大鼠外用脂质体鬼臼毒素后血液中鬼臼毒素浓度观察

目的评价大鼠外用脂质体鬼臼毒素混悬液后经时血药浓度变化规律。方法观察组大鼠涂抹脂质体鬼臼毒素混悬液（载药量0.5％）,对照组大鼠涂抹0.5％鬼臼毒素酊剂。涂药后1、2、4、6、8.10、12和24h心脏采血,用荧光光度法测定不同时间血中鬼臼毒素浓度。结果对照组浓度曲线下面积是观察组的2.3倍。观察组用药8h后鬼臼毒素血药浓度达峰值[（166.395±14.634）ng/ml],而对照组用药后2h即达峰值[（378.603±26.105）ng/ml]。观察组鬼臼毒素的峰值浓度较低,与对照组相比有显著性差异（P<0.001）。结论　脂质体鬼臼毒素混悬液外用后,全身吸收明显低于外用鬼臼毒素酊剂,表明脂质体鬼臼毒素外用后能降低全身毒副作用。     

0.5%鬼臼毒素纳米脂质载体在阴道黏膜的毒性试验

目的考察0.5%鬼臼毒素纳米脂质载体在阴道黏膜的安全性。方法（1）刺激性试验：将12只新西兰兔均分为3组,分别予 生理盐水（NS）、0.5%鬼臼毒素酊剂（POD-T）和0.5%鬼臼毒素纳米脂质载体（POD-NLC）,阴道给药10 d后取阴道组织行病理检 查,根据Eckstein评分标准进行评估。（2）急性毒性试验：将20只SD雌性大鼠均分2 组,分别予赋形剂和POD-NLC,以300倍临 床剂量在24 h内分3次阴道给药,连续观察14 d后解剖并计算脏器系数。（3）长期毒性试验：80只SD雌性大鼠均分4组,分别予 赋形剂、低剂量POD-NLC（15倍临床剂量）、中剂量POD-NLC（30倍临床剂量）和高剂量POD-NLC（60倍临床剂量）。连续13 周每日阴道给药1次,每周记录体质量,给药结束后对每组2/3的大鼠进行抽血化验、解剖并计算脏器系数和肝脏组织病理学检 查。为观察药物延迟毒性,每组剩余1/3的大鼠停药观察2周后做同前处理。结果（1）刺激性试验：0.5% POD-NLC对阴道黏膜 为极轻刺激性,0.5% POD-T为中度刺激性;（2）急性毒性试验：赋形剂组与POD-NLC组大鼠相比,各器官的脏器系数的差异无 统计学意义（P>0.05）;（3）长期毒性试验：赋形剂组与POD-NLC各剂量组大鼠的一般表现、行为活动、体质量变化、血常规、血生 化、重要器官脏器系数及肝脏病理未见明显异常,且组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论POD-NLC在阴道黏膜用药刺激性 较小,对机体无明显的急性及长期毒性,有较高的安全性。     

鬼臼毒素纳米脂质载体的制备及体外对HPV感染的永生化人宫颈上皮细胞的作用

目的研究鬼臼毒素纳米脂质载体(POD-NLC)的体外对HPV感染的永生化人宫颈上皮细胞的作用。方法采用乳化蒸发法制备POD-NLC,分别应用扫描电镜、粒径仪、高效液相法等方法研究其表征,并观察其稳定性。分别以不同浓度(0.0001~1μg/ml)的POD-NLC和鬼臼毒素(POD)处理H8细胞,采用MTT法检测细胞的增殖活性,以荧光显微镜观察细胞的形态变化,流式细胞术(FCM)检测其凋亡率和细胞周期。结果◆制备的POD-NLC扫描电镜下呈球形,有较好的稳定性,粒径为(85.6±10.25)nm,电位为(26.2±4.1)mV,包封率为(88.56±3.1)%;◆POD-NLC能较强地抑制H8细胞的增殖,其抑制作用呈现时间和剂量依赖性;POD-NLC和POD作用72h对H8细胞的抑制率最高分别为95.8%、65.6%,半数抑制浓度(IC50)分别为0.015、0.13μg/ml;空白NLC对H8细胞的增殖无影响;◆浓度为0.01μg/ml的POD-NLC和POD分别处理H8细胞48h后,H8细胞的凋亡率分别为(88.30±4.28)%和(59.95±3.26)%;荧光显微镜观察,均出现了核固缩、染色质高度凝聚、凋亡小体等典型的凋亡形态改变;与空白对照组相比,POD-NLC组和POD组G2/M期细胞比例明显增多,S期细胞比例无明显变化,G0/G1期细胞比例明显减少,但两组间细胞周期时相比例的差异无统计学意义(P>0.05)。结论该制备工艺可行;与POD相比,POD-NLC对H8细胞具有更强的增殖抑制和凋亡诱导效果,可使细胞阻滞于G2/M期,显示出良好的抗宫颈HPV感染的效果。     

五指山小型猪、西藏小型猪和巴马小型猪对外源性脂肪的敏感性观察

目的观察五指山小型猪、西藏小型猪和巴马小型猪对外源性脂肪的敏感性。方法取雄性五指山小型猪、西藏小型猪和巴马小型猪各5只,分别采用静脉注射脂肪乳和饲喂高脂饲料,分别检测静脉注射脂肪乳后0.5、1、1.5、2、2.5、3 h和饲喂高脂饲料后12、24、36、48、60、72、84、120 h的血清胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(LDL-C)和甘油三酯(TG)水平,并计算曲线下面积变化ΔAUC值。结果注射脂肪乳后3种小型猪甘油三酯(TG)均明显升高(P0.01),在注射后0.5 h达到峰值,其升高程度和ΔAUC值高低依次为西藏小型猪五指山小型猪巴马小型猪,而TC、LDL-C和HDL-C则无明显变化(P0.05);高脂饲料饲喂饮食诱导后3种小型猪TC、LDL-C、HDL-C和TG均明显升高(P0.05,P0.01),其中,五指山小型猪TC、LDL-C在饲喂后36 h、HDL-C在饲喂后48 h、TG在饲喂后24 h达到峰值,巴马小型猪和西藏小型猪TC、LDL-C、HDL-C在饲喂后48-60 h、TG在饲喂后36 h达到峰值,TC、LDL-C、HDL-C的ΔAUC值高低依次为五指山小型猪巴马小型猪西藏小型猪。结论静脉注射脂肪乳3种小型猪对TG敏感,脂耐量值高低依次为西藏小型猪五指山小型猪巴马小型猪;高脂饲料饲喂对3种小型猪TC、LDL-C、HDL-C敏感,脂耐量值高低依次为五指山小型猪巴马小型猪西藏小型猪。     

丹参多酚酸盐预防小型猪DIEP皮瓣血管危象的实验研究

目的观察丹参多酚酸盐对小型猪腹壁下血管穿支皮瓣（DIEP）血管危象的防治作用。方法制造双后肢皮肤软组织缺损的小型猪模型10头（共20例创面），按造模时间先后分为实验组和对照组，每组各5头小型猪共10例创面。所有小型猪均行腹壁下动脉外侧皮肤穿支皮瓣转移修复术，术后1h实验组予静脉滴注5％葡萄糖注射液250m1＋丹参多酚酸盐60mg，对照组予静脉滴注5％葡萄糖注射液250ml；均为1次／d，疗程14d。比较两组小型猪术后24h（T1）、3d（L）、7d（T3）、14d（T4）皮瓣皮肤血流灌注量和血液流变学指标；比较实验组术前24h（To）、术后24h（T1）、3d（T2）、7d（T3）、14d（T4）凝血四项即凝血酶原时间（PT）、国际标准化比值（INR）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）；大体观察术后皮瓣血管危象的发生率；14d后计算两组小型猪皮瓣的存活面积比并进行统计学处理。结果（1）血流灌注量实验组各时间点均大于对照组（均P〈0．05），实验组T3明显大于术后前3d（P〈001）；（2）实验组L、L全血高、低切黏度、血浆黏度、RBC压积、RBC聚集指数明显低于对照组。RBC变形指数明显高于对照组（均P〈005）；（3）实验组各时间点凝血四项比较，均无统计学差异（均P〉005）；（4）实验组皮瓣血管危象发生率低于对照组（P〈0．051；实验组皮瓣存活面积比明显高于对照组（P〈0．01）。结论丹参多酚酸盐能增加小型猪DIEP皮肤血流灌注量，能降低血液黏稠度，抑制血小板聚集，改善血液流变学，抑制皮瓣血栓形成，降低血管危象的发生率，提高皮瓣存活面积，而对凝血四项无明显影响，安全性高。     

复方氯已定含漱液毒性作用实验

目的探讨复方氯已定含漱液局部用药的毒性作用。方法选用Wistar大鼠和白色豚鼠,分别进行复方氯已定含漱液的局部口腔黏膜刺激试验和过敏试验。口腔黏膜刺激试验分为复方氯已定合漱液组和生理盐水对照组,观察记录给药后24—144h大鼠的全身状况及口腔黏膜反应情况。过敏试验除复方氯已定含濑液组外,另设空白对照组（生理盐水组）和阳性对照组（2,4-二硝基氯苯组）。6、24、48、72h观察激发接触试验皮肤过敏反应及全身反应情况。结果大鼠口腔给予复方氯已定含漱液未发现口腔黏膜组织异常;白色豚鼠过敏实验结果显示复方氯已定含漱液皮肤用药未出现过敏反应。结论复方氯已定含漱液局部用药毒性试验显示其无口腔黏膜刺激性和致敏性,提示复方氯已定含漱液作为口腔外用含漱液临床用药安全。     

西藏小型猪缺氧缺血性脑病模型的建立及病理和影像学表现

目的建立西藏小型猪缺氧缺血性脑病（HIE）模型,观察HIE模型MR表现并与病理结果对照。方法1~3 d龄西藏小型猪 6只（模型组4只,对照组2只）。模型组夹闭双侧颈总动脉放入缺氧箱内（氧浓度为8%）,60 min后,复氧及再灌注。对照组仅进 行双侧颈总动脉分离。模型组于模型建立后2 h、24 h、3 d、5 d进行脑部ESWAN检查。对照组于手术后2 h进行脑部增强T2*加 权的血管成像（enhanced T2 star weighted angiography, ESWAN）检查。常规MR检查采用SE序列T2FLAIR、T2WI及DWI,于模 型建立后24 h进行。最后进行病理学检查。结果新纹状体区T2*值于模型建立后3 d达峰值,不同时间点与对照组T2*值差异有 统计学意义（P<0.05）。皮层下白质区T2*值于模型建立后24 h达峰值（P<0.05）。新纹状体区R2*值于模型建立后3 d达最低值, 不同时间点与对照组差异有统计学意义（P<0.05）,皮层下白质区R2*值于模型建立后24 h达最低值（P<0.05）。Magnitude值于 模型建立后明显升高（P<0.05）。模型组动物脑部MR的DWI 成像可见双侧额部皮层下白质及双侧新纹状体略高信号, T2FLAIR信号变化不显著,T2WI未见明显异常。SWI可见粗大髓静脉及微出血。HIE早期病理变化以水肿及静脉淤血为主,偶 见局灶性坏死及含铁血黄素沉积。结论ESWAN序列可以评价HIE是否有出血及脑组织水肿。T2*值、R2*值、幅度值可用于观 察缺氧缺血性脑损伤的发生发展变化。     

Cy5标记寡脱氧核苷酸MT01经大鼠牙龈黏膜局部注射后在重要脏器组织中的分布

目的：观察不同时间点Cy5标记寡脱氧核苷酸（ODN）MT01在大鼠体内重要脏器组织中的分布,初步探讨其分布的规律性。方法：选取60只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,每组30只;实验组大鼠牙龈黏膜局部注射Cy5标记的MT01,对照组大鼠牙龈黏膜局部注射未经标记的MT01;于注射后15 min、1 h、4 h、8 h、16 h、1 d、2 d、3 d、4 d和5 d分别取大鼠肺、肝、脾、肾、心和脑组织;激光共聚焦显微镜下观测大鼠重要脏器组织中MT01的荧光分布,以荧光阳性细胞率表示各脏器组织内MT01进入各组织细胞量。结果：对照组大鼠重要脏器组织中未观察到荧光阳性细胞;实验组大鼠除心、脑组织外,肺、肝、脾和肾组织细胞中均可观察到荧光阳性细胞;肾组织中荧光阳性细胞呈片状分布,荧光主要集中于肾小管上皮细胞的胞质中;肝、脾和肾组织的荧光阳性细胞率呈规律性变化,峰值分别出现在注射后4、3和4 d时,肺组织的荧光阳性细胞率未见明显规律性。结论：MT01经大鼠牙龈局部注射后可进入肺、肝、脾和肾组织,主要集中在肾脏组织中,且分布具有一定规律性。     

一种高效转染西藏小型猪胚胎成纤维细胞的方法

目的应用Nucleofector II核转染仪将外源基因EGFP导入西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs),并与脂质体转染的方法进行比较,寻求一种高效转染猪胚胎成纤维细胞的方法。方法使用Lonza公司的Nucleofector II核转染仪,参考已报道的转染程序与相应的转染试剂,将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入西藏小型猪PEFs,并与脂质体转染的方法进行对比研究,比较两种方法的转染效率。结果转染5 h后,核转染仪组镜下即可见绿色荧光,转染效率高达80%,远远高于脂质体转染的方法。结论用Nucleofector II核转染仪能实现西藏小型猪PEFs的高效转染,为高效制备转基因克隆西藏小型猪提供了可靠的方法。     

注射用重组人干扰素α2a联合鬼臼毒素酊治疗生殖器尖锐湿疣临床分析

目的：探讨注射用重组人干扰素α2a联合鬼臼毒素酊局部外搽治疗生殖器尖锐湿疣的疗效。方法：54例生殖器尖锐湿疣病例随机分为对照组22例和治疗组32例。对照组用0.5%鬼臼毒素酊涂搽病灶局部,每日2次,连用3天停药4天为1个疗程,可根据病变程度连续用1-3个疗程。治疗组在局部使用0.5%鬼臼毒素酊涂搽的同时给予注射用重组人干扰素α2a100万国际单位,隔日一次,连续用3周。结果：2组治愈率无显著差异（P〉0.05）,但两组复发率比较差异均有显著性（P〈0.05）。结论：注射用重组人干扰素α2a联合鬼臼毒素酊局部外搽治疗方案可有效防止尖锐湿疣复发。     

Changes in serum concentration of podophyllotoxin after its topical application with liposome on rat skin]

OBJECTIVE: To investigate the changes of serum concentration of podophyllotoxin after topical application of liposome podophyllotoxin suspension on rat skin. METHODS: SD rats were used in this study, which were divided into test group (n=48) to receive application of liposome podophyllotoxin (0.5 % ) suspension and control group (n=48) treated with 0.5 % podophyllotoxin alcohol solution. Blood samples were obtained from the heart at 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 and 24 h respectively after drug application, and the serum concentration of podophyllotoxin was determined by spectrofluorometry. RESULTS: The area under the curve of plasma drug concentration of the control group was 2.3-fold greater than that of the test group. Eight hours after drug application, the serum concentration of podophyllotoxin reached the peak in the test group, while in the control group, only two hours was needed to reach the peak. The peak serum level of podophyllotoxin in the test group were significantly lower than that of the control group (166.395 +/- 14.634 ng/ml vs 378.603 +/- 26.105 ng/ml, P<0.001). CONCLUSION: The systemic absorption of podophyllotoxin in rats after its topical application in liposome suspension is significantly lower than that after application of 0.5 % podophyllotoxin alcohol solution, therefore the systemic toxicity may be reduced.     

两种小型猪代谢综合征相关指标比较研究

目的 探讨两种小型猪作为代谢综合征模型动物的可行性。方法 选择巴马小型猪和西藏小型猪,测量体重、体尺以及与代谢综合征有关指标-血脂、血糖、自由基水平,在不同种和性别之间进行比较分析。结果 与西藏小型猪比较,巴马小型猪体重大,体长度短,颈围大,腹围大,肥胖指数高,而且差异在雌性巴马小型猪中更加显著。TC、HDL-C、LDL-C、TC水平在雌性小型猪高于雄性小型猪。GLU水平在巴马小型猪高于西藏小型猪,并与雌性西藏小型猪的差异显著,而FRA和HbAlc水平在西藏小型猪高于巴马小型猪,Insulin水平在雌性巴马小型猪和雄性西藏小型猪中分别高于雄性巴马小型猪和雌性西藏小型猪。MDA水平在雌性巴马小型猪中显著高于雄性巴马小型猪和西藏小型猪,SOD和GSH-Px水平在巴马小型猪中高于西藏小型猪。结论 通过体重、体尺、血脂、血糖和自由基水平等正常生理指标的分析,巴马小型猪倾向于肥胖;两种小型猪血脂雌性高于雄性;巴马小型猪空腹血糖高于西藏小型猪,但巴马小型猪的血糖控制能力优于西藏小型猪;巴马小型猪抗氧化能力优于西藏小型猪。总之,在代谢综合征相关研究中根据具体需求进行选择不同种、不同性别的小型猪并以具体造模实践来加以验证。     

活血通腑方对术后腹腔粘连大鼠肠黏膜免疫屏障功能的影响

目的?观察活血通腑方对术后腹腔粘连早期肠道黏膜屏障的影响。方法?取SD雄性大鼠60只,随机分为对照组、模型组、活血通腑方组,除对照组外,其余动物均采用锉刀法构建腹腔粘连大鼠模型,分别于术后第3、6、12?h和24?h给予相应剂量的药物,术后48?h采血及组织样本,ELISA法测定血浆中TNF-α水平,免疫组化法检测肠黏膜sIgA的含量和CD4细胞数量,TUNEL法检测肠黏膜下淋巴细胞凋亡情况。结果?与对照组相比,6、12?h和24?h后模型组血浆中TNF-α水平具有统计学差异（P<0.05~0.01）;3、6?h模型组黏膜sIgA表达明显下降;肠黏膜下淋巴细胞凋亡明显（P<0.01）,12、24?h时sIgA的分泌量明显增多（P<0.05）;而模型组12、24?h与3、6?h相比,黏膜下淋巴细胞凋亡明显下降接近对照组水平;模型组3?h肠道黏膜CD4细胞数量明显下降（P<0.01）;6、12、24?h时CD4细胞数量3组比较未见明显异常（P>0.05）。活血通腑方在术后3?h可显著降低模型鼠血浆中TNF-α水平;增高肠道黏膜sIgA含量和CD4细胞数量;减弱黏膜下淋巴细胞凋亡。结论?活血通腑方组可通过降低血TNF-α的水平,减轻黏膜下淋巴细胞凋亡,增加肠道黏膜sIgA含量和CD4细胞数量,提高局部免疫水平,抑制炎症反应。      

复方菊冰喷雾剂的毒性试验研究

目的考察复方菊冰喷雾剂的急性毒性、局部刺激性以及蟾蜍口腔黏膜纤毛毒性。方法采用最大给药量试验观察鼻腔给药后动物短期内出现的急性毒性反应,包括呼吸状况、行为活动、精神状态等;参照中药新药指导原则考察复方菊冰喷雾剂的局部刺激性,并对相关组织进行病理切片检查;在光学显微镜下观察在体、离体蟾蜍口腔上腭纤毛在药物溶液作用下的持续摆动时间,考察复方菊冰喷雾剂的纤毛毒性大小。结果复方菊冰喷雾剂以最大给药浓度2.0mL/kg给予大鼠双侧鼻腔滴鼻无明显的急性毒性反应出现;局部刺激性实验中动物一般状况良好,未发生全身反应及死亡情况;组织病理学检查未见异常;对在体和离体蟾蜍口腔黏膜上腭纤毛的功能有一定的损伤作用。结论复方菊冰喷雾剂无明显急性毒性、局部刺激性,但有抑制蟾蜍口腔黏膜纤毛摆动的作用。     

白速消消毒液刺激性和皮肤变态反应综合研究

目的检测白速消皮肤黏膜消毒液的皮肤刺激性、阴道粘膜刺激性和产生皮肤变态反应的可能性及其强度。方法依照《消毒技术规范》(2002年版)中的皮肤刺激试验、阴道粘膜刺激试验和皮肤变态反应试验方法进行。结果一次皮肤刺激试验受试皮肤的最高皮肤刺激指数为0.3;阴道粘膜刺激试验染毒组和对照组的阴道粘膜未见明显白细胞浸润、充血和水肿,阴道粘膜刺激指数为1.6;皮肤变态反应试验组动物皮肤未见红斑与水肿,各时间段的皮肤刺激反应积分为零。结论白速消皮肤黏膜消毒液对家兔一次皮肤刺激强度为无刺激性,对家兔一次阴道粘膜刺激强度为极轻刺激性,致敏强度为未见皮肤变态反应。     

复方苦参灌肠剂急性毒性及直肠黏膜刺激实验研究

[目的]通过对复方苦参灌肠剂的急性毒性及直肠黏膜刺激性进行实验研究,为临床安全用药提供参考。[方法]应用可供灌肠最大浓度(0.7 g/mL)和最大容积(0.04 mL/g)复方苦参灌肠剂,24 h内重复给药两次,连续观察并记录给药后14 d内小鼠的中毒症状和死亡数,观察小鼠精神、活动状态、毛发色泽、饮食、排泄物、体质量变化及毒性反应,14 d后解剖观察心、肝、脾、肺、肾、结肠并进行病理学检查。对SD大鼠多次直肠给药进行直肠黏膜刺激实验,大鼠给药量为临床灌肠用药剂量,连续给药并观察7 d,第1次给药24 h后解剖1只大鼠,观察直肠黏膜充血水肿情况,以积分评价方法判断药物对直肠黏膜是否有刺激性,并进行病理检查,末次给药24 h后解剖5只大鼠,处理同前,其余大鼠停药观察1周,如果此病理检查结果有异常,则停药观察的动物需行组织病理学检查,否则只需解剖肉眼观察。[结果]急性毒性实验:实验组大鼠体质量增长趋势与对照组比较无统计学意义(P0.05)。实验组与正常对照组给药后30 min内出现倦怠懒动,2 h后恢复正常活动、饮食,随后14 d内各观察指标如外观、行为、饮食、排泄物均正常,无死亡小鼠,14 d后解剖所有小鼠,各内脏无肉眼可观察到的异常变化。直肠黏膜刺激实验:实验组与正常对照组体质量均有不同程度增长趋势,两组比较无统计学差异(P0.05)。动物解剖未见药物引起的直肠黏膜充血水肿等现象,积分评价法判断药物对直肠黏膜无刺激性,两次组织病理学检查未见明显病理改变,停药后的大鼠解剖无肉眼可见病理改变,无死亡大鼠。[结论]该实验条件下,小鼠灌肠最大给药量为56 g生药/kg,相当于人每日用量的14.6倍。实验表明临床拟用灌肠剂量是安全的。复方苦参灌肠剂多次大鼠直肠给药,对直肠黏膜无刺激性作用。     

不同辐射剂量对西藏小型猪小肠线粒体的影响

目的观察不同剂量X线全身照射对西藏小型猪小肠线粒体的影响及其变化特点。方法将18头成年,健康,雄性西藏小
型猪分为6组。实验组5组,对照组1组（n=3头/组）。分别接受2,5,8,11,14Gy全身X线照射。照射后72h麻醉处死并采集小
肠组织分别检测线粒体相关基因的表达,线粒体呼吸链复合酶Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ活性,线粒体琥珀酸氧化呼吸链和NADH氧化呼吸
链的功能及观察线粒体的超微结构。结果8Gy以下剂量组的线粒体蛋白编码相关基因表达、呼吸链复合物活性及呼吸功能明
显低于对照组且随放射剂量的增加而降低;而8Gy以上剂量组,上述指标虽仍明显低于对照组,但不再随放射剂量的增加而继
续降低并维持于一较低水平。电镜下线粒体超微结构在2,5Gy时的改变主要表现为线粒体的扩张及轻微的电子密度降
低。8Gy及其后的剂量组则观察到更为明显的电子密度降低及线粒体的空泡化,嵴与线粒体外膜的连接缺失等。结论电离辐
射导致的小肠线粒体损害在一定剂量范围内（8Gy以下）随放射剂量的增加而愈发明显;但接受更高强度的照射后,其损伤程度
并不会随放射剂量的增加而继续增加。