Ghrelin对脂肪间充质干细胞神经分化的影响

目的：探讨Ghrelin联合LY294002对脂肪间充质干细胞(ADSCs)神经分化的影响,并阐明其作用机制。方法：倒置相差显微镜下观察ADSCs形态表现,流式细胞术鉴定ADSCs表面抗体阳性表达率,将第4代ADSCs分为对照组(不进行干预)、LY294002组[给予40μmol·L^-1磷酸酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)通路特异抑制剂LY294002]、Ghrelin组(给予0.1μmol·L^-1Ghrelin)、Ghrelin+LY294002组(给予40μmol·L^-1LY294002+0.1μmol·L^-1Ghrelin)。倒置相差显微镜下观察各组ADSCs神经分化后的形态表现,免疫荧光染色法检测各组ADSCs中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞百分率,Western blotting法检测各组ADSCs中PI3K/Akt通路蛋白表达水平,并计算磷酸化PI3K (p-PI3K)/PI3K和磷酸化Akt (p-Akt)/...     

P13K/Akt通路在药物放射增敏中作用的机制

目的 进一步探讨PI3K/Akt信号转导途径在药物放射增敏中作用的分子机制.方法 体外培养HeLa细胞,多西紫杉醇(docetaxel)和顺铂(cisplatin)单独及分别联合P13K抑制剂LY294002作用24 h,X线6 Gy剂量照射;Western blot检测Akt、磷酸化Akt(pAkt)、Bad、磷酸化Bad(pBad)蛋白的表达变化;RT-PCR检测Bad、Ku70、Ku80 mR-NA的表达变化;中性彗星电泳检测不同处理组细胞DNA的损伤.结果 ①docetaxel+LY294002联合照射组、cispla-tin+LY294002联合照射组Bad mRNA表达增高,Ku70 mRNA表达减低,Ku80 mRNA表达无明显变化;②docetaxel+LY294002联合照射组、cisplatin+LY294002联合照射组Bad蛋白表达增高,pAkt、pBad蛋白表达减低,Akt蛋白表达无明显变化;③docetaxel+LY294002联合照射组、cisplatin+LY294002联合照射组细胞彗星电泳尾距明显长于单纯药物增敏照射组.结论 ①docetaxel和cisplatin药物增敏照射能够明显活化PI3K/Akt信号转导途径;②抑制PI3K/Akt信号转导途径能够抑制Ku70表达,减少细胞DNA损伤后的再修复,提高促凋亡因子Bad的表达,促进细胞的凋亡.     

抵抗素通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路诱导H9c2心肌细胞肥大机制研究

目的探讨抵抗素激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路诱导H9c2心肌细胞肥大的分子机制。方法取生长状态良好的H9c2心肌细胞,使用含1 g·L~(-1)胎牛血清的高糖达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)处理24 h使其细胞同步化后进行不同干预。随机将H9c2心肌细胞分为Con组、R50组、LY294002+R50组和LY294002组,Con组为空白对照;R50组细胞应用50μg·L~(-1)抵抗素处理48 h组;LY294002+R50组细胞预先应用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002干预2 h后再用50μg·L~(-1)抵抗素处理46 h;LY294002组细胞应用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002处理2 h组。4组心肌细胞加含药物DMEM培养48 h后进行细胞面积、单细胞蛋白质合成量测定,Western blot检测心肌细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、原癌基因c-myc蛋白及PI3K/Akt非磷酸化及磷酸化水平表达。观察抵抗素(50μg·L~(-1))处理细胞不同时间(0、1、2、3 h)后运用Western blot测定磷酸化(p-Akt)的蛋白表达水平,检测抵抗素处理1 h后4组心肌细胞PI3K/Akt信号通路磷酸化表达水平。结果抵抗素处理H9c2心肌细胞0、1、2、3 h组p-Akt蛋白表达水平分别为0.60±0.26、0.71±0.67、0.52±0.32、0.51±0.32;与0 h组比较,抵抗素处理H9c2心肌细胞1 h组p-Akt蛋白表达水平显著增高(P<0.01);与1 h组比较,抵抗素处理H9c2心肌细胞2、3 h组pAkt蛋白表达水平显著降低(P<0.01);抵抗素处理H9c2心肌细胞2 h与处理3 h后H9c2心肌细胞中p-Akt蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。抵抗素处理H9c2心肌细胞48 h后,与Con组比较,R50组、LY294002+R50组心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平显著升高(P<0.05),而LY294002组其心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与R50组比较,LY294002+R50组、LY294002组心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与LY294002+R50组比较,LY294002组心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。Con组、R50组、LY294002+R50组、LY294002组c-myc蛋白表达水平分别为0.45±0.30、0.68±0.32、0.56±0.33、0.16±0.20,4组间比较差异有统计学意义(F=178.91,P<0.05);与Con组比较,抵抗素处理H9c2心肌细胞48 h后,R50组c-myc蛋白表达水平显著增高(P<0.05);而LY294002+R50组c-myc蛋白表达水平较Con组、LY294002组升高但低于R50组(P<0.05)。经抵抗素处理H9c2心肌细胞3 h后,R50组PI3K/Akt信号通路磷酸化水平较Con组、LY294002+R50组、LY294002组显著升高(P<0.05),其余各组PI3K/Akt信号通路磷酸化水平表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论抵抗素通过激活PI3K/Akt通路,提高Akt磷酸化水平来诱导H9c2心肌细胞肥大。     

PI3K/Akt信号通路在转录水平调控VCAM-1表达

目的 探讨PI3K/Akt信号通路是否调控脂多糖诱导的人内皮细胞VCAM-1表达及机制.方法 脂多糖(LPS) 10μg/mL刺激人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)0、6、12、24 h,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测VCAM-1蛋白表达,刺激0、4、8、12 h行RT-PCR检测VCAM-1 mRNA;LPS(10μg/mL,后同)刺激HUVEC 0、30、60、120 min后,Western blot检测PI3K(磷脂酰肌醇-3激酶)、磷酸化PI3K (p-PI3K)、Akt、磷酸化Akt (p-Akt)表达;PI3K抑制剂LY294002(10、50 μmol/L)、Akt抑制剂A6730(2、10 μmol/L)预处理细胞1h后LPS刺激12 h,Western blot检测VCAM-1蛋白表达,刺激8h行RT-PCR检测VCAM-1 mRNA;加或不加抑制剂,LPS刺激8h加入放线菌素D抑制转录,于0、1、2、3、4h收细胞行RT-PCR检测VCAM-1 mRNA,计算mRNA半衰期.结果 LPS刺激HUVEC(6、12、24 h)后VCAM-1蛋白表达增加(P＜0.05),12h达峰值,VCAM-1 mRNA在刺激后也增加(P＜0.05),8h达峰值;LPS刺激HUVEC后p-PI3K、p-Akt增加,p-PI3K在刺激30 min达峰值(P＜0.05),以后逐渐下降,120 min与0h接近(P＞0.05),p-Akt在刺激30 min明显增加,60 min达峰值,120 min仍高于0 h(P＜0.05);LY294002下调了p-Akt表达(P＜0.05),同时降低VCAM-1蛋白、mRNA合成(P＜0.05);Akt抑制剂也抑制VCAM-1蛋白、mRNA(P＜0.05);PI3K、Akt抑制剂均不影响VCAM-1 mRNA稳定性(P＞0.05).结论 PI3K/Akt信号途径在转录水平调控VCAM-1表达.     

重组人红细胞生成素对癫痫持续状态大鼠海马p-Akt和XIAP的影响

目的 观察重组人红细胞生成素(recombinant human EPO,rHuEPO)对戊四氮(Pentylenetetrazol,PTZ)点燃的癫痫持续状态(status epilepticus,SE)的SD大鼠海马神经元磷酸化蛋白激酶B(p-PKB/p-Akt)和X-连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibtor of apoptosis protein,XIAP)表达的影响,应用磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidyl inositol 3 kinase,P13K)抑制剂LY294002进一步探讨rHuEPO作用的可能机制.方法 采用PTZ制作大鼠SE模型,将点燃后的大鼠随机分为PTZ组(PTZ+NS)、rHuEPO组(PTZ+rHuEPO)、LY294002组(PTZ+LY294002+rHuEPO)、LY294002溶剂二甲基亚砜(DMSO)对照组(PTZ+DMSO+rHuEPO),正常对照组腹腔注射生理盐水(n=35).观察大鼠行为学和脑电图的改变;TUNEL法检测海马神经细胞的凋亡情况;免疫组织化学法观察p-Akt、XIAP的表达;RT-PCR法检测各组大鼠海马XIAPmRNA的表达;Western blot法检测各组大鼠海马Akt、P-Akt蛋白的表达.结果 正常对照组仅见少量凋亡细胞,p-Akt和XIAP阳性细胞、p-Akt蛋白、XIAP mRNA均有少量表达;PTZ组与rHuEPO组、LY294002组、LY294002溶剂DMSO对照组比较,p-Akt和XIAP阳性细胞数、P-Akt蛋白表达及XIAP mRNA表达均减少(P<0.05),凋亡细胞数增加(P<0.05);rHuEPO组、LY294002溶剂DMSO对照组与LY294002组比较,p-Akt和XIAP阳性细胞数、p-Akt蛋白表达及XIAP mRNA表达均增加(P<0.05),凋亡细胞数减少(P<0.05).结论 rHuEPO在SE模型中活化了PI3K/Akt,提高p-Akt蛋白的表达,进而对线粒体凋亡途径的相关调控因子XIAP的表达进行了调控,从而介导线粒体凋亡途经,发挥抗凋亡、促存活的神经保护作用.     

阿伐他汀通过PI3K/Akt/mTOR途径调节白血病细胞自噬的作用及机制

目的:研究阿伐他汀对白血病细胞K562自噬的影响及相关信号机制。方法:取对数生长期的K562细胞,分为阴性对照组、阿伐他汀组、阿伐他汀+PI3K抑制剂(LY294002)组、阿伐他汀+mTOR抑制剂(雷帕霉素)组。共培养24h后,采用吖啶橙染色观察细胞自噬体的变化,Western Blot检测Ⅱ型自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)和自噬血管基因Beclin-1的表达,RT-PCR和Western Blot检测磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达。结果:与阴性对照组相比,阿伐他汀抑制白血病细胞K562自噬体的形成(P<0.05),下调LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达(P<0.05)。与阿伐他汀组相比,阿伐他汀+PI3K抑制剂(LY294002)组LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达增加(P<0.05);阿伐他汀+mTOR抑制剂(雷帕霉素)组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达增加(P<0.05)。与阿伐他汀组相比,阿伐他汀+PI3K抑制剂(LY294002)组p-Akt和p-mTOR基因的mRNA和蛋白表达水平均下降(P<0.05);阿伐他汀+mTOR抑制剂(雷帕霉素)组p-Akt和p-mTOR基因的mRNA和蛋白表达水平均下降(P<0.05)。结论:阿伐他汀可以抑制白血病细胞K562自噬,推测其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

PI3K/Akt通路介导LPS调节星形胶质细胞HSPA12B表达的研究

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白kinaseB(PI3K/Akt)通路对内毒素脂多糖（LPS）诱导的星形胶质细胞热休克蛋白A12B（HSPA12B）表达的影响。方法将处于对数生长期的新生SD大鼠星形胶质细胞分为3组：con组（空白对照）、LPS组（1滋g·ml-1LPS刺激4h）、LPS+LY组（20滋mol·L-1LY294002预处理1h+1滋g·ml-1LPS刺激4h）。采用Westernblot法检测3组细胞HSPA12B、磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达水平,采用细胞免疫荧光染色法检测细胞HSPA12B免疫荧光强度,并进行比较。结果3组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与con组比较,LPS组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）;而与LPS组比较,LPS+LY组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平均下调（均P＜0.05）。LPS组星形胶质细胞HSPA12B荧光强度强于con组,而LPS+LY组星形胶质细胞HSPA12B荧光强度较LPS组减弱。结论LPS或是通过PI3K/Akt通路介导调节星形胶质细胞HSPA12B的表达,进而影响中枢神经系统炎症过程。     

LY294002抑制PI3K/Akt信号通路对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的 探讨低氧环境下PI3K抑制剂2-(4-吗啉基)- 8-苯基- 4氢-1-苯并吡喃- 4-酮(LY294002)对人胃癌SGC-7901细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路、细胞生长、细胞凋亡及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA表达的影响.方法 应用LY294002作用于低氧环境中的人胃癌SGC-7901细胞(低氧+LY294002组),采用CCK-8试剂盒检测SGC-7901细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡百分比;Western blotting检测PI3K和p-Akt蛋白表达;RT-PCR检测HIF-1α mRNA表达.以低氧环境中未加LY294002的细胞作为对照(低氧组).结果 LY294002能抑制低氧环境中SGC-7901细胞增殖,抑制效果在药物作用后第2～6天时最为明显(P＜0.05),低氧+LY294002组中细胞凋亡百分比明显高于低氧组(P＜0.01).LY294002能明显抑制PI3K、p-Akt蛋白以及HIF-1α mRNA的表达,与低氧组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 LY294002能抑制低氧环境中人胃癌SGC-7901细胞生长,促进细胞凋亡,抑制PI3K/Akt信号通路及其下游HIF-1α mRNA的表达.     

CTGF诱导的人胚肺成纤维细胞转分化中PI3K/Akt与p38MAPK磷酸化的关系

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-I)转分化中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路的活动状态以及相关性的研究.方法 将体外培养的HFL-I分成4组:(1)CTGF处理组(20 ng/ml);(2) LY294002(10 μmol/L)预处理60min,再行CTGF刺激(20 ng/ml):(3)SB203580 (10 μmol/L)预处理60 min,再行CTGF刺激(20 ng/ml); (4)LY294002(10 μmol/L)和SB203580(10 μmol/L)联合作用60 min,再加入CTGF(20 ng/ml).选取不同时相点,Western blot测定平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、p-Akt和Akt的蛋白表达:RT-PCR检测PI3K和p38MAPKmRNA表达.结果 与对照组相比,CTGF诱导15 min后p-Akt水平升高,30 min时达至顶峰(P＜0.01).CTGF诱导24h后α-SMA表达显著升高(P＜0.01),可被LY294002阻断.LY294002和SB203580单独或联合预处理后,显著抑制CTGF诱导的p-Akt活化(P＜0.01).结论 CTGF诱导的成纤维细胞-肌成纤维细胞转分化中有PI3K/Akt通路的激活,PI3K和p38MAPK均可以调节Akt的活性,其特异性抑制剂均可阻断Akt的磷酸化.     

P13K抑制剂对肺癌Akt2、p-Akt表达影响的试验研究

目的探讨P13K抑制剂LY294002对肺癌Akt2、p-Akt表达的影响。方法体外实验是取对数生长期的A549细胞制备细胞爬片,体内实验先用裸鼠建立移植瘤模型,通过P13K抑制剂LY294002干预后,分别用免疫组织化学法和W estern b lot法检测Akt2、p-Akt蛋白的表达。结果肺腺癌细胞株A549细胞中存在Akt2和p-Akt蛋白的高表达,应用P13K抑制剂LY294002可抑制该细胞株细胞中Akt2和p-Akt蛋白的表达,而且其表达呈浓度依赖型降低。LY294002组移植瘤组织Akt2和p-Akt蛋白的表达用免疫组织化学法检测较对照组染色变淡,用W estern b lot法检测显示其蛋白表达量低于对照组。结论LY294002可通过抑制P13K活性,抑制Akt的表达及活化,使Akt2和p-Akt蛋白的表达降低,提示抑制P13K/Akt途径可能是LY294002发挥抗癌作用的重要机制,P13K/Akt可能成为肺癌治疗的靶点。     

肝癌细胞PI3K/Akt信号通路在干扰素2α上调ISG15表达中的作用

目的 探讨肝癌细胞中干扰素2o(IFN-2α)通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路上调ISG15表达的机制.方法 向培养的肝癌细胞HepG2细胞系中加入IFN-2α和/或PI3K抑制剂(LY294002).采用蛋白免疫印迹检测各组Akt、磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)和干扰素刺激基因15(...     

RhoGDI2调控PI3K/Akt信号通路促进气道上皮间质转化研究

目的：探讨PI3K/Akt信号通路活化在RhoGDI2诱导的气道上皮-间质转化（EMT）中的作用。方法：体外培养人气道上皮细胞16HBE,通过质粒转染过表达RhoGDI2,然后加入PI3K抑制剂LY294002,荧光显微镜观察质粒转染后不同时间的细胞形态变化,评估转染效率。Western blot法检测RhoGDI2、EMT标记蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Snail）以及PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果：细胞转染36小时后荧光表达量达到高峰,转染效率70%~80%。转染组RhoGDI2表达量明显高于正常组和空载组,证明转染成功（P<0.001）;转染组PI3K、Akt及p-Akt表达较正常组、空载组明显升高（P<0.001）,表明PI3K/Akt信号通路被激活。PI3K抑制组PI3K（P<0.01）、Akt（P<0.05）及p-Akt（P<0.01）表达量较转染组明显下降,说明PI3K/Akt信号通路被成功抑制。与正常组、空载组比较,转染组E-cadherin表达明显减少（P<0.001）,N-cadherin（P<0.01）、Snail（P<0.001）表达明显升高,差异均有统计学意义,表明RhoGDI2可以促进气道上皮细胞间质转化;与转染组比较,LY294002抑制组E-cadherin蛋白表达明显升高（P<0.001）,N-cadherin（P<0.05）、Snail（P<0.001）表达明显降低,差异均有统计学意义,表明阻断PI3K/Akt信号通路可有效控制EMT过程。结论：RhoGDI2可以通过调控PI3K/Akt信号通路促进气道上皮-间质转化。     

丹参酮ⅡA通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬抗内皮细胞氧化应激损伤研究

目的基于PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路探讨丹参酮ⅡA对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导内皮细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法体外培养EA.hy926细胞,随机分为正常组、模型组、丹参酮ⅡA组、LY294002组、ox-LDL加丹参酮ⅡA组、oxLDL加丹参酮ⅡA加LY294002组。用比色法检测细胞氧化应激损伤丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,利用倒置荧光显微镜及Naolive 3D cell explorer实时无标记3D显微成像系统检测自噬发生,同时应用免疫印迹(Western Blotting)检测自噬相关蛋白以及PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达情况。结果与正常组相比,模型组MDA含量增高,SOD活力降低,微管相关蛋白1轻链3(LC3)I/II蛋白含量增多(P0.01);丹参酮ⅡA干预后细胞中MDA含量降低,SOD活力增高,LC3-I/LC3-II蛋白含量增多(P0.01)。与正常组相比,模型组PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平明显减少(P0.05或P0.01);与模型组相比,丹参酮ⅡA干预后细胞中PI3K、p-Akt、pmTOR蛋白表达水平明显减少(P0.05或P0.01);与ox-LDL加丹参酮ⅡA组相比,加入PI3K的抑制剂LY294002后细胞中的LC3-I/LC3-II蛋白含量减少,自噬水平减少(P0.01)。结论丹参酮ⅡA可能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路促进自噬,对ox-LDL诱导的EA.Hy926细胞氧化应激损伤起到保护作用,进而防治动脉粥样硬化。     

甲状腺功能亢进症模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt通路与胰岛素抵抗的关系

目的探讨甲状腺功能亢进症模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt通路与胰岛素抵抗的关系。方法建立甲状腺功能亢进症模型大鼠,随机分为模型组、LY294002组（PI3K抑制剂）、740Y-P组（PI3K激动剂）,每组12只;另取12只SD大鼠设为对照组。分组处理后,酶联免疫吸附法（ELISA）检测甲状腺功能指标血清游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺素（TSH）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;测定空腹血糖水平（FBG）、胰岛素抵抗指数（IRI）;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测大鼠心肌组织PI3K/Akt通路蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI显著升高（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt显著降低（P<0.05）;与模型组比较,LY294002组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI升高（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt降低（P<0.05）;740Y-P组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI降低（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt升高（P<0.05）。结论PI3K/Akt通路可调控甲状腺功能亢进症模型大鼠胰岛素抵抗,激活该通路,可使甲状腺功能恢复正常,减轻炎症反应,抑制心肌细胞凋亡,改善胰岛素抵抗。     

黄芩苷对脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞表达炎症因子的影响

  目的  从PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)损伤的影响及机制。  方法  运用LPS诱导建立人牙龈成纤维细胞损伤模型,设置正常对照组、模型组和模型+黄芩苷(1、10和20μg/mL)组,每组设3个复孔,经不同浓度的黄芩苷干预后,Western blotting检测p-Akt、Akt、NF-κB p65等蛋白的表达,采用qPCR法检测炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6等基因的表达。用PI3K抑制剂LY294002作用半小时后,再用黄芩苷干预,qPCR和Western blotting法检测Akt、p-Akt、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6等基因和蛋白的表达。  结果  与模型组比较,黄芩苷低、中、高剂量能有效降低TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达水平,促进p-Akt蛋白表达,抑制NF-κB p65核蛋白表达,并呈剂量依赖性(均P < 0.05)。与模型组比较,模型+黄芩苷组p-Akt表达升高(P＜0.05),NF-κB p65表达降低(P＜0.01)。PI3K抑制剂LY294002作用后,模型+黄芩苷组p-Akt/Akt表达量(0.63±0.18)较模型组(0.56±0.14)升高(P＜0.05),模型+黄芩苷组NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量较模型组降低(均P＜0.01)。黄芩苷对LY294002作用后,p-Akt/Akt、NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量与模型组比较,差异无统计学意义。  结论  黄芩苷可抑制LPS诱导的人牙龈成纤维细胞损伤引起的炎症反应,其作用机制可能与促进Akt的磷酸化,抑制NF-κB p65核转录和炎性因子的释放有关。      

苦豆碱对缺氧/复氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨苦豆碱对缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法：培养人脐静脉内皮细胞,随机分为对照组、缺氧/复氧组、苦豆碱（20、50和100 mg/L）预处理组和苦豆碱预处理+LY294002组,并进行相应处理。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,比色法检测Caspase?3活性,Western blot法检测Bax、Bcl?2、Akt和p?Akt蛋白表达。结果：苦豆碱可提高缺氧/复氧抑制的人脐静脉内皮细胞增殖（P < 0.05）,显著减少缺氧/复氧诱导的细胞凋亡（P < 0.05）,逆转缺氧/复氧引起的Caspase?3活性和Bax表达的增加、Bcl?2表达的降低,提高Bcl?2/Bax值（P < 0.05）。此外,苦豆碱预处理可明显上调缺氧/复氧降低的p?Akt蛋白表达（P < 0.05）,而PI3K/Akt抑制剂LY294002明显逆转苦豆碱抗缺氧/复氧诱导的凋亡作用（P < 0.05）。结论：苦豆碱通过激活PI3K/Akt通路抑制缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。     

LY294002对人纤维肉瘤HT1080细胞生长的影响及机制研究

目的 研究PI3K特异性抑制剂LY294002对人纤维肉瘤HT1080细胞生长的影响及机制.方法 将对数生长期的HT1080细胞分组培养,对照组加入不含LY294002的培养液,实验组加入LY294002,浓度分别为5、10、25、50、100 μmol/L,培养12 h和24 h后,用SunBio~(TM) Am-Blue法测定细胞增殖抑制率.100 μmol/L LY294002作用HT1080细胞24 h后,观察细胞形态的改变,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并收集蛋白标本,Western Blotting检测p-Akt及p-mTOR蛋白的表达.结果 与对照组比较,随着LY294002剂量、作用时间的增加,对HT1080细胞增殖抑制率增大(P＜0.05).LY294002(100 μmol/L)作用24 h后HT1080细胞胞体皱缩,细胞数较对照组减少,细胞早期凋亡率较对照组增加(P＜0.05),p-Akt(0.23±0.01)及p-mTOR(0.32±0.06)蛋白的表达低于对照组p-Akt(0.63±0.02)及p-mTOR(0.71±0.02)蛋白的表达(P＜0.01).结论 LY294002通过抑制PI3K-mTOR信号通路来抑制HT1080细胞的生长,PI3K-mTOR信号通路参与纤维肉瘤细胞的生长调节,该通路可能作为治疗纤维肉瘤的新靶点.     

PI3K特异性抑制剂LY294002增强rsTRAIL蛋白对A549细胞的杀伤作用

目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）参与非小细胞肺癌A549细胞株抵抗重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rsTRAIL)蛋白诱导凋亡的机制,寻找增强rsTRAIL蛋白杀伤非小细胞肺癌细胞的新方法。方法：选取对数生长期A549细胞,随机分为rsTRAIL蛋白组和PI3K特异性抑制剂LY294002联合rsTRAIL蛋白（LY294002+rsTRAIL蛋白）组。MTT法检测2组A549细胞生长抑制率,流式细胞技术检测2组A549细胞周期和细胞凋亡的变化,蛋白质印迹法检测2组A549细胞中p-Akt(Ser473)、c-FLIPL、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：与rsTRAIL蛋白组(5.16%±0.32%)比较,LY294002+rsTRAIL蛋白组A549细胞生长抑制率(74.6%±2.63%)明显升高(P<0.05)。与rsTRAIL蛋白组比较,LY294002+rsTRAIL蛋白组处理2 h后G0/G1期A549细胞百分比增加(P<0.05),S期细胞百分比降低（P<0.05）。LY294002+rsTRAIL蛋白组A549细胞凋亡率为(61.50±3.02)%,显著高于rsTRAIL蛋白组(3.21％±0.96％)（P<0.05）。蛋白质印迹检测,与rsTRAIL蛋白组比较,LY294002+rsTRAIL蛋白组A549细胞中p-Akt、c-FLIPL和Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.05）,Bax/Bcl-2比值升高（P<0.05）。结论：LY294002能够抑制PI3K活性,增强rsTRAIL蛋白对A549细胞的杀伤作用。     

黄芪甲苷对脂多糖诱导的MC3T3-E1细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的：探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对脂多糖(LPS)诱导的成骨细胞前体细胞MC3T3-E1氧化损伤的保护作用,阐明其相关机制。方法：将对数生长期MC3T3-E1细胞分为对照组、LPS组和不同浓度(10、25、50及100 mg·L^-1)AS-Ⅳ组,采用CCK-8法检测各组细胞活性。将对数生长期MC3T3-E1细胞分为对照组、LPS组、AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+LY294002 [磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂]组,采用流式细胞术检测各组细胞中活性氧(ROS)水平,采用相关试剂盒检测各组细胞中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中血红素加氧酶1 (HO-1) mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中HO-1、 PI3K、磷酸化Akt (p-Akt)、核因E2相关因子2(Nrf2)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果：CCK-8法检测,与对照组比较,LPS组细胞活性明显降低(P...