基质金属蛋白酶与Ⅳ型胶原在成釉细胞瘤的表达

目的探讨基质金属蛋白酶和Ⅳ型胶原与成釉细胞瘤复发、侵袭的关系。方法采用免疫组织化学LABC方法检测28例成釉细胞瘤组织中MMP-2、TIMP-2和Ⅳ型胶原的表达,并用RT-PCR方法检测MMP-2、TIMP-2和MT1-MMP在20例成釉细胞瘤的表达。结果MMP-2、TIMP-2和Ⅳ型胶原蛋白在成釉细胞瘤的阳性表达率分别为92.9%、75.0%和42.9%,Ⅳ型胶原阳性着色部位均位于基底膜及部分肿瘤细胞的胞质,MMP-2和TIMP-2阳性着色部位均位于细胞质,分布于瘤组织各层;复发性成釉细胞瘤Ⅳ型胶原的阳性表达率明显低于原发性成釉细胞瘤(P<0.01)。MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2的mRNA在成釉细胞瘤组织中均有表达,复发性成釉细胞瘤的TIMP-2、MT1-MMP相对含量均显著高于原发性成釉细胞瘤(P<0.01)。结论基质金属蛋白酶MT1-MMP表达增加和Ⅳ型胶原在基底膜表达缺失与成釉细胞瘤的复发密切相关,MMP-2活性增加和基底膜Ⅳ型胶原降解增多可能是成釉细胞瘤局部侵袭的机制之一。     

RANKL、MMP-9和MMP-2在成釉细胞瘤中的表达及意义

目的：探讨RANKL、MMP-9和MMP-2与成釉细胞瘤骨吸收机制之间的关系。方法：应用免疫组化、荧光定量RT—PCR及Western印迹方法，分别在不同分子水平检测RANKL、MMP-2和MMP-9在成釉细胞瘤中的表达，所有实验数据均经SPSS11．0统计软件包进行分析处理，组间比较采用t检验。结果：在所有成釉细胞瘤标本中，3种方法均可检测到RANKL、MMP-2和MMP-9的表达。其中，RANKL各型成釉细胞瘤中均呈恒定的高表达，而荧光定量RT—PCR检测结果显示，MMP-2在基底细胞型成釉细胞瘤中的表达水平显著高于其他两型（P〈0．05）。结论：MMP-2、MMP-9及RANKL可能共同参与成釉细胞瘤引起的骨质吸收过程。与MMP-9相比，MMP-2可能与成釉细胞瘤的侵袭性更为相关。     

成纤维生长因子受体2在原发及复发成釉细胞瘤中的表达及意义

目的：检测成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）在颌骨原发及复发成釉细胞瘤中的表达,并探讨其与成釉细胞瘤临床特点尤其是侵袭和复发的关系。方法：选择手术切除的多囊型成釉细胞瘤患者64例共96例成釉细胞瘤组织,分为复发组（第1组,32例患者64例组织）和原发组（第2组,32例患者 32例组织）,以10例正常牙囊组织为对照,采用免疫组织化学方法检测96例成釉细胞瘤组织及10例牙囊组织中FGFR2蛋白的表达。应用SAS9.3软件包分析FGFR2与成釉细胞瘤的关系。结果：96例成釉细胞瘤中均检测到FGFR2的表达,复发成釉细胞瘤组织中FGFR2的表达显著高于原发成釉细胞瘤;第1组中原发成釉细胞瘤的平均直径为4.02 cm,第2组中成釉细胞瘤的平均直径为3.1 cm（P<0.05）且最大直径为3.9 cm。上颌骨复发成釉细胞瘤中FGFR2的阳性率显著高于下颌骨复发成釉细胞瘤。结论：肿瘤复发与成釉细胞瘤的大小相关,直径大于3.9 cm的成釉细胞瘤较直径小于3.9 cm者更易复发,且复发成釉细胞瘤中FGFR2的阳性率显著高于原发成釉细胞瘤,表明FGFR2的表达与成釉细胞瘤的复发相关,可能是成釉细胞瘤局部复发的机制之一。     

基质金属蛋白酶组织抑制剂-2过表达对人成釉细胞瘤鸡胚尿囊膜移植瘤的抑制作用

目的探讨基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）基因过表达对人成釉细胞瘤鸡胚尿囊膜（CAM）移植瘤的抑制作用。方法建立成釉细胞瘤的鸡胚尿囊膜移植瘤模型。将实验分组：空白对照组（Empt）,脂质体转染组（Lipo）,质粒转染组（P）。TIMP－2基因转染成釉细胞CAM移植瘤细胞后,测定移植瘤体积和瘤重;将移植瘤侵袭能力分为4个级别进行移植瘤病理检查。Western blot分析移植瘤基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及TIMP-2蛋白的表达。结果移植瘤能在鸡胚绒毛尿囊膜上生长。接种后第9天,转染质粒组的0级侵袭为7例、2级侵袭为1例、3级侵袭为0例。TIMP-2基因转染可以显著抑制成釉细胞CAM移植瘤的局部侵袭能力。质粒转染组TIMP-2表达明显高于空白组TIMP-2的表达（P＜0.05）;质粒转染组MMP-2表达明显低于空白组MMP-2的表达（P＜0.05）。结论成功建立成釉细胞瘤的CAM移植瘤模型。TIMP-2基因转染后,成釉细胞瘤CAM移植瘤的侵袭性生长被抑制。移植瘤的侵袭性生长被抑制的可能原因是由于特异性抑制MMP-2蛋白引起的。     

基质金属蛋白酶-2活性与成釉细胞瘤侵袭力的关系

目的：探讨基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）活性与成釉细胞瘤体内、外侵袭力的关系。方法：通过MMP-2活性抑制剂R031—9790降低MMP-2活性进行干预处理，采用成釉细胞瘤细胞原代培养、瘤组织块裸鼠肾包膜下移植、MTT、Western印迹、体外侵袭试验、组织学和免疫组织化学等方法，观察MMP-2活性与成釉细胞瘤体内、外侵袭的关系。采用SPSS10．0统计软件包对上述数据进行χ^2检验和单因素方差分析。结果：R031-9790各处理组和对照组的生长曲线无显著差异（P〉0．05）。R031-9790对成釉细胞瘤细胞的体内、外侵袭均有显著的抑制作用（P〈0．01）。并可增加Ⅳ型胶原在瘤组织的阳性表达，减少E-钙黏素在瘤组织的异常表达，同时在体内、外均不影响成釉细胞瘤细胞MMP-2的表达。结论：MMP-2活性与成釉细胞瘤的侵袭直接相关；R031-9790可通过降低MMP-2活性而抑制成釉细胞瘤的侵袭；活性MMP-2可能通过调节Ⅳ型胶原及E-钙黏素的表达。影响成釉细胞瘤的侵袭。     

MMP-2抑制剂对成釉细胞瘤细胞体外侵袭的影响

目的:探讨基质金属蛋白酶-2抑制剂Ro31-9790对成釉细胞瘤细胞体外侵袭的影响。方法:通过给予Ro31-9790对体外培养的成釉细胞瘤细胞进行处理,采用明胶酶谱法、流式细胞术、体外侵袭试验、细胞粘附分析、免疫组化、MTT试验等方法,观察Ro31-9790对成釉细胞瘤细胞体外侵袭等特性的影响。结果:Ro31-9790对成釉细胞瘤细胞的侵袭及粘附能力均有明显的抑制作用;4例成釉细胞瘤细胞均表达MMP-2,但不同肿瘤组织来源的成釉细胞瘤细胞MMP-2表达量不同。Ro31-9790能显著抑制成釉细胞瘤细胞分泌的MMP-2的活性,但不影响成釉细胞瘤细胞MMP-2和TIMP-2的表达;Ro31-9790不能抑制成釉细胞瘤细胞的体外增殖。结论:MMP-2的活性及其相关的细胞粘附能力与成釉细胞瘤的侵袭能力密切相关,Ro31-9790可在体外抑制成釉细胞瘤的侵袭     

环氧化合酶-2蛋白在人成釉细胞瘤中的表达及临床意义

目的探讨环氧化合酶-2在成釉细胞瘤中表达的意义。方法采用免疫组织化学SP法检测COX-2在77例成釉细胞瘤(ameloblastoma,AB)、6例恶性成釉细胞瘤(恶性AB)、9例瘤旁黏膜及9例正常口腔黏膜中的表达。结果AB、恶性AB及瘤旁黏膜中均有COX-2的明显表达,恶性AB阳性率最高,为100,依次为成釉细胞瘤81.8、瘤旁黏膜77.8,正常口腔黏膜轻微表达其阳性率为44.4,各组间均有显著差异(P<0.05)。结论 AB中COX-2高表达,且明显高于正常黏膜;COX-2可能参与AB的发生发展,AB的侵袭性增加和恶变与COX-2的高表达相关。     

过表达RECK基因对成釉细胞瘤hTERT＋_AM永生化细胞株MMPs表达及侵袭能力的影响

目的：观察转染RECK基因对人成釉细胞瘤（ameloblastoma,AM）细胞株hTERT-AM的MMPs表达及细胞侵袭力的影响。方法：利用RECK基因慢病毒载体Lenti—RECK—eGFP／puro转染hTERTAM细胞株．Puro筛选和镜下挑单克隆纯化细胞。CCK8检测细胞活性,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,qRT—PCR检测细胞中RECK的mRNA的表达情况。Western蛋白印迹检测细胞中RECK、MMP2、MMP9的表达情况。采用SPSS13．0软件包对数据进行统计学分析。结果：转染RECK基因后,hTERT~AM细胞中RECK的mRNA和蛋白的表达均显著增高（P均〈0．01）,细胞活性无显著变化（P均〉0．05）,细胞迁移、侵袭能力均显著下降（P均〈0．01）,MMP2、MMP9蛋白表达均显著下降（P均〈0．05）。结论：RECK基因参与人成釉细胞瘤局部侵袭的调节,过表达RECK基因后,MMP2、MMP9下调,抑制AM细胞迁移和侵袭。RECK有望成为人成釉细胞瘤侵袭防治的新靶点。     

TIMP-2对人成釉细胞瘤裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的：研究TIMP-2基因转染对人成釉细胞瘤裸鼠移植瘤侵袭性生长的抑制作用。方法：实验分为空白对照组（Opti—MEM）、脂质体转染组（脂质体＋Opti—MEM）和质粒转染组[pcDNA3．1（＋）／GFP—TIMP－2＋脂质体＋Opti—MEM]。将以上各组液体混合注射于移植瘤的周围，每3天1次，共3次。采用RT—PCR分析移植瘤MMP－2及TIMP－2mRNA的表达．Western印迹分析移植瘤MMP－2及TIMP－2蛋白的表达，测定移植瘤体积和瘤重。应用SPSS11．0软件包对所得数据进行统计学分析。结果：接种AM组织块后，裸鼠生长良好，所有裸鼠在实验终止前均存活。接种AM组织块后1周末．可见裸鼠的接种处皮下有小结节，颜色与皮肤颜色相近，随皮肤移动而移动；2周末，小结节稍有增大，并且固定于皮下，不随皮肤的移动而移动，小结节表面较第1周略圆；实验终止时，所有移植瘤都有不同程度的增大。与对照组比较，质粒转染组移植瘤的生长速度在接种后4周明显降低。接种后第5周末，质粒转染组移植瘤的生长速度略有增加。自第1周末开始至实验终止时，质粒转染组移植瘤的体积均小于对照组。各组MMP－2mRNA表达平均值无变化，三者之间无显著性差异，P〉0．05。质粒转染组的TIMP－2mRNA表达水平与空白对照组和空脂质体转染组比较均显著增加（P〈0．05）。与空白组比较，质粒转染组的TIMP－2mRNA表达相对增加率为35．72％。质粒转染组MMP－2表达平均值比值为0．38，MMP－2蛋白抑制率为47．36％。质粒转染组MMP－2表达显著低于空白组，P〈0．05。质粒转染组TIMP－2表达平均值比值为0．86，TIMP－2蛋白增加率为54．65％。质粒转染组TIMP－2表达显著高于空白组，P〈0．05。结论：AM移植瘤的生长抑制，可能是由于TIMP－2基因过表达后，特异性抑制MMP－2蛋白所致。     

MMP-2靶向siRNA对成釉细胞瘤裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:构建裸鼠皮下人成釉细胞瘤移植瘤模型,研究MMP-2靶向siRNA对成釉细胞瘤侵袭性的抑制作用。方法:取新鲜成釉细胞瘤组织标本,剪切成1～2mm3组织小块,接种于裸鼠前肢根部的背侧皮下。实验分为3组:空白对照组不加任何处理因素;脂质体组注射脂质体混合物;siRNA组注射MMP-2靶向siRNA表达质粒混合物。组织块接种后第2周末开始施加处理因素,记录移植瘤体积和实验终止时的肿瘤重量。采用SPSS10.0统计软件包对数据进行t检验,并对移植瘤进行组织病理学分析。结果:所有移植瘤均成活,病理证实移植瘤为成釉细胞瘤,siRNA组和对照组之间肿瘤的体积有显著性差异,P<0.05。结论:裸鼠皮下接种成釉细胞瘤组织块构建成釉细胞瘤移植瘤动物模型是可行的,MMP-2靶向siRNA可在体内抑制成釉细胞瘤的侵袭性和生长。     

成釉细胞瘤中基质金属蛋白酶MMP-2的表达及意义

:目的　探讨成釉细胞瘤局部侵袭性生长的生物学机制。方法　免疫组化 S- P法检测基质金属蛋白酶MMP- 2在成釉细胞瘤中的表达和分布。结果　成釉细胞瘤中 MMP- 2阳性染色位于肿瘤外周柱状细胞的胞浆中 ,中心星网状细胞未见表达 ;角化囊肿和含牙囊肿的上皮细胞中均未见 MMP- 2的阳性表达。结论　成釉细胞瘤细胞产生的 MMP- 2 ,导致基底膜成分 型胶原降解 ,破坏基底膜的完整性 ,这可能是成釉细胞瘤局部侵袭的机制之一。     

负向调控基质金属蛋白酶-2的表达抑制成釉细胞瘤的侵袭性

目的探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）靶向小干扰RNA（siRNA）对成釉细胞瘤（AM）细胞MMP-2基因的负向调控作用及对AM侵袭性的抑制作用。方法培养成釉细胞瘤细胞，应用免疫荧光法检测成釉细胞瘤中MMP-2的表达；体外构建MMP-2靶向siRNA质粒表达载体，并转染成釉细胞瘤细胞．激光共聚焦显微镜检测siRNA质粒表达载体的转染效果，流式细胞仪检测转染效率．逆转录聚合酶链反应检测MMP-2mRNA的改变，免疫印迹法检测细胞MMP-2蛋白表达．侵袭小室微侵袭分析检测细胞的侵袭性，对统计结果进行方差分析。结果成釉细胞瘤中MMP-2呈阳性表达，siRNA质粒表达载体对成釉细胞瘤细胞的转染率为63、6％；转染后，成釉细胞瘤细胞的MMP-2mRNA表达减少69．3％，MMP-2蛋白表达减少64.2％，P〈0．05，细胞的侵袭抑制率为61．2％。结论MMP-2靶向siRNA表达质粒成功转染成釉细胞瘤细胞并沉默MMP-2基因，MMP-2与细胞的侵袭性密切相关。     

成釉细胞瘤中Ki-67的表达及其临床意义

目的　检测Ki-67抗原在不同组织类型成釉细胞瘤中的表达情况,以探讨不同组织类型成釉细胞瘤的细胞增殖能力差异及其相应的临床意义。方法　采用LsAB免疫组织化学方法,对70例成釉细胞瘤进行染色, 并采用Sopt及IPP图像分析系统半定量分析Ki-67阳性染色指数。结果　恶性成釉细胞瘤的阳性染色指数最高 14·72%±2·87%,其次为实性成釉细胞瘤,其中以滤泡型4·42%±1·05%高于丛状型3·64%±1·23%,单囊型最低 2·21%±1·09%。结论　Ki-67所反映的不同组织类型成釉细胞瘤的细胞增殖能力的差异,可能与其术后复发率的高低有关。     

成釉细胞瘤中MMP-2的表达及RNA干扰的抑制作用

目的：研究MMP-2存成釉细胞瘤中的表达和RNA干扰对成釉细胞瘤细胞中MMP-2基因的沉默效应。方法：培养成釉细胞瘤细胞，应用免疫组织化学方法检测成釉细胞瘤中MMP-2的表达；体外构建MMP-2靶向siRNA质粒表达载体，将siRNA质粘表达载体转染原代培养的成釉细胞瘤细胞，激光共聚焦显微镜检测siRNA质粒表达载体的转染效率，RT-PCR检测成釉细胞瘤细胞中MMP-2 mRNA的改变，明胶酶谱法检测MMP-2的变化．应用SPSSI 1．0统计软件中的t检验对结果进行统计学分析。结果：成釉细胞瘤中MMP-2呈阳性表达．siRNA质粒表达载体对原代培养的成釉细胞瘤细胞的转染半为41.8％；转染后，成釉细胞瘤细胞的MMP-2 mRNA表达水平显著降低，酶原性MMP-2和活性MMP-2显著减少，P〈0．05结论：体外构建的MMP-2靶向siRNA质粒表达载体可以转染体外培养的成釉细胞瘤细胞，并导致MMP-2基因沉默。     

Ki-67抗原在实性成釉细胞瘤中的表达及其临床意义

目的 :探讨 2种常见类型实性成釉细胞瘤的细胞增殖性与其生物学行为的关系及其临床意义。方法 :应用LsAB免疫组织化学染色法对Ki 67抗原在 3 0例 2种常见实性成釉细胞瘤中的表达进行了研究 ,图像分析系统半定量分析其阳性染色指数。结果 :滤泡型成釉细胞瘤阳性染色指数 (4 .3 1± 2 .2 5 ) %明显高于丛状型成釉细胞瘤 (3 .76± 1.96) %。结论 :不同类型实性成釉细胞瘤的生物学行为存在差异 ,滤泡型成釉细胞瘤的细胞增殖能力较丛状型强 ,生物学行为上更具侵袭性 ,预后较差。     

PKC-α和BCL-2在成釉细胞瘤中的表达及相关性

目的：观察蛋白激酶C-α（protein kinase C-α,PKC-α）和B细胞淋巴瘤因子-2（B Cell Lymphoma/Leukemia-2,BCL-2）在成釉细胞瘤中的表达及其相关性,探讨其与成釉细胞瘤发生和发展的生物学意义。方法：应用免疫组织化学方法检测42例成釉细胞瘤中PKC-α和BCL-2的表达,10例牙源性角化囊肿和10例口腔正常黏膜为对照。结果：PKC-α和BCL-2在成釉细胞瘤中的阳性率均高于对照组,且PKC-α和BCL-2的表达呈正相关。结论：PKC-α和BCL-2在成釉细胞瘤中高度表达。PKC-α和BCL-2在成釉细胞瘤的发生、发展及细胞分化与增殖中起着重要作用。     

实性型成釉细胞瘤的体外培养与检测

目的观察体外培养的实性型成釉细胞瘤的生长特点。方法对实性型成釉细胞瘤细胞进行体外培养,免疫组化证实其细胞来源,倒置显微镜观察细胞形态及生长情况,并用流式细胞仪分析细胞周期、噻唑蓝比色(MTT)法绘制细胞生长曲线。结果贴壁的实性型成釉细胞瘤细胞为上皮来源,在体外原代培养的肿瘤细胞包含2种形态不同的细胞,肿瘤细胞生长缓慢。1例复发型的丛状型成釉细胞瘤的第2代细胞DI值出现异倍体。结论成釉细胞瘤细胞增殖缓慢,复发型的成釉细胞瘤细胞在体外培养中随着传代次数的增加,细胞向恶性转化,可能与其恶变及侵袭性有关。     

成釉细胞瘤基质金属蛋白酶-2表达的初步研究

目的:分析基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在成釉细胞瘤中的表达,比较其在成釉细胞瘤各病理类型间的差异及与侵袭性的关系.方法:收集2005—2009年于北京大学口腔医院手术所得成釉细胞瘤石蜡标本26块,对标本进行免疫组织化学(免疫组化)染色.MMP-2为一抗,在高倍镜...     

成釉细胞瘤的侵袭性生物学行为研究

目的　研究成釉细胞瘤 (AB)侵袭性生长的生物学行为 ,对其相关因素进行分析。方法　采用免疫组化SP法 ,对 4 3例AB(原发 16例 ,复发 2 1例 ,恶性 6例 )进行了上皮性钙黏附蛋白 (E cad)、基质金属蛋白酶 (MMP 2、MMP 9)及其血管生成因子 (VEGF)的定位表达。结果　侵袭恶变AB细胞离散度增加 ,基膜断裂消失 ,瘤细胞外侵 ,E cad在AB中表达下降 ,MMP 2、MMP 9在AB上皮中有 2 8/41例和 30 /43例强表达 ,AB中VEGF阳性表达随着AB复发、恶变而逐渐增加 ,伴随AB的复发与恶变E cad、MMP 9、VEGF与其生物学行为显著相关 (rs=0 30 9、0 5 19、0 381,P <0 0 5 )。结论　AB为具有较高侵袭性的肿瘤 ,其生物学行为与E cad的丢失和异常表达 ,MMP 2、MMP 9、VEGF的强表达有关     

RECK在成釉细胞瘤中的表达及其与基质金属蛋白酶-2的关系

目的:研究RECK(reversion-inducing cysteine rich protein with Kazal motifs)和基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)在成釉细胞瘤(ameloblastoma,AB)中的表达及其相关性,探讨两者与成釉细胞瘤临床生物学行为的关系.方法:应用免疫组化EliVisionTM plus法,检测69例成釉细胞瘤(原发AB 45例,复发AB 24例)、6例成釉细胞癌和16例牙源性角化囊性瘤(keratocystic odontogenic tumor,KCOT)中RECK、MMP-2蛋白的表达,采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:RECK在KCOT、AB和成釉细胞癌中的阳性表达率依次降低,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),且复发AB的RECK表达显著低于原发AB(P<0.01).MMP-2在AB和成釉细胞癌中的阳性表达率均显著高于KCOT(P<0.05),且MMP-2的表达在AB与成釉细胞癌以及原发AB与复发AB间均无显著性差异(P>0.05).RECK与MMP-2在AB中的表达呈负相关(r=-0.431,P<0.001).结论:RECK与AB的临床生物学行为密切相关,可能通过调控MMP-2参与AB的浸润、复发和恶性转化过程.