白血病抑制因子对K62细胞增殖、凋亡及p53蛋白表达的影响

目的 探讨白血病抑制因子(LIF)体外对K562细胞增殖、凋亡的影响及机制.方法 取对数生长期K562细胞接种于96孔板中,随机分为对照组和观察1～3组,分别加入质量浓度为0、5、10、40μg/L的重组人LIF,继续培养6、12、24、48 h;应用MTT法、Hoechst染色法观察各组K562细胞增殖活性、凋亡率,采用免疫组化法检测观察3组和对照组p53蛋白表达情况.结果 观察1～3组不同时间细胞增殖活性均显著低于对照组,且观察1组＞观察2组＞观察3组、6 h＞12 h＞24 h＞48 h(P均＜0.05);观察1～3组不同时间细胞凋亡率均显著高于对照组,且观察1组＜观察2组＜观察3组、6 h＜12 h ＜24 h＜48 h(P均＜0.05);观察3组各时间点p53蛋白阳性表达率均明显高于对照组,且6 h＜12 h＜24 h＜48 h(P均＜0.05).结论 LIF能以浓度—时间依赖性抑制K562细胞 增殖并诱导其凋亡,机制可能为上调p53蛋白表达.     

白藜芦醇对白血病K562细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的 探讨白藜芦醇对白血病K562细胞生长的影响及相关作用机制.方法 用不同浓度白藜芦醇作用于K562细胞,CCK-8法观察白藜芦醇对K562细胞生长增殖的影响,AnnexinV-FITC/PI双染法观察白藜芦醇对K562细胞凋亡的影响,PI染色法观察白藜芦醇对K562细胞周期的影响,Western blot法检测K562细胞中的Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Cyclin D1蛋白.结果 白藜芦醇作用后的K562细胞的增殖被抑制并且凋亡增加,呈时间-剂量依赖性;同时,凋亡相关分子Bcl-2、Bcl-xl表达下调,Bax表达上调;白藜芦醇作用K562细胞后,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞周期调节蛋白Cyclin D1表达下降.结论 白藜芦醇可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调细胞内Bcl-2、Bcl-xl、Cyclin D1表达并上调Bax的表达有关.     

旋毛虫培养液对人白血病细胞K562凋亡和坏死的影响

在对旋毛虫的研究过程中，有研究者曾对旋毛虫与肿瘤的关系进行了探讨。发现感染旋毛虫的小鼠再接种某些肿瘤细胞后，肿瘤细胞生长缓慢，甚至完全不生长，提示旋毛虫感染可以提高小鼠对肿瘤的防御机能。为了解旋毛虫致死肿瘤细胞的相关机制，本实验观察旋毛虫培养液对K562细胞凋亡和坏死的影响，现将结果报告如下。     

硒诱导红白血病K562细胞凋亡机制的探讨

目的 探讨微量元素硒对人红白血病细胞株（K562细胞株）诱导凋亡的机制。方法 采用免疫光技术检测加硒培养组（实验组）K562细胞的凋亡细胞核变化和凋亡小体的数量,同时还应用化学检测与细胞凋亡有关的酶。结果 实验组凋亡细胞明显增多,且呈剂量依赖性,实验组细胞内谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px)的活性及环磷酸苷（cAMP)的含量也明显高于对照（P＜0．01）。结论 硒能够诱导K562细胞凋亡,可提高该细胞内GSH－Px的活性及cAMP的含量。     

弓形虫诱导人白血病细胞K562凋亡的实验观察

目的 探讨弓形虫对体外培养的人白血病细胞K562（简称K562细胞）有无抑制作用和诱导细胞凋亡作用。方法 取培养至对数生长期的K562细胞（浓度为5×10^-4/ml和1×10^-6/ml）分别接种于96孔培养板（100 μl/孔）及50 ml培养瓶（1.5 ml/瓶）中，加入不同浓度的弓形虫速殖子（1×10⁴、2×10⁴、4×10⁴、8×10⁴及16×10⁴个/ml），作用48 h, 用四甲基氮噻唑蓝（MTT）法检测其对K562细胞增殖的抑制作用；荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡。 结果 上述不同浓度弓形虫速殖子作用48 h，对K562细胞增殖的抑制率依次为17%、28%、48%、50%及55%。各实验组吸光度（A₄₉₀）与对照组比较差异均有统计学意义（t=3.606及5.918， P<0.05； t=9.171、7.841、7.067， P<0.01）。荧光显微镜观察实验组培养的K562细胞，出现细胞核固缩及凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳见DNA梯形条带。流式细胞仪检测到细胞凋亡峰（48 h），上述不同浓度弓形虫速殖子诱导K562细胞凋亡数分别占总数的5.53%、7.12%、10.34%、21.14% 及29.68%。对照组未出现凋亡小体。 结论 弓形虫速殖子对体外培养K562细胞增殖有明显的抑制作用，并可诱导K562细胞凋亡。     

青蒿琥酯诱导白血病K562细胞凋亡的临床研究

青蒿素是从菊秋植物黄花蒿中提取的有效单体 ,是一种新的化学结构抗疟药。青蒿琥酯是其衍生物 ,是具有过氧化桥的倍半萜内酯类化合物 ,具有水溶性好、抗疟活性高等特点。近年来 ,有人报道青蒿琥酯具有体内外抗肿瘤作用 ,对人肝癌细胞有诱导凋亡作用 [1]。2 0 0 2年 7月～ 2 0 0 3年 3月 ,我们观察了青蒿琥酯对体外培养的人慢性粒细胞白血病细胞系K5 62细胞的凋亡诱导作用 ,旨在为其治疗肿瘤提供理论依据。1　材料与方法1 .1　材料　注射用青蒿琥酯 ,5 %碳酸氢钠 1 ml,RP-MI1 640培养液 ,4℃保存。1 .2　方法1 .2 .1　细胞系及细胞培养　K…     

防风多糖诱导人白血病K562细胞凋亡的研究

目的:探讨防风多糖对体外培养人白血病K562细胞有无调亡诱导作用.方法:MTT法检测防风多糖对K562细胞的增殖抑制作用;荧光显微镜观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂;流式细胞术采用Annexin-V/PI双染实验检测细胞凋亡.结果:MTT法检测显示防风多糖对K562细胞具有显著生长抑制作用;荧光显微镜下观察发现防风多糖作用的K562细胞中出现核固缩、凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳呈现DNA梯形条带即(DNA ladder);流式细胞仪分析结果显示细胞凋亡百分率随防风多糖浓度增加而增加.结论:防风多糖对体外培养人白血病K562细胞具有增殖抑制及凋亡作用.     

香芹芥酚诱导人白血病K562细胞凋亡的研究

目的探讨香芹芥酚对人白血病K562细胞凋亡作用的影响。方法采用不同浓度的香芹芥酚处理体外培养的K562细胞,MTT比色法观察细胞存活率;Hoechst染色法观察细胞凋亡形态学变化,Annexin-V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率;Western-blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达水平的改变。结果人白血病K562细胞存活率随着香芹芥酚作用时间延长和浓度增高而降低（P〈0.05）。香芹芥酚处理K562细胞48 h后出现较典型的细胞凋亡特征形态学改变,Annexin-V/PI双染法显示随着香芹芥酚作用浓度增大,凋亡细胞比例增大。West-ern-blot结果表明,香芹芥酚可以浓度依赖性降低凋亡相关基因Bcl-2的表达和增加Bax基因的表达。结论香芹芥酚具有诱导人白血病K562细胞凋亡的作用,其分子机制可能通过调控Bcl-2、Bax的基因及蛋白水平而诱导凋亡。     

露蜂房蛋白体外诱导K562细胞凋亡的作用及其机制

目的探讨露蜂房蛋白(NVP)体外诱导人红白血病细胞系K562细胞凋亡的作用及其机制。方法将露蜂房蛋白NVP1、NVP2、NVP3及NVP4分别作用于K562细胞,采用细胞培养、Hoechst 33258荧光染色技术观察K562细胞形态变化;采用免疫组织化学方法检测K562细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cas-pase-3)表达。结果NVP1~NVP4作用后K562细胞生长缓慢,数量减少,胞质内颗粒增多,并出现大量空泡,细胞碎片逐渐增多;Hoechst33258荧光染色显著增强,染色质呈致密浓染的块状或粗颗粒状荧光。K562细胞cas-pase-3蛋白表达明显增加,与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05)。结论NVP能抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡;其作用机制可能是使caspase-3蛋白表达升高和活化。     

富硒麦芽粉水提取物通过细胞衰老和凋亡抑制人白血病K562细胞的增殖

目的 研究富硒麦芽粉水提取物能否抑制K562细胞增殖的作用.方法 Coulter细胞计数法检测细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期分布以及细胞内活性氧自由基的水平,DNA特异染料Hoechst 33342染色检测染色质凝集,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白的表达,衰老相关的β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老.结果 富硒麦芽粉水提取物能抑制K562细胞的增殖,IC50值为0.5 mg/mL.进一步研究发现：富硒麦芽粉水提取物使细胞阻滞在G2/M期、增加细胞内活性氧自由基水平,染色质发生凝集,引起细胞凋亡标志蛋白的切割.此外,4 mg/mL的水提取物能引起60％的细胞发生衰老.结论 富硒麦芽粉水提取物具有明显的抑制K562细胞增殖的作用,其机制与诱导细胞衰老和凋亡有关.     

凋亡抑制基因XIAP与p53在非小细胞肺癌中表达的相关性

目的 研究凋亡抑制基因XIAP与抑癌基因p53在非小细胞肺癌中的表达及两者的相关性.方法 转染特异短发夹样RNA(XIAP shRNA)序列的表达载体至非小细胞肺癌细胞A549中,应用半定量PT PCR方法测定转染前后细胞中XIAP与p53的表达情况并进行对比.结果 PT-PCR结果显示XIAP在阳性转染组的表达较阴性转染组、未转染组细胞表达明显降低;p53在阳性转染组表达升高,加入顺铂后,阳性转染组XIAP mRNA表达较阴性转染组、未转染组细胞降低,p53在阳性转染加顺铂组的表达明显提高.结论 非小细胞肺癌中XIAP与p53呈负相关,高表达的XIAP抑制野生型p53的表达,反之XIAP受到抑制后野生型p53表达增高,促进非小细胞肺癌细胞凋亡.     

白血病细胞p53和bcl—2表达与化疗药诱导凋亡的关系

目的 探索ｐ５３和ｂｃｌ－２表达及化疗药物体外诱导白血病细胞凋亡与患者化疗疗效的关系。方法 用免疫组化法测定４２例急性白血病患者骨髓细胞ｐ５３和ｂｃｌ－２表达水平;用Ｔｃｌ－２表达水平;用ＴｄＴ介导的脱氧核苷酸切口和末端标记法（Ｔｕｎｅｌ法）、Ｗｒｉｇｈｔ－Ｇｉｅｍｓａ梁色及超微结构观察等方法检测化疗药物诱导的白血病细胞凋亡。结果 ４２例急性白血病患者ｐ５３和ｂｃｌ－２总体表达水平显著高于对照组。     

急性淋巴细胞白血病X-连锁凋亡抑制蛋白的表达及意义

急性淋巴细胞白血病（ALL）发生和发展与凋亡受阻密切相关。X-连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）在包括ALL在内的许多恶性肿瘤中过度表达并同时伴随着较差的预后。我们以初治、复发ALL患者及正常志愿者为研究对象,通过RT-PCR法检测XIAP的表达,观察正常人与ALL患者之间XIAP表达的差异。     

藤黄酸调控白血病K562细胞GFI-1表达及对细胞增殖和凋亡的影响

目的: 探讨藤黄酸对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法：体外培养K562细胞,采用CCK-8法检测不同浓度藤黄酸(0、0.2、0.4、0.8、1.2、2.0μmol/L)处理24、48、72h后K562细胞增殖率;用流式细胞术检测K562细胞的凋亡和周期;采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR)）和Western blot法检测独立生长因子1(GFI-1) 的mRNA及蛋白表达水平。结果： 藤黄酸可以抑制K562细胞的增殖,并呈剂量、时间依赖性;0.4μmol/L藤黄酸处理24h后的K562细胞凋亡率增加;藤黄酸对GFI-1的mRNA表达无显著影响,藤黄酸可以下调GFI-1蛋白的表达;藤黄酸及蛋白酶体抑制剂（MG132）共处理后的K562细胞GFI-1蛋白水平较藤黄酸组升高;藤黄酸及氯喹（CQ）共处理后的K562细胞GFI-1蛋白水平与藤黄酸组无统计学差异（P>0.05）。结论： 藤黄酸可以有效抑制K562细胞的增殖并诱导细胞凋亡;藤黄酸可以诱导K562细胞G0/G1期及S期阻滞;藤黄酸通过蛋白酶体途径促进GFI-1蛋白降解。     

RSVA314对白血病细胞K562 细胞迁移和增殖的影响

目的 探讨RSVA314对白血病细胞K562 细胞迁移和增殖的影响,为RSVA314可能治疗白血病提供实验依据。方法 通过体外培养K562 细胞,实验分为四组：生理盐水对照组、RSVA314低剂量组（1 μM）、RSVA314中剂量组（5 μM）、RSVA314高剂量组（25 μM）。采用CCK-8方法检测K562细胞的增殖活性;采用Transwell 迁移实验检测K562细胞的迁移能力;采用Western blot检测K562细胞蛋白激酶B（AKT）的表达。结果 与对照组相比,RSVA314中、高剂量组OD值明显增加（P<0.05,P<0.01）,提示其可抑制K562细胞的增殖活性。RSVA314低、中、高剂量组穿膜细胞数量明显减少,与对照组相比有明显的差异（P<0.05,P<0.01,P<0.01）。Western blot 检测显示RSVA314中、高浓度组可抑制AKT磷酸化的表达,与对照组相比有显著差异（P<0.05,P<0.01）。     

齐墩果酸对K562细胞系VEGF表达影响的实验研究

目的观察齐墩果酸(Oleanolic Acid,OA)对慢性粒细胞白血病系K562细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法采用MTT实验观察OA对体外培养K562细胞增殖抑制作用,用RT-PCR以及Western印迹法研究OA处理后K562细胞中VEGF基因表达的变化。并用ELISA方法检测培养液中VEGF的表达。结果OA能抑制K562细胞生长,呈一定的量效特征;并能抑制K562细胞中VEGF的表达。结论OA通过下调VEGF表达,抑制白血病细胞的增殖。     

叠氮胸苷诱导人类慢性粒细胞白血病细胞株K562凋亡的研究

目的观察叠氮胸苷（AZT）对人类慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖的抑制作用,探讨其治疗白血病的可行性。方法以不同浓度AZT处理K562细胞,用四氮甲唑蓝实验测定AZT作用于细胞株48 h的IC50,瑞氏染色观察细胞凋亡形态学变化,流式细胞仪检测细胞周期变化,Annexin-V/PI双染法分析细胞凋亡比例。结果AZT对K562细胞株有明显增殖抑制作用,且抑制作用呈时间与浓度依赖性增长;AZT处理48 h后可见细胞凋亡形态学变化及白血病细胞株S期比例增大;Annexin V/PI双染法显示早期凋亡细胞比例增大。结论AZT有诱导白血病细胞凋亡的作用。     

玉米苞叶对动脉粥样硬化家兔平滑肌细胞凋亡及p53和Fas蛋白表达的影响

目的：探讨玉米苞叶防治动脉粥样硬化（AS）的机制。方法：选用大耳白家兔，复制家兔AS模型，随机分为动脉粥样硬化模型组，玉米苞叶组和正常对照组，成模后给予玉米苞叶煎剂治疗，8w后处死家兔，采用流氏细胞术检测平滑肌细胞的凋亡率以及凋亡相关基因p53和Fas蛋白表达。结果：模型组血管平滑肌细胞的凋亡率明显高于对照组（P＜0．05），p53和Fas蛋白的表达增强（P＜0．05），主动脉壁肉眼观测出现典型斑块。玉米苞叶组平滑肌细胞的凋亡率明显低于模型组（P＜0．05），p53和Fas蛋白表达下调（P＜0．05）；主动脉斑块面积较模型组明显减小，结论：玉米苞叶通过调节p53和Fas蛋白表达而调节AS家兔平滑肌细胞凋亡。     

急性白血病bcl-2、p53基因蛋白细胞表达水平及与化疗效果的关系

为探讨ｂｃｌ－２、ｐ５３基因蛋白在急性白血病（ＡＬ）细胞表达水平、相互关系及对化疗药耐受的影响，采用免疫组化方法检测ｂｃｌ－２及ｐ５３蛋白阳性水平，临床及体外实验以细胞凋亡为指标观察ｂｃｌ－２蛋白与ＡＬ对ＤＮＲ的耐受。结果：ｐ５３和ｂｃｌ－２蛋白在４６例ＡＬ细胞的阳性率分别为２１７％和６３０％（Ｐ＞００５），与细胞类型、病情有关。ｂｃｌ－２阳性在耐药组多于在缓解组（８８５％、３５０％，Ｐ＜００１）。两种蛋白均阳性的８例均不缓解，均阴性者的缓解率为１１／１３。１例ｂｃｌ－２低表达ＡＬ细胞与ＤＮＲ（１０ｍｇ／Ｌ）共育后有明显的细胞凋亡，４例高表达者加大药物剂量才发生。结果提示，成人ＡＬ细胞有ｂｃｌ－２和ｐ５３蛋白异常表达，且与ＡＬ类型、病情及耐药有关，联合检测基因蛋白更有助于对化疗效果的预测。克服ｂｃｌ－２所致的耐药应设法下调ｂｃｌ－２的表达     

细胞凋亡和p53、bc1-2蛋白在肝细胞癌中的表达

目的：探讨HCC中细胞凋亡情况及其与p53和bcl-2蛋白表达的关系。方法：细胞凋亡采用原位细胞凋亡检测法．p53和bcl-2蛋白表达采用免疫组他方法．细胞凋亡与p53、bcl-2蛋白表达的关系采用双标记法进行检测。结果：70例HCC中。癌组织和癌周组织中细胞凋亡指数(1000个细胞中)分别为3．63士1．96和10．63±3.64，bcI-2和突变型p53置自检出率分别为22．9％和42．9％．bcl-2主要表达在癌周组织中，抑制肝细胞凋亡。而p53则仅表过在癌组织，抑制癌细胞凋亡。双染色显示细胞凋亡与p53或bel-2不同时在一个细胞中表选。结论：HCC癌细胞凋亡减弱一突变型p53蛋白是癌细胞凋亡减弱的主要原因．而be-2则可能在维持HCC的肝脏功能方面具有重要作用。