亚低温对大鼠急性脊髓损伤后局部线粒体呼吸功能的影响

目的:探讨亚低温治疗对大鼠脊髓损伤后局部线粒体呼吸功能的影响。方法:54只SD大鼠,随机分组为对照组(假手术组)、脊髓损伤组(SCI组)和亚低温治疗组,每组又分为处理后6、12、24h三个时相。每组6只大鼠,采用Allen's打击法造成脊髓损伤模型,在各时相点提取损伤段脊髓线粒体,测定线粒体呼吸态(R3)、态(R4)、呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O)。结果:SCI组在脊髓损伤后6、12和24h线粒体R3、RCR和P/O显著低于对照组,R4显著高于对照组,差异有统计学意义;亚低温组脊髓损伤后6、12和24h线粒体R3、RCR和P/O高于SCI组,R4低于SCI组,差异有统计学意义;亚低温组R3、R4和RCR在6h和12h时相与对照组之间无明显差异,24h时相R3、RCR和P/O低于正常对照组,有显著差异。结论:脊髓损伤后局部线粒体呼吸功能明显受到影响,线粒体内膜通透性增加,线粒体氧化磷酸化的偶联程度明显受到抑制。早期使用亚低温治疗可明显改善线粒体的呼吸功能,保护伤段脊髓线粒体的稳定性。     

脊髓损伤后大鼠脊髓线粒体呼吸功能和游离Ca2+含量的变化

目的：探讨脊髓损伤后大鼠伤段脊髓线粒体呼吸功能和线粒体内游离Ca^2＋含量的变化.方法：48只SD大鼠,随机分为对照组（假手术组,n=24）和脊髓损伤组（SCI组,n=24）,每组又分为处理后6、12、24 h三时相组,每组8只,采用Allen＇s打击法造成大鼠脊髓损伤模型,在各时相提取伤段脊髓线粒体,用Clark氧电极法测定线粒体呼吸功能,根据线粒体呼吸耗氧量换算出呼吸Ⅲ态（R3）、呼吸Ⅳ态（R4）、呼吸控制率（RCR）、磷氧比值（P/O比值）;用Reers法测定线粒体内游离Ca^2＋浓度.结果：SCI组在伤后6、12、24 h R3、RCR和P/O显著低于对照组,R4和线粒体游离Ca^2＋显著高于对照组,有极显著统计学意义（P＜0.01）.结论：大鼠脊髓损伤后伤段脊髓线粒体呼吸功能明显下降,线粒体Ca^2＋内流明显增加.     

C3c、CD59在大鼠脊髓损伤组织中的表达及甲基强的松龙的干预作用

目的:探讨C3c、CD59在大鼠脊髓损伤组织的表达,并观察甲基强的松龙(MP)的干预作用.方法:采用改良Allen重物打击法制成SD大鼠急性脊髓损伤模型,观察MP组与生理盐水(NS)组在伤后12 h,1,3,5,7 d时间点损伤组织C3c、CD59阳性反应物的表达部位及时程,并比较两组间差异.结果:MP组与NS组脊髓损伤组织中存在C3c、CD59的阳性表达.MP组在伤后各个时间点C3c阳性表达均明显轻于NS组,有显著性差异(P＜0.01);MP组在伤后12 h(P＜0.01)、1 d(P＜0.05)、3 d(P＜0.05)时间点CD59的表达明显轻于NS组,伤后5 d,7 d时间点两组间无明显差异.结论:急性脊髓损伤组织中存在C3c、CD59的动态阳性表达,甲基强的松龙可通过抑制补体系统激活机制减轻继发性脊髓损伤.     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤组织中肾上腺髓质素表达的影响

目的:观察甲基强的松龙(MP)对大鼠脊髓损伤(SCI)组织中肾上腺髓质素(AM)表达的干预作用.方法:SD大鼠108只随机分为假手术组、MP干预组(MP组)和脊髓损伤组(SCI组),每组36只.假手术组只切除椎板不损伤脊髓,MP组和SCI组采用Allen WD法制作大鼠急性脊髓损伤模型,并于术后1 h经尾静脉分别给予50mg/kg MP和等量生理盐水.于术后2 h、8 h、1 d、2 d、3 d、6 d取骨髓组织(每个时点6只大鼠),HE染色观察脊髓损伤情况,免疫组化染色观察AM的表达,并于术后1 d、3 d、6 d行运动功能评定.结果:HE染色,假手术组各时间点无明显异常,MP组病理变化轻于SCI组.免疫组化染色,假手术组中AM低表达,SCI组AM表达增高并于术后8 h达峰值,以后逐渐降低(P＜0.01),MP组AM的表达在术后8 h、1 d、2 d、3 d均高于SCI组,差异有统计学意义(P＜0.05).运动功能评分:假手术组1 d、3 d、6 d均高于MP、SCI组,MP组在术后3 d、6 d高于SCI组,P均＜0.01.结论:急性脊髓损伤后AM表达代偿性增高并存在动态变化,MP干预可上调AM的表达从而减轻脊髓的继发性损伤.     

C-jun,HSP70在大鼠脊髓损伤组织中的表达及甲基强的松龙的干预作用

目的:探讨C-jun, HSP70在大鼠脊髓损伤组织中的表达,并观察甲基强的松龙(MP)的干预作用. 方法:采用Allen's打击法建立急性脊髓损伤(ASCI)模型,观察MP组和NS组在伤后1, 3, 6 h, 1, 2, 3 d时间点组织中C-jun, HSP70阳性反应物的表达. 结果:MP组与NS组脊髓损伤组织中存在C-jun, HSP70的阳性表达. ASCI后C-jun表达增加,3 h最为显著,MP组在伤后1, 3, 6 h时间点C-jun的表达明显少于NS组(P＜0.05). ASCI后HSP70表达增加,1 d最为显著,MP组在伤后6 h, 1, 2 d时间点HSP70的表达明显多于NS组(P＜0.05). C-jun, HSP70在对照组有少量表达. 结论:急性脊髓损伤组织中存在C-jun, HSP70的动态阳性表达,MP可以抑制损伤性因素(C-jun蛋白)的表达,促进保护性因素(HSP70蛋白)的表达,从而减轻继发性脊髓损伤.     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的 观察大剂量甲基强的松龙（methylprednisolone,MP）对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后神经细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响.方法 72只健康雌性Wistar大鼠随机分为创伤对照组及MP治疗组,各36只.以Allen′s法制作大鼠SCI模型.MP的给药方法为术后30 min内经鼠尾静脉给予MP 30 mg/kg;创伤对照组给予等容积生理盐水.术后1 h、4 h、12 h、24 h、3 天、7 天处死动物,取出脊髓组织,TUNEL检测细胞凋亡,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Bcl-2、Bax mRNA.结果 SCI 24 h时,脊髓组织细胞凋亡达高峰,然后逐渐下降,给予MP治疗后,与创伤对照组比较凋亡指数明显降低（P＜0.05或P＜0.01）.Bcl-2、Bax mRNA结果显示,在SCI 4 h后各时间点MP组大鼠Bcl-2/Bax比值高于创伤对照组,24 h时更明显（P＜0.05或P＜0.01）.结论 细胞凋亡是SCI早期主要的生物学事件;细胞凋亡的调控基因家族Bcl-2/Bax通过调节细胞凋亡参与SCI的发生发展;MP可抑制大鼠SCI细胞的凋亡,从而实现对SCI的影响.     

大剂量维生素C治疗大鼠急性脊髓损伤初步研究

目的　研究大剂量 Vitam in C对大鼠急性脊髓损伤 (SCI)疗效并与甲基强的松龙 (MP)相比较。方法SD大鼠 4 8只随机分为 A组 (SCI+MP) ,B组 (SCI+Vitam in C) ,C组〔 SCI+生理盐水 (NS)〕,Allen's模型 (7g× 4cm )致大鼠 T1 1 急性 SCI;伤后 0 .5 h A组、B组分别腹腔注射 MP 30 m g/ kg、Vitam in C 2 0 0 mg/ kg,C组腹腔注射等量 NS。观察伤后 4 8h脊髓 HE染色 +尼氏染色、含水量及伤后 2周斜板实验 +Gale评分。结果　 A、B组伤后 4 8h脊髓出血坏死程度及含水量明显轻于创伤组 ,神经元残存 Olsiwski氏小体数量及伤后 2周斜板实验 +Gale评分也明显高于 C组 (P<0 .0 5 ) ,而 A、B组间差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论　大剂量 Vitamin C早期使用对大鼠急性脊髓损伤有治疗作用 ,但效果不优于大剂量 MP。     

MP与GM1对脊髓损伤后神经元凋亡及bcl-2基因的影响

目的:探讨甲基强的松龙(MP)与神经节苷脂(GM1)对脊髓损伤后脊髓神经元凋亡和bcl-2基因的影响及保护机制。方法:将85只同龄Wistar大鼠,采用Allens的weight dropping(WD)法挫伤大鼠T11节段脊髓,于术后即刻、15 min,4 h、8 h、12 h、24 h、72 h经蛛网膜下腔导管各注入MP与GM1,并与NaCl溶液组和正常对照组进行比较。结果:正常组脊髓前角中未发现凋亡细胞,NS组于伤后4 h始出现凋亡神经元。MP与GM1组与NS组相比较,凋亡神经元明显减少(P<0.01)。bcl-2基因在正常脊髓组织中表达很弱,在NS组中表达随时间不同,MP与GM1组bcl-2基因表达较NS组明显增加(P<0.01)。结论:脊髓损伤后脊髓神经元凋亡增多和bcl-2基因表达显著增多,MP与GM1能抑制脊髓损伤后脊髓神经元凋亡和上调bcl-2基因表达,从而保护损伤的神经组织。     

大剂量甲基强的松龙联合MK-801治疗大鼠急性脊髓损伤的实验研究

目的观察大剂量甲基强的松龙（MP）联合MK-801（地卓西平马来酸盐）对大鼠急性脊髓损伤的治疗效果。方法采用Allen的重物坠落法建立大鼠急性脊髓损伤模型,将72只致伤大鼠一次性随机分为4组,每组18只大鼠（其中每组又包括24h、72h、15d三个亚组,每个亚组6只大鼠）。对照组伤后0．5h腹腔注射5mL生理盐水;MP组伤后0．5h腹腔注射甲基强的松龙30mg／kg体重;MK-801组伤后0．5h腹腔注射2．5％MK-801（地卓西平马来酸盐）5mg／kg体重;联合组伤后0．5h腹腔注射甲基强的松龙和MK-801（剂量、浓度同前）。分别在伤后24h、72h、15d处死动物,观察受损部位脊髓的病理形态和细胞凋亡,其中15d组分别于第1、3、5、7、10、15天做Gales评分和斜板试验。结果甲基强的松龙、MK-801及联合组治疗大鼠急性脊髓损伤,在Gales评分、斜板试验及病理形态上、细胞凋亡检测与对照组相比都有很大提高,但三个治疗组在上述方面却处于同一水平。结论甲基强的松龙、MK-801及两药联合对大鼠急性脊髓损伤的治疗作用在目前的实验条件下无明显差异。     

甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤组织C9和CD59表达的影响

目的: 探讨甲基强的松龙(MP)对大鼠急性脊髓损伤组织C9,CD59表达的影响.方法: 采用改良Allen重物打击法制成SD大鼠脊髓急性损伤模型,观察MP组与生理盐水(NS)组在伤后12 h和1,3,5,7 d时间点损伤组织C9,CD59阳性反应物的表达部位及时程,并比较两组间差异.结果: MP组在伤后各个时间点C9阳性表达均明显轻于NS组(P <0.05);MP组在伤后12 h和1,3 d时间点CD59的表达明显轻于NS组 (P <0.05),伤后5,7 d时间点两组间无显著差异.结论: MP可抑制补体系统激活减轻继发性脊髓损伤.     

硫酸镁对实验性脊髓损伤的保护作用

目的：观察硫酸镁对脊髓损伤（SCI）的保护作用。并探讨其可能机制，寻求缓解脊髓继发性损伤的新途径。方法：成年SD大鼠48只，建立脊髓腰膨大横切模型，随机分为对照组，硫酸镁实验组。经处理后检测不同时相损伤部位组织Ca^2 浓度，过氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二酰二甲醛(MDA)浓度；4周后进行斜板试验，分析功能恢复情况。结果：与对照组相比，硫酸镁处理组的细胞内Ca^2 浓度，MDA水平明显下降，SOD升高（P＜0．01）。结论：硫酸镁对SCI后的脂质过氧化水平和Ca^2 内流有显著的保护作用，可作为临床上缓解脊髓继发性损伤的一种新药物。     

内皮素受体拮抗剂PD142893对大鼠损伤脊髓血流及功能的影响

目的：研究内皮素受体拮抗剂PD142893对大鼠损伤脊髓血流及功能的影响,探讨内皮素在继发性脊髓损伤中的作用机制。方法：35 g物体后路压迫大鼠胸段脊髓5 min造成脊髓急性中度损伤。应用激光多普勒血流仪检测对照组、损伤组及PD142893治疗组(蛛网膜下腔注射给药50 μg)大鼠局部脊髓血流的动态变化,并观察伤后一周的神经功能恢复情况。结果：PD142893蛛网膜下腔注射能明显改善脊髓压迫伤早期（30 min至8 h）的低血流灌注;且能部分恢复损伤大鼠脊髓功能。结论：内皮素可能是脊髓继发性损伤的重要损害因子之一; 蛛网膜下腔注射内皮素受体拮抗剂PD142893能部分逆转脊髓损伤。     

GDNF与甲泼尼龙对脊髓损伤后细胞内游离钙含量的影响

目的：比较胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）与甲泼尼龙（MP）对脊髓损伤组织细胞内游离钙及水含量的影响。方法：SD大鼠分成对照组、GDNF组、MP一及GDNF＋MF组,改良Allen法撞击致伤脊髓T13节段,蛛网膜下腔给予GDNF 20μl,尾静脉给予MP 30mg/kg,不同时间取伤段脊髓以Fura-2法测定细胞内钙[Ca^2 ]i及组织中水含量。结果：治疗组[Ca^2 ]i及组织中水含量明显低于对照组（P＜0．01）;伤后24h[Ca^2 ]i及组织中水含量GDNF组＞MP组及GDNF＋MP组（P＜0．01）,MP组与GDNF＋MP组无差异（P＞0．05）;伤后72h的[Ca^2 ]i水平,GDNF组＞MP组＞GDNF＋MP组（P＜0．05）;组织中水含量GDNF组＞MP组及MP＋GDNF组（P＜0．01）;伤后7天[Ca^2 ]i的水平,GDNF组＞MP组＞GDNF＋MP组（P＜0．01）;组织中水含量各治疗组无显著差异（P＞0．05）。结论：GDNF、MP及其联合应用均能降低脊髓组织[Ca^2 ]i水平,减轻组织水肿,作用效果MP超过GDNF,MP联合GDNF治疗脊髓损伤能增强MP的疗效。     

2-氯腺苷对大鼠脊髓损伤后脊髓血流量和神经功能的影响

目的：观察腺苷受体激动剂2－氯腺苷对大鼠脊髓损伤后神经功能和脊髓血流量的影响,探讨腺苷在继发性脊髓损伤中的作用。方法：脊髓腹侧压迫法造成T13脊髓损伤,用激光多普勒血流仪检测损伤前后的脊髓血流量、治疗组于伤前15例min蛛网膜下腔注射不同剂量的非特异性腺苷受体激动剂2－氯腺苷（2－CADO）,对照组注射同量的生理盐水。伤后24h观察神经功能评分、倾斜平面临界角和组织学变化。结果：脊髓损伤后脊髓血流量立即下降,而治疗组较对照组显改善（P＜0．05,P＜0．01）。大剂量（500μmol/L)的2－CADO能显改善损伤后的神经功能,小剂量（50μmol/L)则对脊髓损伤无明显神经保护作用,大小剂量的作用有显差异（P＜0．01）。结论：腺苷通过改善脊髓血流量,从而对脊髓损伤起保护作用。     

复方丹参保护大鼠脊髓继发性损伤的实验研究

目的 观察复方丹参对脊髓继发性损伤的神经保护作用。方法 Wistar大鼠54只，以改良Allen氏法制备脊髓打击伤模型，随机分为三组。测定不同药物处理后8和24小时脊髓组织SOD活性和MDA浓度以及血注 变学改变；术后2，4周联合行为学评分（CBS）观察实验动物的神经功能恢复情况。结果 复方丹参处理后，脊髓组织MDA浓度明显低于各时相点对照组，SOD活性显著升高（P＜0.01)，与甲基强的松龙治疗组无明显差异（P＞0.05)，血液流变学指标也有所改善，CBS评分明显增加（P＜0.01)。结论 复方丹参治疗可以缓解脊髓损伤后的脂质过氧化反应，改善微循环，从而发挥脊髓保护作用。     

丙戊酸对大鼠急性脊髓损伤后BDNF及NT-3表达的影响

目的探讨丙戊酸（VPA）对脊髓损伤后脑源性神经营养因子（BDNF）和神经营养素3（NT-3）表达的影响。方法将60只雄性SD大鼠随机分为三组：对照组（C组）、损伤组（SCI组）和丙戊酸保护组（VPA组）。采用改良Allen法制作脊髓损伤动物模型。VPA组术后即刻及其后每12 h皮下注射VPA 300 mg/kg;C组和SCI组在相应时间点注射等体积的生理盐水。于伤后24、48、72 h和1周取材。利用BBB评分标准进行不同时段的行为学评分。通过免疫组化法观察各组大鼠脊髓损伤后BDNF及NT-3表达的变化。结果 BBB评分显示,C组运动功能未受影响,VPA组的BBB评分均高于SCI组,在伤后48、72 h和1周两者比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。与C组比较,SCI组和VPA组的BDNF及NT-3表达在各时间点均明显增加（P〈0.05）,但VPA组各时间点的BDNF及NT-3表达均明显高于SCI组（P〈0.05）。结论 VPA可促进大鼠脊髓损伤后神经功能恢复,其机制可能与促进BDNF及NT-3表达有关。     

糖尿病大鼠脊髓损伤后血小板衍化生长因子的表达研究

目的观察糖尿病大鼠脊髓机械性损伤后损伤处脊髓血小板衍化生长因-7-（PDGF）在星型胶质细胞中的表达量,以探讨脊髓损伤过程中PDGF的作用。方法将36只大鼠随机分为假手术对照组、脊髓损伤组和糖尿病脊髓损伤组并制作相关模型,观察脊髓损伤24h和7d后大鼠运动功能的改变、损伤脊髓的病理变化及PDGF在星型胶质细胞中的表达情况。采用UTHSCSA Image Tools 3．0图像分析处理系统进行分析,统计各张切片单位面积（mm^2）内PDGF阳性细胞的数量和光密度：BIO-RAD软件Quantityone测定并用相对灰度值表示PDGF蛋白的表达量：然后对所得数据进行分析。结果脊髓损伤24h后,两组大鼠均出现严重运动功能障碍,BBB功能评分分别为（0.7±0．4）、（0．7±0.5）分：损伤7d后,脊髓损伤组大鼠恢复为（6．7±1.2）分,而糖尿病脊髓损伤组仅恢复为（3．9±0.7）分,两组差异有统计学意义（P〈0．01）：而假手术对照组大鼠运动自如,术后24h和7d评分均为（21．0±0．0）分,与另两组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。术后24h脊髓损伤组和糖尿病脊髓损伤组脊髓损伤部位白质中可见肿胀的轴突和大量空泡。灰质中存在极少量的神经元和胶质细胞;7d后损伤范围确定,损伤段变细,脊髓内有空洞形成,其中糖尿病脊髓损伤组的空洞大于脊髓损伤组,并且周围有炎性细胞浸润。PDGF阳性表达部位为星形胶质细胞,术后24h、7d假手术对照组PDGF表达少,没有太大的变化：24h后脊髓损伤组和糖尿病脊髓损伤组损伤部位的PDGF表达增多,且脊髓损伤组明显多于糖尿病脊髓损伤组（P〈0．01）：7d后脊髓损伤组PDGF持续高表达,仍明显多于糖尿病脊髓损伤组（P〈0．01）。在Western blot检测中,假手术对照组在两个时段均仅有少量PDGF蛋白表达,24h后脊髓损伤组PDGF表达明显多于糖尿病脊髓损伤组（P〈0．01）,损伤7d后脊髓损伤组PDGF持续高表达,仍明显高于糖尿病脊髓损伤组（P〈0．01）。结论糖尿病脊髓损伤大鼠脊髓损伤后BBB评分明显低于脊髓损伤组大鼠,PDGF表达量亦明显减少,可能与高血糖状态加重脊髓的损伤以及抑制其损伤后恢复有关。     

促红细胞生成素和甲基泼尼松龙对大鼠急性脊髓损伤的疗效比较

目的探讨促红细胞生成素(EPO)和甲基泼尼松龙(MP)对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)的疗效。方法按改良Allen′s撞击法制作急性不完全性脊髓损伤的大鼠模型。将60只雄性SD大鼠随机分为3组:EPO组、MP组和对照组,每组20只,在模型制作成功后8h、24h、3d、7d4个时间点取脊髓标本。比较各组在各个时间点上的运动功能评分、凋亡细胞计数、脊髓病理改变等指标。结果 EPO组和MP组在伤后2、8h的运动功能评分和伤后8、24h凋亡细胞计数比较,差异无统计学意义(P>0.05),但均优于对照组(P<0.01);在伤后3、7d时,EPO组的运动评分和凋亡细胞计数优于MP组(P<0.05),且均明显优于对照组(P<0.01)。结论 EPO比MP的抗凋亡作用更强、更持久,能显著减轻继发性脊髓损伤,促进运动功能恢复。