒酵母中编码3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶催化结构域的基因tHMG1、人参中达玛烯二醇-Ⅱ合酶基因ds和原人参二醇合酶基因cyp1、拟南芥中CYP450还原酶基因cyp-re,构建相应表达质粒,转化酿酒酵母INVSc1,并检测重组菌中原人参二醇产量.结果 重组菌INVSc1-DS-GFP/CYP1／CYP-Re和INVSc 1-DS-GFP/CYP1/CYP-Re/tHMG1中原人参二醇产量分别为3.04 mg·L-1和26.5 mg·L-1.结论 导入基因tHMG1,使原人参二醇产量提高了8.7倍,该结果为优化酵母工程菌中人参皂苷代谢途径奠定了基础.     

人参皂苷Rb_3的生物学活性研究进展

人参皂苷Rb_3存在于人参、西洋参和三七等五加科植物中,其具有广泛的生物学活性,本文从人参皂苷Rb_3的脑保护、内皮细胞保护、心血管保护、抗抑郁和抗糖尿病等方面进行综述,希望能为探索人参皂苷Rb_3潜在的药理作用提供帮助。     

三萜皂苷合成生物学元件的初步开发:三七鲨烯环氧酶编码基因克隆及表达模式分析

中药合成生物学是将合成生物学思路引入中药天然产物次生代谢途径研究的一门新兴学科,其发展初期的首要任务是进行元件的开发与标准化,建立标准化的合成生物学元件库。三七(Panax notoginseng)作为人参属重要的药用植物,具有较高的药用价值,其主要活性成分是三萜皂苷。鲨烯环氧酶(squalene epoxidase)被认为是三萜皂苷与植物甾醇次生代谢途径中的关键限速酶,是三萜皂苷合成生物学研究的重要元件之一。本研究克隆获得三七中两种类型的鲨烯环氧酶编码基因(PnSE1、PnSE2),对其进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法检测其在4年生三七不同组织部位的表达模式,以及受茉莉酸甲酯(MeJA)诱导处理后基因的表达量变化,为实现中药合成生物学元件挖掘与开发奠定基础。PnSE1基因与PnSE2基因预测编码蛋白分别包含537和545个氨基酸,序列相似性为79%,但N端(前70个氨基酸)序列不保守。PnSE1基因在根、茎、叶、花中均有表达,以花中表达丰度最高;PnSE2基因只在花中表达量显著,其余组织较弱。PnSE1基因响应MeJA诱导,诱导24 h后在叶中的表达量最大;相同诱导条件下,PnSE2基因未响应诱导,表达水平无显著变化。结果表明,PnSE1和PnSE2基因具有不同的表达模式,在三七次生代谢产物合成中起不同催化作用,推测PnSE1基因参与三萜皂苷合成途径,PnSE2基因则在甾醇合成途径中起催化作用。     

藏药珊瑚七十味丸对高脂血症模型大鼠的降脂作用及机制研究

目的研究藏药珊瑚七十味丸对高脂血症(HLP)模型大鼠的降脂作用,并初步探讨其作用机制。方法将60只SD大鼠按体质量随机分为正常组、模型组、辛伐他汀组(阳性对照,20 mg/kg)和珊瑚七十味丸低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg),每组10只。正常组大鼠饲喂常规饲料,其余各组大鼠饲喂高脂饲料建立HLP模型,连续喂养4周。各给药组大鼠在造模同时即开始灌胃相应药物,正常组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续4周。末次灌胃后,检测各组大鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,观察各组大鼠肝组织病理变化,测定各组大鼠肝组织中AMP活化蛋白激酶1(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、肝激酶B1(LKB1)、3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)蛋白的表达情况。结果低、中、高剂量珊瑚七十味丸均可显著降低HLP模型大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平以及肝组织中HMGCR蛋白表达水平(P<0.05),显著升高HLP模型大鼠血清中HDL-C水平及肝组织中AMPK磷酸化水平、LKB1蛋白表达水平(P<0.05),不同程度地改善HLP模型大鼠肝组织的病理变化。结论珊瑚七十味丸能降低HLP模型大鼠的血脂水平;其机制可能与抑制LKB1/AMPK信号通路的传导,从而调节脂代谢相关。     

羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂发展与构效特征

临床应用他汀类药疗效的研究应重视药物的构效关系 ,本文主要简述他汀类药的发展和药名 ,依据药物的来源和化学结构 ,论述构效关系。并对已上市他汀类药物的临床结果 ,加以介绍     

香樟3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(CcHMGRs)基因家族的克隆及表达分析

3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase, HMGR)是萜类甲羟戊酸途径(mevalonic acid pathway, MVA)上的第一个限速酶,是细胞质中萜类代谢途径中的重要调控位点。本研究以5种化学型的香樟(Cinnamomum camphora)作为实验材料,基于转录组数据,从香樟cDNA中克隆出2个HMGR基因,分别命名为CcHMGR1 (GenBank登录号:MN163055)和CcHMGR2 (GenBank登录号:MN163056)。基因包含开放阅读框(ORF)分别为1 689 bp和1 683 bp,编码562和560个氨基酸残基,生物信息学分析推测其分子质量为59.819 kDa和59.397 kDa,等电点(theoretical pI)为8.20和8.61,均不含信号肽,存在2个跨膜结构。结合蛋白质保守区以及进化树分析,证实该基因确为HMGR家族基因。利用实时荧光定量PCR检测, CcHMGR1和CcHMGR2在香樟5种化学型中的表达模式类似,均在油樟中的表达量要高于另外...     

人参皂苷生物合成相关糖基转移酶研究基本策略及进展

人参、西洋参和三七等传统中药材因其广泛且良好的药理活性一直倍受关注,而人参皂苷是其主要活性成分。糖基转移酶是催化人参皂苷生物合成最后一步的关键酶。人参皂苷苷元经过糖基转移酶的修饰,产生了复杂多样的人参皂苷,从而具有广泛的药理活性。目前人们已通过合成生物学技术实现了人参皂苷苷元和稀有人参皂苷compound K的合成。人参皂苷苷元的糖基化作为人参皂苷生物合成途径的最后一步,是整个合成途径中最重要的环节之一,近年来也取得了一些研究进展。本文介绍了人参皂苷生物合成途径中相关糖基转移酶研究的基本策略,并对相关进展进行了综述,为人参皂苷生物合成途径的深入解析及通过合成生物学途径获得人参皂苷提供理论参考。     

阿托伐他汀钙片溶出度研究

目的比较某国产阿托伐他汀钙片用不同溶出度试验仪进行体外溶出度试验测定结果的差异。方法用不同型号溶出度试验仪对同一生产厂家同一批号阿托伐他汀钙片进行体外溶出试验,考察溶出度测定结果。结果与结论样品溶出度测定数据受仪器影响明显,其他条件相同情况下,应用不同溶出度试验仪差异>10%。     

人参皂苷Rg3与Rh2的研究进展

人参是我国传统的名贵中草药材,人参皂苷是人参的主要有效成分。人参皂苷Rg3,Rh2具有抗疲劳、舒张血管、提高免疫力、抗肿瘤等药理作用。综述了人参皂苷Rg3,Rh2的药理作用及制备方法。     

蚯蚓冻干粉对高血脂小鼠羟甲基戊二酸单辅酶A还原酶基因的调节作用

以高脂饲料饲喂昆明种小鼠构建高血脂小鼠模型,灌胃给予高、中、低剂量(0.4、0.2和0.1 g/kg)蚯蚓冻干粉,每天1次,同时饲喂高脂饲料,共饲养10周.提取小鼠肝脏总RNA,应用反转录基因扩增(RT-PCR)技术检测羟甲基戊二酸单辅酶A还原酶(HMG-CoAR)信使核糖核酸(mRNA)水平.结果表明,试验组小鼠HMG-CoAR mRNA相对含量显著低于高脂饲料组小鼠,提示蚯蚓冻干粉能够降低高血脂小鼠血浆胆固醇水平,可能与下调肝HMG-CoAR mRNA表达有关.     

他汀类降脂药的抗炎作用

<正>他汀类药物,即3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A (HMA-CoA)还原酶抑制剂,可减少动脉粥样硬化的形成和心血管事件的发病率及死亡率。上述作用源自该类药物对胆固醇代谢的影响以及下调低密度脂蛋白的合成。目前越来越多的证据显示,除上述作用外,他汀类药物还有更广泛的作用,其中包括对炎症途径的影响,具有免疫调节活性,在许多炎症性疾病中表现出一定的治疗作用。     

人参皂苷Rg3抑制肺癌细胞增殖和侵袭的作用及机制

目的 探讨人参皂苷Rg3通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制肺癌细胞增殖与侵袭的机制。方法 体外培养人肺癌细胞(A549),分为对照组(正常培养),低剂量实验组(30μmol·L^-1人参皂苷Rg3),高剂量实验组(60μmol·L^-1人参皂苷Rg3)。用细胞计数试剂盒8(CCK-8)评估人参皂苷Rg3对肺癌细胞存活率的影响,用流式细胞术检测肺癌细胞经处理之后的凋亡率,用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测重要凋亡基因的表达,用Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力,同时检测细胞内的氧化应激状况,用蛋白质印迹法检测PI3K和Akt磷酸化的水平。结果 对照组和低、高剂量实验组细胞活力分别为(98.67±0.88)%、(82.67±2.40)%和(74.77±3.09)%,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)mRNA相对表达水平分别为0.96±0.04、0.87±0.02和0.71±0.01,caspase-3 mRNA相对表达水平分别为0.96±0.04、1.22±0.07和1.36±0.04,活性氧(ROS)水平分别为(99.70±3.45)%、(134.58±6.68)%和(145.72±8.96)%,细胞相对侵袭率分别为(95.33±2.72)%、(87.33±2.18)%和(78.00±1.73)%, p-Akt蛋白相对表达水平分别为1.08±0.11、 0.34±0.19和0.29±0.17,p-PI3K蛋白相对表达水平分别为1.09±0.09、 0.55±0.16和0.42±0.19。低、高剂量实验组上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论 人参皂苷Rg3对人肺癌细胞具有抵抗作用,可能与PI3K/Akt信号通路相关。     

人参皂苷Rg3与离子通道受体作用的研究进展

目的对人参皂苷Rg3(ginsenoside Rg3,G-Rg3)与离子通道受体作用进行全面总结。方法根据国内外最新有关文献,依据作用的离子通道受体不同进行分类介绍。结果G-Rg3可作用于离子通道受体,通过与特定氨基酸残基的作用,影响离子通道活性,进而影响某些离子的通透性。结论为G-Rg3的药理作用研究提供参考。     

人参皂苷元25-OH-PPD的修饰及结构研究

目的设计合成3β,12β,20,25-四羟基-达玛烷(25-OH-PPD)的衍生物,并确定其结构。方法以25-OH-PPD为原料,以DCC、DMAP为催化剂,在室温下与饱和脂肪酸进行酯化反应得到一系列不同位置取代的25-OH-PPD酯类衍生物,经IR、13C-NMR、HR-MS确证其结构。结果与结论设计并合成了8个未见文献报道的人参皂苷元25-OH-PPD衍生物。该工艺条件温和,易于操作,为原人参二醇型衍生物的构效关系研究奠定基础。     

3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂的构效关系研究进展

3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A（HMG CoA）还原酶抑制剂是治疗高胆固醇血症的有效药物。现综述该类药物的发展概况和作用机制，并从母环、连接链和侧链三部分总结其构效关系，为国内研发新的HMG CoA还原酶抑制剂提供参考。     

人参皂苷对人肺腺癌细胞转化生长因子β1表达的影响

目的 探讨人参皂苷对人肺腺癌A549细胞及其对转化生长因子β1( TGF-β1)表达的影响。方法 将人肺腺癌标准细胞株A549培养后完全随机分为人参皂苷组、对照组,采用四氮唑蓝法检测各组细胞增殖率;用酶联免疫吸附法测定各组细胞TGF-β1的表达水平,并分析TGF-β1的表达与A549细胞凋亡的相关性。结果 当人参皂苷浓度为0.1、1、10、100μmol/L时,A549细胞内TGF-β1表达水平逐渐降低,其吸光度(A)值分别为2.712±0.285、1.436±0.285、0.543±0.280、0.125±0.022,不同浓度的人参皂苷组间比较及其与对照组（A值为3.737±0.234）比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。当人参皂苷浓度为1、10、100 μmol/L时,A549细胞半数抑制浓度(IC50)分别为0.26±0.09、0.54±0.04和0.74±0.10,与阴性对照组(0.01±0.01)相比,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论 人参皂苷可以抑制肿瘤细胞TGF-β1的分泌,从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

人参皂苷Rg3羟丙基-β-环糊精包合物的制备和表征

目的考察人参皂苷Rg3羟丙基-β-环糊精包合物的制备工艺及其表征。方法比较研磨法和水溶液搅拌法制备人参皂苷Rg3羟丙基-β-环糊精包合物,以包合率为指标,采用L9(34)正交试验设计优化包合工艺条件,采用薄层色谱法、DSC差热分析、红外光谱法、X-射线衍射法等分析手段对包合物进行表征,测定包合物的体外溶出度。结果选择水溶液搅拌法制备包合物,最佳包合工艺为人参皂苷Rg3与羟丙基-β-环糊精的质量比1∶100,搅拌时间2 h,温度25℃,其包合率为86.11%,通过表征说明包合物已经形成,包合物的溶出速率明显提高。结论人参皂苷Rg3羟丙基-β-环糊精包合物制备工艺稳定可行,溶解性显著提高。     

不同基因多态性对他汀类药物影响的研究进展

他汀类药物是目前临床应用最广泛的降脂药物,为心血管疾病的一级、二级预防的基石。他汀类药物为羟基-甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂,可以显著降低血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、三酰甘油水平,同时可轻度升高高密度脂蛋白胆固醇水平。目前研究的参与他汀类药物代谢的酶、转运蛋白、受体等基因多态性对他汀类药物安全性、不良反应有重要影响。阐述遗传因素载脂蛋白E、SLCO1B1、ATP结合盒转运蛋白B1、ABCG2、CYP、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因等相关基因多态性对他汀类药物疗效和安全性的影响,为他汀类药物的个体化用药提供参考依据。     

爱维莫潘关键中间体的合成

目的研究爱维莫潘关键中间体2-[(S)-2-{[(3R,4R)-4-(3-羟基苯基)-3,4-二甲基哌啶基]甲基}-3-苯基丙酰氨基]乙酸乙酯的合成工艺。方法以(3R,4R)-3-(3,4-二甲基-4-哌啶基)苯酚为起始原料,经加成、缩合、水解、酰化得到目标产物。结果经4步合成了目标产物,总收率为27%,目标化合物结构经1H-NMR确证。结论本合成方法原料易得,反应条件温和,适合大规模制备。     

北京市71家基层医疗机构2010-2012年HMG-CoA还原酶抑制剂应用情况分析

目的：调查北京市71家基层医疗机构2010-2012年羟甲基戊二酸单酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶抑制剂的应用情况。方法：对北京市71家基层医疗机构在2010-2012年HMG-CoA还原酶抑制剂的应用情况进行统计,包括药品名称、生产厂家、医院归属地和级别。结果：各种HMG-CoA还原酶抑制剂的用量和用药金额均呈逐年上升的趋势。阿托伐他汀和辛伐他汀占据垄断地位,两者的用药金额占HMG-CoA还原酶抑制剂总用药金额的约90%份额。一级医院HMG-CoA还原酶抑制剂的院均用药量和用药金额均明显低于二级医院,郊区医院明显高于市区医院。结论：北京市基层医疗机构使用的HMG-CoA还原酶抑制剂以阿托伐他汀和辛伐他汀为主,外资企业所产药品的用药金额高于内资企业。