细咆DNA定量分析法在判断良恶性胸、腹水中的临床应用

目的应用自动细胞DNA定量诊断系统,鉴别诊断良恶性胸、腹水标本。方法202例胸、腹水标本,经细胞采集器处理,每例制成4张薄层细胞片,2张细胞片做巴氏染色,用于常规细胞学检查;另2张经Feulgen染色,用自动细胞DNA定量分析系统检测。结果202例标本常规检测为阴性胸、腹水112例,DNA定量测定为阴性116例。常规检测找到癌细胞51例,找到可疑癌细胞5例,找到少许异型细胞34例。DNA定量测定可见大量异倍体细胞65例,少量异倍体细胞21例。结论应用自动细胞DNA定量分析系统可弥补常规形态学工作的不足,二者协同诊断,可发现早期癌变的胸、腹水,使细胞学检查工作更完善、客观。     

细胞DNA定量分析法在判断良恶性胸、腹水中的临床应用

目的 应用自动细胞DNA定量诊断系统,鉴别诊断良恶性胸、腹水标本.方法 202 例胸、腹水标本,经细胞采集器处理,每例制成4张薄层细胞片,2张细胞片做巴氏染色,用于常规细胞学检查;另2张经 Feulgen染色,用自动细胞DNA定量分析系统检测.结果 202例标本常规检测为阴性胸、腹水112例,DNA定量测定为阴性116例.常规检测找到癌细胞51例,找到可疑癌细胞5例,找到少许异型细胞34例.DNA定量测定可见大量异倍体细胞65例,少量异倍体细胞21例.结论 应用自动细胞DNA定量分析系统可弥补常规形态学工作的不足,二者协同诊断,可发现早期癌变的胸、腹水,使细胞学检查工作更完善、客观.     

全自动细胞图像分析系统在良恶性胸水诊断中的价值

目的 通过全自动细胞图像分析系统(Automatic Imaging Cytometer, AICM)进行细胞核DNA定量鉴别良恶性胸水.方法 111例良恶性胸水标本,经离心涂片,每例制成2张薄层细胞片.1张细胞片进行HE染色,用于常规细胞学检测,另1张行Feulgen染色,用全自动细胞图像分析系统进行细胞核DNA定量测定检查.结果 111例胸水标本经临床或病理诊断证实,71例为良性胸水,40例为恶性胸水.AICM-DNA倍体分析在判断良恶性胸腔积水中的敏感性、特异性、准确性及Youden指数分别为90%、100%、96.4%及0.9;而常规细胞学分别为62.5%、84.5%、76.6%和0.47.结论 AICM进行细胞核DNA测定有助于提高胸水阳性诊断率,在良、恶性胸水的鉴别诊断较常规细胞学方法更客观、敏感.     

外周血细胞DNA、RNA及血红蛋白同时提取法

采用淋巴细胞分离液分离外周血中的有核细胞,经细胞裂解液处理,上清提取RNA,沉淀提取DNA,用分离液分离所得红细胞沉淀制备血红蛋白溶液。经对抽提物质量进行评价,发现3种提取物质量均高。本法能从少量外周血中同时分离DNA、RNA及血红蛋白,高效易操作,值得推广。     

用~3H-TdR掺入法研究小鼠体外培养骨髓细胞DNA代谢过程

研究细胞内DNA、RNA和蛋白质的代谢过程,可利用~3H标记的化合物:~3H-TdR,~3H-Urd和~3H-leu作示踪物,它们与正常的胸腺嘧啶核苷(TdR),尿嘧啶核苷(Urd)和亮氨酸(Leu)有着相同的生物化学性质,在细胞内DNA、RNA和蛋白质合成的过程中可以无选择地被吸收,并能取代正常的前身物而掺入细胞的代谢产物。由于细胞中新合成的DNA、RNA和蛋白质被~3H标记,因此可以根据细胞的放射强度测出标记化合物的掺入率。细胞中DNA、RNA和蛋白质的合成速率与这些被标记的特异前身物的掺入率相一致。用这种方法来研究活细胞内DNA、RNA、蛋白质代谢的动态过程具有简便、迅速、直观、准确等优点,可以免除对DNA、RNA、蛋白质分离提纯及定量测定等复杂过程。这一方法在生物学、特别是药理学研究方面有很大应用价值。     

外周血细胞DNA、RNA及血红蛋白同时提取法

采用淋巴细胞分离液分离外周血中的有核细胞。经细胞裂解液处理，上清提取RNA，沉淀提取DNA，用分离液分离所得红细胞沉淀制备血红蛋白溶液，经对抽提物质量进行评价，发现3种提取物质量均高，本法能从少量外周血中同时分离DNA、RNA及血红蛋白，高效易操作，值得推广。     

石蜡包埋宫颈组织中三种DNA提取方法的比较

目的:通过比较了三种不同的DNA提取方法对DNA质量的影响,旨在寻找一种高效、简便、实用的石蜡组织中DNA提取方法.方法:取10%甲醛固定石蜡包埋的宫颈组织标本(宫颈癌及宫颈上皮内瘤变标本),分别以二甲苯脱蜡及酚氯仿法提纯DNA(方法1)、,IES水浴脱蜡及酚氯仿提纯DNA(方法2)、IES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA(方法3),然后进行电泳和聚合酶链反应扩增分析.结果:TES;水浴脱蜡及酚氯仿法提纯DNA所得样本·DNA的0D260/0D280比值为1.85±0.22,TES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA法为1.81±0.12,两者比较无显著差异(P>0.05);桓分别和二甲苯脱蜡及酚氯仿提纯DNA法相比较有显著差异(P>0.01).DNA电泳和PGR扩增结果示IES水浴脱蜡及酚氯仿提纯DNA、TES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA所得DNA质量均高于二甲苯脱蜡酚氯仿提纯DNA法.结论:TES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA法简便快捷,是理想的石蜡包埋组织DNA提纯方法.     

细菌细胞DNA中碱基成分的高效液相色谱测定法的研究

目的 建立细菌细胞DNA中碱基成分的高效液相色谱定量测定方法。方法 对其实验条件，如检测波长、流动相、方法的线性范围及最低检出量、精密度和准确度等方面进行实验研究。结果 优选细胞DNA中碱基成分测定的最佳实验条件，建立简便、快速、灵敏、精密度好、准确度高、抗干扰能力强的高效液相色谱测定方法。结论 本法可用于细菌细胞DNA中碱基成分的测定。     

荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒的临床意义

目的 :对荧光定量 PCR(FQ- PCR)测定的 10 2例 HBV- DNA结果进行分析 ,以探讨其临床价值。方法 :对 10 2份临床血清标本用 FQ- PCR方法进行 HBV- DNA定量测定 ,并和 EL ISA两对半结果以及 AL T结果进行比较分析。结果 :2 5份 HBs Ag(+)、HBe Ag(+)、HBc Ab(+)的标本 HBV- DNA均为阳性 ,L og DNA平均值± 2 sd为 7.45± 2 .5 4;34份 HBs Ag(+)、HBe Ab(+)、HBc Ab(+)的标本 HBV- DNA阳性 15份 ,L og DNA平均值± 2 sd为 6 .33± 1.86 ;9份HBs Ag(+)、HBc Ab(+)的标本 HBV- DNA阳性 4例 ,L og DNA平均值± 2 sd为 5 .2 3± 4.6 0 ;14份 HBs Ab(+)的标本 HBV- DNA阳性 1例 ,18份全阴性的标本 HBV- DNA无阳性。以上五种两对半结果其相对应的 HBV- DNA值基本呈下降趋势 ,而且前二者之间有显著性差异 (P<0 .0 1)。急性乙型病毒性肝炎、慢性乙型病毒性肝炎、肝癌、肝硬化患者之间的 HVB- DNA定量结果无显著性差异。HBV- DNA和 AL T之间无相关性 (r=0 .17)。结论 :FQ- PCR定量测定HBV- DNA可以真实反应 HBV的感染和复制情况 ,可以用于临床治疗和疗效观察 ,但它在急性乙型病毒性肝炎、慢性乙型病毒性肝炎、肝癌、肝硬化的鉴别诊断上无帮助 ,和病情的轻重也无相关性。     

溪黄草抗乙肝及抗肿瘤活性成分的体外筛选

目的 对溪黄草抗乙肝抗肿瘤活性部位进行初步筛选,为进一步分离活性成分奠定基础.方法 首先在HepG2.2.15细胞模型上对三种不同方法萃取所得的溪黄草提取物进行抗乙肝活性筛选,以用于进一步分析提纯.用MTT实验检测细胞毒性,ELISA和实时定量PCR检测细胞上清液中HBsAg、HBeAg的分泌及乙肝病毒DNA含量.然后,用硅胶柱色谱法进一步提取分离活性最大的提取物,用MTT和ELISA检测所分离各组分的抗乙肝活性.最后,在MCF-7,BGC-823和HepG2细胞中检测细胞毒性最大的三个组分的抗肿瘤活性.结果 乙酸乙酯萃取分离所得的提取物抗乙肝活性最大,可显著降低HepG2.2.15细胞的HBsAg、HBeAg抗原的分泌,并抑制乙肝病毒DNA的复制,被用来进一步分离提纯.从乙酸乙酯提取物中分离出14个组分,其中A3和A5组分对HBsAg有较好的抑制作用,A9组分对HBeAg有较好的抑制作用,并均存在明显的量效关系,且治疗指数均比乙酸乙酯提取物的要高.A6,A7和A11组分细胞毒性大,对不同的肿瘤细胞有不同的抑制活性.结论 溪黄草的乙酸乙酯提取物及其分离成分具有很强的抑制乙肝病毒复制的作用,从而具有很好的抗乙肝病毒活性,进一步提取分离有利于有效成分的纯化而具更强的活性.此外,一些分离成分对不同的肿瘤细胞还有很高的细胞毒性,具一定的抗肿瘤作用.本实验为溪黄草在临床的使用及其作为潜在的高效抗乙肝和肿瘤药物的进一步研究开发工作提供了理论基础.     

40例甲状腺肿瘤DNA含量流式细胞术分析

应用流式细胞仪对40例甲状腺肿瘤石蜡包埋标本进行DNA 含量分析。并对其良、恶性肿瘤间关系进行探讨。结果表明:两组甲状腺肿瘤DNA 含量、倍体水平、S 期细胞数与增殖指数比较无显著差别。作者认为应用FCM 测定石蜡包埋标本细胞的DNA含量,进行回顾性研究是肿瘤诊断、判断预后的一种有效方法。     

中华眼镜蛇蛇毒磷脂酶A2的提纯

目的:探索从中华眼镜蛇蛇毒中快速分离提纯磷脂酶A2(PLA2)的方法方法:应用ARG-CY仿生配基,用亲和层析一步法从中华眼镜蛇蛇毒粗毒中纯化PLA2,用SDS-PAGE进行纯度鉴定及相对分子质量测定,并测定其溶血活性.结果:纯化后获得的PLA2电泳图谱呈单一区带,相对分子质量为14 000,活性为182 μmol/(min·mg).产物具有溶血活性.结论:仿生亲和层析法提纯LPA2操作简单,纯度高,为一高效实用的方法.     

卵巢癌细胞DNA含量定量测定的显微分光光度法和图像分析系统的比较

卵巢恶性肿瘤细胞DNA含量能客观反映肿瘤的内在生物学特性,并与患者预后密切相关,对卵巢交界性肿瘤能提供有价值的诊断依据。传统的测定方法是使用显微分光光度计(MSP)。鉴于它存在测定慢,方法较繁锁的缺点,我们使用计算机图像分析技术(IAT),进行癌细胞DNA含量定量测定,并将结果与分光光度计测定结果进行了     

ELISA-HBsg“灰区”原因的探讨

目的通过ELISA定性试剂检测HBsAg弱反应结果,探讨HBsAg检测值在灰区的原因。方法收集临床标本207份,用某国产试剂对初次测定HBsAg的吸光度值（A）介于灰区的血清标本进行复检,复检后仍介于灰区的血清标本再用FQ-PCR定量测定,分析灰区原因。结果溶血、脂血、凝固不全等标本对ELISA测定HBsAg有影响,72份标本其测定值/阳性判定值（S/CO）在灰区的标本定量检测,结果阳性率为12.5%。结论处于灰区是由于不良标本、试剂质量差异、操作不规范等引起假阳性或假阴性,另外患者的HBV感染人群中,有一部分血清HBsAg呈低水平状态存在,并且部分感染者存在病毒复制。     

放射性碘诱发的大鼠甲状腺肿瘤细胞的DNA含量的测定研究(摘要)

标本为13例大鼠的甲状腺组织,根据每例标本测定100个细胞的结果绘制了组方图,并计算每种肿瘤细胞的平均DNA含量,与正常对照比较分析。结果表明,在显微分光光度计上测定的细胞核的DNA含量在正常甲状腺细胞与淋巴细胞中完全一致,均为正常二倍体细胞(本文二倍体相当于2C细胞),与文献报道一致。本文测定的正常甲状腺(2例),滤泡上皮细胞DNA相对含量范围为8～16(90%的细胞),     

尿液分析测定其它体液中葡萄糖和蛋白定量方法探讨

长期以来 ,我对脑脊液、浆膜腔积液中葡萄糖和蛋白定量测定方法进行摸索。进一步想到 :在尿液与脑脊液、浆膜腔积液中葡萄糖和蛋白定量测定具有相同实验原理的前提下 ,用尿分析仪替代繁锁的生化操作 ,为临床提供了迅捷 ,可靠的诊断依据。1　材料及方法1 1　 5 2例脑脊液和 83例浆膜腔积液标本来源于 1998年1月至 1999年 5月我院住院病人。1 2　脑脊液、浆膜腔积液蛋白定量测定采用染料结合法(以下简称结合法 )。1 3　脑脊液、浆膜腔积液葡萄糖定量测定采用葡萄糖氧化酶法 (以下简称酶法 )采用 3Ｖ集团公司生产的血糖测定试剂盒。1 4　优利特…     

荧光定量PCR检测生殖道内沙眼衣原体感染的应用

目的 评价DNA定量测定技术在生殖道衣原体感染诊断中的应用价值.方法 比较荧光定量DNA测定与传统检测手段对衣原体感染的检测结果.结果 用荧光定量PCR法测定DNA来检测沙眼衣原体(CT)感染,其敏感性和特异性均比传统的方法高.结论 CT-DNA定量测定不宜用作短期判愈,在沙眼衣原体诊断中具有巨大的潜力.     

扩增潜伏HIV-1 DNA序列实验方法的优化

目的对PCR扩增潜伏HIV-1DNA序列的实验方法进行优化。方法收集30例经高效抗逆转录病毒治疗（HAART）6~12个月的HIV-1感染者抗凝血标本,分别从外周血单个核细胞（PBMC）和高度纯化的CD4＋T细胞提取基因组DNA,巢式PCR扩增HIV-1env的C2-V5区,电泳检测扩增产物并进行DNA序列测定。结果同一患者PBMC纯化CD4＋T细胞标本扩增HIV-1env基因C2-V5区的效率（93.3%）明显高于直接从PBMC标本扩增该目的片段的效率（10.0%）。结论 PBMC纯化CD4＋T细胞后,再提取基因组DNA进行巢式PCR扩增,可提高扩增潜伏HIV-1DNA序列的效率。     

用聚合酶链反应微孔板杂交技术检测HBV DNA

目的 :建立并优化HBVDNA的PCR 微孔板杂交技术检测体系 ,使临床PCR结果判定更加客观可靠。方法 :采用碱裂解标本中的HBV、玻璃粉吸附提纯模板DNA ,用 5’端标记生物素的引物进行PCR ,PCR扩增产物与包被于微孔板中的靶基因杂交 ,酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合后 ,用酶底物与所标记酶进行显色反应 ,最后通过测定其光密度来判定结果。结果 :建立并优化的PCR 微孔板杂交检测方法提高了检测的灵敏度和特异性。PCR 微孔板杂交法对HBVDNA的检出阳性率 (79.8% )比电泳法 (6 9.0 % )高 ,2 0份非乙肝患者血清标本两方法检测均阴性。结论 :本方法灵敏、特异、操作简便、快速、结果客观可靠。     

聚合酶链反应在临床巨细胞病毒感染检测中的应用和研究

本文用聚合酶链反应(PCR)技术检测76份患儿尿标本中巨细胞病毒(CMV)DNA,其中32份尿标本做了病毒分离,另44例同时做血清CMV IgM抗体检测。结果PCR和病毒分离阳性符合率为100％,与CMV IgM抗体检出率无显著差异(P>0.05)。证明PCR方法具有特异性高、敏感性好、操作简便、检测周期短等优点,适用于临床进行CMV感染的快速诊断。