塞来昔布对3种肿瘤细胞株放射增敏效应的研究

目的观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对3种不同肿瘤细胞株（肺腺癌细胞株A549、宫颈癌细胞株HeLa、鼻咽癌细胞株CNE）的放射增敏作用。方法选择适当浓度的塞来昔布进行放射增敏实验,设置对照组（C）、药物组（D）、单纯照射组（R）和照射＋药物组（R＋D）,采用集落形成法分别检测塞来昔布对肺腺癌细胞株A549、宫颈癌细胞株HeLa、鼻咽癌细胞株CNE的放射增敏效应,并绘制细胞存活曲线。结果塞来昔布对3种肿瘤细胞株均显示出放射增敏效应,R＋D组与R组相比较,反映放射敏感性指标的SF2、D0.01、D0、Dq出现不同程度的下调。30μmol/L塞来昔布作用A549细胞、HeLa细胞、CNE细胞的放射增敏比SERD0和SERDq分别为1.26和1.34、1.25和1.33、1.24和1.32;当塞来昔布浓度增加到50μmol/L时,放射增敏比SERD0和SERDq分别增至1.74和1.84、1.36和1.47、1.33和1.61。结论塞来昔布在体外实验中可提高3种肿瘤细胞株的放射敏感性,呈浓度依赖性。塞来昔布有望作为放射增敏剂在临床广泛应用。     

塞来昔布对人结肠癌细胞系HT-29增殖的抑制及其对miRNA表达谱的影响

目的研究塞来昔布对人结肠癌细胞系HT-29增殖的抑制作用及其对HT-29细胞微小核糖核酸（mi-RNA）表达谱的影响。方法采用CCK-8比色还原法观察塞来昔布对HT-29细胞增殖的抑制作用;miRNA芯片技术检测塞来昔布作用前后HT-29细胞miRNA的表达变化,实时定量RT-PCR验证其结果。结果塞来昔布对HT-29细胞增殖有显著的抑制作用,且呈剂量时间效应关系,其半数抑制浓度为（237.73±1.65）μmol/L;塞来昔布作用于HT-29细胞48 h后,获得28个与塞来昔布干预相关的miRNAs（P〈0.01）,其中8个下调,20个上调。结论塞来昔布对miRNA表达谱的影响可能是其抑制HT-29细胞株生长的作用途径之一。     

塞来昔布对人结肠癌细胞裸鼠移植瘤肝转移和血管生成的影响

目的研究COX-2选择性抑制剂塞来昔布对结肠癌肝转移瘤微血管生成以及血管生成因子VEGF、bFGF表达的影响,从而探讨COX-2对结肠癌肝转移瘤血管形成的作用机制.方法细胞培养建立稳定的结肠癌细胞株HT-29和HCT-116,利用脾切除法建立结肠癌肝转移动物模型,免疫组化检测结肠癌肝转移瘤MVD、VEGF、bFGF蛋白表达.结果结肠癌肝脏转移率,HT-29组、HCT-116组和塞来昔布组分别为83.33%、16.67%和33.33%.肝脏转移瘤MVD、VEGF、bFGF的表达,HT-29组与HCT-116组、塞来昔布组比较治疗组表达减弱,有显著统计学差异(P＜0.01,P＜0.05);塞来昔布组与HCT-116组比较无显著性差异(P＞0.05).结论塞来昔布可能通过抑制促血管生成因子VEGF、BFGF的表达,进而抑制了结肠癌肝转移瘤新生血管生成.     

塞来昔布对宫颈癌HeLa细胞放射增敏效应的观察

目的探讨环氧合酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人宫颈癌HeLa细胞株的放射增敏作用及其机制。方法MTT实验测定塞来昔布对宫颈癌HeLa细胞的毒性,筛选出塞来昔布的半数抑制浓度(IC50),实验分为不同浓度药物组(10、20、40、80μmol/L)、对照组和空白组。克隆形成实验检测20%IC50浓度的塞来昔布对He-La细胞的放射增敏作用,实验分为空白对照组、单纯放射组(2、4、68、Gy)、单纯加药组(药物浓度为20%IC50)、放射加药组(20%IC50药物浓度+2、4、68、Gy放射剂量),根据各组的克隆形成率,计算放射敏感性相关参数;流式细胞仪(FCM)分析细胞周期的分布情况,实验分为对照组和药物组(药物浓度为20%IC50)。结果MTT实验显示塞来昔布对HeLa细胞毒性呈现出浓度和时间依赖性,72 h的IC50是44μmol/L;克隆形成实验显示,放射加药组与单纯放射组相比,反映放射敏感性的指标平均致死剂量(D0)、准域剂量(Dq)、2 Gy照射的存活分数(SF2)均下降,放射增敏比(SER)升高。流式细胞术检测细胞周期S期细胞明显减少,G0~G1期细胞增多,细胞阻滞于G1期。结论塞来昔布能增强宫颈癌HeLa细胞的放射敏感性,其机制可能与促进细胞凋亡、抑制肿瘤细胞亚致死性损伤修复和促进肿瘤细胞周期再分布有关。     

塞来昔布对U266细胞株增殖和凋亡的研究

目的观察环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对骨髓瘤细胞株U266细胞的增殖抑制和凋亡诱导的影响,并通过比较单用塞来昔布和加用Caspase-3阻断剂Ac-DEVD-FMK后的U266细胞株的凋亡率以及Caspase-3的表达,探讨其诱导U266细胞株凋亡的分子机制。方法骨髓瘤细胞株U266细胞经不同浓度的塞来昔布处理后,应用CCK-8体外药物筛选法测定受试样品塞来昔布对人骨髓瘤细胞U266体外增殖有无抑制作用及作用强弱;Annexin V-FITC染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法测定不同实验组样品中Caspase-3总量的表达。结果塞来昔布浓度〉40μmol/L能抑制人骨髓瘤细胞U266体外增值,并呈浓度依赖性,IC50=66.83μmol/L。塞来昔布在40～120μmol/L浓度范围内能诱导人骨髓瘤细胞U266细胞凋亡,呈浓度依赖性。用Ac-DEVD-FMK阻断Caspase-3活性,塞来昔布诱导的U266细胞凋亡明显受抑。结论塞来昔布可诱导骨髓瘤细胞株U266细胞株凋亡,其机制涉及Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路。     

塞来昔布通过Wnt信号通路对人结肠癌细胞的影响

目的:观察非甾体类抗炎药物(NSAIDs)塞来昔布(celecoxib)对结肠癌细胞Wnt信号通路的影响,探讨塞来昔布抑制结肠癌细胞生长的机制。方法:MTT法测定塞来昔布(0、20、40、60、80和100μmol/L)对人结肠癌SW480细胞生长的影响;应用免疫细胞化学方法分析塞来昔布(0、20、40和80μmol/L)处理48h后细胞中β-catenin蛋白的分布表达情况;应用RT-PCR法分析塞来昔布(0、20、40和80μmol/L)处理48h后细胞中C-myc mRNA的表达水平。结果:MTT结果显示,塞来昔布能够抑制结肠癌细胞的生长增殖,且有剂量依赖性(P<0.05)和时间依赖性(P<0.05);免疫细胞化学法检测结果显示,细胞浆及细胞核内β-catenin蛋白随着塞来昔布浓度的增加表达显著下降(P<0.05);RT-PCR法检测结果显示,随着塞来昔布浓度的增加,C-myc mRNA表达下降,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:塞来昔布可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞增殖。     

塞来昔布对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B生长及其VEGF表达的影响

目的 研究塞来昔布对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的生长及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 应用不同浓度的塞来昔布作用于HEC-1-B细胞,MTF法检测塞来昔布作用于HEC-1-B细胞24、48、72h后,对HEC-1-B细胞增殖的影响.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析其对HEC-1-B细胞VEGF mRNA表达的影响,同时用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HEC-1-B细胞上清中VEGF蛋白表达量.结果 塞来昔布对HEC-1-B细胞的生长有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,塞来昔布能降低HEC-1-B细胞VEGF mRNA及蛋白的表达.结论 塞来昔布能抑制HEC-1-B细胞的生长及VEGF的分泌.     

NS-398对结肠癌细胞系HT-29放射增敏作用的观察

目的：研究COX-2抑制剂NS-398对结肠癌细胞系HT-29的放射增敏作用及其相关放射增敏机制。方法：25μmol/L NS-398预处理HT-29细胞24h后给不同剂量X线照射,以克隆形成实验检测NS-398放射增敏作用。DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡。分光光度法测定Caspase3、8、9活性。结果：25μmol/L NS-398对HT-29细胞有放射增敏作用,由Dq、D0计算放射增敏比(SER)分别为1.36、1.27。NS-398可以增强HT-29细胞的放射诱导凋亡敏感性,DNA凝胶实验中观察到典型的DNA“Ladder”。与照射组比较,NS-398预处理组细胞凋亡指数及Caspase3、8、9活性均增高（P＜0.05）,且Caspase3、9活性增高更为明显。结论：COX-2抑制剂NS-398在HT-29细胞中具有放射增敏作用,诱导细胞凋亡是其放射增敏的重要机制之一。     

塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响

目的：体外观察塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法,流式细胞仪（FCM）、吖啶橙/溴化乙啶染色结合荧光显微镜、Western印迹法等技术,研究塞来昔布对HT-29细胞增殖抑制的影响。结果：体外塞来昔布抑制HT-29细胞生长,呈浓度和时间依赖性。DNA直方图示典型的亚二倍体“凋亡峰”,凋亡率在（7.31±2.37）%～（48.30±2.86）%;塞来昔布使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例下降,呈一定剂量效应关系。典型的凋亡形态学改变：细胞体积缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等。凋亡比例呈剂量和时间依赖。塞来昔布下调细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2,CDK4蛋白表达、上调细胞周期素依赖蛋白激酶抑制因子P21WAF1/CIP1蛋白表达。结论：塞来昔布抑制HT-29细胞增殖、诱导凋亡可能与阻止细胞周期进展有关。     

塞来昔布抑制人结肠癌细胞SW-1116增殖并诱导其凋亡

目的 :探讨塞来昔布 ,一个环氧合酶 2选择性抑制剂 ,诱导人结肠癌SW 1 1 1 6细胞凋亡 .方法 :应用体外噻唑兰法、吖啶橙荧光染色法、透射电镜技术、流式细胞术等方法研究塞来昔布抑制人结肠癌细胞SW 1 1 1 6的增殖及诱导其凋亡的作用 .结果 :塞来昔布抑制SW 1 1 1 6细胞的增殖且呈剂量依赖性 ,给药处理 72h其IC50 为 (33.6± 1 .78) μmol/L ;AO荧光染色及透射电镜观察发现 4 0 μmol/L的塞来昔布作用 2 4h后一些细胞形态出现了典型的凋亡特征 ;给药 2 5 ,5 0 ,1 0 0μmol/L 4 8h流式细胞术周期分析结果显示 ,各治疗组均出现凋亡峰 .结论 :塞来昔布抑制人结肠癌细胞株SW 1 1 1 6细胞的增殖并诱导其凋亡     

胃泌素及丙谷胺对结肠癌细胞株HT-29 EGF和VEGF表达的影响

目的观察五肽胃泌素(PG)及其受体拮抗剂丙谷胺(PGL)对人结肠癌细胞株HT-29表皮生长因子(EGF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养结肠癌细胞株HT-29,用PG及PGL干预。放射免疫法测定EGF,ELISA法测定VEGF。结果在PG浓度为10~(-5)mol/L、10~(-6)mol/L时,PG组EGF明显高于空白对照组(P<0.01),PG+PGL组EGF明显低于PG组(P<0.01);在PG浓度为10~(-7)mol/L时,PG组与空白对照组以及PG+PGL组与PG组EGF含量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在PG浓度为10~(-5)mol/L时,PG组VEGF明显高于空白对照组(P<0.01),PG+PGL组VEGF明显低于PG组(P<0.01);在PG浓度为10~(-6)mol/L、10~(-7)mol/L,PG组与空白对照组以及PG+PGL组与PG组VEGF含量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论五肽胃泌素能促进体外培养结肠癌细胞株HT-29中EGF和VEGF的表达,而其受体拮抗剂丙谷胺能部分阻断这一作用。提示胃泌素的促结肠癌细胞生长作用可能与促进EGF和VEGF表达有关。丙谷胺可部分抑制其作用。     

大肠癌HT-29细胞亚系与母系转移能力和相关因子的比较

目的：探讨大肠癌细胞转移能力与肿瘤相关因素的关系。方法：用结肠癌HT－29亚系HT－29c和HT－29d细胞在裸大鼠体内建立转移模型，比较其与母系的转移能力。用ELISA法测定3个大肠癌细胞系的尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）及纤溶酶原抑制－1（PAI－1）含量；用免疫组化技术检测癌胚抗原和3－磷酸肌醇激酶（PI3－Kinase）在体内外的表达；用流式细胞仪测定癌胚抗原表达。结果：在裸鼠体内HT－29d细胞的肝转移率明显高于母系HT－29细胞，转移累及的脏器增多，在体外培养中，HT－29d细胞的uPA及PAI－1含量明显高于HT－29和WiDr细胞，在裸鼠体内HT－29d细胞的PI3－Kinase表达明显高于HT－29和WiDr细胞。结论：经裸鼠体内筛选的大肠癌HT－29细胞亚系表现出增强的肿瘤转移能力，UPA、PAI－1的含量及PI3－Kinase的表达与肿瘤转移能力有关。     

RhoC-shRNA对结肠癌细胞HT-29细胞生物学行为的影响

目的探讨RhoC-shRNA对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法构建RhoC-shRNA表达载体,以脂质体转染法将之稳定转染入HT-29结肠癌细胞株,Western blot检测转染细胞中RhoC蛋白表达的抑制情况,观察转染前后结肠癌细胞周期、凋亡和侵袭能力的变化。结果成功构建RhoC-shRNA真核表达载体,并且转染入结肠癌细胞后,细胞中RhoC蛋白表达水平明显受到抑制,并且抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,降低肿瘤细胞侵袭能力。结论下调RhoC蛋白的表达可抑制结肠癌细胞HT-29的体外增殖和侵袭能力。     

塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响

目的体外观察塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法采用噻唑蓝(MTT)比色法,流式细胞(FCM)、吖啶橙/溴化乙啶染色结合荧光显微镜、Western印迹法等技术,研究塞来昔布对HT-29细胞增殖的抑制和可能的机制.结果塞来昔布抑制HT-29细胞生长,呈浓度和时间依赖性.流式术检测出典型的亚二倍体"凋亡峰",凋亡率(7.31±2.37)%～(48.30±2.86)%;使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等.凋亡比例呈剂量和时间依赖.塞来昔布降低细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2和CDK4的表达、上调细胞周期素依赖蛋白激酶抑制因子p21WAF1/CIP1n蛋白表达.结论体外塞来昔布抑制HT-29细胞增殖,并诱导细胞凋亡;下调CDK2和CDK4蛋白表达,上调P21WAF1/CIPln蛋白表达.塞来昔布抑制HT-29细胞增殖、诱导凋亡可能与阻止细胞周期进展有关.     

在裸鼠体内连续传代的人类大肠癌HT-29细胞系分化程度逐渐增高现象的发现及研究

对在裸鼠体内连续传代的HT-23细胞系对宿主间质细胞影响的研究中,偶尔发现随着传代次数的增加,移植瘤细胞的分化程度逐渐增高,移植瘤逐渐由未分化癌变为高分化腺癌,表现为瘤细胞呈腺腔样排列,腺腔内有粘液分泌,间质细胞增多。第5代移植瘤出现了类似结肠绒毛样结构。带瘤裸鼠血清中单位瘤体积癌胚抗原(CEA)含量也逐渐下降。这一结果提示:异体恶性细胞在免疫缺陷动物体内连续传代有可能导致恶性的逆转。     

在裸鼠体内连续传代的人类大肠癌HT-29细胞系分化程度逐渐增高现象的发现及研究

对在裸鼠体内连续传代的HT-23细胞系对宿主间质细胞影响的研究中,偶尔发现随着传代次数的增加,移植瘤细胞的分化程度逐渐增高,移植瘤逐渐由未分化癌变为高分化腺癌,表现为瘤细胞呈腺腔样排列,腺腔内有粘液分泌,间质细胞增多。第5代移植瘤出现了类似结肠绒毛样结构。带瘤裸鼠血清中单位瘤体积癌胚抗原(CEA)含量也逐渐下降。这一结果提示:异体恶性细胞在免疫缺陷动物体内连续传代有可能导致恶性的逆转。     

人结肠癌细胞HT-29血管生成能力与微缺氧的关系

目的观察HT-29细胞在微缺氧下的血管生成能力,检测OPN的表达,以探讨其向恶性表型转化的潜在机制。方法参照体内肿瘤的氧分压,建立微缺氧模型。内皮细胞小管形成试验检测体外促进新生血管形成的能力。将HT-29细胞微缺氧处理0、6、12、24、48小时,RT-PCR和Western blot检测OPN的mRNA和蛋白表达。结果微缺氧组内皮细胞形成的管状结构数为（28.5±3.6）,明显多于对照组（12.4±2.8）,差异具有统计学意义（P〈0.01）。微缺氧6h,HT-29细胞OPN的mRNA和蛋白无明显变化,随着微缺氧时间的延长,其表达逐渐上调,24h达顶峰,48h与24h无显著差异。结论微缺氧能诱导HT-29细胞促进新生血管形成,而促进其向恶性表型转化。微缺氧下OPN普遍上调,OPN可能是微缺氧下继HIF-1α之外的另一重要调控因子,该调控因子与微缺氧诱导的恶性表型密切相关。