FLT3基因内部串联重复突变与急性白血病的关系及临床意义

目的　研究FLT3基因的内部串联重复 (internaltandemduplication ,ITD)突变与急性白血病的关系及临床意义。方法　采用PCR方法分析 14 3例急性髓系白血病 (AML)、2 5例急性淋巴细胞白血病 (ALL)、2例急性杂合性白血病 (AHL)、17例骨髓增生异常综合征 (MDS)和 7例慢性粒细胞白血病急变期 (CML BC)患者骨髓单个核细胞中FLT3基因外显子 14和 15中ITD突变 ,分析FLT3 ITD阳性AML患者的临床特征及疗效。结果　 14 3例AML患者中 37例 (2 5 .9% )FLT3 ITD阳性 ,其中 5 3例M2 中 10例、4 0例M3 中 15例、2 0例M4中 4例、2 3例M5中 8例。在 2 5例ALL、2例AHL、17例MDS和 7例CML BC患者中未检测到FLT3 ITD突变。对其中 5例特征性突变测序结果显示 ,ITD位于外显子 14 ,长度为 2 1～ 6 0bp ,3例为单纯串联重复 ,2例同时出现插入序列 ,均未改变FLT3阅读框架。临床研究表明 ,FLT3 ITD突变在染色体核型正常患者中占有较高比例 (P <0 .0 5 ) ,FLT3 ITD阳性患者外周血白细胞数高 (P <0 .0 5 ) ,化疗后完全缓解率低 (P <0 .0 5 )。结论　FLT3 ITD突变多见于M3 、M5患者 ,为框内突变 (Inframemutation)。FLT3 ITD阳性的AML患者外周血白细胞数高 ,化疗后完全缓解率低     

恶性血液病FLT3基因突变的检测及临床意义

为了探讨FLT3基因及FLT3内部串联重复（ITD）突变与恶性血液病的关系及临床意义,采用PCR结合DNA测序技术分析32例急性髓系白血病（AML）、18例急性淋巴细胞白血病（ALL）、2例急性杂合性白血病（AHL）、12例骨髓增生异常综合征（MDS）、10例慢性粒细胞白血病（CML）、3例非何杰金淋巴瘤（NHL）及9例多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓单个核细胞中FLT3基因及FLT3/ITD突变,分析FLT3/ITD阳性患者的临床特征及疗效。结果表明：在32例AML患者中5例FLT3/ITD（15.6%）阳性,其中7例M3中1例、10例M4中1例、10例M5中3例;而在18例ALL、2例AHL、12例MDS和10例CML患者中未检测到FLT3/ITD突变;在3例非何杰金淋巴瘤（NHL）、9例多发性骨髓瘤（MM）患者中亦未检测到FLT3基因。对2例特征性突变进行了测序,其结果显示,ITD位于外显子14,长度为27-63bp,为单纯串联重复,FLT3/ITD序列包括有2个SH2-结合结构域（YEYV与YEYDLK）,其中1例出现氨基酸的替换,其ITD序列及氨基酸的替换均具有独特性,均未改变FLT3阅读框架。临床研究表明,FLT3/ITD阳性AML患者外周血白细胞数高（p〈0.01）,骨髓原始细胞比例高（p〈0.01）,化疗后有低缓解率趋势。结论：FLT3/ITD突变多见于M5患者,为框内突变。FLT3/ITD阳性的AML患者外周血白细胞数高,骨髓原始细胞比例高,伴低缓解率趋势。FLT3/ITD基因突变可作为预测AML预后的一个指标。     

白血病患者FLT3基因第二酪氨酸激酶结构域点突变分析

目的研究FLT3基因酪氨酸激酶结构域(TKD)点突变与急性白血病的关系及临床意义。方法采用PCR结合限制性内切酶酶切及序列测定,检测143例急性髓系白血病(AML)、25例急性淋巴细胞白血病(ALL)、2例急性杂合细胞白血病(AHL)、17例骨髓增生异常综合征(MDS)和7例慢性粒细胞白血病急变期(CMLBC)患者骨髓单个核细胞中FLT3基因外显子20中的TKD点突变,分析其临床相关性。结果143例AML患者中9例(6.3%)存在FLT3TKD点突变(FLT3TKD+),阳性率显著低于FLT3基因内部串联重复(ITD)突变(25.9%,P<0.01)。FLT3TKD+存在于AMLM2(3/53)、M3(3/40)、M5(2/23)、M6(1/2)亚型中。2例FLT3-TKD+患者同时存在FLT3-ITD突变,M2、M3各1例。在25例ALL、2例AHL、17例MDS和7例CMLBC患者中未检测到FLT3TKD+。测序分析显示TKD点突变累及密码子D835,未改变FLT3的开放式阅读框架,为错义突变。D835的第1个核苷酸G被T替换,即D835Y。FLT3-TKD+组和FLT3-TKD组在性别、年龄组成、白细胞计数、骨髓原始细胞比例及化疗缓解率方面差异无统计学意义。结论AML患者中FLT3-TKD点突变的阳性率显著低于FLT3ITD。TKD点突变累及密码子D835,为错义突变。TKD点突变可单独存在,也可与ITD同时存在。与FLT3-ITD相比,TKD点突变与高白细胞无关。     

急性白血病FLT3基因突变的检测及临床意义

为探讨FLT3基因及FLT3内部串联重复(internal tandemduplication ITD)突变与急性白血病的关系及临床意义,采用PCR结合DNA测序技术分析32例急性髓系白血病(AML),18例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓单个核细胞中FLT3基因及FLT3/ITD突变,分析FLT3/ITD阳性患者的临床特征及疗效。结果表明:32例AML患者中5例FLT3/ITD(15.6%)阳性,其中7例M3中1例、10例M4中1例、10例M5中3例。而18例ALL患者中未检测到FLT3/ITD突变。对其中2例特征性突变测序结果显示,ITD位于外显子14,长度为27~63bp,为单纯串联重复,FLT3/ITD序列包括2个SH2-结合结构域(YEYV与YEY-DLK),其中一例出现氨基酸的替换,其ITD序列及氨基酸的替换均具有独特性,均未改变FLT3阅读框架。临床研究表明FLT3/ITD阳性AML患者外周血白细胞数高(P<0.01),骨髓原始细胞比例高(P<0.01),化疗后有低缓解率趋势。结论:FLT3/ITD突变多见于M5患者,为框内突变。FLT3/ITD阳性的AML患者外周血白细胞数高,骨髓原始细胞...     

FLT3基因突变和染色体易位与急性髓性白血病预后的关系

目的:探讨FLT3跨膜区内部串联重复(FLT3/internal tandem duplication,FLT3/ITD)突变和染色体易位与急性髓性白血病预后的关系。方法:选取1998-03/2005-10中国医科大学及沈阳医学院附属医院血液科门诊或住院治疗的125例急性髓性白血病患者,均经形态学及骨髓活检确诊,所有患者均签署知情同意书。于治疗前抽取急性髓性白血病患者骨髓标本,短期培养法制备染色体标本,应用R显带技术进行核型分析,每例标本至少分析20个中期细胞。传统酚/氯仿/异丙醇法抽提DNA,调整浓度至200μg/L。针对FLT3基因内部重复串联结构主要发生在11号外显子,在11号外显子近端和远端分别设计引物11F和11R扩增产物133bp。采用PCR联合序列检测伴有或不伴有染色体易位的急性髓性白血病患者FLT3基因突变情况。结果:①染色体核型分析:125例患者中,46例证实存在不同类型染色体易位,总检出率36.8%。染色体易位的类型以t(1621)最多,为9例(19.78%),t(8,21)核型7例(15.22%),t(4,11)核型6例(13.04%),同时发现国内罕见的t(6,9)染色体易位3例(6.52%)。②PCR结合碱基测序检测FLT3基因表达及FLT3/ITD基因突变:46例染色体易位的样本中,31例FLT3基因表达,阳性率67.39%;而79例无染色体易位的样本中,56例FLT3基因表达,阳性率70.89%,两者比较差异无显著性意义(P>0.05)。两组样本FLT3/ITD基因突变阳性率分别为26.09%和11.39%(P<0.05)。③伴有或不伴有染色体易位FLT3/ITD突变阳性患者临床特征:伴有染色体易位FLT3/ITD突变阳性患者外周血白细胞、血红蛋白、血小板、骨髓粒细胞比例与不伴有染色体易位FLT3/ITD突变阳性患者均基本相似[(31.25±5.67)×109L-1,(28.98±7.56)×109L-1;(75.97±1.46)g/L,(70.16±8.46)g/L(71.38±12.51)×109L-1,(78.59±9.42)×109L-1;(7.91±1.28)%,(9.28±0.56)%;P均>0.05]。④伴有或不伴有染色体易位FLT3/ITD突变阳性与临床预后的关系:与不伴有染色体易位FLT3/ITD突变阳性患者比较,伴有染色体易位FLT3/ITD突变阳性患者的死亡率无明显差异(83.33%,77.78%,P>0.05),但平均生存时间明显降低[(8.9±1.5),(13.9±2.39)个月,P<0.05]。结论:伴有染色体易位且FLT3/ITD突变的急性髓性白血病患者预后较差,染色体易位和FLT3/ITD突变可以作为其预后不良的重要标志。     

FLT3基因的内部串联重复是新型的延长突变模式

作者总结了51例AML和MDS中的FLT3基因突变情况,并分析了FLT3基因在Cos7细胞中转染后的表达和磷酸化情况。 材料和方法①白血病细胞和FLT3/ITD检测 从白血病细胞中抽提高分子量DNA,用PCR扩增复盖JM区的DNA片段,琼脂糖凝胶电泳上切下异常大小带并纯化,然后克隆进pMOS-Blue T-载体。选择10个重组子集落并在LB培养基中培养,而后制备质粒DNA,二条链借结合荧光素21 M13和T7引物在DNA测序仪上测序。用RT-PCR法检测FLT3转录本表达。异常大小产物同上克隆和测序,以确定转录本是在读框内。②转染子分析 借RT-PCR法扩增白血病细胞中复盖有突变FLT3,cDNA串联重复的Munl-EcoRV片段,扩增产物用Munl     

聚合酶链反应检测急性非淋巴细胞白血病患者FLT3/ITD基因突变及临床意义

目的　探讨急性非淋巴细胞白血病 (ANLL)患者FLT3基因及内部串联重复 (ITD)突变及临床意义。方法　采用聚合酶链反应 (PCR )方法扩增 71例ANLL患者FLT3 /ITD基因突变。结果　 71例ANLL患者中有 65例 ( 91 5% )FLT3基因检测阳性 ,其中有 17例出现FLT3 /ITD基因突变 ,71例ANLL患者FLT3 /ITD基因突变阳性率为 2 3 9%。FLT3 /ITD基因突变阳性ANLL患者外周血白细胞计数及骨髓白血病细胞比例显著高于FLT3 /ITD基因突变阴性ANLL患者 (P <0 0 1和P <0 0 5)。FLT3 /ITD基因突变阳性ANLLCR后 1年内复发率显著高于FLT3 /ITD基因突变阴性组(P <0 0 5)。结论　FLT3 /ITD基因突变可作为部分ANLL患者微小残留病检测的新的基因标记 ;FLT3 /ITD基因突变阳性ANLL常伴外周血高白细胞数、骨髓中高白血病细胞比例及明显增高的复发率 ,FLT3 /ITD基因突变阳性ANLL预后较差     

235例急性髓系白血病患者血浆游离DNAFLT3-ITD的检测及临床意义

本研究检测急性髓系白血病（AML）患者外周血血浆游离DNAFLT3内部串联重复序列（internal tandem duplication,ITD）并探讨其临床意义。提取235例AML患者血浆游离DNA并以PCR扩增看家基因globin作为判定标准,通过PCR方法检测FLT3－ITD,并与骨髓或外周血白血病细胞DNA检测结果进行比较。结果表明：235例AML患者中,190例患者血浆游离DNA扩增出globin基因。188倒初诊、复发或难治患者中,血浆游离DNA发生FL33—1TD突变35例（19％,35／188）,与病人白血病细胞DNA检测结果完全一致。47例临床缓解患者中,有2例血浆游离DNA扩增出globin基因并检出FLT3－ITD突变,而其细胞来源DNA均为阴性。2例患者均早期复发。与FLT3－野生型（wt）相比,FLT3－ITD突变患者白细胞计数、CD7、CD56表达等明显升高,CR率降低。结论：AML患者血浆中可以检测出白血病细胞特异性的血浆游离DNA,与直接检测白血病细胞结果一致。对骨髓缓解期病人残留白血病（MRD）的检测,血浆游离DNA具有更高的敏感性。FLT3－ITD的检测对AML患者的预后及疗效判断有重要意义。     

白血病患者Flt-3基因突变及其与白血病发生、预后的关系

背景：Flt3基因是近年来发现的早期造血生长因子受体基因。Flt3与其配体结合后能通过信号传导途径对造血干，祖细胞的增殖和分化起调节作用。Flt3近膜区的内部串联重复（FLT3／ITD）与多种白血病的发生，发展密切相关，且为预后不良的独立指标。目的：探讨Flt-3基因内部串联重复（ITD）突变与急性白血病发生的关系及其预后判断的临床意义。设计：重复测量。单位：沈阳医学院生物化学及分子生物教研室。对象：147例样本均来自于1999—01／2004—12沈阳医学院附属医院住院及门诊收治的白血病患者，均经形态学及骨髓活检确诊。其中男95例，女52例；年龄5—23岁。参照FAB分型标准诊断：急性髓性白血病62例患者分别为AML（M1，M2）33例，AMMOL（M4）3例，AMOL（M5）18例，AMKL（M7）8例，急性淋巴细胞白血病43例，幼年型慢性粒细胞白血病13例，骨髓增生异常综合征29例。纳入对象均对检测项目知情同意。方法：采用聚合酶链反应联合序列检测147例白血病患者中的Flt-3／ITD。主要观察指标：观察伴有Flt-3，ITD急性髓性白血病患者的临床表现及预后，检测各类急性白血病中Flt-3的表达水平及Flt-3／ITD阳性率，发生的区间和长度。结果：①Flt-3／ITD：急性髓性白血病患者62例中有5例除Flt-3表达产物之外，伴有异常扩增产物，其中急性髓性白血病（M1，M2）3例、AM-MOL1例、AMOL1例。测序及Blast比对分析显示，伴有异常产物的患者在外显子11区均有ITD，各例ITD的复制区域不同，长短不等（33—72bp）。43例急性淋巴细胞白血病、29例骨髓增生异常综合征和13例幼年型慢性粒细胞白血病患者中均未检测到Flt-3／ITD。②预后：5例Flt-3，ITD阳性患者确诊后均在短期内死亡，平均生存期10．8个月。结论：①Flt-3／ITD仅发现于急性髓性白血病患者，其存在可能与急性髓性白血病发生及进展有关。②Flt-3／ITD是急性髓性白血病患者预后判断的重要标志。     

骨髓增生异常综合征染色体核型与形态学临床演变及生存期的关系

随机研究188例骨髓增生异常综合征(MDS)患者的临床和细胞遗传学,以探讨核型与形态学、临床演变及生存期的关系。188例中环状铁粒幼细胞性难治性贫血(RARS)4例,难治性贫血(RA)67例,原始细胞过多的难治性贫血(RAEB)58例,转化中的RAEB(RAEB-t)40例,慢性粒-单核细胞白血病(CMML)19例。MDS确诊之日计算生存期。骨髓