脊髓损伤后大鼠脊髓线粒体呼吸功能和游离Ca2+含量的变化

目的：探讨脊髓损伤后大鼠伤段脊髓线粒体呼吸功能和线粒体内游离Ca^2＋含量的变化.方法：48只SD大鼠,随机分为对照组（假手术组,n=24）和脊髓损伤组（SCI组,n=24）,每组又分为处理后6、12、24 h三时相组,每组8只,采用Allen＇s打击法造成大鼠脊髓损伤模型,在各时相提取伤段脊髓线粒体,用Clark氧电极法测定线粒体呼吸功能,根据线粒体呼吸耗氧量换算出呼吸Ⅲ态（R3）、呼吸Ⅳ态（R4）、呼吸控制率（RCR）、磷氧比值（P/O比值）;用Reers法测定线粒体内游离Ca^2＋浓度.结果：SCI组在伤后6、12、24 h R3、RCR和P/O显著低于对照组,R4和线粒体游离Ca^2＋显著高于对照组,有极显著统计学意义（P＜0.01）.结论：大鼠脊髓损伤后伤段脊髓线粒体呼吸功能明显下降,线粒体Ca^2＋内流明显增加.     

急性脊髓损伤后线粒体的功能变化

线粒体是对各种损伤最为敏感的细胞器之一;细胞活动所需绝大多数的能量都是由线粒体氧化磷酸化提供。外伤后线粒体功能的改变直接影响到神经细胞的功能和存活。因此,了解继发性脊髓损伤中线粒体的功能变化的分子机制,对于脊髓损伤的治疗和预后具有重要意义。文中从线粒体能量代谢、活性氧生成、钙超载等角度对线粒体损伤机制进行综述。     

亚低温对大鼠急性脊髓损伤后局部线粒体呼吸功能的影响

目的:探讨亚低温治疗对大鼠脊髓损伤后局部线粒体呼吸功能的影响。方法:54只SD大鼠,随机分组为对照组(假手术组)、脊髓损伤组(SCI组)和亚低温治疗组,每组又分为处理后6、12、24h三个时相。每组6只大鼠,采用Allen's打击法造成脊髓损伤模型,在各时相点提取损伤段脊髓线粒体,测定线粒体呼吸态(R3)、态(R4)、呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O)。结果:SCI组在脊髓损伤后6、12和24h线粒体R3、RCR和P/O显著低于对照组,R4显著高于对照组,差异有统计学意义;亚低温组脊髓损伤后6、12和24h线粒体R3、RCR和P/O高于SCI组,R4低于SCI组,差异有统计学意义;亚低温组R3、R4和RCR在6h和12h时相与对照组之间无明显差异,24h时相R3、RCR和P/O低于正常对照组,有显著差异。结论:脊髓损伤后局部线粒体呼吸功能明显受到影响,线粒体内膜通透性增加,线粒体氧化磷酸化的偶联程度明显受到抑制。早期使用亚低温治疗可明显改善线粒体的呼吸功能,保护伤段脊髓线粒体的稳定性。     

急性脊髓损伤后线粒体形态结构与线粒体膜电位的变化

目的 探讨大鼠急性脊髓损伤后线粒体形态结构和线粒体膜电位的变化.方法 SD大鼠36只,随机分为对照组（假手术组）和脊髓损伤组（SCI组）,每组又分为处理后4h、8h、16h组（各6只）.SCI组采用Allen＆#39;s打击法,制作大鼠脊髓损伤模型,对照组只暴露脊髓,不打击.透射电镜观察线粒体形态结构的改变;在各时相提取伤段脊髓组织线粒体,JC-1法测定线粒体膜电位的变化.结果 SCI组脊髓组织伤后4h线粒体体积略增大,嵴排列稍紊乱;8h线粒体体积增大,嵴稍肿胀;16h线粒体结构不清,嵴断裂、排列紊乱,部分线粒体膜破裂,有空泡化.脊髓损伤后4h,线粒体膜电位开始明显下降（P＜0.01）,随着时间的延长,线粒体膜电位处于下降趋势.结论 大鼠急性脊髓损伤后线粒体的形态结构发生明显改变,伤段脊髓线粒体膜电位明显下降,出现功能障碍.     

术后应用甲基强的松龙治疗脊髓损伤

大剂量甲基强的松龙冲击疗法治疗急性脊髓损伤的效果,从基础实验到临床研究都得到证实。我院从1995年2月～1999年2月应用甲基强的松龙于术前及术后治疗脊髓损伤,收到较好效果。本文分析脊髓减压术后甲基强的松龙减轻脊髓继发性损伤,促进脊髓神经功能恢复的意义。1　资料与方法1.1　病例选择　本组32例,男27例,女5例;年龄18～45岁;均为胸腰段骨折导致脊髓损伤(不包括横断),受伤原因以车祸和高处坠落为多;均为伤后8h内入院患者。1.2　分组及给药方法　随机分成两组:实验组16例,入院即刻15min内滴注甲基强的松龙(比利时,UPJOHN公司产品)30mg…     

线粒体分裂抑制剂对大鼠急性脊髓损伤后线粒体形态与功能的影响

目的旨在检测选择性线粒体分裂抑制剂-1(Mdivi-1)预处理对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后线粒体形态,线粒体膜电位(MMP)及线粒体ATP含量的影响。方法成年雌性SD大鼠72只,体重250~300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=24):假手术组(Sham组)、单纯脊髓损伤组(SCI组)和Mdivi-1预处理组(1.20 mg/kg,Mdivi-1组),每组24只。SCI组和Mdivi-1组大鼠采用Allen’s方法制备ASCI模型,Mdivi-1组和SCI组大鼠在脊髓打击之前15 min经尾静脉分别给予Mdivi-1或等容量二甲基亚砜(DMSO)。每组大鼠再分为两个亚组,分别于脊髓暴露或者打击后的3和12 h处死,取出脊髓T9-11,采用透射电子显微镜检测线粒体形态,用荧光显微镜和荧光分光光度计检测MMP变化,用荧光分光度计检测线粒体ATP含量的变化。结果与Sham组相比,SCI 3 h组时,线粒体数目明显减少(P<0.01),截面积明显增大(P<0.01),但MMP和线粒体ATP含量无明显变化;SCI 12 h组时,线粒体数目明显增多(P<0.01),截面积明显减小(P<0.01),但MMP和线粒体ATP含量明显减低(P<0.01)。与SCI组相比,Mdivi-1 3 h组时,线粒体数目、截面积及MMP和线粒体ATP含量无明显变化;而Mdivi-1 12 h组时,线粒体数目明显减少(P<0.01),截面积明显增大(P<0.01),MMP和线粒体ATP含量明显升高(P<0.01)。结论选择性线粒体分裂抑制剂-Mdivi-1能有效抑制ASCI后线粒体分裂和MMP降低,增加线粒体中ATP的合成,从而保护了线粒体功能。     

甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤后c-fos基因表达的影响

探讨甲基强的松龙对脊髓损伤后ｃ－ｆｏｓ基因表达的影响。方法采用Ａｌｌｅｎ’ｓ法制成大鼠脊髓损伤模型,动物随机分三组：假手术组、手术组、术后给药组。分３个时间点（术后１小时、２小时,４小时）进行ｃ－ｆｏｓ免疫细胞化学法染色。结论脊髓损伤后脊髓ｃ－ｆｏｓ基因表达显著增多,甲基强的松龙能抑制损伤后ｃ－ｆｏｓａ基因表达。     

大剂量甲基强的松龙治疗急性脊髓损伤的临床研究

目的：观察并比较大剂量甲基强的松龙（Ⅷ）冲击疗法及常规疗法治疗急性脊髓损伤的疗效。方法：对13例急性脊髓损伤患者采用早期大剂量甲基强的松龙冲击治疗,观察神经功能恢复情况,并和此前或同期未使用该疗法而使用传统常规疗法的16例患者进行比较。结果：采用大剂量MP冲击治疗的急性脊髓损伤患者,其神经功能恢复速度和程度均优于对照组。结论：早期大剂量MP冲击治疗急性脊髓损伤对于防止脊髓继发性损伤发生、发展及促进患者神经功能的改善与恢复具有非常重要而积极的意义。     

甲强龙对大鼠急性脊髓损伤后血中丙二醛的影响

目的 探讨大剂量甲基强的松龙(methylprednisolone,MP)对急性脊髓损伤(acute spinal cord injury,ASCI)后大鼠血清中丙二醛(Malonic Dialdehyde,MDA)的影响.方法该试验于2015年7月-2016年8月进行.90只雄性SD大鼠,随机分成A,B,C 3组,每组30只.A组单纯全椎板切除,不损伤脊髓;B,C组采用Allen's法制作T10脊髓损伤模型,C组首计量以30 mg/kg甲基强的松龙尾静脉注射,余计量以5.4 mg/(kg·h),每4 h静脉给药1次,24 h给完,A、B组以生理盐水尾静脉注射,计量同C组.术后24 h,48 h对3组大鼠后肢运动功能行BBB评分;损伤脊髓病理观察.应用ELISA方法检测各组中血清MDA含量.结果BBB评分A组中24 h与48 h亚组分别为(19.60±0.97),(19.90±0.74);B组中24 h与48 h亚组分别为(0.80±0.63),(1.00±0.94);C组中24 h与48 h亚组分别为(2.40±1.07),(2.60±0.97).经比较C组与B组,在运动功能恢复上差异有统计学意义(P<0.01),C组明显优于B组.血清MD含量变化不同时间点血清中丙二醛含量浓度(ng/mL),A组中24 h与48 h亚组分别为(2.45±0.23),(2.46±0.26);B组中24 h与48 h亚组分别为(6.25±0.59),(6.74±0.31);C组中24 h与48 h亚组分别为(4.53±0.43),(4.44±0.50).B组血清中MDA含量较A和C组明显增高(P<0.01),C组血清中MDA含量较A组明显增高(P<0.05).C组大鼠在损伤后24 h,48 h后BBB评分高于B组,差异有统计学意义(P<0.01).B,C组血清中的MDA浓度较A组均明显升高,而C组血清的MDA浓度显著低于B组,差异有统计学意义(P<0.01).结论大鼠急性脊髓损伤后血清中MDA显著升高,早期应用大剂量MP后血清MDA明细降低,提示早期大剂量的MP治疗对脊髓急性损伤具有明显的保护作用.     

甲基强的松龙对脊髓损伤后脊髓病理生理变化的影响

目的探讨脊髓受压及减压后,甲基强的松龙对脊髓灰质血流量,体感诱发电位（SEP）,组织学变化,运动功能的影响。方法 36只犬随机分为2组,每组18只。实验组：甲基强的松龙（30mg/kg）以5.4mg/（kg.h）用静脉泵静脉注射。对照组应用0.9%氯化钠注射液以同样方式静脉注射。两组注射时间均为SEP消失后5min。均持续90min后减压,期间检测SEP及脊髓灰质血流量,减压后3h重复检测,并进行改良Tarlov评分。减压后28d通过病理组织学分析确定损伤范围。结果在持续压迫期间实验组7只犬出现了SEP,对照组无一出现。减压后实验组对照组均有3只犬出现SEP。两组犬中出现SEP的脊髓灰质血流量明显高于没有出现SEP的（P〈0.05）。实验组犬的脊髓灰质血流量在减压后5min恢复到基线水平,对照组始终未恢复到基线水平。实验组脊髓灰质血流量明显高于对照组（P〈0.05）。实验组动物后肢的运动功能可较快恢复,对照组不能恢复。实验组脊髓损伤范围与对照组具有显著性差异,病理改变与SEP及脊髓血流量具有相关性,与运动功能的恢复具有相关性。结论甲基强的松龙在神经功能保护及恢复方面提供了显著持续的作用,可能增加了脊髓局部的血流量。     

甲基强的松龙与尼莫地平联合治疗脊髓损伤的实验研究

目的通过建立脊髓损伤动物模型,探讨甲基强的松龙(MP)、尼莫地平联合用药与单独用药对脊髓损伤的疗效差别.方法参照动脉瘤夹压迫法制作SD大鼠T10段脊髓损伤模型,并随机分为4组,分别予MP、尼莫地平、两药联合应用治疗(3组统称为治疗组)及不予治疗(对照组).于伤后1、2、3、4周末行神经功能评分及斜板试验,伤后24h及2、3、4周末行伤段脊髓HE染色及银染,并行图像分析,伤后3周行皮层诱发电位(CSEP)及脊髓诱发电位(SCEP)检查.伤后4周行L1段脊髓5-HT免疫组化染色.结果伤后3周神经功能评分治疗组较对照组显著增高(P＜0.01);伤后2周斜板最大角度治疗组较对照组显著增高(P＜0.01);伤后3、4周残留神经组织百分率治疗组较对照组显著增高(P＜0.01),联合治疗组又较MP组及尼莫地平组为高(P＜0.01);各组CSEP均无恢复,SCEP恢复率各治疗组较对照组高(均P＜0.01);5-HT免疫组化染色治疗组表达明显,而对照组不明显.结论脊髓损伤后早期应用MP及尼莫地平治疗均有效,两者合用未显示出明显的协同作用.     

肾上腺髓质素在大鼠急性脊髓损伤中的表达及其意义

目的 观察肾上腺髓质素(AM)在大鼠损伤脊髓中的表达及甲基强的松龙(MP)干预对AM表达的影响,并探讨脊髓损伤的保护作用机制.方法 Allen's WD法制成大鼠急性脊髓损伤模型.免疫组化观察脊髓损伤后AM表达的变化;HE染色观察脊髓损伤情况.观察MP干预对脊髓损伤后AM表达、神经功能和组织学的影响.设假手术组、脊髓损伤非MP干预组(非干预组)作为对照.结果 免疫组化各组中均有AM的表达,其中假手术组AM持续低表达;MP组及非干预组AM表达增高,8h均达峰值,以后渐低,但伤后3d仍高于假手术组(P＜0.05);MP组AM表达于伤后8 h、1 d、2 d、3 d高于非干预组(P＜0.05),3组间在伤后2 h、6d时差异无显著性(P＞0.05).形态学显示假手术组无明显异常,MP组病理变化轻于非干预组.假手术组神经功能评分均高于非干预组和MP组(P＜0.01),MP组伤后3 d,6 d的神经功能评分高于非干预组(P＜0.05).结论 AM表达增高可能是脊髓损伤自身保护机制之一.通过药物上调AM的表达可起到保护脊髓的作用,这为AM治疗脊髓损伤的临床应用提供了实验依据.     

甲基强的松龙对大鼠损伤脊髓BDNF、NMDA受体表达及神经行为学的影响

目的研究甲基强的松龙(MP)对脊髓损伤大鼠神经行为学、脑源性神经营养因子(BDNF)和N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的影响。方法建立脊髓损伤(SCI)大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、SCI组和MP治疗组,每组16只。MP治疗组在SCI术后8h内肌注50mg/kg MP,此后肌注量每天减少10mg/kg,1次/d,共5d。各组取8只大鼠在术后1d、7d、28d行后肢运动功能BBB评分,并于术后28d用免疫组织化学染色观察各组BDNF在脊髓的分布、阳性细胞定位及数量变化;术后13d用[3 H]MK-801放射性配基测定各组另8只大鼠脊髓中NMDA受体亲和力(Kd)和最大结合容量(Bmax)。结果 SCI后MP治疗组中BDNF阳性细胞数较SCI组增加(P<0.05),但亚细胞定位仍分布在细胞浆,且BBB评分亦较SCI组高;NMDA受体Kd高于SCI组,Bmax较SCI组低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MP能改善脊髓损伤大鼠后肢功能,增加BDNF含量和降低NMDA受体表达。     

急性脊髓损伤后神经细胞凋亡及其意义

目的：研究急性脊髓损伤后神经细胞凋亡的分布特点及其意义。方法：Wistar雌性大白鼠54只，使用改良Allen法制作急性脊髓损伤模型，分别于术后1、4、8、24、72h及7、14、21天处死取材。应用苏木精-伊红染色及凋亡细胞原位末端标记(TUNEL)法对脊髓组织进行标记。结果：损伤后4h，在损伤段及邻近段可见末端标记的阳性神经细胞，损伤段灰质中阳性细胞数24h达高峰，白质中阳性胶质细胞数量72h达高峰。相邻节段阳性细胞数量在72h达高峰。灰质中神经元及胶质细胞均有阳性表达，但以胶质细胞为主。结论：脊髓损伤后神经细胞凋亡是继发损伤期的重要病理变化，并有其时相和空间分布特点。     

TAT-PEG-磁性纳米脂质体跨脊髓损伤大鼠血脊髓屏障的观察

目的 探讨TAT-PEG-磁性纳米脂质体作为一种药物载体通过尾静脉注入跨越大鼠血脊髓屏障(BSCB)并在脊髓损伤局部聚集的情况.方法 通过反向蒸发法制备新型磁性纳米脂质体,通过表面功能基团连接TAT、PEG而形成TAT-PEG-磁性纳米脂质体,使其兼备跨膜功能、长循环功能及核磁活体示踪功能;36只成年Wistar大鼠以Impactor Model-Ⅱ法建立T10急性脊髓损伤模型,随机分为3组,Ⅰ组:对照组,Ⅱ组:PEG-多功能脂质体组,Ⅲ组:TAT-PEG-多功能脂质体组,各组均12只.将制备出的TAT-PEG-多功能脂质体,通过尾静脉注入Ⅲ组大鼠脊髓损伤模型体内,将PEG-多功能脂质体按同样剂量尾静脉注入Ⅱ组大鼠体内,Ⅰ组尾静脉注入等量生理盐水,通过核磁共振(MRI)动态观察TAT-PEG-多功能脂质体在脊髓损伤局部的靶向聚集与扩散情况、通过普鲁士蓝染色、电镜观察、火焰原子吸收分光光度法检测,分析其在脊髓损伤局部的聚集情况.结果 TAT-PEG-磁性纳米脂质体可以穿过BSCB聚集在脊髓损伤局部,MRI动态观察显示,这种药物载体逐渐在损伤局部浓集,主要呈现T2WI低信号.普鲁士蓝染色观察到聚集在损伤局部组织的蓝染铁颗粒,电镜进一步观察到脊髓组织神经细胞内聚集的铁颗粒,火焰原子吸收分光光度法分析显示Ⅲ组脊髓损伤局部铁元素含量相对升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TAT-PEG-磁性纳米脂质体作为一种新型药物载体,通过静脉途径注入体内,可以跨越BSCB聚集在脊髓损伤局部,并能将其包裹的物质释放入损伤局部的神经细胞内,可作为脊髓损伤的治疗的新思路.

Abstract：

Objective To evaluate the ability of a kind of novel magnetic liposomes modified with polyethylene glycol(PEG) and transactivating-transduction protein (TAT) to cross the blood spinal cord barrier (BSCB) so as to demonstrate whether or not they can accumulate at the lesions of injured spinal cord. Methods The novel liposomes were made through reverse-phase evaporation method modified with polyethylene glycol (PEG) and transactivating-transduction protein (TAT) with an iron core. Thirty-six Wistar rats subject to spinal cord injury (SCI) at T10 were randomly divided into three groups (Groups Ⅰ ,Ⅱ and Ⅲ ). The rats of Group Ⅲ were injected with TAT-PEG loaded magnetic liposomes (4.55 mg/kg).The rats of Group Ⅱ received an injection of the equivalent PEG loaded magnetic liposomes while those of control group ( Group Ⅰ ) the equivalent normal saline. The accumulation of liposomes was observed by MRI (magnetic resonance imaging), Prussian blue staining, electron microscope and flame atomic absorption spectrophotometer. Results This kind of TAT-PEG loaded magnetic liposomes could croas the BSCB and enter into the cells around the injured tissue. A low signal of T2WI on MRI could also be found in Group Ⅲ.The results of flame atomic absorption spectrophotometer showed that the iron content accumulated around the lesion site in Group Ⅲ was obviously higher than the other two groups (P＜0.05). Conclusion The TATPEG loaded magnetic liposomes may be employed as one kind of novel drug carrier to cross the BSCB and accumulate at tissue cells of spinal cord. It is likely to become a new therapy for SCL     

挤压性脊髓损伤大鼠模型的建立

目的:建立一种简便易行的挤压性脊髓损伤动物模型。方法:将大鼠随机分为3个实验组和1个对照组,3个实验组采用改良动脉夹置于椎管壁和硬脊膜之间横行压迫脊髓,分别持续5、15及30 s,对照组只暴露脊髓后缝合。测定各组手术损伤后即刻、7、14 d脊髓运动诱发电位(MEP)并进行改良Tarlov评分。结果:3个实验组手术损伤后MEP N1波潜伏期均明显延长,主波振幅显著降低或消失;改良Tarlov评分亦显著降低,随饲养时间延长MEP和改良Tarlov评分有不同程度恢复。结论:挤压5、15、30 s可分别复制出轻、中、重度脊髓损伤大鼠模型,此造模方法无需特殊实验仪器,简便易行,可重复性强,具一定推广价值。     

庆大霉素对截瘫大鼠肠道细菌移位影响的实验研究

目的探讨庆大霉素灌胃和肌注两种不同给药方式对脊髓损伤并发截瘫大鼠肠道细菌移位的影响。方法建立大鼠脊髓损伤性截瘫模型,以庆大霉素灌胃治疗和肌注治疗两组大鼠为实验组,以脊髓损伤生理盐水灌胃和肌注两组大鼠为相应对照组。采集动物下腔静脉血进行内毒素定量检测和细菌培养,采集肝、脾、肠系膜淋巴结、肠内容物作细菌培养并进行菌种鉴定。取实验组和对照组各动物的肝、脾、肠系膜淋巴结、空肠、回肠进行病理切片及染色检查。结果庆大霉素灌胃组内毒素低于其他三组,血细菌培养仅生理盐水灌胃组阳性率高,脾细菌培养仅生理盐水肌注组阳性率高;肠系膜淋巴结细菌培养、庆大霉素灌胃组阳性率低,而生理盐水灌胃组阳性率高。结论本研究提示在预防及治疗脊髓损伤性截瘫后并发细菌／内毒素时应以经胃肠道途径给药为主。     

人参皂甙对大鼠急性脊髓损伤的保护作用及其机制

目的 探讨人参皂甙（Ginsenodides,Gs）对急性脊髓损伤的保护作用及其机制。方法采用改良Allen’s重物打击法制作急性脊髓损伤模型。大鼠随机分为对照组、损伤组和Gs治疗组。每组36只,分别于术后6h、12h、1d、3d、7d、14d完整取大鼠Tq脊髓段。斜板实验和BBB行为学评分评价大鼠脊髓功能的恢复情况;TUNEL法标记脊髓组织凋亡细胞;Westernblot方法检测B细胞淋巴瘤／白血病基因-2（Bcl-2）和Bcl伴随蛋白x（Bax）蛋白表达;RT—PCR方法检测半胱氨酸基天冬氨酸-特异性蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达。结果损伤组和Gs组大鼠术后14d内脊髓功能均有不同程度恢复,Gs组恢复优于损伤组（P〈0．05或P〈0．01）;损伤组大鼠脊髓TUNEL标记的阳性细胞数于术后3d达高峰,Gs组于相应各时间点均低于损伤组（P〈0．01）;术后各时间点Gs组大鼠脊髓Bcl-2蛋白表达高于损伤组（P〈0．01）,术后12h、1d、3d、7d、14dGs组大鼠脊髓Bax蛋白表达均低于损伤组（P〈0．05或P〈0．01）;术后各时间点Gs组大鼠脊髓caspase-3mRNA表达低于损伤组（P〈0．01）。结论通过提高Bcl-2／Bax比值并抑制caspase-3mRNA表达减少脊髓损伤后神经元凋亡是Gs对脊髓损伤后具有保护作用的可能机制之一。     

脊髓损伤后神经源性膀胱功能的康复护理

目的:探讨康复护理对神经源性膀胱功能重建的疗效。方法:采用综合性膀胱功能锻炼方法治疗神经源性膀胱排尿功能障碍患者30例,记录患者平均排尿次数、最大排尿量、残余尿量、平均膀胱容量、尿中白细胞数和清洁尿培养细菌数来评价疗效。结果:30例患者接受膀胱功能锻炼后平均排尿次数明显减少、最大排尿量增加、残尿量减少、平均膀胱容量减小、尿中白细胞数及清洁尿培养细菌数降低,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论:综合性应用膀胱功能锻炼可显著改善神经源性膀胱的功能。