肝动脉断流促进癌旁正常肝细胞上皮-间质转化

目的 观察肝动脉断流对癌旁正常肝细胞生物学特性的影响.方法 肝动脉结扎(HAL)阻断裸鼠肝脏原位移植瘤(高转移性MHCC97H肝癌细胞)血供(nHAL=10,n假手术=10).免疫组织化学(SP)法分别检测移植瘤内或癌旁缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Pimonidazole及上皮-间质转化(EMT)标记分子如E-cadherin和N-cadherin分子表达;体外用CoCl2模拟缺氧环境,免疫荧光和Western blot检测缺氧处理后L-02肝细胞内上述分子的表达变化.结果 HAL增加肝癌组织和癌旁肝组织内HIF-1α表达和Pimonidazole阳性细胞数(HAL组:9±3比假手术组:4±2,P＜0.05),减少癌旁肝细胞内E-cadherin水平,增加其N-cadherin蛋白表达.100 μmol/L CoCl2有效模拟体外缺氧环境,增加L-02肝细胞内HIF-1α表达,上调N-cadherin同时降低E-cadherin表达.结论 HAL 增加肝癌及癌旁组织缺氧,诱导癌旁正常肝细胞发生EMT.     

上皮间质转化与肿瘤转移研究进展

上皮细胞间质转化是一种基本的生理病理变化,其在胚胎发育、慢性炎症、纤维化和肿瘤浸润转移中发挥重要作用。近年来,人们发现EMT与肿瘤的发生及转移可能存在关联,使其迅速成为肿瘤研究的焦点。对于EMT的研究不但能进一步了解其影响肿瘤的机制,而且可促进EMT生物标记物及靶向治疗的研究,这对侵袭性肿瘤的诊治具有重大意义。1 EMT概述     

抑制残癌细胞上皮间质转化能降低肝动脉结扎增强的肝癌转移潜能

目的 探讨抑制残癌细胞上皮-间质转化对肝动脉断流后肝癌增强的转移潜能的影响.方法 采用MHCC97肝癌细胞系和52只BALB/c-nu/nu裸鼠,建立转移性人肝癌裸鼠原位移植并肝动脉结扎(hepatic artery ligation,HAL)模型.另12只荷瘤裸鼠行假手术设为对照.分别观察肝动脉结扎+阻滞剂LY294002以及肝动脉结扎+不同剂量干扰素α(intererin-α,IFN-α)对移植瘤生长和肺转移率的影响.体外将肝癌细胞MHCC97置于缺氧环境中培养.Western blot检测细胞和移植瘤内HIF-1 α、E-cadherin、N-cadherin、Twist表达.结果 肝动脉结扎虽然减小肝癌移植瘤体积(2002.97 ±331.28) mm3 vs.(3921.23 ±786.21) mm3,t =4.052,P＜0.01),但增加荷瘤裸鼠肺转移率( 10/12 vs.4/12,P＜0.05).联合阻滞剂LY294002治疗不能进一步抑制肝癌生长,但显著减少裸鼠肺转移(1/6 vs.10/12 vs.100％,P＜0.05).中等以上剂量的IFN-α(7.5×106 U/kg)显著降低肝动脉结扎诱导的肺转移率(0/6 vs.2/6 vs.100％,P＜0.01,P＜0.05).对移植瘤和细胞样本的分析证实阻滞剂LY294002或中等以上剂量的IFN-α均抑制缺氧肝癌细胞内N-cadherin和Twist上调,增加E-cadherin表达.结论 阻断肝癌细胞上皮-间质转化能够抑制缺氧诱导的肝癌侵袭、转移.     

上皮间质转化在前列腺癌中的研究进展

前列腺癌（PCa）是一种最常见的恶性肿瘤,据2010年美国癌症协会估计每年新发病例在各种肿瘤中最多,死亡率仅次于肺癌。未发生远处转移的PCa患者的5年生存率已接近100％,但是,发生转移的PCa患者的预后很差。因此研究肿瘤转移的机制尤其是肿瘤细胞如何从原位脱离就显得非常重要。在本文中,我们将讨论目前最流行的转移机制上皮间质转化的作用及其在PCa转移中的潜在作用。我们也将进一步讨论了间质上皮转化及其在肿瘤转移中的作用,最后是两者的相互作用在肿瘤转移全过程中的作用。     

上皮间质转化与恶性肿瘤的转移和侵袭

上皮细胞间质化(EMT)与恶性肿瘤的局部浸润及远处转移有着非常密切的关系。在EMT过程中,细胞表面上皮标志物E-钙黏蛋白表达下调,间质标志物波形蛋白、N-钙黏蛋白表达上调是其主要标志。本文就恶性肿瘤EMT机制的最新研究进展作一综述。     

跨膜丝氨酸蛋白酶4诱导放疗后肝细胞癌转移的机制研究

目的 探讨跨膜丝氨酸蛋白酶4(transmembrane protease serine 4,TMPRSS4)在放疗后残余肝细胞癌转移中的作用及机制.方法 建立具有肺转移潜能的人肝癌裸鼠原位模型,模拟临床分割放射治疗.将放疗后残余肝癌组织切除后再种植于正常裸鼠肝脏.6周后处死,测量放疗后再种植肝癌体积,计算其肝内移灶数目及肺转移率.HE染色观察放疗后肝癌组织学形态.Westernblot及RT-PCR检测放疗前后肝癌组织内上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关基因及TMPRSS4的表达.结果 对照组肝癌切除再种植后42 d,其肿瘤大小及肺转移率分别为(2.25士0.52)cm3和66.7％,而放疗后2d和放疗后30 d残癌切除再种植组,肿瘤大小分别为(1.61±0.51)cm3 (P＜0.05)和(2.60±0.61)cm3 (P＞0.05),肺转移率分别为12.5％ (P＜0.05)和100％ (P＜0.05).对照组及放疗后2d残癌切除再种植组无肝内转移灶,放疗后30 d残癌切除再种植组肝内转移灶数为18±8.05(P＜0.05).放疗后30 d残癌组织EMT相关蛋白N-cadherin、Vim-entin及TMPRSS4、SIP1的表达显著高于对照组及放疗结束后2d残癌组织,而E-cadherin表达则显著降低.结论 放疗后残癌的转移潜能先降低后增强.放疗后残癌TMPRSS4表达增加进而诱导EMT的发生可能是后期转移潜能增强重要原因之一.     

上皮-间质转化是肝动脉断流后肝癌侵袭转移潜能增加的重要机制

目的 研究肝动脉断流对原发性肝癌(简称肝癌)侵袭转移潜能的影响.方法 采用24只 BALB/c-nu/nu裸鼠,建立转移性人肝癌裸鼠原位移植模型.种瘤术后2周荷瘤裸鼠随机分为2组干预:一组行肝动脉结扎(hepatic artery ligation,HAL);另一组假手术作为对照.每组随机抽取6只裸鼠于干预术后4周进行肿瘤大小和肺转移率的比较,并用免疫组化(S-P法)及Western blot检测移植瘤上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子的表达;其余荷瘤动物观察生存时间.体外以100 μmol/L CoCl2模拟乏氧环境,观察MHCC97L肝癌细胞生长和凋亡以及运动和侵袭能力,用免疫荧光和Western blot检测细胞EMT标志分子的变化.结果 HAL抑制肝癌生长[(1996.8±223.6)mm3比(4049.1±596.5)mm3,P＜0.01],但增加肺转移率(6/6比1/6,P＜0.05),因此不能改善荷瘤动物生存期[(56.0±4.6)d比(60.7±5.8)d,P＞0.05].这与乏氧环境中癌细胞运动[(472.7±84.3)μm比(378.8±73.7)μm,P＜0.05]和侵袭能力[(154.4±30.5)个比(45.2±7.6)个,P＜0.01]增强有关,主要涉及E-cadherin下降及N-cadherin和Twist上调的EMT机制.结论 HAL抑制肝癌生长,促进其侵袭转移潜能,与乏氧环境中癌细胞EMT相关.     

上皮-间质转化在肝癌非手术治疗后促进残癌侵袭、转移的研究进展

上皮-间质转化(EMT)以上皮表型的缺失伴随上皮间质特性的获得为主要特征。上皮-间质转化现象与肝癌非手术治疗后残癌的侵袭、转移能力增加关系密切。本文对近年来有关EMT在各种肝癌非手术治疗后,促进残癌侵袭、转移的研究进展进行综述。     

CD133通过上皮间质转化促进胃癌侵袭和转移的研究

目的观察胃癌细胞CDl33表达与胃癌侵袭的关系,进而探讨其是否通过上皮间质转化（EMT）促进胃癌侵袭和转移。方法通过免疫磁珠分选技术,将KATO-Ⅲ细胞分为CDl33阳性细胞和CDl33阴性细胞,利用Transwell小室法检测其侵袭能力,并通过Western blot和RT-PCR方法检测siRNA干扰CDl33基因沉默前后其EMT相关因子的表达差异。Western blot法检测50例胃癌组织及癌旁组织CDl33和EMT相关因子的表达．并分析其相关性。结果CDl33阳性组穿膜细胞数（67．7±10．5）显著高于CDl33阴性组（13．3±6．8,P=0．001）。CDl33阳性细胞中Snail和N-cadherinmRNA及蛋白表达显著高于CDl33阴性细胞．而E-cadherin表达则明显低于CDl33阴性细胞（均P〈0．05）。siRNA干扰后,Snail和N-cadherinmRNA及蛋白表达明显下调,而E-cadherin表达则显著上升（均P〈0．05）。胃癌组织中CDl33、Snail及N-cadherin蛋白相对表达为0．635±0．119、0．599±0．114及0．754±0．154,明显高于癌旁组织的0．485±0．116（P=0．029）、0．259±0．108（P=0．020）和0．329±0．134（P=0．001）,而E-cadherin蛋白表达相对表达为0．378±0．123,明显低于癌旁组织的0．752±0．156（P=O．003）。相关分析显示,Snail及N-cadherin的表达与CDl33表达呈正相关（P〈0．05）,而E-cadherin的表达则与CDl33表达呈负相关（P〈O．05）。结论CDl33阳性胃癌细胞具有更强的侵袭能力,并可能通过EMT促进胃癌的侵袭和转移。     

转化生长因子β与肝细胞癌关系的研究进展

肝细胞癌（HCC）的形成与许多细胞因子有关,其中转化生长因子β（TGF-β）与HCC的关系最为密切。在HCC患者的肿瘤细胞、血浆和尿液中TGF-β的水平明显升高。TGF-β是一种肿瘤抑制因子,而在HCC进展期却表现为促进HCC的生长、侵袭和转移的作用。这与TGF-β信号通路的异常以及其他具有肿瘤促进作用的细胞因子密切相关。就TGF-β与HCC的关系作一综述。     

蛋白质精氨酸甲基转移酶7对肝癌细胞上皮-间充质转化及侵袭转移能力的影响

目的 观察蛋白质精氨酸甲基转移酶7(PRMT7)表达变化对肝癌细胞上皮-间充质转化(EMT)及侵袭转移的影响.方法 应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测人正常肝细胞L02及不同转移潜能肝癌细胞株Hep3B、Huh7、MHCC97H、LM3细胞PRMT7表达;检测不同转移潜能肝癌细胞株抑制和上调PRMT7蛋白表达之后EMT相关指标蛋白和基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达变化及肝癌细胞侵袭运动能力改变.结果 PRMT7的表达水平与肝癌细胞转移潜能呈正相关.上调低转移潜能肝癌细胞株Huh7的PRMT7蛋白表达,能够促进细胞EMT的发生[E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达下调,N-cadherin、波形蛋白(Vimentin)表达上调],上调MMP-2、MMP-9表达,其侵袭[Huh7组:(2.35±0.34)个;对照载体组:(3.11±1.09)个;PRMT7过表达组:(11.92±2.32)个]和迁移[Huh7组:(4.50±2.17)个;对照载体组:(3.43±1.29)个;PRMT7过表达组:(13.21±2.27)个]能力明显增强;抑制高转移肝癌细胞株LM3的PRMT7蛋白表达,细胞EMT发生逆转(E-cadherin蛋白表达上调,N-cadherin、Vimentin蛋白表达下调),MMP-2、MMP-9表达下调,其侵袭[LM3组:(19.01±1.88)个;对照载体组:(21.02±2.14)个;PRMT7表达抑制组:(10.15±1.52)个]和迁移[LM3组:(22.55±3.06)个;对照载体组:(23.93±4.08)个;PRMT7表达抑制组:(13.11±1.31)个]能力明显减弱.结论 PRMT7通过影响肝癌细胞EMT的发生进而参与调控肝癌侵袭转移过程.     

消炎痛抑制肝细胞肝癌生长转移的研究

目的 观察消炎痛(Indomethacin)对有转移潜能的人肝癌MHCC97L细胞增殖侵袭的影响和对裸鼠肝癌生长和转移的抑制作用.方法 (1)体外实验:采用0.2 mmol/L的消炎痛分别作用于MHCC97L细胞,观察细胞增殖、侵袭实验、运动实验和血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达[酶联免疫吸附试验(ELISA)].(2)体内实验:建立转移性人肝癌裸鼠原位模型后,将裸鼠随机分为对照组和消炎痛组.6周后处死动物,测量肿瘤体积,计算抑瘤率、肺转移灶数目及肺转移率.免疫组织化学方法检测VEGF、MMP-2、环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达.结果 (1)体外实验:0.2mmol/L消炎痛明显抑制MHCC97L细胞增殖(P值均＜0.01),消炎痛组穿过人工基底膜(侵袭实验)和上室底膜(运动实验)的细胞数分别为2.2±1.3和4.4±1.1,明显低于对照组(11.4±1.9和12.8±1.8,P值均＜0.01);ELISA法检测发现,消炎痛组VEGF蛋白和MMP-2蛋白含量和对照组比较明显降低(P值均＜0.01).(2)体内实验:对照组、消炎痛组肿瘤体积分别为(1700 ±422)mm3 和(1170±585)mm3(P＜0.05),肺转移率分别为75%和50%(P＞0.05),平均肺转移灶数目分别为2.92±2.07和1.33±1.56(P＜0.05);与对照组比较,消炎痛组的抑瘤率为31.2%.免疫组织化学染色显示,消炎痛组VEGF、MMP-2、COX-2蛋白的表达和对照组比较均有降低(P值均＜0.01).结论 在一定条件下,消炎痛可抑制肝细胞肝癌的生长转移,其作用和抑制VEGF蛋白和MMP-2蛋白的表达有关.

Abstract：

Objective To study the effects of indomethacin on proliferation and invasion of hepatocellular carcinoma (HCC) cell line MHCC97L with metastatic potential and the effect of indomethacin on the growth and metastasis of HCC. Methods (1) In vitro; Proliferation, Transwell invasion assay, cell motility assay, vascular endothelial growth factor (VEGF) and matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) protein activity were evaluated after cells were treated with 0. 2 mmol/L indomethacin. (2)In vivo: Mice bearing xenografts in the liver were randomly divided into control and indomethacin groups. At the end of sixth week, the mice were killed and tumor volume, inhibitory rate, immunohistochemistry assay (IHA) and metastasis were evaluated. Results (1)In vitro; 0. 2 mmol/L indomethacin could inhibit the proliferation of MHCC97L cells markedly (P ＜0. 01). The average amount of invading cells per field in cell invasion assay and motility assay was 2. 2 ± 1. 3 and 4.4 ± 1. 1 respectively in indomethacin group, significantly less than in control group ( 11. 4 ± 1. 9 and 12. 8 ± 1. 8 respectively, P ＜0. 01). The expression of VEGF and MMP-2 in cells treated with indomethacin was significantly lower than in control group (P ＜0. 01). (2)In vivo; Tumor volume, incidence and number of lung metastases in control and indomethacin groups were (1700 ±422) mm3 and (1170 ± 585) mm3 (P ＜ 0. 05), 75% and 50% ( P ＞ 0.05), 2. 92 ± 2. 07 and 1.33 ±1.56 (P＜0. 05) , respectively. Inhibition rate in indomethacin group was 31.2%. IHA showed that the expression of VEGF, MMP-2, and cyclooxygenase-2 ( COX-2) was down-regulated in indomethacin group (P ＜0.01). Conclusion Indomethacin could inhibit the growth and metastasis of HCC, which was in part mediated by down-regulation of VEGF and MMP-2.     

生长抑素受体-2基因逆转上皮-间充质转化抑制肝癌细胞侵袭转移机制的研究

目的 观察生长抑素受体-2(SSTR2)基因对肝癌细胞株MHCC-97H侵袭转移及上皮-间充质转化(EMT)特性的影响.方法 构建慢病毒3FLAG-puromycin-LV及SSTR2-LV,转染肝癌细胞株MHCC-97H,噻唑蓝(MTT)、免疫荧光检测转染效率.采用Transwell侵袭实验和迁移实验分别检测未转染细胞(空白对照组)、转染3FLAG-puromycin-LV细胞(阴性对照组)和转染SSTR2-LV细胞(实验组)侵袭转移能力的强弱.镜下观察转染前后细胞形态的变化,免疫荧光检测转染前后细胞上皮表型蛋白和间质表型蛋白的定位和表达,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染后细胞SSTR2的表达,Westem blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达.结果 SSTR2-LV可以有效转染肝癌细胞株MHCC-97H,稳定表达SSTtR2的mRNA和蛋白.转染SSTR2-LV的肝癌细胞株MHCC-97H较空白对照组和阴性对照组侵袭迁移能力明显受到抑制(P＜0.05).镜下观察肝癌细胞株MHCC-97H转染SSTR2-LV后,由成纤维细胞样、排列分散,转变为细胞排列紧密如铺路石.免疫荧光染色结果可见肝癌细胞株MHCC-97H转染后细胞膜表达的E-cadherin荧光由胞质转移至细胞周边浓聚,而Vimentin的荧光强度较前下降.采用Western blot进行蛋白定量分析,转染后MHCC-97H细胞上皮表型标志性蛋白E-cadherin、β-连环蛋白(β-catenin)表达量增高,间质表型标志性蛋白N-cadherin、Vimentin表达量减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 转染再表达SSTR2MHCC-97H细胞可以增加上皮表型蛋白表达,减少间质表型蛋白,从而逆转肝癌细胞EMT,导致肿瘤细胞侵袭能力减弱.     

血小板在肝细胞癌发生和转移中的研究进展

肝细胞癌(HCC)是临床上最常见的原发性肝癌,其发生、发展通常与慢性炎症和肝损害有关。血小板不仅是肝损伤后再生的基础,而且在促进HCC发生和转移中所起的作用也得到较多关注。血小板既能在HCC肿瘤微环境中直接诱导肿瘤细胞生长和帮助肿瘤细胞躲避免疫杀伤,又能通过分泌的特异性生长因子和血管生成因子诱导肿瘤滋养血管生成促进HCC进展。此外,血小板相关衍生物也对HCC肿瘤细胞的增殖和转移存在重要影响。详细了解血小板在HCC中的作用,对于优化HCC肿瘤治疗方案和探索新的治疗策略很有必要。本综述详细报道血小板在HCC发生和转移中作用的相关机制及最新研究进展。     

转移与无转移肝细胞癌患者血清蛋白质指纹图谱的比较

目的比较转移与无转移肝细胞癌(HCC)患者的血清蛋白质指纹图谱,筛选与肝癌转移相关的蛋白质。方法术前收集84例HCC患者(有转移45例,无转移39例)和30例健康成人的血清,采用弱阳离子交换蛋白质芯片为检测介质,经表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)测定,得到蛋白质指纹图谱并运BioMarkerWizard软件分析比较。结果在质荷比(m/z)1500~30000范围内,比较有转移HCC与健康成人的血清,检测出的146个蛋白质峰中,69个蛋白质峰差异有统计学意义(P<0.05),比较无转移HCC与健康成人的血清,60个蛋白质峰差异有统计学意义(P<0.05),差异蛋白质峰中57个为有转移与无转移HCC的共有蛋白峰;单独比较有转移与无转移HCC血清,检测出的146个蛋白质峰中仅有11个蛋白质峰差异有统计学意义(P<0.05)。结论有转移与无转移HCC患者血清蛋白质之间有差异,但远较其与健康成人血清之间差异小;血清蛋白质指纹图谱中的差异蛋白质可能与肿瘤的发生和转移有关。     

酪氨酸激酶Syk在肝癌中的表达及与血管生成的关系

目的探讨酪氨酸激酶Syk在肝细胞性肝癌中的表达及对肿瘤微血管生成的影响。方法采用RT-PCR检测Syk mRNA在肝细胞性肝癌及癌旁正常组织中的表达,免疫组化SABC法检测标本中CD34的表达反映肿瘤的微血管密度（MVD）。结果24例癌旁正常组织中Syk mRNA均表达阳性,32例肝细胞性肝癌中Syk mRNA表达率为46.9％（15／32）,其中低分化组阳性表达率23．1％（3／13）,明显低于高分化组阳性表达率63．2％（12／19）（P〈0．05）。肿瘤微血管密度（MVD）检测：低分化组（Ⅲ级Ⅳ级为49．2±3.6,54±4.3）,明显高于高分化组（Ⅰ级Ⅱ级为13．6±4．5,32.3±3．2）与正常组织（5．9±1．7）,有显著统计学意义（P〈0．05）。Syk mRNA的表达与CD34的表达明显负相关（r=-0.97）。结论肝细胞性肝癌中Syk基因的缺失对癌组织血管的生成起重要的作用。     

马氏钳蝎毒搞癌多肽与5-Fu对小鼠肝癌的关系

目的 观察肝癌肝内动静脉分流对术后的肺转移的影响。方法 ３２例可切除肝癌术前经肝动脉插管注入５ｍＣｉ（１８５ＭＢｑ）＾９９ｍＴｃ－ＭＡＡ,获得肝肺分流率,术后随访３年观察肺情况。结果 肺转移病人的肝肺分流率明显高于无肺转移者。结论 肝内动静脉分流量大者术后肺转移的可能性大。     

乙酰肝素酶mRNA在肝细胞癌中的表达及点突变研究

目的 探讨乙酰肝素酶（HPA）mRNA在肝细胞癌（HCC）中的表达及点突变的意义。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测33例HCC中HPA的表达，用T—A克隆测序法检测其扩增产物有无突变，并与HCC临床病理学指标分析。结果 有16例癌组织HPA表达阳性，阳性率（48．5％）显著高于癌周肝组织（P〈0．01）。术后转移复发组HPA阳性率显著高于无转移复发组（P〈0．01）。7例PCR产物测序发现有4例均存在2处点突变，其中一处为有义突变，突变率为57．1％。结论 HCC中HPAmRNA表达率增高，可作为HCC术后预测转移复发的一个重要指标。HPA基因点突变可能是其表达率增高的原因之一。     

原发性肝癌肾上腺转移56例的诊治分析

目的总结肝癌。肾上腺转移的临床特点，探讨影响其生存率的临床因素。方法回顾性分析2000年11月至2003年4月期间在我院住院治疗并获得随访的56例发生。肾上腺转移的原发性肝癌病人的临床资料，对是否进行治疗，肾上腺肿瘤大小，是否合并肝内病灶，发病时间，肝功能分级等因素进行单因素及Cox模型多因素分析。结果单因素分析显示。肾上腺肿瘤的大小，有无肝内病灶，是否进行治疗以及肝功能分级是影响病人生存时间的因素，而多因素分析表明是否进行治疗，肝功能分级是影响病人生存率的独立因素。结论对于肝癌肾上腺转移应当保持警惕性，以获得早期诊断，对于部分经过选择的病人以手术为主的综合治疗具有积极的意义。