急性颅脑损伤患者脑脊液中兴奋性和抑制性氨基酸含量改变及…

采用氨基酸自动分析仪检测了１８例急性颅脑损伤患者脑脊液中谷氨酸、天门冬氨酸、牛磺酸、甘氨酸、丙氨酸、γ－氨基丁酸、脯氨酸含量的动态变化。结果发现。伤情越重、预后越差的患者，脑脊液中牛磺酸、ｒ－氨基丁酸、丙氨酸含量伤后早期升高越明显，恢复至正常的时间也越长；其中２例早期死于急笥弥漫性脑肿胀、脑水肿的患者，伤后当天脑脊液中牛磺酸含量分别为９２．６和５１．５ｕｍｏｌ／Ｌ，是对照值的９．６倍和５．４倍，ｒ     

急性颅脑损伤患者脑脊液中兴奋性和抑制性氨基酸含量改变及其临床意义

采用氨基酸自动分析仪检测了１８例急性颅脑损伤患者脑脊液中谷氨酸、天门冬氨酸、牛磺酸、甘氨酸、丙氨酸、γ－氨基丁酸、脯氨酸含量的动态变化。结果发现，伤情越重、预后越差的患者，脑脊液中牛磺酸、γ－氨基丁酸、丙氨酸含量伤后早期升高越明显，恢复至正常的时间也越长；其中２例早期死于急性弥漫性脑肿胀、脑水肿的患者，伤后当天脑脊液中牛磺酸含量分别为９２．６和５１．５μｍｏｌ／Ｌ，是对照值的９．６倍和５．４倍，γ－氨基丁酸含量分别为１１９．８和２４６．２μｍｏｌ／Ｌ，是对照值的２．７倍和５．５倍。表明伤后脑脊液中牛磺酸、γ－氨基丁酸和丙氨酸含量的动态变化可初步反映颅脑损伤的严重程度及颅脑损伤患者的脑功能恢复状况，并可能与急性脑水肿、脑肿胀的病理生理过程有关。     

HPLC法测定大鼠脑组织游离天门冬氨酸、谷氨酸、肌肽及γ-氨基丁酸

目的建立镄4定大鼠脑组织中游离天门冬氨酸、谷氨酸、肌肽以及γ-氨基丁酸含量的高效液相色谱法。方法采用C18色谱柱,以乙腈和25mmol／L磷酸盐缓冲液（pH6．8）为流动相,用邻苯二甲醛为柱前衍生剂,流速为1mL／min,激发波长为338nln,发射波长为425nm,在柱温38℃下采用二元梯度洗脱,同时对大鼠脑组织中游离天门冬氨酸、谷氨酸、肌肤以及γ-氨基丁酸的含量进行了测定。结果天门冬氨酸、谷氨酸、肌肽以及γ-氨基丁酸在该色谱奈件下均可基线分离,在O．5—6μg／mL范围内呈现良好线性关系,天门冬氨酸、谷氨酸、肌肽以及γ-氨基丁酸的相关系数分别是0．9991,0．9998,0．9996,0．9995。回收率分别为99．80％,99．74％,99．63％,99．34％。结论该方法灵敏可靠,专属性强,重现性好。天门冬氨酸、谷氨酸、肌肽以及γ-氨基丁酸在大鼠脑组织中的含量分别为0．77±0．04、1．16±0．07、0．36±0．05、1．30±0．06mg／g。     

ALS患者脑脊液中氨基酸类神经递质的变增益高效液相-荧光检测

目的建立用于测定肌萎缩侧索硬化(ALS)患者脑脊液中氨基酸类神经递质的方法,观察患者用肌萎灵注射液治疗前后脑脊液中氨基酸类神经递质的变化。方法采集42例患者的脑脊液,用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生变增益HPLC法测定脑脊液中天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸的含量。结果4种氨基酸在20min内分离度、线性关系均良好;42例ALS患者治疗后与治疗前相比,脑脊液中兴奋性的天门冬氨酸和谷氨酸水平明显降低,而抑制性的甘氨酸和γ-氨基丁酸水平变化不明显。结论本方法快速、准确、灵敏度高,适用于脑脊液中神经递质类氨基酸的含量测定。     

电针对小白鼠大脑皮层内某些游离氨基酸及谷氨酸脱羧酶活性的影响

根据近年来国内针麻原理研究的报导,有人观察到针刺动物穴位后,脑中谷氨酸,天门冬氨酸的含量降低,而 r-氨基丁酸(GABA)的含量升高。众知,谷氨酸和天门冬氨酸可能是中枢神经系统内的兴奋性递质;而 r-氨基丁酸是中枢神经系统内的抑制性递质。脑中 r-氨基丁酸几乎全部是在谷氨酸脱羧酶(GDC)的催化下,由谷氨酸脱羧生成的。因此,针刺后脑中 r-氨基丁酸含量升高,是否由于谷氨酸脱羧酶(GDC)活性改变所引起,这是我们要探讨的目的。     

雄性激素对氨基酸代谢的影响;Ⅰ 丙酸睾丸酮对动物组织氨基化及转氨基作用之影响

(1)成年雄性大白鼠去势14天后,肝脏谷氨酸——丙酮酸,谷氨酰胺——丙酮酸,天门冬氨酸——α酮戊二酸,天门冬氨酰胺——α酮戊二酸等转氨酶活力均无显著变化。肾的谷氨酸丙酮酸和酪氨酸——α酮戊二酸,肌肉的酪氨酸——α酮戊二酸及肌肉的天门冬氨酸——α酮戊二酸谷氨酸一丙酮酸转氨酶活力亦无明显改变,仅肌肉的天门冬氨酸——α酮戊二酸转氨酶活力增强。(2)注射丙酸睪丸酮的给予去势大白鼠,对肝的容氨酰胺——丙酮酸,天门冬酰胺——α酮戊二酸,天门冬氨酸——α酮戊二酸,肾的酩氨酸——α酮戊二酸未给予显著影响。但可增强肝谷氨酸——丙酮酸转氨酶活力,并降低肌肉天门冬氨酸——α酮戊二酸转氨酶活力。(3)去势大白鼠肝中的丙酮酸氨基化作用显著增强,对α酮戊二酸的氨基化作用之影响不显著,注射丙酸睪丸酮给予去势大鼠并不能对抗去势动物肝的丙酮酸氨基化作用之升高。     

RP-HPLC法测定人血清中天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸和γ-氨基丁酸含量

[目的]建立RP-HPLC法测定人体血清中天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸和γ-氨基丁酸含量的方法.[方法]用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生;氨基酸的衍生物用Nova-Pak C18(3.9 mm×150 mm,4μm)分离;流动相A为30%甲醇、2%四氢呋喃、68%磷酸缓冲液(0.1 mol/L,pH 6.8),流动相B为100%甲醇,用二元线性梯度程序洗脱;荧光检测器检测,激发光波长280 nm,发射光波长340 nm.[结果]在(4～400)nmol/mL范围内,各组分线性关系良好,各氨基酸的平均回收率为90.0%～93.1%.[结论]本方法操作简便、准确,适用于人体血清中天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸和γ-氨基丁酸浓度的测定.     

基于核磁共振代谢组学分析糖尿病大鼠脑区特异性代谢变化

目的：运用基于核磁共振氢谱的代谢组学方法分析1型糖尿病大鼠多个脑区的代谢变化。方法： 取正常大鼠（ n =8）和链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠（ n =8）的大脑皮层、纹状体、下丘脑、中脑组织 进行核磁共振氢谱代谢组学分析,并通过模式识别和代谢物通路分析考察糖尿病大鼠脑区特异性代谢变 化。结果：与对照组大鼠相比,糖尿病大鼠的大脑皮层、纹状体、下丘脑和中脑的代谢模式均发生显著改变。 代谢物定量分析显示,与正常大鼠相比,糖尿病大鼠不同脑区具有特异性代谢变化。大脑皮层中乳酸、牛 磺酸等代谢物的含量出现显著升高（ P ＜0.05）,而N-乙酰天门冬氨酸、胆碱等代谢物的含量显著降低（ P ＜0.05）;纹状体中乳酸、牛磺酸等代谢物的含量显著升高（ P ＜0.05）,而N-乙酰天门冬氨酸、γ-氨基丁酸等 代谢物的含量显著降低（ P ＜0.05）;下丘脑中牛磺酸、肌醇等代谢物的含量出现显著升高（ P ＜0.05）,而N乙酰天门冬氨酸、琥珀酸等代谢物的含量显著降低（ P ＜0.05）;中脑中乳酸、肌醇等代谢物的含量显著升 高（ P ＜0.05）,而N-乙酰天门冬氨酸、γ-氨基丁酸等代谢物的含量显著降低（ P ＜0.05）。结论：1型糖尿病大鼠脑代谢发生显著改变,而且具有脑区特异性的代谢变化,主要涉及能量代谢、神经递质代谢和胆碱代谢。     

脑微透析法研究大鼠脊髓损伤后脑内兴奋性氨基酸的动态变化

目的研究大鼠脊髓损伤后大脑中枢兴奋性氨基酸水平的变化,探讨微透析技术在脊髓损伤中的应用,以及脊髓损伤与大脑中枢反应的关系。方法将Wistar大鼠分为损伤组、对照组和正常组,损伤组定位脑内纹状体,运用微透析技术检测大鼠脊髓损伤前1 h,损伤后0.5 h,2 h,6 h,24 h,72 h其脑细胞外液(ECF)兴奋性氨基酸含量的变化,选取谷氨酸含量([Glu]d)和天门冬氨酸含量([Asp]d)为兴奋性氨基酸的主要参考值。结果大鼠脊髓损伤0.5 h后脑内[Glu]d和[Asp]分别为损伤前基础值的(402±10)%、(642±7)%(P<0.01),然后逐步回落,于伤后24 h大致恢复正常。结论由于谷氨酸,天门冬氨酸是大脑内重要的兴奋性氨基酸递质,因此脊髓损伤后脑内兴奋性氨基酸水平的一过性升高提示大脑皮质、脑干网状结构正常状态对脊髓易化作用在脊髓损伤后所依赖的神经递质水平受到显著影响,而且微透析技术可以较好地检测其动态变化。     

高效液相色谱荧光法同时测定小鼠脑组织中4种氨基酸类神经递质

目的 采用高效液相-荧光检测技术建它一种稳定的用于测定脑组织中多种氨基酸类神经递质的方法.方法 用微透析技术收集小鼠脑组织中多种氨基酸类神经递质,用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生高效液相色谱(high perform-ance liquid chromatography,HPLC)法测定微透析液中天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、r-氨基丁酸(GABA)的含量.结果 兴奋性Asp、Glu及抑制性Gly、GABA在18 min内完全分离,在0.625~5umol/L浓度范围内与峰面积有良好的线性关系.结论 HPLC法快速、准确、灵敏度高,适用于脑组织中氨基酸类神经递质含量的测定.     

深低温停循环手术中肺部温度变化初步观察

目的观察深低温停循环过程中肺部温度的变化规律,为深低温停循环过程中肺保护提供参考。方法4例在深低温停循环下行主动脉弓部手术的患者纳入本研究,全麻完成后,经右侧颈外静脉穿刺置入Swan-Ganz导管,导管气囊漂入肺动脉,测试可以测定肺毛细血管嵌压后,气囊充气,远端温度探头可以测定手术过程中肺深部温度,同时监测鼻咽温度和直肠温度。结果4例深低温停循环手术患者的肺部温度可降低到16.6℃,接近鼻咽温度16.4℃,在降温过程中比鼻咽温略低,在复温过程中比鼻咽温略高。结论深低温停循环过程中,肺部温度可达到深低温要求。     

脊神经节损伤所介导的脊髓背角兴奋性氨基酸和抑制性氨基酸变化的实验研究

目的研究脊神经节 (DRG)炎性损伤时 ,脊髓背角兴奋性氨基酸 (EAAs)、抑制性氨基酸 (I AAs)含量和脊髓背角谷氨酸 (Glu)、天门冬氨酸 (Asp)免疫组织化学的变化 ,以及与实验动物神经行为异常变化之间的关系。方法健康家兔 5 4只 ,随机分为手术对照组 ( n =2 4) ;炎症损伤组 ( n =2 4)和正常对照组 (n =6)。采用组织氨基酸的含量分析仪测定脊髓背角Glu ,Asp ,GABA ,Tau ,Thr和Ser含量变化。采用免疫组化法观察脊髓背角Glu和Asp分布特点及变化。结果 1.术后 2～ 4周 ,伤侧的Glu ,Asp ,GABA ,Tau ,Ser含量较术前 ,非伤侧显著增高 (P <0 .0 5 )。 2 .术后 2～ 4周 ,其伤侧N 甲基 D 天 (门 )冬氨酸受体 (NMDAR1)免疫阳性纤维在脊髓背角浅层 (Ⅰ ,Ⅱ )和固有层 (Ⅲ ,Ⅳ )的分布密度和染色强度 ,较术前和非伤侧显著降低 (P <0 .0 5 )。结论DRG炎症损伤所介导脊髓背角EAAs释放增加 ,在痛觉过敏的形成和维持中具有重要作用。而IAAs的增加则与机体抗伤害性保护反应相关。DRG炎症损伤初期 ,脊髓背角EAAs/IAAs动态平衡的破坏是伤害性神经细胞兴奋性损伤和伤侧肢体痛觉过敏的主要原因。     

中低温诱导室颤性停搏对心内直视手术心肌保护效果的临床研究

目的探讨中低温室颤性停搏对心内直视手术的心肌保护效果。方法选择行心脏瓣膜置换手术患者60例,ASA分级Ⅱ~Ⅳ级,随机分为中低温室颤性停搏组(A组)和浅低温不停跳组(B组)各30例。各组分别于麻醉后体外循环前、体外循环后60 min、120 min和停机时、手术后6 h、手术后24 h抽取动脉血检测肌酸磷酸肌酶(CK)、心肌型肌酸磷酸肌酶同工酶(CKMB)、乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸(Lac)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)指标,并取左室心肌标本作扫描电镜观察。结果在麻醉后体外循环前、体外循环后60 min、120 min和停机时、手术后6 h、24 h各时点A组和B组的CK、CKMB、LDH、Lac、cTnT指标水平差异无显著性;心肌电镜扫描发现两组差异无显著性,仅在体外循环120 min后心肌细胞轻度受损。结论中低温诱导室颤性停搏对心内直视手术的心肌保护效果是一种安全有效的心肌保护方法 。     

化学中毒患者心理评估及血浆氨基酸测定

目的评估化学中毒患者心理状态并检测血浆氨基酸水平变化。方法选择解放军第三〇七医院2012年12月收治的中毒患者34例,采用液质联用（LC-MS/MS Q-TRAP）同位素内标法,测定患者的血浆全谱氨基酸,用秩和检验对牛磺酸（Taurine,Tau）、甘氨酸（Gly）、谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）、天门冬氨酸（Asp）、丙氨酸（Ala）水平,并与标准值进行比较;对患者相关心理测试做出评估。结果中毒患者Tau和Glu水平高于标准值（氨基酸正常上下限的平均值）,Gly和GABA的水平低于标准值,差异均有统计学意义（P〈0.05）;Asp、Ala水平与标准值比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）;心理测试表明34例患者多数存在明显的焦虑和睡眠障碍。结论血中氨基酸水平变化可用来推断中毒患者的心理问题;氨基酸的变化趋势与心理问题有关。     

补阳还五汤对鼠脑缺血再灌注后脑组织兴奋性氨基酸的作用

【目的】观察补阳还五汤对沙土鼠脑缺血及再灌注损伤与脑组织兴奋性氨基酸(EAA)的影响。【方法】复制沙土鼠双侧颈总动脉夹闭脑缺血模型,于缺血后15min再灌注48h,取脑组织测定天冬氨酸(GJu)、谷氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)的含量。【结果】缺血15min后,脑组织Glu、Asp、GABA含量升高(P<0.05或P<0.01),补阳还五汤可降低脑组织Glu含量(P<0.05);缺血15min再灌注48h后,脑组织Glu及Asp含量升高(P<0.05),补阳还五汤可使脑组织Glu含量降低(P<0.05)。【结论】补阳还五汤抗缺血性脑损伤的作用机理可能与其对抗脑缺血及再灌注后EAA的升高有关。     

抗呆合剂对小鼠缺血再灌注脑内氨基酸、乙酰胆碱酯酶活力的影响

反复脑缺血再灌注后５０ｍｉｎ,小鼠脑内谷氨酸（Ｇｌｕ）、天冬氨酸（Ａｓｐ）均升高,γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）,也随之升高。抗呆合剂大、小剂量均可抑制Ｇｌｕ、Ａｓｐ的升高,大剂量还使升高的ＧＡＢＡ恢复至接近正常。造模后５０ｍｉｎ以及７ｄ,模型组小鼠乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）活力降低,抗呆合剂可升高ＡｃｈＥ活力。     

急性脊髓损伤后脑脊液中兴奋性氨基酸含量在脊髓功能恢复中的临床意义

目的 探讨急性脊髓损伤后脑脊液中兴奋性氨基酸含量变化与脊髓功能恢复的关系及其对预后的影响。方法 采用氨基酸自动分析仪检测32例急性脊髓损伤患者脑脊液（CSF）中天门冬氨基酸（Asp）和谷氨酸（Glu）在损伤后不同时段的含量变化。结果 天门冬氨基酸（Asp）和谷氨酸（Glu）在损伤后16h达到高峰，24h后开始逐渐下降；兴奋性氨基酸在损伤后高峰越早，升高得越多，脊髓损伤越严重；CSF中兴奋性氨基酸含量升高越高、持续的时间越长，脊髓功能恢复越差。结论 CSF中兴奋性氨基酸含量是脊髓损伤的敏感指标，可以作为早期预测脊髓损伤程度和判断其预后的指标之一。     

微透析探针在体透析时间对氨基酸回收率的影响

目的：探讨在体透析不同时间后微透析探针的氨基酸体外回收率的变化。方法：采用微透析系统对使用前后的探针进行氨基酸标准液的体外透析，氨基酸标准液和探针透析液则用柱前衍生法配合高效液相色谱荧光检测器进行检测。结果：用再生纤维素膜制作的微透析探针在使用不同时间之后，天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）和γ-氨基丁酸（GABA）体外回收率不完全相同（Asp：F=19．669，P=0．000；Glu：F=103．955，P=0．000；GABA：F=3．454，P=0．040）；牛磺酸（Tau）无显著性差异（F=2．001，P=0．152）。在使用6h后，Asp、Glu、Tau和GABA的回收率剩余百分率（RRP）分别为64．34％、67．36％、103．11％和98．23％，其中Asp、Glu有显著性下降（Asp：P〈0．01，Glu：P〈0．05）。在使用12h后，Asp、Glu、Tau和GABA的RRP分别为43．44％、24．42％、77．45％和67．36％，Asp、Glu和GABA有显著性下降（Asp：P〈0．001，Glu：P〈0．001，GABA：P〈0．05）。在使用24h后，Asp、Glu、GABA的RRP分别为36．26％、12．24％、89．48％和71．35％，Asp、Glu和GABA有显著性下降（Asp：P〈0．0001，Glu：P〈0．0001，GABA：P〈0．05）。结论：在体透析可引起氨基酸回收率的下降，透析时间越长，回收率下降越大。故在进行脑微透析实验时，探针的在体使用时间不宜过长；为了提高所得数据的可靠性，应对探针的回收率进行适当校正。     

MK-801在脊髓缺血再灌注损伤中的作用

目的 研究大鼠脊髓缺血40min和再灌注4h脊髓组织兴奋性氨基酸(EAA)和细胞内Ca^2 ([Ca^2 ]i)的含量变化，及应用地卓西平马来酸盐(MK-801)对上述指标的影响。方法 SD大鼠40只，随机分为假手术组、缺血40min组、再灌注4h组、MK-801治疗组(n=10)。测定各组脊髓组织中谷氨酸(Glu)和[Ca^2 ]i含量，同时观察MK-801对上述指标的影响．结果 缺血40min组Glu含量明显降低，再灌注4h组Glu含量降低更明显；[Ca^2 ]i的含量在缺血40min组时有所升高，再灌注4h组则明显升高，MK-801组能显著升高Glu含量和降低[Ca^2 ]i的含量．结论 EAA的兴奋性神经毒性在脊髓缺血再灌注中发挥着重要的作用，MK-801对该神经毒性有明显的抑制作用。     

Inhibition of excitatory amino acid efflux contributes to protective effects of puerarin against cerebral ischemia in rats

Objective To investigate whether the protective effects of puerarine(Pur)against cerebral ischemia is associated with depressing the extracellular levels of amino acid transmitters in brain of rats.Methods Male Sprague-Dawley rats were subjected to transient middle cerebral artery occlusion(MCAO)for 60 min followed by 24 h reperfusion.Pur(50,100 mg/kg,i.p.)was administered at the onset of MCAO.The infarct rate and edema rate were detected on TTC(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride)-stained coronal sections.The extracellular levels of amino acid transmitters were monitored in striatum of rats with ischemic/reperfusion injury using in vivo microdialysis technique.Furthermore,the protective effects of Pur against glutamate-induced neurotoxicity were detected.Glutamate-induced apoptotic and necrotic cells in hippocampus were estimated by flow cytometric analysis of Annexin-V and PI labeling cells.Results Pur(100 mg/kg)significantly decreased infarct size by 31.6%(P<0.05),reduced edema volume(P<0.05),and improved neurological functions(P<0.05)following MCAO.In these rats,the ischemia-induced extracellular levels of aspartate(Asp),glutamate(Glu),γ-aminobutyric acid(GABA),and taurine(Tau)were significantly reduced in striatum of vehicle-treated animals by 54.7%,56.7%,75.8%,and 68.1%(P<0.01 and P<0.05).Pur reduced the peak values of Glu and Asp more obviously than those of GABA and Tau,and the rate of Glu/GABA during MCAO markedly decreased in Pur-treated MCAO rats,compared with the vehicle-treated MCAO rats.Meanwhile,apoptosis and necrosis induced by Glu in cultured hippocampal neurons were significantly reduced after Pur treatment.Conclusion Acute treatment with Pur at the onset of occlusion significantly depresses ischemia-induced efflux of amino acids,especially,excitotoxicity in the striatum,a mechanism underlying the neuroprotective effect on cellular survival.