肠道病毒71型感染研究进展

肠道病毒71型（Enterovirus 71,EV71）属于小RNA病毒科（Picomaradae）肠道病毒属（Enterovirus）,同一属的病毒还有脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒和埃可病毒等。这类病毒通过在人体的消化道组织中侵袭与繁殖,后经过血液循环传播,而最终导致多种临床病征。EV71最初于1969年由Schmidt等从美国加利福尼亚州1名9个月大的脑炎患儿的脑脊液中分离出,1972年定出血清型,并于1974年首次报道。其后,在全世界发现各种各样的临床表现和很多致命性感染与EV71相关。     

肠道病毒71型感染引起的手足口病患儿Th细胞变化的意义研究

目的：探讨肠道病毒71型感染引起的手足口病（HFMD）患儿Th细胞变化及意义。方法：选取我院收治的HFMD患儿162例及65例健康小儿作为临床研究对象。采集两组小儿的外周血、大便,两组患儿Th细胞水平。结果：与对照组比较,HFMD小儿的Th1水平较低（P＜0.05）,与轻症组比较,重症组HFMD小儿的Th1水平较低（P＜0.05）;与对照组比较,研究组HFMD小儿的Th2水平较高（P＜0.05）,与轻症组比较,重症的HFMD小儿Th2水平较高（P＜0.05）;与对照组比较,研究组HFMD小儿的Th17水平较高（P＜0.05）,与轻症组比较,重症的HFMD小儿Th17水平较高（P＜0.05）。结论：EV71感染引起小儿HFMD时。其Th细胞有明显的变化,Th1水平的降低、Th2和Th17水平的升高。     

木犀草素对高脂血症大鼠血脂的影响

目的观察木犀草素对实验性高脂血症大鼠血脂代谢的影响及抗氧化作用.方法喂饲法建立高血脂症大鼠模型,木犀草素按1.5、3和6 mg/mL(bw/d)给大鼠连续灌胃5周,测定血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷光甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,血清脂质过氧化物(MDA)含量.结果木犀草素能明显降低高脂血症大鼠血清中TC、TG、LDL-C和MDA的水平,升高HDL-C使动脉硬化指数(AI)降低,并能提高大鼠血清中SOD、GSH-Px的活性.结论木犀草素能降低高脂血症大鼠血脂水平及纠正自由基代谢紊乱,发挥抗动脉硬化作用.     

木犀草素对急性痛风性关节炎模型大鼠的抗炎作用研究

目的:探讨木犀草素对急性痛风性关节炎模型大鼠的抗炎作用。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为6组,踝关节局部注射尿酸钠晶体混悬液制备急性痛风性关节炎大鼠模型,观察各组不同时间点关节肿胀指数和血清、滑膜中白介素(IL)-1β、IL-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6的水平。结果:造模后模型组不同时间点的步态评分和关节肿胀指数均较对照组升高(P<0.01);木犀草素组可减轻急性痛风性关节炎模型大鼠的踝关节肿胀(P<0.05),并且显著降低IL-1β、IL-17、TNF-α、IL-6的水平(P<0.01)。结论:木犀草素可减轻急性痛风性关节炎的炎症反应,有望成为治疗痛风性关节炎急性发作的有效药物。     

木犀草素对肿瘤作用的研究进展

木犀草素(luteolin)是由木犀草中分离出而得名,是一种天然黄酮类化合物,存在于锦葵科、菊科、唇形科、马鞭草科、伞形科、天南星科、十字花科、萝藦科等。木犀草素具有抗炎,抗细菌,抗氧化,抗癌等药     

木犀草素对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响

目的研究木犀草素对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响.方法木犀草素按0.04、0.02和0.01g/(mL·d)给小鼠连续灌胃7d后,进行碳粒廓清试验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验并测定和计算血清溶菌酶活力及胸腺指数、脾脏指数.结果木犀草素对小鼠的胸腺指数及脾脏指数无明显影响.与对照组相比,木犀草素高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数、碳粒廓清速率和廓清指数及体内溶菌酶活力明显降低,而低剂量和中剂量木犀草素组则无显著差别.结论木犀草素可降低小鼠巨噬细胞的吞噬功能及体内溶菌酶活力,具有一定的免疫调节作用.     

重症71型肠道病毒感染的临床治疗分析

目的探讨重症71型肠道病毒感染的临床特征、治疗方法及临床效果。方法选取86例EV71感染的重型小儿手足口病患儿,随机分为治疗组56例和对照组30例。在常规治疗的基础上,对照组采用病毒唑10mg／kg＋5％葡萄糖100～250raL静脉滴注;治疗组干扰素肌注＋炎琥宁10mg／kg＋5％葡萄糖100～250mL静脉滴注。比较两组的临床疗效。结果治疗组的总体有效率为92．9％（52／56）,显著高于对照组66．7％（20／30）,P〈0．01。结论EV71重症以中枢神经系统感染为主,该病应早诊断、早治疗,干扰素＋炎琥宁治疗预后良好。     

木犀草素对冷保存心脏功能及心肌细胞凋亡的影响

目的研究木犀草素对UW液低温保存离体大鼠心脏的功能及对心肌细胞凋亡的影响。方法将40只成年SD大鼠随机分成2组（n=20）：对照组（UW组）及实验组（添加30μmol/L木犀草素的UW液）。利用Langendorff离体心脏灌流法,观察离体心脏冷保存18h复灌60min后心率、左心室最大收缩压、左心室压力变化率、心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达。结果与对照组比较,实验组复灌期心脏的收缩功能（LVPSP,＋dp/dtmax）、舒张功能（-dp/dtmax）及心率高于对照组差异有统计学义意义（P〈0.05）;心肌细胞的凋亡及促进凋亡Bax基因的表达均明显低于对照组;而抑制凋亡Bcl-2基因的表达均明显高于对照组。结论木犀草素能显著改善UW液低温保存离体大鼠心脏的功能,对心肌细胞凋亡有明显抑制作用。     

白藜芦醇体外抗肠道病毒71型的作用

目的在体外观察白藜芦醇抗肠道病毒71的作用效果。方法将白藜芦醇作用于Vero细胞,CCK-8法检测其细胞毒性。以利巴韦林作为对照药物,分别在病毒感染细胞的不同阶段加入白藜芦醇,观察细胞病变(CPE),CCK-8法检测并计算病毒抑制率、半数有效浓度(IC50)及选择指数(SI),评价白藜芦醇的抗病毒效果。结果低浓度的白藜芦醇对细胞是无毒性的,细胞半数毒性浓度(TC50)为307.6 mmol/L。白藜芦醇只在预处理细胞后具备抗病毒效果,药物半数有效浓度(IC50)为20.2 mmol/L,白藜芦醇抗EV71的选择指数(SI)为15.2。而在病毒吸附细胞后,以及白藜芦醇直接与病毒液混合,均无抗病毒作用。结论白藜芦醇具有一定的抗肠道病毒71的作用。     

疏清颗粒对EV71的体外抗病毒研究

目的 观察疏清颗粒体外抗肠道病毒71型（EV71）作用,为临床治疗EV71感染提供理论依据.方法 观察EV71病毒感染人横纹肌肉瘤细胞（RD细胞）后引起的细胞病变效应（CPE）,并用MTT法测定疏清颗粒对EV71的抑制作用,同时以板蓝根颗粒作为阳性对照药物.结果 疏清颗粒能明显抑制EV71引起的细胞病变效应（CPE）,疏清颗粒及板蓝根颗粒抑制EV71增殖的半数有效浓度（IC50）分别为（0.136±0.022）和（0.199±0.016）g·L-1.结论 与板蓝根颗粒组相比,疏清颗粒在体外能明显的抑制EV71增殖,差异有统计学意义（P＜0.05）,为进行临床治疗EV71感染引起的手足口病提供新方法.     

肠道病毒71型微复制子的构建

目的 构建EV71非结构蛋白及EV71 3C蛋白酶微复制子体系,研究微复制子的复制及表达情况。方法 聚合酶链式反应扩增绿色荧光蛋白(EGFP),利用特定酶切位点及连接酶,将目的基因片段连接至pMD19-T载体,分别构建EV71非结构蛋白及EV71 3C蛋白酶微复制子体系。荧光显微镜下观察微复制子表达情况,实时荧光定量PCR观察微复制子复制情况。结果 EV71非结构蛋白微复制子及EV71 3C蛋白酶微复制子表达后,均可观察到特异性绿色荧光,荧光强度有明显差异;转染后12~72 h取样所测RNA含量几乎不变。结论 非结构蛋白全长及3C蛋白酶启动微复制子转录强度不同,所构建微复制子不具备复制功能,提示结构蛋白编码区对病毒RNA复制有重要意义。     

制备肠道病毒71型黏膜疫苗的初步探索

目的利用同源重组技术将肠道病毒71型衣壳蛋白VP1基因重组入枯草芽胞杆菌基因组,进而将VP1蛋白展示在其芽胞表面制备EV71黏膜疫苗。方法将枯草芽胞杆菌CotB基因与VP1基因连接后插入整合质粒pDG1662,得到重组质粒pDG1662-CotB-VP1,电转化法转化枯草芽胞杆菌1A771,抗生素抗性筛选,PCR、Westernblot、免疫荧光鉴定VP1基因重组及蛋白表达情况。结果 VP1基因成功重组入枯草芽胞杆菌基因组中,VP1蛋白在芽胞表面得到了有效表达。结论 EV71衣壳蛋白在枯草芽胞杆菌芽胞表面得到了有效表达,为研究EV71黏膜疫苗奠定基础。     

肠道病毒71型感染治疗方法研究进展

肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）是引起重症手足口病的主要病原体。随着其病毒特征、感染和发病机制逐渐清晰,EV71感染的治疗策略也逐步明确。一方面是直接靶向EV71感染过程,针对具体靶点进行EV71感染或发病过程的干预;另一方面是通过调节宿主免疫清除病毒、缓解炎症、保护未感染细胞。目前已经在临床应用的治疗药物不多,大多尚处于临床前研究阶段。也有干扰素类具有广谱抗病毒和免疫调节双重作用的细胞因子在临床使用,或者通过药物联用的方法增强抗病毒效果,降低毒性和耐药性。本文对近年来报道的不同类型的EV71治疗药物进行综述,以期为深入研究抗EV71感染的治疗策略提供帮助。     

传统头颅MR序列阳性与阴性的重症EV71感染临床特征的差异

目的：比较传统MRI阳性EV71脑炎与MRI阴性脑炎患者临床特征。方法选取21位传统MRI阴性的EV71患儿与11位MRI阳性的EV71脑炎患儿,所有患儿进行传统的MRI检查（T1WI、T2WI、FLAIR）,并根据检查结果将患儿分为MRI阳性组及MRI阴性组,比较两组临床特征。结果 MRI阴性组的临床特征,包括年龄、性别、高热、皮疹、肢体震颤、头痛、呕吐、心率加快、呼吸加快、高血压、意识障碍、肢体无力、眼球运动异常、肺出血、血糖、血白细胞计数、CSF压力、CSF细胞数、CSF总蛋白与MRI阳性组比较,无统计学差异。结论传统MRI阳性的EV71脑炎患儿,并不代表其临床特征更差。为了识别更加严重的EV71脑炎,可能需要行增强MRI或弥散-加权成像的MRI。     

夫西地酸钠抗肠道病毒EV-A71的活性分析

目的 分析夫西地酸钠在细胞水平上的抗肠道病毒活性并分析其抗EV-A71的作用机制。方法 通过空斑分析测定夫西地酸钠在RD细胞中抗EV-A71和CV-A16的量-效曲线;通过加入时间分析（time of addition）、病毒吸附及内吞实验、反转录-定量PCR（RT-qPCR）测定病毒RNA水平在复制周期中的变化、携带GFP的病毒RNA（EV-A71-GFP RNA）转染合并荧光观察以及双报告基因分析初步确定夫西地酸钠阻断EV-A71复制的作用机制。结果 夫西地酸钠可以显著抑制EV-A71和CV-A16在RD细胞中的复制,MOI为0.001时IC₅₀ 分别为3.56 μmol/L和5.41 μmol/L。夫西地酸钠抑制EV-A71复制主要发生在复制早期阶段,降低了病毒RNA的丰度和病毒蛋白的合成水平,但不影响病毒的吸附和内吞;与未经药物处理的对照组相比,EV-A71感染5 h和8 h时,夫西地酸钠导致EV-A71 RNA相对丰度降低了大约70%;EV-A71-GFP RNA在292A细胞中的翻译明显受到夫西地酸钠的抑制,GFP阳性细胞明显减少;夫西地酸钠对EV-A71 5′-UTR所驱动的报告基因翻译抑制程度为30%。结论 夫西地钠酸具有抗肠道病毒活性,主要通过直接或间接抑制病毒基因组RNA复制以及干扰病毒蛋白合成或加工而发挥抗EV-A71活性。     

EV71入侵人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞机制的初步研究

目的:初步研究肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)入侵人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的机制。方法:将临床EV71分离株接种于人横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RD)细胞,扩增和纯化病毒;MTT法检测不同病毒胞吞途径阻断剂对SKN-SH细胞生长抑制作用;用特异性的化学阻断剂预处理靶细胞后,Taq Man real-time PCR验证其对EV71 m RNA表达的影响。结果:RD细胞能够成功扩增出EV71病毒,病毒滴度为1×105 TCID50。随着药物浓度梯度的增加,SK-N-SH细胞的生长增殖受到抑制。Taq Man荧光定量RT-PCR结果显示氯丙嗪(chlorpromazine,CPZ)能够抑制EV71 m RNA的表达(Ρ<0.05),制霉菌素(nystatin,NT)对其影响不大(Ρ>0.05)。结论:初步推测EV71入侵SK-N-SH细胞是通过网格蛋白依赖性的内吞作用入胞。