白血病抑制因子对K62细胞增殖、凋亡及p53蛋白表达的影响

目的 探讨白血病抑制因子(LIF)体外对K562细胞增殖、凋亡的影响及机制.方法 取对数生长期K562细胞接种于96孔板中,随机分为对照组和观察1～3组,分别加入质量浓度为0、5、10、40μg/L的重组人LIF,继续培养6、12、24、48 h;应用MTT法、Hoechst染色法观察各组K562细胞增殖活性、凋亡率,采用免疫组化法检测观察3组和对照组p53蛋白表达情况.结果 观察1～3组不同时间细胞增殖活性均显著低于对照组,且观察1组＞观察2组＞观察3组、6 h＞12 h＞24 h＞48 h(P均＜0.05);观察1～3组不同时间细胞凋亡率均显著高于对照组,且观察1组＜观察2组＜观察3组、6 h＜12 h ＜24 h＜48 h(P均＜0.05);观察3组各时间点p53蛋白阳性表达率均明显高于对照组,且6 h＜12 h＜24 h＜48 h(P均＜0.05).结论 LIF能以浓度—时间依赖性抑制K562细胞 增殖并诱导其凋亡,机制可能为上调p53蛋白表达.     

生长抑素对人肝癌HepG2细胞增殖及cyclinD1、cyclinE蛋白表达的影响

目的探讨生长抑素治疗肝癌的作用机制。方法取对数生长期HepG2细胞以不含血清的培养液使其周期同步化,以含血清培养液继续培养24h后随机分为观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组,前三组分别加入质量浓度为100、200、400μg／（kg·d）的生长抑素,对照组加入等体积RPMll640培养液24—72h。MTT比色法观察各组细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫组化法检测周期素D1（cyclinD1）、周期素E（cyclinE）蛋白表达。结果观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组不同时间点细胞增殖抑制率均显著高于对照组,且同一时间点观察Ⅲ组〉观察Ⅱ组〉观察I组,同组中72h〉48h〉24h（P〈0．05、0．01）;观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组G,期细胞比例均显著高于对照组,观察Ⅱ、Ⅲ组S期细胞比例均显著低于对照组（P〈0．05、0．01）;观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组cyclinD1、cyclinE蛋白水平均显著低于对照组,且观察Ⅲ组〈观察Ⅱ组〈观察Ⅰ组（P〈0．05、0．01）。结论生长抑素可通过下调cyclinD1、cyclinE表达抑制HepG2细胞增殖,此可能为其治疗肝癌的作用机制之一。     

靶向抑制乳腺癌细胞GLS1基因表达对癌细胞凋亡的影响

目的探讨抑制乳腺癌细胞谷氨酰胺酶(GLS) 1基因表达对癌细胞凋亡的影响。方法参照Lipofectamine~(TM) 2000说明将合成的GLS1 siRNA及无干扰作用的siRNA转染MCF-7细胞,分别为GLS1-siRNA组和阴性对照组,并设置空白对照组,转染48 h后,Western印迹检测GLS1、凋亡相关蛋白survivin、p53及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)信号通路PI3K和磷酸化(p-AKT)的蛋白表达; 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测GLS1-siR-NA转染24、48和72 h的细胞活力;流式细胞仪检测GLS1-siRNA转染48 h的细胞凋亡率。结果转染GLS1-siRNA的MCF-7细胞GLS1蛋白表达显著低于空白对照组(P<0. 05);与空白对照组比较,GLS1-siRNA组细胞在转染24、48和72 h的细胞活力均显著降低,细胞凋亡率显著升高,survivin、PI3K和p-AKT蛋白表达均显著降低,p53蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论抑制GLS1基因在乳腺癌中的表达可降低细胞活力,促进细胞凋亡及下调PI3K/AKT信号通路,其中诱导细胞凋亡的方式是下调survivin表达和上调p53表达。     

塞来昔布对嘌呤氨基核苷诱导的足细胞凋亡的影响

以条件永生性小鼠足细胞株为研究对象，分为正常对照组（CON组）、嘌呤霉素氨基核苷组（PA组）、地塞米松组（DEX组）、塞来昔布组（CELE组）、地塞米松＋嘌呤氨基核苷组（DEX＋PA组）、塞来昔布＋嘌呤氨基核苷组（CELE＋PA组）。在0、8、24和48h检测足细胞凋亡水平、caspase-3蛋白酶活性水平及凋亡过程中p53水平。结果显示，与CON组比较，CELE、DEX组凋亡率无明显变化，PA组凋亡率明显增高（P〈0．01），而CELE＋PA、DEX＋PA组凋亡率较PA组明显下降（P均〈0．05）。PA组24h时，p53表达较CON组明显增多（P〈0．01），用CELE、DEX干预后明显降低（P均〈0．05）。认为塞来昔布可以抑制PA诱导的足细胞凋亡，且p53参与了PA诱导的足细胞凋亡过程。     

低剂量辐射对荷人小细胞肺癌(NCI-H446)裸小鼠移植瘤细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响

目的 研究低剂量照射（LDR）对荷人小细胞肺癌（NCI-H446）裸小鼠移植瘤细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响。方法 35只荷人小细胞肺癌（NCI-H446）裸小鼠，随机分为7个实验组，假照组（0mGy）；D1组（75mGy）；D2组（4Gy）；D1-12h＋D2组（D1照射后12h予以D2）；D1-24h＋D2组（D1照射后24h予以如）；D1-48h＋D2组（D1照射后48h予以D2）；D1-72h＋D2组（D1照射后72h予以D2）。各实验组不同方式照射后4d，荷瘤裸鼠全部处死，采用免疫组化技术检测荷瘤组织的P=53、Bcl-2、Bax的蛋白表达水平。结果 D1组照射后，小细胞肺癌细胞的p53、Bcl-2的蛋白表达呈下降趋势，Bax蛋白表达呈上升趋势，但与假照组比较，无明显差异（P〉0．05）；D2组、D1＋D2组的p53、Bcl-2蛋白表达明显减少，Bax蛋白表达明显增多，与假照组比较差异显著（P〈0．05）；而D1＋D2组与D2组比较，差异显著（P〈0．05），以D1＋D2组p53、Bcl-2蛋白的表达减少、Bax蛋白的表达增多更为明显。结论 低剂量辐射可能在一定程度上下调了小细胞肺癌细胞的p53、Bcl-2的蛋白表达，上调了Bax蛋白的表达，同时对其后的大剂量照射有协同作用。     

rhEPO对视网膜缺血再灌注损伤大鼠视网膜神经细胞凋亡及Fas、FADD表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素（rhEPO）对视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）所致视网膜神经细胞凋亡的保护作用及机制。方法将52只Wistar大鼠随机分为对照组4只,不行特殊处理;模型组和观察组各24只,均通过前房穿刺加压法制成RIRI模型,并分别于缺血前24h腹腔注射生理盐水和rhEPo,于1～72h应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记（TUNEL）法检测视网膜神经细胞凋亡,采用过氧化物酶标记的sP免疫组化方法检测Fas、Fas相关蛋白（FADD）表达。结果对照组未见细胞凋亡及Fas、FADD表达。观察组与模型组视网膜神经细胞凋亡及Fas、FADD表达均出现于再灌注后6h,24h达到高峰,48h开始下降,其中观察组细胞凋亡在12、24、48h明显低于模型组（P〈0．05）,Fas、FADD表达在6、12、24h明显低于模型组（P〈0．05）。结论rhEPO可明显减轻RIRI所致大鼠视网膜神经细胞凋亡,可能机制为下调Fas、FADD表达。     

藤黄酸调控白血病K562细胞GFI-1表达及对细胞增殖和凋亡的影响

目的: 探讨藤黄酸对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法：体外培养K562细胞,采用CCK-8法检测不同浓度藤黄酸(0、0.2、0.4、0.8、1.2、2.0μmol/L)处理24、48、72h后K562细胞增殖率;用流式细胞术检测K562细胞的凋亡和周期;采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR)）和Western blot法检测独立生长因子1(GFI-1) 的mRNA及蛋白表达水平。结果： 藤黄酸可以抑制K562细胞的增殖,并呈剂量、时间依赖性;0.4μmol/L藤黄酸处理24h后的K562细胞凋亡率增加;藤黄酸对GFI-1的mRNA表达无显著影响,藤黄酸可以下调GFI-1蛋白的表达;藤黄酸及蛋白酶体抑制剂（MG132）共处理后的K562细胞GFI-1蛋白水平较藤黄酸组升高;藤黄酸及氯喹（CQ）共处理后的K562细胞GFI-1蛋白水平与藤黄酸组无统计学差异（P>0.05）。结论： 藤黄酸可以有效抑制K562细胞的增殖并诱导细胞凋亡;藤黄酸可以诱导K562细胞G0/G1期及S期阻滞;藤黄酸通过蛋白酶体途径促进GFI-1蛋白降解。     

Ad-Gax转染对缺氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的观察Gax基因转染对缺氧性肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）凋亡及其相关基因表达的影响。方法腺病毒介导Gax转染体外原代培养的PASMCs。透射电镜观察细胞凋亡形态;原位细胞凋亡检测法观察Ad-Gax转染前后在常氧和缺氧处理2h,6h、12h、24h、48h大鼠PASMCs凋亡情况;免疫细胞化学法测PASMCsBcl-2、Bax蛋白表达。结果透射电镜观察到Ad-Gax转染后PASMCs产生凋亡现象。未转染缺氧刺激前后,均无或可见极少量的阳性细胞;Ad-Gax转染后,如无缺氧刺激,也无或仅可见少量的阳性细胞,予缺氧刺激后,阳性细胞显著增多,尤其在转染后24～48h更明显。转染组常氧、缺氧2h,6h、12h、24h、48h细胞凋亡百分率均显著高于未转染组（P〈0．01）。Ad-Gax转染前,与常氧时比较,缺氧刺激PASMCs后,Bax蛋白表达略为升高但无统计学意义;而Bcl-2蛋白表达显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。Ad-Gax转染PASMCs后,缺氧刺激使Bcl-2蛋白表达显著降低（P〈0．01）,Bax蛋白表达显著增高（P〈0．01）。转染组细胞凋亡率与Bcl-2／Bax比值呈负相关（r=-0．53,P〈0．01）。结论Ad-Gax转染可诱导缺氧性PASMCs凋亡,其机制可能是通过上调Bax蛋白和下调Bcl-2蛋白的表达,尤其是通过降低Bcl-2／Bax比值实现的。     

胰岛素对心肺复苏术后大鼠海马神经元凋亡及神经功能缺损评分的影响

目的探讨胰岛素对心肺复苏术（CPR）后大鼠海马神经元凋亡及神经功能缺损评分的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为3组,对照组（6只）、CPR组（12只）、胰岛素组（12只）。经食管超速起搏诱发心室颤动6min后行CPR。大鼠自主循环恢复后10min,胰岛素组于左侧脑室内注射12．5μl（1U）普通胰岛素,对照组和CPR组注射等量等渗盐水。在不同时间点应用神经功能缺损评分（NDS）评价大鼠神经功能,应用TUNEL染色法观察各组大鼠海马神经元凋亡情况,在CPR前后监测大鼠血糖。结果①CPR后大鼠NDS评分结果：对照组大鼠在各时间点NDS评分无差异;CPR后24、48、72h,CPR组和胰岛素组的NDS评分均低于对照组（P〈0．01）;CPR后7d,三组大鼠NDS评分差异无统计学意义;CPR后24h,胰岛素组NDS评分高于CPR组（P〈0．01）。组内比较,CPR组大鼠复苏后24h的NDS评分最低,此后评分逐渐升高;胰岛素组复苏后48h的NDS最低,此后评分逐渐升高。②CPR组海马CA1区凋亡神经元（124．8±17．4）高于对照组（5．1±3．2,P〈0．01）和胰岛素组（92．8±7．5,P〈0．05）;胰岛素组凋亡神经元高于对照组（P〈0．01）,差异均有统计学意义。③相关性分析：24、72h的NDS评分与凋亡神经元计数呈负相关（r=-0．893,P=0．030;r=-0．767,P=0．026）。④CPR前后不同时间点,CPR组与胰岛素组的静脉血糖差异无统计学意义（P〉0．05）。结论胰岛素可能通过抑制CPR后大鼠海马CAI区神经元的凋亡,达到其保护神经功能的作用。     

IGFBPrP1 siRNA诱导的大鼠肝星状细胞凋亡及其机制

目的研究IGFBPrP1 siRNA对大鼠肝星状细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）,分别设立：正常对照组,阴性对照组,IGFBPrP1 siRNA转染组。IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞,转染不同时间后,用CCK-8试剂盒检测肝星状细胞增殖的变化,AnnexinV/PI双标法流式细胞术检测肝星状细胞凋亡的变化,免疫细胞化学染色法检测P53及Bcl-2蛋白表达的变化。结果 （1）IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞不同时间（24、48、72 h）后,转染组细胞增殖受到抑制且凋亡率明显增高,与正常对照组及阴性对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0.01）;（2）IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞48 h后,与正常对照组及阴性对照组相比,转染组P53蛋白的表达量显著增高（P〈0.01）;Bcl-2蛋白的表达明显降低（P〈0.01）。结论 IGFBPrP1 siRNA能显著抑制大鼠肝星状细胞增殖且能促进其凋亡;上调P53的表达,下调Bcl-2的表达可能是IGFBPrP1 siRNA诱导大鼠肝星状细胞凋亡的途径之一;推测抑制IGFBPrP1的表达有可能成为治疗肝纤维化的新靶点。     

三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞周期的影响

目的：探讨三氧化二砷(As2O3)对人类慢性髓系白血病细胞系(K562)细胞周期及其凋亡的影响。方法：将K562细胞与不同浓度的As2O3共同孵育，在不同时间点应用MTT方法检测K562细胞存活率，并用流式细胞仪检测As2O3的致凋亡作用，同时对As2O3作用后的K562细胞进行细胞周期分析及时相性周期蛋白表达检测。结果：As2O3明显抑制K562细胞增殖并表现为时间和剂量依赖性；在2．0--10．0μmol/L梯度浓度As2O3的作用下，细胞于12—24h时段内无明显凋亡现象，但K562细胞明显阻滞于G2／M期时相，同时周期调控蛋白cyclinE表达下调，cyclinB1表达基本不变。结论：As2O3可抑制K562细胞增殖，但其抑制机制不在于通过诱导凋亡，而依靠诱发K562细胞的G2／M期阻滞。     

银杏叶提取物对体外循环脑损伤的干预作用

目的探讨体外循环（CPB）脑损伤的发生机制及银杏叶提取物（GBE）的干预作用。方法选择44例需CPB下手术的风湿性心脏瓣膜病患者,随机分为观察组和对照组各22例。观察组在CPB预充液中加入GBE（2mg／kg体质量）,对照组应用常规预充液。分别在术前、主动脉阻断后1h、术后6、12、24、48h抽取静脉血标本,检测血清IL-10、IL-18和S100蛋白水平。结果观察组血清IL-10在术后6h开始升高,至术后48h达高峰,且显著高于对照组（P〈0．05）。观察组血清IL-18主动脉阻断1h高于对照组（P〈0．05）,但术后6、12、24、48h显著低于对照组（P均〈0．05）。对照组S100蛋白自CPB结束开始升高,持续至实验结束;自主动脉阻断1h开始至术后48h血清S100蛋白水平对照组均显著高于观察组（P均〈0．05）。结论CPB心脏直视手术细胞因子IL-18参与脑组织损伤过程,GBE可调节细胞因子,显著减轻CPB引起的脑损伤。     

肝移植大鼠肝窦内皮细胞细胞凋亡与移植肝肝细胞损害的关系

目的探讨冷保存肝移植大鼠肝窦内皮细胞（SEC）细胞凋亡与移植肝肝细胞损害的关系。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组（n=6）、UW1h肝移植组（11=48）、UW12h肝移植组（n=48）。参照Kamada的方法行原位肝移植（OLT）。观察大鼠I68h存活率。分别于术后不同时相点采取血液及组织标本，检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）及透明质酸（HA）水平；TUNEL法检测SEC凋亡，透射电镜观察细胞凋亡的形态学改变。结果UW12h组168h存活率为50％，显著低于UW1h组（F=6．39，P〈0．05）。UW12h组肝移植后血清ALT、HA水平明显高于UW1h组（F=3．99，P〈0．05；F=12．43，P〈0．05），两组大鼠ALT水平均于术后6h达高峰。UW12h组SEC凋亡指数（AI）明显高于UW1h组和假手术组（F值分别为63．58和86．58，P值均〈0．01），两组大鼠SEC的AI也于术后6h达高峰，与血中丙氨酸氨基转移酶（ALT）的高峰时相点一致。且两组大鼠SEC的AI均与ALT水平呈显著正相关（，值分别为1．0和0．962，P〈0．05）。结论SEC凋亡程度与移植肝肝细胞损害呈显著正相关，SEC凋亡是冷保存再灌注损伤的关锋环节。     

拉帕替尼诱导Her－2高表达乳腺癌细胞凋亡的机制探讨

目的探讨拉帕替尼诱导Her-2高表达乳腺癌细胞株SKBR-3凋亡的机制。方法取处于对数生长期的SKBR-3细胞,接种于96孔板。随机分为实验组和对照组,每组设6个复孔。实验组加入终浓度500μg／L拉帕替尼,对照组加入含DMSO无血清的DMEM培养液。培养24、48、72h后,采用MTT法检SKBR-3生存率,用流式细胞仪检测两组细胞凋亡情况,Western blot法检测磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）及survivin蛋白。结果拉帕替尼作用24、48、72h时SKBR-3生存率分别为100％、69．4％、62．0％（P均〈0．05）。实验组细胞凋亡率为10．48％,明显高于对照组的2．14％（P〈0．05）;实验组p-AKT与survivin蛋白相对表达量为0．49±0．12、0．51±0．38,明显低于对照组的1．46±0．13、0．89±0．36（P均〈0．05）。结论拉帕替尼诱导Her-2高表达乳腺癌SKBR-3细胞凋亡的机制与其下调p-AKT、survivin蛋白表达有关。     

EGCG对人食管癌CaEs-17细胞增殖、凋亡及其线粒体膜电位的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对人食管癌CaEs-17细胞增殖凋亡及线粒体腹电位（MMP）的影响。方法取对数生长期人食管癌CaEs-17细胞,随机分为观察组和对照组。观察组分别予30、60、240 mg/L EGCG处理48 h及120 mg/L EGCG分别处理12、24、48、72 h;对照组常规培养。采用MTT法检测细胞增殖率、流式细胞仪检测细胞凋亡率,JC-1染色检测MMP。结果观察组细胞增殖率均显著低于对照组,细胞凋亡率均显著高于对照组,MMP均显著低于对照组（P均〈0.05）,且呈浓度时间依赖性。结论 EGCG可在体外抑制人食管癌CaEs-17细胞增殖,促进凋亡,并降低其MMP。     

高浓度葡萄糖条件下罗格列酮对NIT-1细胞增殖、胰岛素分泌水平及IRS-2表达的影响

目的探讨高浓度葡萄糖条件下罗格列酮对胰岛B细胞增殖、胰岛素分泌功能的影响及机制。方法取对数生长期NOD鼠胰岛β细胞株NIT-1,以胰酶消化离心、收集细胞,按5×10^4个细胞／孔移至24孔培养板,继续培养48h后分别用葡萄糖浓度为5．6—27．6mmol／L的RPMI1640培养基处理,24h后随机分为对照组、罗格列酮1～3组,分别加入浓度为0～10^-5mol／L的罗格列酮培养;分别于干预24h和48h时收集细胞培养上清液,采用MTT法检测各组细胞增殖活性,放射免疫法检测胰岛素水平;Western blot技术检测胰岛素受体底物（IRS）-2蛋白表达水平。结果①四组细胞增殖活性及胰岛素分泌水平均随葡萄糖浓度升高而降低,其中罗格列酮1-3组细胞增殖活性和胰岛素分泌量均显著高于对照组（P〈0．05、0．01）。②罗格列酮3组在葡萄糖浓度为22．5、27．6mmol／L培养24h及葡萄糖浓度为11．1mmol/L培养48h时胰岛素分泌水平均显著高于对照组（P〈0．05、0．01）;不同浓度葡萄糖培养下罗格列酮3组细胞中IRS-2蛋白水平均显著高于对照组（P〈0．05、0．01）,且变化趋势同上。结论在高浓度葡萄糖条件下罗格列酮可促进NIT-1细胞增殖、胰岛素分泌,机制可能与其上调IRS2表达有关。     

缺氧缺血性脑损伤大鼠脑组织海马区 p-tau 蛋白与凋亡相关蛋白 Bcl-2、Bax 的关系

目的：观察缺氧缺血性脑损伤（HIBD）大鼠脑组织海马区磷酸化tau（p-tau）蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,并分析其相关性。方法选择新生SD大鼠56只,随机分为正常对照组8只、假手术组8只和HIBD组40只（按处死时间点分为3、6、12、24、48 h 5个亚组,每组8只）。 HIBD组参照Rice法建模,并在不同时间点断头取脑。假手术组仅暴露左颈总动脉,正常对照组未做处理,均于手术结束后断头取脑。采用HE染色法观察各组脑组织海马区细胞形态结构改变,免疫组化染色法观察各组脑组织海马区p-tau、Bcl-2、Bax蛋白阳性细胞表达。结果正常对照组及假手术组脑组织细胞形态结构正常,基本无损伤性改变。 HIBD组在HIBD后3 h细胞无明显变化;HIBD后6 h出现细胞肿胀,结构排列紊乱;HIBD后24 h细胞肿胀明显,细胞核固缩、碎裂;HIBD后48 h细胞内出现凋亡小体,神经细胞数量锐减。 HIBD组各时间点脑组织海马区p-tau、Bcl-2、Bax蛋白阳性细胞数均较正常对照组和假手术组显著增多（P均＜0．05）;HIBD后12 h内,脑组织海马区p-tau蛋白阳性细胞数与Bcl-2、Bax蛋白阳性细胞数均呈正相关（ P均＜0．05）。结论 HIBD后脑组织海马区细胞启动了凋亡程序,p-tau蛋白参与了海马区细胞的凋亡过程,并且与Bcl-2、Bax蛋白的表达存在相关性。     

槲皮素对肾癌786-0细胞增殖、凋亡的影响及其机制探讨

目的观察槲皮素对肾癌786-0细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期的细胞,观察组加入不同浓度的槲皮素,对照组加入1‰的DMSO,每组设3个复孔。MTT法观察培养24、48、72 h时细胞的增殖活性,流式细胞仪检测培养48 h时的细胞凋亡率,Western blot法检测培养48 h时细胞内的磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及总Akt。结果槲皮素可明显抑制肾癌786-0细胞生长,并呈时间和剂量依赖性(P均<0.05);观察组细胞凋亡率与对照组相比明显增加(P均<0.05),且随剂量升高而增加;细胞内p-Akt表达水平,随槲皮素表达剂量增加而降低(P均<0.05)。结论槲皮素可显著抑制肾癌786-0细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与其抑制PI3K/Akt通路活性有关。     

脑出血患者血肿周围组织氧化还原因子-1表达与细胞凋亡的关系

目的研究脑出血患者血肿周围组织氧化还原因子-1(Ref-1)表达与细胞凋亡的关系。方法根据发病到手术的时间,将30例脑出血患者分为<6h组(6例)、6~12h组(7例)、12~24h组(5例)、24~72h组(6例)和≥72h组(6例)。应用HE染色、免疫组化染色和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别观察血肿旁约1cm处脑组织的病理学、Ref-1、凋亡细胞、促凋亡基因Bax和抑凋亡基因Bcl-x的变化情况。选择在发病12h内手术的7例脑出血患者作为对照组,观察手术入路上远离血肿处少许脑组织的上述指标,并与血肿周围组织进行比较。结果HE染色显示,对照组和<6h组的血肿周围组织基本正常,6~12h组损伤较轻,12~24h组损伤较重,24~48h组损伤严重,以后逐渐好转,8d时与对照组相似;免疫组化染色显示,凋亡细胞和Bax蛋白表达在发病6h后逐渐增高,12~72h达高峰(P<0·01),以后逐渐下降。Bcl-x蛋白表达在发病后12~72h虽有升高趋势,但无统计学意义(P>0·05);RT-PCR显示,Ref-1mRNA表达在发病后12~72h期间明显下降(P<0·01),此后逐渐上调。Bax和Bcl-xmRNA表达与免疫组化染色结果相似。相关分析显示,Ref-1mRNA表达与凋亡细胞和Bax蛋白及mRNA表达呈显著负相关(P<0·01),与Bcl-x蛋白及mRNA表达无相关性。结论Ref-1mRNA表达可能对脑出血后血肿周围组织细胞凋亡的产生和细胞的保护起重要作用。     

重组人p53腺病毒联合奥沙利铂对胃癌细胞HGC-27的生长抑制作用

目的观察外源p53基因在胃癌细胞内的表达,研究其对肿瘤细胞生长的影响以及对胃癌细胞化疗敏感性的作用和机制。方法用重组人p53腺病毒注射液（rAd—p53）及奥沙利铂（OXA）单独及联合作用于胃癌细胞株HGC-27不同时间后,MTF法检测其对体外培养细胞的抑制率,免疫组织化学S-P法检测p53蛋白的表达情况,流式细胞仪（FCM）分析其细胞凋亡蛋白caspase-3的表达情况。结果rAd-p53及OXA单独作用时,随药物浓度及作用时间的增加,细胞的生长抑制率逐渐增高;两者联合作用48小时,其在较低浓度时细胞生长抑制率即明显增高（P值均〈0．05）,且明显高于单药作用;OXA（3．2μg／m1）与rAd．p63（5×10。、5×107、5×108、5×109vp／m1）联合作用48小时后,与对照组比较,胃癌细胞caspase-3蛋白的含量升高（P值均〈0．05）,但p53蛋白无明显升高（P值均〉0．05）。结论OXA和rAd—p53单药可抑制胃癌细胞HGC-27的生长,两者联合应用对胃癌细胞的抑制作用增强;rAd—p53有增强OXA化疗敏感性的作用,其机制与通过线粒体途径激活下游的caspase一3诱导细胞凋亡有关。