去甲肾上腺素与哌唑嗪对高血压大鼠动脉平滑肌细胞Na~+-K~+-ATPase活性及mRNA表达的影响

目的观察去甲肾上腺素(NE)及其α1肾上腺素能受体(α1-AR)拮抗剂哌唑嗪(Prazosin)对自发性高血压大鼠(SHR)动脉血管平滑肌细胞Na -K -ATPase活性及mRNA表达的影响。方法采用生化酶学方法和逆转录聚合酶链反应技术,观察不同浓度的NE和哌唑嗪对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Na -K -ATPase活性和mRNA表达的影响。结果与SHR组比较,NE(10-7mol/L)能减弱Na -K -ATPase活性(3·98±0·14vs7·92±0·19,P<0·01)及Na -K -ATPaseα1-亚单位mRNA的表达(0·863±0·057vs1·307±0·051,P<0·01),单用哌唑嗪对Na -K -ATPase活性及mRNA的表达均无影响(P>0·05)。哌唑嗪(10-7,10-6,10-5mol/L)呈剂量依赖性减弱和阻断NE(10-7mol/L)对Na -K -ATPase活性(4·31±0·24,6·15±0·30,7·52±0·31)及Na -K -ATPaseα1-亚单位mRNA表达(0·857±0·041,1·096±0·055,1·183±0·059)的影响(P<0·01,P<0·05)。结论NE抑制SHRNa -K -ATPase活性和下调Na -K -ATPaseα1-亚单位mRNA表达,可能是通过α1-AR途径介导基因转录的下调。肾上腺素能1型受体拮抗剂哌唑嗪可通过阻断α1-AR途径抑制NE对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Na -K -ATPase活性和Na -K -ATPaseα1-亚单位mRNA表达的影响。     

去甲肾上腺素与哌唑嗪对高血压大鼠动脉平滑肌细胞Na+-K+-ATPase活性及mRNA表达的影响

目的 观察去甲肾上腺素(NE)及其α1肾上腺素能受体(α1-AR)拮抗剂哌唑嗪(Prazosin)对自发性高血压大鼠(SHR)动脉血管平滑肌细胞Na -K -ATPase活性及mRNA表达的影响.方法 采用生化酶学方法和逆转录聚合酶链反应技术,观察不同浓度的NE和哌唑嗪对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Na -K -ATPase活性和mRNA表达的影响.结果 与SHR组比较,NE(10-7 mol/L)能减弱Na -K -ATPase活性(3.98±0.14 vs 7.92±0.19,P＜0.01)及Na -K -ATPase α1-亚单位mRNA的表达(0.863±0.057 vs 1.307±0.051,P＜0.01),单用哌唑嗪对Na -K -ATPase活性及mRNA的表达均无影响(P＞0.05).哌唑嗪(10-7,10-6,10-5 mol/L)呈剂量依赖性减弱和阻断NE(10-7mol/L)对Na -K -ATPase活性(4.31±0.24,6.15±0.30,7.52±0.31)及Na -K -ATPase α1-亚单位mRNA表达(0.857±0.041,1.096±0.055,1.183±0.059)的影响(P＜0.01,P＜0.05).结论 NE抑制SHR Na -K -ATPase活性和下调Na -K -ATPase α1-亚单位mRNA表达,可能是通过α1-AR途径介导基因转录的下调.肾上腺素能1型受体拮抗剂哌唑嗪可通过阻断α1-AR途径抑制NE对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Na -K -ATPase活性和Na -K -ATPase α1-亚单位mRNA表达的影响.     

赖诺普利对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞离子泵活性及其mRNA表达的影响

目的 探讨赖诺普利对自发性高血压犬鼠动脉血管平滑肌细胞钠泵、钙泵活性及钠泵α1亚单位、钙泵亚型1mRNA表达水平的影响.方法 以自发性高血压大鼠动脉血管平滑肌细胞为研究对象,分为自发性高血压大鼠对照组、低剂量(1×10-6mol/L)赖诺普利组和高剂量(1×10-5mol/L)赖诺普利组,另以Wistar-Kyoto大鼠(WKY)为对照;分别用生化酶学方法和实时定量PCR检测细胞膜钠泵、钙泵活性和mRNA表达水平,用放射免疫分析法检测细胞培养液血管紧张素Ⅱ的含量.结果 与WKY对照组比较,自发性高血压大鼠动脉血管平滑肌细胞膜钠泵、钙泵活性及钠泵α1亚单位、钙泵亚型1mRNA表达水平均降低(P<0.01).赖诺普利能提高自发性高血压大鼠动脉血管平滑肌细胞膜钠泵、钙泵活性,并能上调钠泵α1亚单位和钙泵亚型1mRNA的表达水平(P<0.01).自发性高血压大鼠动脉血管平滑肌细胞培养液中血管紧张素Ⅱ含量高于WKY对照组(P<0.05),赖诺普利能降低其培养液中血管紧张素Ⅱ含量(P<0.05).结论 高血压大鼠动脉血管平滑肌细胞两种离子泵活性降低可能缘于它自身基因表达水平的下降,赖诺普利通过阻断血管紧张素Ⅱ而上调两种离子泵活性及基因表达.     

瘦素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨leptin对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖影响，并研究leptin b型受体在VSMC中的表达。方法 本文主要采用培养的自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMC），研究Leptin受体b(OB-Rb)的mRNA的表达，以及对平滑肌细胞增殖的影响。结果 OB－Rb的mRNA仅在SHR大鼠的平滑肌细胞表达，而没有在正常对照大鼠（WKY）的平滑肌细胞中表达。Leptin仅仅可以刺激SHR大鼠VSMC的DNA合成率的增加而对WKY大鼠的VSMC则无作用。同样，Leptin对VSMC细胞增殖的作用，也仅仅在SHR大鼠可以发现，而WKY大鼠则没有。结论 上述研究的结果显示；高血压时，Leptin是一种对血管平滑肌细胞的增殖因子，也许在高血压的发生，发展过程中起重要的作用。     

去甲肾上腺素,人参皂甙和硝苯啶对大鼠动脉平滑肌细胞增殖和D…

目的 血管的老化与血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的异常增殖有关，我们拟探讨其增殖机制并寻求有效防治措施。 方法 应用噻唑蓝（ＭＴＴ）染色法和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法观察去甲肾上腺素（ＮＥ）、硝苯啶（Ｎｉｆ）以及人参皂甙（Ｇｉｎ）对老年（１８月龄）和青年（３月龄）大鼠培养的主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）增殖和细胞内ＤＮＡ合成的影响。 结果 （０．１￣５）×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ的ＮＥ可明显促进ＡＳＭＣ呈剂量依赖     

自发性高血压大鼠冠状动脉平滑肌细胞膜电位的研究

目的：观察自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）冠状动脉平滑肌细胞的静息膜电位（Ｅｍ ）及其对血管活性物质ＫＣｌ、ＡＣｈ、ＮＥ的反应性,并与Ｗｉｓｔａｒ大鼠进行了比较。方法：采用先进技术细胞内微电极的方法。结果：ＳＨＲ冠状动脉平滑肌细胞静息膜电位稳定,其均值为－４２．４０±２．７０ ｍ Ｖ,比Ｗｉｓｔａｒ大鼠升高２２％ 左右;ＫＣｌ和ＡＣｈ均引起膜电位去极化,且呈剂量依赖式特点;ＮＥ对膜电位无明显影响。结论;　ＳＨＲ的膜电位比Ｗｉｓｔａｒ大鼠较低,对ＫＣｌ和ＡＣｈ 的反应性明显增强     

瘦素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨leptin对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖影响,并研究leptin b型受体在VSMC中的表达.方法本文主要采用培养的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC),研究Leptin受体b(OB-Rb)的mRNA的表达,以及对平滑肌细胞增殖的影响.结果 OB-Rb的mRNA仅在SHR大鼠的平滑肌细胞表达,而没有在正常对照大鼠(WKY)的平滑肌细胞中表达.Leptin仅仅可以刺激SHR大鼠VSMC的DNA合成率的增加,而对WKY大鼠的VSMC则无作用.同样,Leptin对VSMC细胞增殖的作用,也仅仅在SHR大鼠可以发现,而WKY大鼠则没有.结论上述研究的结果显示;高血压时,Leptin是一种对血管平滑肌细胞的增殖因子,也许在高血压的发生、发展过程中起重要的作用.     

通脉Ⅰ号对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞AngⅡ、AT1mRNA表达的影响

目的：通过观察通脉Ⅰ号对自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)AngⅡ、AT1mRNA表达的影响，探讨通脉Ⅰ号对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的可能机制。方法：细胞培养、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及放射免疫等细胞、分子生物学方法。结果：通脉Ⅰ号较显著抑制VSMC的增殖；15mg／L浓度的通脉Ⅰ号可降低VSMC内AngⅡ的含量，并可显著抑制AngⅡ受体AT1mRNA的表达。结论：通脉Ⅰ号降低AngⅡ受体AT1mRNA的表达可能是其抑制SHR的VSMC增殖机制之一。     

大蒜素对自发性高血压大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞钙电流的作用

目的:观察大蒜素(Gar)对自发性高血压大鼠(SHR)肠系膜动脉平滑肌细胞L-型钙电流(LCa,L)的影响。方法:利用双酶-两步法消化得到单个大鼠肠系膜动脉血管平滑肌细胞,用全细胞膜片钳记录钙电流。在细胞池中灌流含Gar的细胞外液,观察药物对LCa,L的作用和门控机制及门控动力学参数的改变。结果:1Gar对ICa,L的抑制效应呈浓度依赖性和电压依赖性特征。刺激电位0 mV时,200μmol/L Gar可使ICa,L峰值密度由(-8.4±0.4)pA/pF降低为(-6.1±0.3)pA/pF;2药物可使ICa,L半激活电压V1/2右移,半失活电压左移及失活后恢复动力学减慢等环节可减少通道的开放和重复开放,从而减少ICa,L峰值密度和窗口电流。结论:Gar可能通过减少细胞的钙电流发挥降压效应。     

依那普利对自发性高血压大鼠平滑肌细胞Gqα基因表达的影响

目的:(1)自发性高血压大鼠是否存在Gqα基因表达的异常;(2)ACEI抑制血管平滑肌的增殖是否与抑制Gqα基因表达有关.方法:采用半定量RT-PCR方法,观察SHR及WKY主动脉血管平滑肌细胞静止期及增殖期Gqα基因表达情况以及依那普利对Gqα基因表达的影响.结果:(1)静止期,SHR及WKY血管平滑肌细胞Gqα mRNA表达无明显差别;在10%小牛血清刺激下,SHR血管平滑肌细胞Gqα mRNA表达增加四倍(P<0.01);(2)依那普利对静止期SHR Gqα mRNA表达无明显作用,对小牛血清引起的Gqα mRNA表达的增加有明显抑制作用,且呈浓度及时间依赖性;(3)非特异性肽类AngⅡ受体阻制剂无此作用.结论:SHR的Gqα基因表达反应性增加,依那普利对高血压病的治疗除抑制ACE 外,通过对Gq蛋白基因表达的抑制也起一定的作用.     

内皮素1和BQ-123对自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞腺苷三磷酸酶活性及mRNA表达的影响

目的 观察内皮素1及其受体拮抗剂BQ-123对自发性高血压大鼠及Wistar-Kyoto(WKY)大鼠动脉平滑肌细胞膜腺苷三磷酸酶(ATPase)活性及其mRNA表达的影响.方法 组织块种植法培养自发性高血压和WKY大鼠胸主动脉平滑肌细胞.以WKY大鼠为对照,采用生化酶学方法和逆转录聚合酶链反应,观察不同浓度的内皮素1 (10-7、10-8、10-9 mol/L)及其受体拮抗剂BQ-123(10-6、10-7、10-8 mol/L)对自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞膜Na+,K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性及mRNA表达的影响.结果 内皮素1能减弱自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞两种ATPase活性(P<0.01)及膜钙ATP酶亚型1(PMCA1)表达(P<0.01).BQ-123能部分逆转内皮素1所致两种ATPase活性减弱(P<0.01)及PMCA1表达下调(P<0.01),而内皮素1对Na+,K+-ATPase α1- 亚单位mRNA表达水平无明显改变(P>0.05).结论 内皮素1抑制Na+,K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性,可能是通过ETA受体途径介导,且其对Ca2+-ATPase活性的影响可能发挥在转录水平.BQ-123通过阻断ETA受体逆转内皮素1对自发性高血压大鼠Na+,K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性的影响.     

高血压大鼠心肌肌浆网膜流动性与Ca~(2+)-ATP酶活性的研究

本文观察了高血压６周和１０周两阶段组大鼠肥厚心肌肌浆网膜流动性的变化及其对肌浆网ＣＡ＾２＋－ＡＴＰ酶活性变化的影响。结果发现，高血压对照组膜流动性的随增龄下降，其中高血压１０周网组较６周膜流动性下降更明显。     

氯通道参与脑血管平滑肌细胞Ca2+池操纵性Ca2+内流

研究Cl-通道在牛脑血管平滑肌细胞Ca2+池操纵性Ca2+内流中的作用.采用培养的脑血管平滑肌细胞,在生物荧光双波长影像分析系统用Fura-2/Am荧光探针测定单个细胞内游离Ca2+浓度.结果发现① Cl-通道阻断剂DIDS(0.75 μmol/L)能降低内皮素1(10-7 mol/L)刺激引起的脑血管平滑肌细胞Ca2+内流,抑制率为29.6%±3.9%,随后加入Cl-通道阻断剂NPPB(10 μmol/L)能继续降低平台相,抑制率为44.9%±8.7%;交换加药顺序,NPPB能降低内皮素1刺激引起的Ca2+内流,DIDS能进一步降低Ca2+内流.②DIDS(0.75 μmol/L)能降低三磷酸腺苷(10 μmol/L)刺激引起的脑血管平滑肌细胞Ca2+内流,抑制率为26.7%±10.5%,随后加入NPPB(10 μmol/L)能继续降低平台相,抑制率为54.3%±9.6%;交换加药顺序,NPPB能降低三磷酸腺苷刺激引起的Ca2+内流,DIDS能进一步降低Ca2+内流.③DIDS(0.75 μmol/L)能降低环匹阿尼酸(10 μmol/L)刺激引起的脑血管平滑肌细胞Ca2+内流,抑制率为26.5%±5.0%,随后加入NPPB(10 μmol/L)能继续降低平台相,抑制率为46.1%±4.2%;交换加药顺序,NPPB能降低环匹阿尼酸刺激引起的Ca2+内流,DIDS能进一步降低Ca2+内流.提示对DIDS、NPPB敏感的非同一性Cl-通道参与内皮素1、三磷酸腺苷、环匹阿尼酸触发的脑血管平滑肌细胞 Ca2+池操纵性Ca2+内流.     

Growth Properties and Receptor Expression in Vascular Smooth Muscle Cells from Hypertensive Rats

The objective of this study was to evaluate the growth properties and receptor expression in aorta-ring derived smooth muscle cells (SMCs) cultured from control (WKY) and spontaneously hypertensive rats (SHR). SHR-SMCs exhibited a 3–4 day lag period before migrating. In addition, SHR-SMCs had a significantly higher growth rate, shorter population doubling time and higher saturation density level characteristics that were retained at higher passage levels. O-adrenergic and angiotensin (AII) receptors were measured using iodocyanopindolol (ICYP) and [3H]-All, respectively. All receptor expression was similar in both WKY and SHR-SMC cultures. WKY-SMCs exhibited little ICYP binding (Bmax 8.27± 2.0 fmol/mg) while SHR-SMC binding capacity was 8 fold higher (Bmax 65± 9.2 fmol/mg). In addition, the responsiveness of the P-receptor, as assessed by adenylyl cyclase stimulation, was similar for WKY and SHR-SMCs. These data suggest that factors regulating SMC receptor expression in vitro are selective since All and adrenergic receptor densities exhibit different responses to hypertension.     

碱性成纤维细胞生长因子对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞肾素-血管紧张素系统的作用

以培养的自发性高血压大鼠（SHR）和正常血压（WKY）大鼠主动脉平滑肌细胞（ASMC）为模型,采用Northern印迹和逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术分别检测ASMC中血管紧张素原（Ang N）和血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）的AT_1型受体的基因表达,并用紫外法和放射免疫法分别测定培养液中的血管紧张素Ⅰ转换酶（ACE）活性和AngⅡ的含量。结果表明,基础状态及给予外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF,10 ng/ml）刺激后,SHR的ASMC中上述4种实验参数的水平均明显高于WKY大鼠。提示SHR ASMC中的肾素—血管紧张素系统（RAS）处于高功能状态;bFGF能促进Ang N基因表达、激活ACE,进而导致Ang Ⅱ生成增加,同时它对AT_1受体基因表达也有调节作用,bFGF的上述作用可能是高血压时血管RAS高功能状态发生和维持的一个重要机制。     

表皮生长因子对HT-29细胞内游离Ca~(2 )和C-AMP的影响

本文应用荧光比色法和放射免疫法动态检测了表皮生长因子对大肠癌HT-29细胞内Ca~(2 )和C-AMP水平的影响。结果发表EGF可呈剂量依赖性升高Ca~(2 )水平,而EGF-R抗体则可阻断此作用;EGF可短时降低C-AMP水平,提示Ca2 和C-AMP参于EGF作用的信息传递。     

Coculture of Vascular Endothelial Cells and Smooth Muscle Cells from Spontaneously Hypertensive Rats

The effect of endothelium‐released vasoactive factors on vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation was studied in a coculture system. Isolated aortic endothelial cells and smooth muscle cells from 4‐week‐old spontaneously hypertensive rats (SHR) and age‐matched Wistar–Kyoto (WKY) rats were cocultured. After coculture, the VSMC proliferation rate was examined by ³H‐thymidine incorporation assay and the levels of the vasoactive factors in medium were determined by enzyme immunoassay (EIA). The results indicate that the proliferation rate of VSMCs in SHR was significantly higher than in WKY rats when VSMCs were cultured alone. When SHR vascular endothelial cells (VECs) were cocultured with VSMCs, the proliferation rate of SHR VSMCs was enhanced; however, there was no growth promoting effect in WKY VSMCs. When WKY VECs were cocultured with VSMCs, no VSMC proliferation effect was observed. When VSMCs were cultured alone, the endothelin‐1 (ET‐1) secretion in SHR was significantly higher than in WKY rats. When VECs and VSMCs were cocultured, the ET‐1 concentration increased in both SHR VEC and WKY VEC coculture groups in a similar manner; but the SHR VECs tended to release more thromboxaneA₂ (TXA₂) and less PGI₂ than WKY VECs. These results suggest that some kind of interaction between SHR VSMCs and SHR VECs is responsible for the high proliferation of SHR VSMCs but not the effects of SHR VECs per se.