小干扰RNA的靶向运送体系

靶向运送是小干扰RNA（siRNA）药物进入临床应用最关键的环节。研究人员利用配体、抗体和适配子构建了非常有效的靶向特异性细胞组织的siRNA运送体系。制备运送体系分3步：先使脂质体或多聚物与siRNA自发结合形成微粒，利用聚乙二醇等作为桥接分子包被在微粒外层，最后将配体、抗体或适配子等靶向性分子与桥接分子连接。     

RNA干扰与药物的研究进展

RNA干扰是由双链RNA诱导的序列特异性的基因沉默,目前被广泛用于药物研究,特别是针对肿瘤、病毒感染性疾病、血液病及神经退行性疾病等的治疗药物。随着核酸药物在体内靶向转运技术的不断发展,RNA干扰有可能成为一种新型的治疗途径。     

RNA干扰技术在结肠癌基因靶向治疗应用的研究

RNA干扰技术以其特异性和高效性抑制基因表达,已经成为研究基因功能的重要工具。它能够沉默同源基因的表达,在肿瘤的基因靶向治疗中发挥的作用日趋明显。最近,RNA干扰技术应用于结肠癌靶向基因沉默为结肠癌的基因靶向治疗开辟了新的途径。现就RNA干扰技术在结肠癌基因靶向治疗的研究进行综述。     

RNA干扰与鼻咽癌的研究进展

RNA干扰(RNAi)是利用双链小片段RNA高效、特异性地降解细胞内同源mRNA,阻断体内基因表达,使细胞出现靶基因缺失的表型[1]。近几年,RNA干扰研究在国内外迅速开展,并且扩大到许多方面,如抑制病毒的研究、抑制多药耐药基因的表达、在人体寄生虫研究中的应用、基因治疗、肿瘤研究等。而鼻咽癌的发病机制与许多致病因素有关,实验研究表明RNAi可以通过多种途径影响鼻咽癌细胞的生长,因此RNAi可能为鼻咽癌治疗提供新的方法。     

RNA干扰及其在医学研究中应用的进展

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的,序列特异的基因沉默现象。小干扰RNA(siRNA)是RNAi作用中的效应分子。RNAi技术作为新兴的基因阻断技术具有明显优势,已经广泛地应用于基因功能研究、抗病毒感染和抗肿瘤等热门领域。现就RNAi作用机制、siRNA的制备、设计及RNAi技术在医学研究中应用做一综述。     

治疗遗传病的RNA药物研究进展

RNA药物能够通过识别互补序列靶向对应基因以抑制特定蛋白或RNA的表达，或通过翻译合成目的基因编码的蛋白来发挥遗传性疾病治疗作用。RNA药物主要分为寡核苷酸药物（包括反义寡核苷酸、小干扰RNA和RNA适配体）和信使RNA药物等。其中，反义寡核苷酸和小干扰RNA已用于临床治疗遗传病，而RNA适配体和信使RNA药物目前还处于临床试验阶段。当前主要通过对RNA药物进行化学修饰（如对信使RNA进行假尿嘧啶修饰）来降低免疫原性和提升药物疗效，以及开发纳米粒载体、细胞外囊泡和类病毒载体等递送载体来解决RNA药物的稳定性、特异靶向性和安全性等问题。本文概述了目前用于治疗遗传病的11种RNA药物的具体作用分子机制，并简单讨论了RNA药物的化学修饰及递送载体的研究现状。     

靶向人端粒酶逆转录酶进行RNAi的逆转录病毒载体的构建

目的构建靶向性干扰人端粒酶逆转录酶表达的特异性小干扰RNA的真核表达载体。方法采用PCR法分别扩增增强型绿色荧光蛋白的DNA序列、U6启动子序列和靶向性干扰人端粒酶逆转录酶的特异性小干扰RNA对应的DNA序列,随后将与之相应的DNA序列片断依次克隆入真核表达载体pLXSN中,并通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体进行鉴定。以荧光显微镜和利用流式细胞仪分析重组病毒表达EGFP蛋白的情况。以MTT方法检测初步分析重组病毒对人Hela细胞的RNAi效果。结果限制性内切酶酶切和测序结果均表明成功构建了靶向人端粒酶逆转录酶的小干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siTERT。以磷酸钙共转染法制备的重组逆转录病毒滴定了病毒滴度后,重组病毒感染人Hela细胞24h时用流式细胞仪测得EGFP表达的阳性率为24.1%。重组逆转录病毒感染人Hela细胞48h时,MTT实验测得细胞死亡率为53.2%。结论成功构建了针对人端粒酶逆转录酶小干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siTERT,并制备了重组逆转录病毒,初步观察了效应,为进一步利用小干扰RNA技术研究肿瘤的基因治疗奠定了基础。     

RNA干扰及其在肿瘤研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是近年发展起来的一种阻抑基因表达的新方法,该技术通过双链RNA的介导,可以特异性地阻断或降低相应基因的表达。在肿瘤研究中,通过RNAi技术可以选择性地抑制人类肿瘤相关基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长。该技术的应用为癌症的基因治疗提供了新的方法。本文综述了小干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)的生成和作用机制以及RNAi在肿瘤研究中的应用。     

Dll4基因靶向RNAi重组腺相关病毒载体的构建和高滴度病毒制备

目的：构建一个表达肿瘤血管生成调节基因Delta-like ligand4（Dll4）小干扰RNA的重组腺相关病毒载体,制备靶向性抑制Dll4表达的高滴度重组腺相关病毒。方法：将包含肿瘤血管生成调节基因Dll4特异性小干扰RNA片段的质粒用EcoRI＋SalI双酶切,回收目的片段,将pSNAV2.0质粒用EcoRI＋SalI双酶切后同目的片段连接,脂质体法转染BHK-2l细胞,G418筛选后以辅助病毒感染获取病毒。结果：PCR和测序证实,成功构建包含U6启动子和肿瘤血管生成调节基因Dll4特异性RNA干扰片段的重组腺相关病毒载体,并制备出滴度为2.4×10^11 vectorgenome/L高滴度腺相关病毒。结论：成功构建携带Dll4基因短发夹状干扰RNA的腺相关病毒载体。为下一步探索抗肿瘤血管生成基因治疗的新途径提供实验基础。     

RNA干扰技术及其在椎间盘退变研究中的进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来发展起来的一种新兴的基因沉默技术,它是由双链RNA介导的靶向基因序列特异性转录后的沉默机制.RNA干扰序列特异性的抑制效应较反义DNA、抗体封闭技术等传统基因调节方法 有着明显的优势.在哺乳动物细胞中,RNAi可由21～25个核苷酸长度的小干扰RNA(sm...     

RNA干扰技术在肿瘤基因治疗中的研究进展

RNA干扰(RNAi)技术是利用双链RNA,高效、特异性降解细胞内同源信使RNA,从而阻断特定基因表达,使细胞出现靶基因缺失的表型。与反义寡聚核苷酸技术相比,RNAi技术具有更高的特异性,是更有效的方法。目前,RNAi技术是肿瘤基因治疗领域的一个热点技术,它抑制癌基因表达及肿瘤血管生成,沉默细胞凋亡相关基因、肿瘤转移相关基因及肿瘤耐药相关基因,在肿瘤基因治疗领域显示出广阔的应用前景。     

RNA干扰中小干扰RNA的设计原则

RNA干扰(RNAi)是由内源性或外源性双链RNA介导的一种高度保守的序列特异性基因表达调控机制,主要通过小干扰RNA(siRNA)和微小RNA发挥作用。由于其具有高效、高特异性、作用稳定等特点,已被广泛地应用于基础实验和疾病治疗的研究中。在进行siRNA介导的RNAi实验时,如何设计高效、特异性抑制靶mRNA的siRNA是实验成败的关键。     

RNA干扰分子机制的研究进展及其在黑素瘤中的应用

RNA干扰是一种由外源性或内源性双链RNA分子阻断或者降低同源基因表达的现象,是目前生物分子学研究的热点之一。近年来RNA干扰分子机制的研究从转录后水平逐渐深入到转录水平、翻译水平,取得了飞速的发展。由于RNA干扰作用的靶向性,为肿瘤的治疗带来了新的希望,现从RNA干扰的分子学机制及其在黑素瘤中的研究予以简要综述。     

RNA干扰技术的原理与应用

RNA干扰作用(RNA i)是通过双链RNA(dsRNA)引发的转录后基因沉默机制。RNA i主要是指dsRNA分子进入细胞内,特异性降解与之同源的mRNA,从而特异高效地抑制相应基因表达活性的现象。近年来,RNA i以其高特异性、高效性等显著优势已成为研究基因功能的新手段,在功能基因组学、基因表达调控机制研究等领域得到了广泛的应用。在此对RNA干扰技术的发展历程、作用机制、作用特点及应用前景予以综述。     

RNAi技术在肿瘤研究中的应用

外源性或内源性双链RNA（Double—stranded RNA,dsRNA）在细胞导致与其同源的mRNA分子发生特异性降解,从而干扰相应基因的表达,这种现象被称为RNA干扰（RNA interference,RNAi）．RNAi主要由长dsRNA分子裂解形成的小干扰RNA（Small interfering RNA,siRNA）分子介导,是在RNA水平调节基因表达的一种方式,     

RNA干扰技术的研究进展

自1998年2月Fire等[1]首次在Nature上发表了将双链RNA(double stranded RNA, dsRNA)注入一种秀丽线虫(caenorhabditis elegans)体内,dsRNA诱导了靶向基因专一性的基因表达沉默(gene silencing),由此,一门新技术--RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术逐渐发展起来.随后许多研究人员先后运用RNAi技术在线虫、果蝇、植物及动物细胞中进行了大量研究,采用不同长度的dsRNA 可使不同类型细胞的靶向基因表达明显降低.近年来研究表明,在哺乳动物以及人类细胞中转染21～23个核苷酸(nucleotide, nt)的小干扰性RNA(small interfering RNA, SiRNA)可使同源基因表达产生特异性强抑制效应[2].SiRNA和RNAi技术的研究和运用,具有极其重要的理论意义和实践意义,它将对医学生物学的发展产生深远的影响.杂志将这一新发现评为2002年度世界十大科学成就之首.本文就RNAi的作用机制、SiRNA合成以及RNAi技术运用等方面的研究进展综述如下.     

RNA干扰在抗肿瘤中的作用研究进展

癌症是当前危害人类健康的最主要杀手。临床上常用的手术治疗、放射治疗和化学治疗无法完全根除或彻底杀灭肿瘤细胞,常出现肿瘤转移或复发现象。而肿瘤的生物治疗具有安全、有效、毒副作用低等特点,基因治疗是生物治疗的一种,其主要是抑制肿瘤细胞中过度表达的基因。RNA干扰(RNAi)是一种利用双链RNA(dsRNA)特异性沉默某一特定基因转录后翻译的过程。RNAi已成为用于研究基因功能的重要工具,其不仅能敲除某些基因的表达,防御dsRNA病毒,还能作用于整个基因组,观察基因之间的协调合作,可以利用它进行基因治疗。本文主要介绍了RNAi技术的发现、作用机制及其在抗肿瘤方面的应用,并总结了该技术在抗肿瘤过程中存在的问题。     

非小细胞肺癌术后分子靶向治疗研究进展

化疗在晚期非小细胞肺癌治疗上的疗效已达一个平台,且毒性作用限制了化疗的进一步发展。随着对现代肿瘤分子生物学及基因水平的认识逐渐加深,靶向治疗以成为临床研究的重点,非小细胞肺癌术后给予分子靶向治疗已成为目前抗肿瘤研究的热点。靶向治疗是在细胞分子水平上,针对明确的致癌位点,设计相应的治疗药物,使药物进入体内特异性选择致癌位点结合而发生作用,从而最终使肿瘤细胞特异性死亡,正常组织细胞不受影响的一种治疗方法。常用的分子靶向治疗药物包括表皮生长因子受体抑制剂,抗血管生成药物,多靶点药物等。