AEG-1在胃癌组织中的表达及与肿瘤多药耐药性的关系

目的 检测星形细胞上调基因1（astrocyteelevatedgene-1,AEG-1）的表达强度与胃癌细胞体外化疗药敏性的关系,并分析AEG-1可能参与胃癌多药耐药性的机制.方法 取58例胃癌患者的组织标本,一份应用四甲基偶氮唑盐（four methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测肿瘤细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）、顺铂（cisplatin,DDP）、紫杉醇（taxol,PTX）、表阿霉素（epirubicin,eADM）、奥沙利铂（oxaliplatin,L-OHP）的体外敏感性;另一份用免疫组织化学技术检测多药耐药相关基因AEG-1与P-糖蛋白（p-glycoprotein,P-gp）、谷胱甘肽-S-转移酶π（glutathione-S-transferase-π,GST-π）、生存素（Survivin）、Bcl-2的蛋白表达.结果 胃癌组织中AEG-1阳性表达率为81.03％ （47/58）,强表达率为55.17％（32/58）;AEG-1强表达组对5-FU、DDP、L-OHP具有更强的耐药性（P＜0.05）,而PIX、eADM对肿瘤细胞的抑制率在2组间差异无统计学意义（P＞0.05）;相关分析显示,AEG-1与P-gp、AEG-1与Survivin具有正相关性（r=0.305、0.413,P＜0.05）,AEG-1与GST-π、Bcl-2表达无明显相关关系（rs=0.225、0.138,P＞0.05）.结论 AEG-1与胃癌的MDR有关,其机制可能在于AEG-1能调节P-gp、Survivin的表达.     

胃癌组织铂类药物体外化疗药敏性与多种耐药相关因子表达的关系

目的 探讨铂类药物对胃癌组织的药物抑制率与多种耐药相关因子表达的关系及意义。方法 对68例胃癌新鲜肿瘤组织进行肿瘤细胞原代培养,以顺铂（CDDP）、奥沙利铂（L-OHP）行化疗药敏性实验,并对肿瘤组织行P-gp、GST-π、P53、Survivin和Bcl-2、Bax免疫组化染色。结果 L-OHP对肿瘤细胞的抑制率高于CDDP（t=2.76,P<0.05）。CDDP对胃癌细胞的药物抑制率与GST-π呈负相关（P<0.05）;L-OHP药物抑制率与P-gp、GST-π、Survivin表达呈负相关（均P<0.05）。结论 胃癌的CDDP和L-OHP化疗药敏性存在差异,影响两者药敏性的主要耐药因子也不相同。     

胃、大肠癌COX-2和多药耐药相关因子表达与体外化疗药敏性的关系及意义

目的 探讨胃、大肠癌细胞环氧合酶-2(COX-2)、多药耐药相关因子(P-gp、GST-π,TopoⅡα)表达与体外化疗药敏性的关系及临床意义.方法 84例胃癌、大肠癌标本采用免疫组化染色法检测COX-2、P-gp、GST-π、TopoⅡα的表达,进行MTT法体外化疗药物敏感性实验,分析4种因子表达与9种化疗药物对肿瘤细胞抑制率的关系.结果 肿瘤COX-2、P-gp、GST-π、TopoⅡα强表达率分别为48.8%、76.2%、78.6%、66.7%;COX-2与P-gp、COX-2与TopoⅡα之间表达具有正相关性(r=0.287,0.256,P均＜0.05).在各因子表达程度与药物对肿瘤细胞抑制率的关系中,COX-2强表达时,紫杉醇(PTX)、表阿霉素(eADM)、羟基喜树碱(OPT)对肿瘤细胞的抑制率降低(t=2.21、3.11、2.09;P均＜0.05);P-gp强表达组PTX、奥沙利铂(OXA)、顺铂(DDP)对肿瘤细胞的抑制率低于弱表达组(t=2.54、2.47、2.05,P均＜0.05),GST-π强表达与5-氟尿嘧啶(5-Fu)对肿瘤细胞的抑制率降低有关(t=2.13,P＜0.05),TopoⅡα强表达时,长春新碱(VCR)、PTX、eADM对肿瘤细胞的抑制率升高(t=-2.29、-2.12、-2.26;P均＜0.05).结论 COX-2在胃、大肠癌多药耐药中起一定的作用;COX-2、P-gp、GST-π、TopoⅡα各自表达程度仅与部分化疗药物耐药性有关;胃、大肠癌对化疗药物的耐药性与多种机制有关,仅检测部分多药耐药相关因子的表达不能准确预测化疗药敏性.     

胃癌淋巴结转移灶对顺铂体外化疗的药敏性及多种耐药相关因子的表达

目的:探讨胃癌淋巴结转移灶对顺铂(DDP)的体外化疗药敏性及其组织中多种耐药因子的表达.方法:对54例胃癌组织及相应转移淋巴结的肿瘤细胞进行MTT法原代细胞培养体外化疗药敏性实验,检测肿瘤细胞对DDP的体外化疗药敏性;采用免疫组织化学方法检测原发灶、淋巴结转移灶组织中P-gp、GST-π、P53、Survivin、Bcl-2和Bax 6种多药耐药相关因子的表达情况.结果:CDDP对淋巴结转移灶肿瘤细胞的抑制率为(26.10±10.03)%,与原发灶的(27.04±8.37)%比较,差异无统计学意义(t=0.530,P=0.597).胃癌原发灶GST-π表达水平越高药物抑制率越低(β=-2.937,P=0.010);转移淋巴结中P53表达水平越高药物抑制率也越高(β=2.015,P=0.026),Survivin、Bcl-2表达水平越高药物抑制率越低(β分别为-2.652和-3.466,P=0.046和0.002).P-gp、GST-π、Bcl-2和Bax在淋巴结转移灶中的表达程度高于原发灶(Z=2.414,P=0.016;Z=2.218,P=0.026;Z=2.096,P=0.036;Z=3.175,P=0.001);胃癌原发灶、淋巴结转移灶中P-gp、P53、Bcl-2及Bax的表达均呈止相关(rs=0.342,P=0.011;rs=0.712,P<0.001;rs=0.455,P=0.001;rs=0.311,P=0.022).结论:影响胃癌原发灶和淋巴结转移灶中DDP药敏性的耐药相关因子不同.     

胃癌耐药细胞株SGC7901/阿霉素中miR-185的表达及对细胞多药耐药性的影响

目的 检测miR-185在胃癌组织及细胞株中的表达,探讨miR-185在胃癌多药耐药性（MDR）发生机制中的作用。方法 选取2014年3-5月于河北医科大学第四医院行胃癌切除术的20例患者胃癌及癌旁组织标本,荧光定量PCR技术检测胃癌及癌旁组织和人胃腺癌细胞株SGC7901、正常胃上皮细胞株GES-1、耐阿霉素（ADR）的胃癌MDR细胞株SGC7901/ADR的miR-185表达水平。采用miR-185模拟物或无关对照序列转染细胞株SGC7901/ADR,检测其对化疗药物ADR、5-氟尿嘧啶（5-FU）、草酸铂（L-OHP）的敏感性,荧光定量PCR和Western blotting技术检测多药耐药基因MDR1/P-gp、MRP-1、GST-π、LRP的mRNA及蛋白表达水平。结果 癌旁组织和胃癌组织miR-185相对表达水平分别为（0.910±0.142）、（0.243±0.045）,差异有统计学意义（t=20.025,P＜0.001）。细胞株GES-1、SGC7901、SGC7901/ADR miR-185相对表达水平分别为（0.903±0.117）、（0.630±0.101）和（0.191±0.030）,差异有统计学意义（F=46.850,P＜0.001）。其中,细胞株SGC7901、SGC7901/ADR miR-185相对表达水平低于GES-1,细胞株SGC7901/ADR miR-185相对表达水平低于SGC7901（P＜0.05）。ADR、5-FU和L-OHP对不同转染处理后的细胞株SGC7901/ADR抑制率比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。其中,ADR、5-FU和L-OHP对miR-185模拟物转染的细胞株SGC7901/ADR抑制率高于未转染和无关对照序列转染（P＜0.05）。经不同转染处理后,细胞株SGC7901/ADR多药耐药基因MDR1/P-gp、MRP-1和GST-π mRNA和蛋白相对表达水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。其中,miR-185模拟物转染的细胞株SGC7901/ADR多药耐药基因MDR1/P-gp、MRP-1和GST-π mRNA和蛋白相对表达水平低于未转染和无关对照序列转染（P＜0.05）。结论 胃癌细胞miR-185表达下调,通过上调miR-185的表达可提高胃癌细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能是miR-185调控部分多药耐药基因的表达。     

SN50对裸鼠人胃癌移植瘤生长的影响

目的探讨核转录因子（NF）-κB p65的阻断剂SN50对裸鼠人胃癌移植瘤生长的影响。方法建立裸鼠胃癌移植瘤模型后将20只裸鼠随机分成对照组（n=5）和SN50实验组（n=15）,用生理盐水处理对照组、SN50处理实验组,于第5 d、10 d、15 d分别取5只裸鼠测量肿瘤体积,计算抑瘤率。采用免疫组织化学染色观察凋亡指标Bcl-2、Bax和p53表达的变化。结果使用SN50处理肿瘤后5 d、10 d、15 d肿瘤生长抑制率逐渐增高;与对照组相比,凋亡指标Bcl-2的表达下调,p53和Bax的表达上调（均P〈0.05）。结论 NF-κB p65的阻断剂SN50可能通过下调Bcl-2的表达和上调p53、Bax的表达导致细胞凋亡,从而最终抑制移植瘤的生长。     

沉默circPVT1对5-氟尿嘧啶耐药胃癌细胞化疗增敏作用及机制研究

目的:研究circPVT1对胃癌细胞5-氟尿嘧啶（FU）敏感性的作用及分子机制。方法:采用RT-PCR检测胃癌组织、胃癌细胞BGC823和5-FU抵抗胃癌细胞 BGC823/5-FU 中circPVT1的相对表达水平。沉默circPVT1,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性,观察其对细胞活性的影响。采用克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。采用TUNEL试剂盒和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用RT-PCR和Western 印迹检测Bcl-2、Bax 和caspase-3基因mRNA和蛋白的表达水平。沉默circPVT1观察裸鼠皮下移植瘤生长。结果:在5-FU抵抗患者胃癌组织中circPVT1的表达水平明显高于5-FU敏感患者（P＜0.01）。与BGC823细胞相比,circPVT1在BGC823/5-FU细胞中的表达水平明显升高（P＜0.001）。下调circPVT1表达可增强5-FU的细胞毒性（P＜0.05）。与5-FU+si-NC组相比,5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞的克隆形成能力明显降低（P＜0.05）。5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞的凋亡数目明显高于5-FU+si-NC组（P＜0.01）。沉默circPVT1,与5-FU+si-NC组相比,5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞中Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平明显降低,Bax和caspase-3的mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。裸鼠移植瘤实验结果显示,5-FU+si-circPVT1组移植瘤体积和重量明显低于5-FU+si-NC组（P＜0.05）。结论:沉默circPVT1可以通过调控Bcl-2、Bax和caspase-3的表达,增强BGC823/5-FU细胞对5-FU的敏感性。     

P-gp、MRP、Bcl-2、Bax在膀胱癌中的表达及其意义

目的：探讨P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白（MRP）、Bcl-2、Bax在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义。方法：采用SP免疫组化技术检测59例膀胱移行细胞癌和13例正常膀胱组织标本中P-gp、MRP、Bcl-2、Bax的表达。结果：（1）复发膀胱癌组织中P-gp、MRP、Bcl-2表达水平高于初发癌组织（P〈0.05）;Bax表达水平与之相反（P〈0.05）。（2）P-gp、Bcl-2表达随着病理分级、分期上升而增高,Bax表达随着病理分级、分期上升而下降,MRP与病理分级、分期不相关。（3）P-gp表达与Bcl-2呈正相关,与Bax呈负相关。结论：膀胱癌组织P-gp、MRP、Bcl-2、Bax可作为判断膀胱癌的恶性度及预后的重要指标。     

扶正中药逆转TLR4过表达乳腺癌紫杉醇耐药的机制

目的：探讨扶正中药联合紫杉醇（PTX）逆转TLR4过表达乳腺癌细胞株MDA-MB-231对PTX的耐药及对TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法：MTT实验检测扶正中药、PTX及两药联用对乳腺癌细胞株T47D及MDA-MB-231的增殖抑制作用;流式细胞技术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白及TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果：扶正中药与PTX在处理MDA-MB-231细胞株时有协同作用,可诱导MDA-MB-231细胞株细胞凋亡增加（P＜0.05）,使TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白TLR4、p-lκBα、NF-κB表达减少（P＜0.05）。结论：MDA-MB-231细胞株中,扶正中药可以通过抑制TLR4/NF-κB信号通路增加细胞凋亡,从而增加PTX对MDA-MB-231乳腺癌细胞株的增殖抑制作用,逆转乳腺癌对PTX的耐药。     

ZNF139通过抑制miR-181a-5p增加胃癌细胞耐药性的机制

目的:探讨ZNF139通过抑制miR-181a-5p表达增加胃癌细胞耐药性的机制.方法:检测ZNF139和miR-181a-5p在胃癌组织和细胞系中的表达情况,ZNF139-siRNA、miR-181a-5p模拟物或pcDNA-ZNF139转染MKN45、MKN45/ADR细胞系.MTT法测定细胞活性,Real-time PCR和Western blot分别检测ZNF139、miR-181a-5p和P-gp、GST-π、MRP-1、Bcl-2、TS和Bax等耐药相关基因mRNA和蛋白表达水平.ChIP和双荧光素酶活性试验验证ZNF139、miR-181a-5p之间的调控作用.结果:ZNF139 mRNA和蛋白相对表达量在胃癌组织和细胞系较癌旁组织升高(P<0.05),miR-181a-5p mRNA相对表达量降低(P<0.05).转染ZNF139-siRNA后,MKN45/ADR细胞中miR-181a-5p mRNA表达升高,化疗药物阿霉素(ADR)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、奥沙利铂(L-OHP)处理后,MKN45/ADR细胞存活率降低(P<0.05).MKN45细胞系转染pcDNA-ZNF139后,ZNF139 mRNA和蛋白表达水平升高,miR-181a-5p mRNA表达水平下降,同时细胞对ADR、5-FU、L-OHP的耐药性增强(P<0.05).双荧光素酶活性试验表明,ZNF139抑制了miR-181a-5p启动子的转录活性(P<0.05).抑制ZNF139可降低MKN45/ADR细胞中P-gp、MRP-1、Bcl-2的表达(P<0.05);miR-181a-5p模拟物转染MKN45/ADR细胞后,P-gp、LRP和Bcl-2的表达降低(P<0.05).结论:ZNF139通过抑制-miR-181a-5p诱导胃癌中P-gp、MRP-1和Bcl-2的表达来增加细胞的耐药特性,有望成为防治胃癌细胞耐药的新的策略.     

胰腺癌p16、Bcl-2、Bax和VEGF基因表达及新生血管密度计数的意义

目的：研究胰腺癌组织中p16、Bcl-2、Bax和VEGF基因的表达及新生血管计数的意义。 方法：采用免疫组织化学法及形态半定量方法对33例胰腺癌和6例正常胰腺组织进行新生血管密度记数和p16、Bcl-2、Bax和VEGF基因表达检测。 结果：P16蛋白表达：高、中分化胰腺癌高于低分化(P<0.05),生存期长者表达高于生存期短者(P<0.05);Bcl-2表达：高、中分化者高于低分化者;Bax表达：正常胰腺组织高于胰腺瘤组织,高、中分化者高于低分化者,生存期≥12个月者高于＜12个月者;VEGF表达：有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者;MVD记数：正常胰腺组织低于胰腺瘤组织,有淋巴转移者高于无淋巴结转移者;MVD与VEGF表达呈正相关（r=0.79,P<0.05）;p16基因表达与VEGF表达和MVD呈负相关（r=-0.69,P<0.05;r=-0.87,P<0.05）,Bcl-2表达与其他基因表达结果无相关关系。Bax表达与p16表达呈正相关（r=0.54,P<0.05）,与VEGF表达和MVD呈负相关（r=-0.66,P<0.05）。 结论：综合检测胰腺癌组织中p16、Bcl-2、Bax和VEGF基因的表达及微血管密度对判断胰腺癌恶性程度及估计肿瘤的预后有较大帮助。     

胃癌组织中HIF-1α、Bax、Bcl-2的表达及意义

目的：探讨胃癌组织中缺氧诱导因子（HIF）-1α、Bax、Bcl-2蛋白的表达及其与肿瘤浸润、转移的关系。方法：应用免疫组织化学（PV9000）染色法检测100例胃癌组织中HIF—1α、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果：胃癌组织中HIF—1α、Bax、Bcl-2蛋白阳性表达率分别为56％（56／100）、40％（40／100）、68％（68／100）,与阴性对照组的5％（1／20）、90％（18／20）、20％（4／20）相比,P均〈0．05。Bax、Bcl-2蛋白在56例HIF-1α阳性表达的胃癌组织中的阳性表达率分别为17．9％（10／56）、89．3％（50／56）,与在44例HIF—1α阴性表达的胃癌组织的阳性表达率68．2％（30144）、40．9％（18144）相比,P均〈0．05。HIF—1α、Bax蛋白在胃癌组织中的表达呈负相关（r=0．510,P〈0．05）,而HIF—1α、Bcl-2蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关（r=0．515,P〈0．05）。HIF—1α蛋白表达与胃癌组织浸润范围及有无淋巴结转移有关（P均〈0．05）,与分化程度无关（P〉0．05）。结论：HIF—1α阳性表达胃癌组织中Bax低表达,Bcl-2高表达,提示HIF—1α可能通过减少促凋亡蛋白Bax的表达,增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,参与胃癌的发生发展过程。HIF—1α蛋白表达与胃癌浸润转移密切相关。     

胃癌组织Survivin和Ki-67表达与体外化疗药物敏感性的关系

目的探讨胃癌组织中凋亡抑制蛋白Survivin和反映增殖的Ki-67表达与体外化疗药物敏感性的关系。方法对64例胃癌患者的癌组织进行MTT法体外化疗药物敏感性实验,并进行Survivin、Ki-67免疫组化染色。结果胃癌组织中Survivin、Ki-67表达阳性率分别为90.6%（58/64）、76.6%（49/64）;Survivin与Ki-67的表达呈正相关（r=0.6354,P〈0.01）。在耐药因子表达程度与药物对肿瘤细胞抑制率的关系中,Survivin强表达时表阿霉素、顺铂对肿瘤细胞的抑制率明显降低（均P〈0.05）,但奥沙利铂对肿瘤细胞的抑制率明显增加（P〈0.05）;Ki-67强表达时,5-氟尿嘧啶、羟基喜树碱对肿瘤细胞的抑制率明显高于弱表达组（均P〈0.05）,而表阿霉素对肿瘤细胞的抑制率明显降低（P〈0.05）。结论胃癌组织Survivin、Ki-67表达与部分化疗药物敏感性有关,检测其表达对预测胃癌化疗药物敏感性有一定意义。     

核转录因子κB p65和骨桥蛋白在子宫内膜异位症中的表达及相关性研究

背景 目前子宫内膜异位症（EMs）的病因和发病机制尚不清楚,治疗措施有限,严重影响女性的身心健康。目的 探讨核转录因子κB（NF-κB）p65和骨桥蛋白（OPN）在EMs组织中的表达及二者的相关性。方法 收集2013年1-12月于宁夏医科大学总医院妇产科因EMs行手术的患者35例（病例组）,于术中或术后确诊,其中增生期17例,分泌期18例;收集同期行双侧输卵管结扎手术并经病理科诊断排除EMs的正常子宫内膜者30例作为对照（正常子宫内膜组）,其中增生期15例,分泌期15例。分别采用免疫组化SP法、RT-PCR法检测正常子宫内膜组、EMs在位内膜组和EMs异位内膜组NF-κB p65、OPN及其mRNA的表达。结果 NF-κB p65、OPN主要表达于子宫内膜腺上皮细胞的胞质中,极少数表达于间质细胞中。EMs在位、异位内膜组NF-κB p65和OPN表达高于正常子宫内膜组,EMs异位内膜组高于EMs在位内膜组（P＜0.05）。3组增生期及分泌期NF-κB p65的表达比较,差异无统计学意义（P＞0.05),EMs在位、异位内膜组分泌期OPN的表达均高于增生期（P＜0.05）;EMs在位内膜组和EMs异位内膜组中NF-κB 与OPN的表达均呈正相关（r在位=0.88,r异位=0.78,P＜0.05)。NF-κB p65、OPN mRNA在EMs在位、异位内膜组中的表达高于正常子宫内膜组,EMs异位内膜组高于EMs在位内膜组（P＜0.05）。结论 NF-κB p65、OPN及其mRNA在EMs患者在位、异位内膜组织的表达明显增强,并呈正相关,提示二者极有可能通过相互激活进而诱导EMs的发生、发展。     

胃癌原发灶和淋巴结转移灶中锌指蛋白139与肿瘤细胞凋亡和生存素及B细胞淋巴瘤/白血病-2的关系及意义研究

目的 探讨胃癌原发灶和淋巴结转移灶中锌指蛋白139（ZNF139）与肿瘤细胞凋亡、生存素（Survivin）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）的关系及意义。方法 选取2012年1-6月在河北医科大学第四医院外三科行手术切除的35例进展期胃癌患者为研究对象,收集患者胃癌组织及相应的淋巴结转移组织,采用DNA原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡指数（AI）,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA的相对表达水平,蛋白印迹法（Western blotting）检测ZNF139、Survivin、Bcl-2蛋白表达水平。结果 胃癌原发灶AI（10.8±4.7）高于淋巴结转移灶的（8.7±3.0）（t=-2.176,P=0.039）。淋巴结转移灶ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相对表达水平均高于胃癌原发灶（P＜0.05）。淋巴结转移灶ZNF139、Survivin、Bcl-2蛋白表达水平均高于胃癌原发灶（P＜0.05）。胃癌原发灶Survivin mRNA相对表达水平与AI呈负相关（r=-0.517,P=0.001）;淋巴结转移灶ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相对表达水平均与AI呈负相关（r=-0.346、-0.467、-0.511,P=0.042、0.005、0.002）。淋巴结转移灶Bcl-2 mRNA相对表达水平与胃癌原发灶Bcl-2 mRNA相对表达水平呈正相关（r=0.791,P＜0.001）。在胃癌原发灶中,ZNF139 mRNA相对表达水平与Bcl-2 mRNA相对表达水平呈正相关（r=0.482,P=0.003）。在淋巴结转移灶中,ZNF139 mRNA相对表达水平与Survivin、Bcl-2 mRNA相对表达水平均呈正相关（r=0.436、0.452,P=0.009、0.006）;Survivin mRNA相对表达水平与Bcl-2 mRNA相对表达水平呈正相关（r=0.465,P=0.005）。结论 胃癌肿瘤细胞在转移过程中抗凋亡能力增强,这可能与ZNF139对部分凋亡相关基因（Survivin、Bcl-2）的调控有关,但这种调控关系在胃癌原发灶和淋巴结转移灶中并不相同。     

P53、Bcl-2和Bax在膀胱癌的表达及意义

目的 探讨P53、Bcl-2、Bax蛋白在膀胱癌中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学（SP法）测定67例膀胱癌和13例正常膀胱黏膜组织中P53、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 P53、Bcl-2、Bax蛋白在膀胱癌中阳性表达率分别为74.6％,64.2％,70.1％,而在正常膀胱黏膜组织中阳性表达率为15.4％,23.1％,100％.P53和Bcl-2蛋白的表达与膀胱癌病理分级呈正相关（rP53=0.667,rBcl-2=0.625,均P＜0.05）,与临床分期呈正相关（rp53=0.638,rBcl-2 =0.717,均P＜0.05）;Bax蛋白表达随着膀胱癌病理分级、临床分期下降,但无相关性（P ＞0.05）;P53蛋白的表达与Bcl-2蛋白表达存在正相关（r=0.778,P＜0.05）.结论 P53蛋白可能参与了膀胱肿瘤增殖水平的调控,Bcl-2、Bax蛋白可能参与了细胞凋亡的调节.P53蛋白可能通过调节Bcl-2蛋白的表达参与膀胱癌的发生、发展.     

Effects of Fuzheng Yiliu Decoction on Apoptosis Related Factors Expression of H22 Tumor-bearing ICR Mice

目的 探讨扶正抑瘤方(FYG)与5-FU联用对凋亡相关因子及5-FU靶酶TS基因、蛋白表达的影响. 方法 建立H22肝癌ICR小鼠皮下移植瘤模型,分模型组、5-FU组、FYG组、5-FU+FYG 4组,连续给药FYG(3.6 g/kg·d)和5-FU(10 mg/kg·d)5 d,免疫组化方法检测肿瘤组织中凋亡相关因子(Bax,Bcl-2)和TS的蛋白表达情况,RT-PCR检测凋亡相关因子(Bax,Bcl-2,p53,C-myc)和TS的基因表达. 结果 与模型组相比,其它3组小鼠肿瘤组织中Bax蛋白表达显著上调(P＜0.05 or P＜0.01);FYG组和5-FU+FYG组小鼠肿瘤组织中Bax基因表达明显上调(P＜0.05or P＜0.01);5-FU组和5-FU+FYG组小鼠肿瘤组织中野生型p53基因表达显著上调(P＜0.05 or P＜0.01). 结论 FYG与5-FU联合应用可上调凋亡相关因子蛋白及基因的表达,但对TS几乎没有影响.     

和厚朴酚对U937/ADR细胞系耐药逆转作用及其机制研究

目的 探讨和厚朴酚（HNK）对白血病细胞U937阿霉素（ADR）耐药细胞系U937/ADR多药耐药逆转作用及其机制。方法 以大剂量（IC₅₀）ADR短时间诱导方法,构建U937/ADR细胞系。以低浓度HNK（IC₂₀）与不同化疗药物联合作用于U937/ADR细胞系,检测其对不同化疗药物耐药逆转倍数。罗丹明123检测药物外排功能;荧光定量PCR（FQ-PCR）和Western blotting检测不同浓度HNK对U937/ADR细胞系核转录因子-κB(NF-κB)和耐药相关基因MDR1及其蛋白P-糖蛋白（P-gp）表达的影响;ELISA法检测NF-κB亚单位p65（NF-κB p65）的DNA结合活性。结果 成功构建了白血病多药耐药细胞系U937/ADR,对ADR耐药指数为亲代U937细胞的11倍。6.5 μg/mL HNK可以逆转U937/ADR对ADR的耐药,逆转倍数为2.20倍。HNK能够浓度依赖性地下调U937/ADR细胞NF-κB、MDR1 mRNA和P-gp表达,抑制NF-κB p65的活性。结论 HNK能有效逆转U937/ADR多药耐药,其机制可能与抑制NF-κB p65活性、下调MDR1和P-gp表达有关。     

miR-103通过NF-κB通路上调MGMT表达诱导胃癌细胞紫杉醇耐药

目的 观察miR-103在胃癌细胞紫杉醇(PTX)耐药中的作用,并对其机制进行探讨。方法 构建PTX耐药胃癌NCI-N87细胞(N87/PTX);N87/PTX 细胞转染miR-103 inhibitor和阴性对照,分别设为miR-103 inhibitor组和阴性对照组(NC),同时以未转染的N87/PTX细胞作为空白对照组(Control)。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞miR-103表达水平;生物信息学分析miR-103的靶基因;结晶紫染色法检测细胞贴壁存活率;免疫荧光法检测细胞NF-κB p65定位;蛋白印记法检测p-NF-κB p65、IKBα、MGMT蛋白表达变化。结果 N87/PTX耐药指数为26.4。IKBα蛋白的编码基因NFKBIA与miR-103存在互补结合位点。与正常N87细胞相比,N87/PTX细胞miR-103、p-NF-κBp65和MGMT表达显著升高,IKBα表达明显下调(P＜0.01)。miR-103 inhibitor可显著降低PTX对N87/PTX细胞的IC₅₀(P＜0.01)。miR-103 inhibitor显著增强PTX(3 μmol.L^_-1)诱导的N87/PTX细胞贴壁存活率降低(P＜0.01)。NF-κB p65在NC组N87/PTX细胞中表达于细胞质和细胞核,而在miR-103 inhibitor组中主要表达于细胞质。miR-103 inhibitor显著下调N87/PTX细胞p-NF-κB p65和MGMT蛋白表达,上调IKBα蛋白表达(P＜0.01)。结论 miR-103可能通过降解IKBα诱导NF-κB p65入核,NF-κB p65增强MGMT转录表达从而介导胃癌细胞对PTX耐药。     

乳腺癌组织内NF-κB p65、PCNA的表达及其相关性分析

目的研究乳腺癌组织内细胞核因子-κB（NF-κB）p65与增殖细胞核抗原（PCNA）的表达及意义。方法采用SABC免疫组化染色法检测135例乳腺癌组织内NF-κB p65与PCNA蛋白的表达,并分析二者的相关性及与临床病理因素的关系。结果乳腺癌组织内NF-κB p65蛋白表达阳性率为52.6%,PCNA表达阳性率为58.5%。乳腺癌组织内NF-κB p65蛋白与PCNA蛋白的表达呈正相关（r=0.55,P〈0.05）;NF-κB p65与肿瘤大小呈正相关（r=0.401,P〈0.05）,与淋巴结转移呈正相关（r=0.432,P〈0.05）,与患者年龄无明显相关性（r=-0.233,P〉0.05）。PCNA与肿瘤大小呈正相关（r=0.403,P〈0.05）,与淋巴结转移呈正相关（r=0.467,P〈0.05）,与患者年龄无明显相关性（r=0.222,P〉0.05）。结论 NF-κB p65、PCNA可以作为判断乳腺癌患者预后的有效指标,乳腺癌组织内NF-κB p65和PCNA的高表达可导致肿瘤侵袭性增加,促进肿瘤细胞向区域淋巴结转移。