P2X3在偏头痛大鼠中脑的表达及正天丸作用机制研究*

目的探究正天丸对偏头痛大鼠中脑P2X3受体表达的影响。 方法 24只SD雄性大鼠随机分为空白组、偏头痛组、正天丸组,每组8只。连续给药7 d后硝酸甘油皮下注射造模。观察各组大鼠行为学及痛觉阈值变化,免疫荧光和免疫蛋白印迹技术测各组大鼠中脑内P2X3受体的表达。结果 正天丸组耳红和挠头持续时间均较偏头痛组缩短（P<0.001）。造模后偏头痛组疼痛阈值较造模前及同期空白组均明显下降（P<0.05）;正天丸组造模后1.5 h与空白组相比差异无统计学意义。偏头痛组P2X3受体在中脑内多数神经核团均呈明显高表达状态,正天丸组表达强度较偏头痛组降低。偏头痛组和正天丸组P2X3蛋白表达较空白组升高（P<0.001）;正天丸组P2X3蛋白表达较偏头痛组降低（P<0.001）。结论 中脑内P2X3受体的活化介导了偏头痛的痛觉信息传递,正天丸的抗偏头痛作用与其抑制中脑内P2X3受体过表达有关。     

大鼠坐骨神经损伤后DRG神经元P2X3受体表达的变化

目的 应用免疫组织化学技术,探讨大鼠坐骨神经损伤后不同时间段L4～L5节段DRG神经元P2X3受体表达的变化.方法 实验动物分为对照组、损伤2d组和损伤7d组,分别建立大鼠坐骨神经离断模型,在2d、7d后按照组化方法常规取材、切片、染色,观察坐骨神经损伤后不同时间段DRG神经元P2X3受体表达的变化.结果 对照组、损伤2d组、损伤7d组DRG神经元P2X3受体阳性神经元百分比率分别为31.73%、35.26%、42.93%.坐骨神经损伤2d后DRG神经元P2X3受体表达差异无统计学意义(P＞0.05);而坐骨神经损伤7d后DRG神经元P2X3受体表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 坐骨神经损伤后不同时间段DRG神经元P2X3受体表达发生了不同的变化.     

雌激素对直肠炎大鼠背根神经节P2X3受体mRNA表达的影响

目的:观察结直肠三硝基苯磺酸(TNBS)致炎条件下,改变大鼠体内雌激素和孕激素水平对背根神经节(DRG)中P2X3和P2X2 mRNA表达的影响。方法:SD大鼠分为4组:假手术组、去卵巢组、去卵巢加雌激素替代组、去卵巢加雌孕激素替代组,每组手术完成后饲养5周,再行TNBS致炎,5~7 d后用于实验。实时定量RT-PCR法检测各组P2X3 和P2X2 mRNA的表达。结果:去卵巢组大鼠DRG中P2X3 mRNA表达明显低于假手术组,差异有统计学意义(1.08±0.35 vs 1.66±0.66,P<0.05,n=4),雌激素替代组有明显上升(2.06±0.58),明显高于去卵巢组(P<0.01,n=5),而雌孕激素同时替代组明显低于单独添加雌激素组(2.06±0.58 vs 0.87±0.28,P<0.01,n=5)。各组大鼠DRG中P2X2 mRNA表达无统计学差异。结论:结直肠TNBS致炎条件下,雌激素可促进大鼠DRG中P2X3 mRNA表达,但对P2X2 mRNA无明显影响;孕激素的作用可能与雌激素正好相反。炎性条件下,雌孕激素可能通过影响P2X3受体的表达发挥调节炎性痛作用。     

神经元P2X7受体在疼痛调制中作用研究进展

疼痛是指组织损伤或潜在组织损伤所引起的不愉快感觉和情感体验。由于疼痛机制未明确,临床上传统镇痛疗法效果不理想,给患者、家人及社会造成沉重的经济与精神负担。研究发现P2X7受体作为非选择性ATP门控阳离子通道,由于其自身结构的特殊性,使得其在痛觉调制镇痛中起着重要的作用。本文通过总结近年来国内外有关神经元P2X7受体特性、神经元P2X7受体在神经元凋亡机制中作用以及神经元P2X7受体在疼痛调制中的作用的相关文献报道进行综述,为进一步开发以P2X7受体为靶点的镇痛药物提供新的思路。     

外周P2X3受体在不同炎性痛模型中的作用比较

P2X3亚单位是嘌呤受体P2X家族成员之一,高度选择性的表达于伤害感受器上,参与炎性痛病理过程。目前炎性痛的动物模型主要包括福尔马林炎性痛模型、弗氏佐剂炎性痛模型、角叉菜胶炎性痛模型、蜜蜂毒炎性痛模型等。不同的炎性痛模型具有不同的病理特征,福尔马林模型的主要特点是双时相的自发痛,由于炎症持续时间的不同,角叉菜胶模型一般用于亚急性的炎症模型,而弗氏佐剂模型和蜜蜂毒模型,以及松节油模型则用于慢性炎性痛模型研究,P2X3受体在其中的表达和功能可能有所不同,本文就外周P2X3受体在不同炎性痛模型中的作用做一综述。     

坐骨神经压迫性损伤大鼠背根神经节P2X3受体表达的变化

目的观察背根神经节P2X_3受体在大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)后表达的变化,探讨慢性神经痛的发生机制。方法24只雄性SD大鼠随机分成假手术组(S组)、坐骨神经结扎组(CCI组),各组分别均分为D7组和D14组,分别在各自的时间点灌注取材L_(4～5)背根神经节,用免疫组织化学方法观察P2X_3受体表达的变化。结果CCI组术侧背根神经节P2X_3阳性神经元数目明显增加,与S组相比,差异有统计学意义(P<0.05);非术侧与S组相比则无统计学差异(P>0.05)。结论坐骨神经损伤后背根神经节P2X_3受体的激活与神经性疼痛的病理过程密切相关。     

P2X3受体在逼尿肌不稳定大鼠膀胱组织的表达及其意义

本实验通过建立逼尿肌不稳定(detrusor instability, DI)大鼠模型,检测正常及DI大鼠逼尿肌组织中P2X3受体mRNA及蛋白的表达情况,探讨P2X3受体在大鼠DI发生中的作用.     

ATP、P2X3受体与疼痛

产生痛觉的原因有很多种,从组织损伤到阳光灼伤等,好几种痛觉的机制都涉及到所有细胞的能量库ATP。不论是因膝盖擦伤还是因生长中的肿瘤引致的痛觉,都涉及到化学信使与信号通道之间复杂的相互作用,其机制中的很多问题目前尚不清楚。但Cockagne与Souslova在近期出版的美国《自然》杂志上报道了两项具有里程碑意义的实验研究,即P2X_3受体分子如何影响疼痛。Cockapne与Souslov及其合作者培养出已被敲除与ATP结合的P2X_3受体的鼠。他们对这些鼠的初期研究结果支持ATP参与组织损     

隐神经部分结扎大鼠背根神经节P2X3受体表达的变化

目的观察隐神经部分结扎（saphenous partial ligation,SPL）大鼠背根神经节P2X3受体表达的改变。方法麻醉下。制备大鼠SPL模型;测定SPL大鼠机械异常性疼痛和热痛敏的变化;应用免疫组化技术观察SPL大鼠损伤相应节段（L3、L4）的背根神经节P2X3受体表达的变化。结果SPL大鼠可产生热痛敏和机械异常性疼痛;SPL术后第7、14d,损伤同侧的L3、L4节段背根节P2X3免疫阳性神经元数量明显增加。结论SPL是一种适合于病理性神经痛机制研究的模型,SPL可导致损伤同侧相应节段的背根节神经元P2X,受体表达增加。     

电针内关穴对心肌痛大鼠心肌和下丘脑P2X_3受体影响的研究

目的观察电针"内关"对实验性心肌痛大鼠心肌和下丘脑P2X3受体表达的影响。方法成年雄性SD大鼠28只,随机分为正常组(N组)、对照组(C组)、心肌痛组(M组)、电针组(E组),每组7只。观察大鼠的行为学变化及体重变化;苏木精-伊红(HE)染色方法观测心肌组织的变化;免疫印迹法(West blotting)分别检测大鼠心肌和下丘脑P2X3受体及β-肌动蛋白(β-actin)蛋白表达,比较各组P2X3受体蛋白相对表达量。结果 C组的体重增长较少,与N组相比有统计学意义(P0.01);M组、E组的体重增长较N组和C组显著降低(均P0.01);E组的体重增加比M组的明显升高(P0.01)。M组、E组的行为学表现较N组和C组显著增加(均P0.01);与M组相比,E组的行为学表现都明显下降(P0.01)。N组和C组的心肌细胞排列致密;M组可见严重的心肌细胞萎缩以及代偿性肥大和大面积的结缔组织增生现象;E组可见轻微的细胞肥大和结缔组织增生。M组心肌P2X3受体蛋白表达量显著高于N组、C组(均P0.01);E组心肌P2X3受体蛋白表达量显著低于M组(P0.01),M组下丘脑P2X3受体蛋白表达量显著高于N组、C组(均P0.01);E组下丘脑P2X3受体蛋白表达量显著低于M组(P0.01)。结论电针"内关"可能对P2X3受体介导的心肌痛信息产生影响,这可能是电针"内关"镇痛的机制。     

大鼠坐骨神经损伤后脊髓P2X3受体变化

目的 研究大鼠坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)后脊髓背角神经元P2X3受体的变化,以探讨P2X3受体在初级中枢中的作用.方法 雄性SD大鼠20只,随机分为正常组、CCI后3、7和14 d组.采用von Frey细丝法检测大鼠机械痛敏压力阈值变化,采用免疫组化技术检测不同时间段大鼠脊髓背角P2X3受体表达的变化.结果 CCI 7和14 d组大鼠术侧足底机械痛阈(PWPT)明显降低;CCI 7和14 d组大鼠术侧腰4～腰5(L4～L5)节段脊髓背角P2X3受体免疫反应阳性显著上升.结论 坐骨神经损伤后L4～L5节段脊髓背角P2X3受体免疫阳性的增加与机械痛敏的增强一致.在神经损伤的病理情况下.P2X3受体可能参与了脊髓中枢疼痛信息的调节.     

大鼠正畸牙移动初期P2X3受体在牙髓及牙周膜中的表达变化

[目的]研究正常大鼠牙髓牙周膜P2X3受体的表达及正畸牙移动初期的变化.[方法]利用免疫组织化学方法检测大鼠第1磨牙牙髓及牙周组织P2X3受体的表达及分布.[结果]P2X3受体表达牙髓多于牙周膜,在牙髓主要分布于成牙本质细胞层,并伸向前期牙本质和牙本质;在牙周膜以牙根中部和根尖部居多,远离牙骨质;在正畸牙移动初期牙髓、牙周膜的表达均增强.[结论]P2X3在牙髓牙周膜均有表达,在正畸牙移动初期表达增强,可能在正畸初期疼痛信息的传递中起着一定作用.     

右美托咪定对神经病理性痛大鼠脊髓P2X3和P2X4受体表达的影响

摘要：目的  探讨右美托咪定对神经病理性痛大鼠脊髓P2X3和P2X4受体表达的影响。方法  60只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、神经病理性痛组（NP组）和右美托咪定干预组（DI组）,复制神经病理性痛大鼠模型。于模型复制即刻,DI组大鼠腹腔注射40μg/kg右美托咪定,间隔24 h给药1次,连续进行至模型复制成功后14 d,Sham组和NP组给予等量生理盐水腹腔注射。分别于复制模型前（T0）、复制模型后24 h（T1）、72 h（T2）、7 d（T3）和14 d（T4）,对大鼠机械缩足阈值（MWT）和热缩足潜伏期（TWL）进行测定。Western blot检测大鼠脊髓P2X3和P2X4受体总蛋白及膜蛋白的表达。结果  与Sham组比较,NP组和DI组大鼠T1、T2、T3、T4时MWT和TWL降低;与NP组比较,DI组大鼠T2、T3、T4时MWT和TWL升高,差异有统计学意义（P <0.05）。与Sham组比较,NP组大鼠脊髓P2X3和P2X4受体总蛋白及膜蛋白升高;与NP组相比,DI组大鼠脊髓P2X3和P2X4受体总蛋白及膜蛋白降低,差异有统计学意义（P <0.05）。结论  右美托咪定可有效改善神经病理性痛大鼠痛觉过敏症状,可能与抑制脊髓中P2X3和P2X4受体蛋白的表达有关。

     

正天丸对偏头痛大鼠的预防作用及对神经递质的影响研究

目的研究正天丸对偏头痛大鼠的预防作用及对脑组织中单胺类神经递质的影响。方法实验大鼠分为4组:正常组(等量生理盐水);模型组(等量生理盐水);正天丸组(16.8 mg/kg);西比灵治疗组(1 mg/kg)。各组分别给药5 d后,皮下注射硝酸甘油复制偏头痛大鼠模型,观察其耳红情况、挠头次数等行为学指标后,采用高效液相法测定各组大鼠脑组织中5-羟色胺(5-HT)去甲肾上腺素(NE)和多巴胺(DA)的含量。结果与正常组比,模型组大鼠出现耳红,挠头和甩头次数增多,5-HT、NE、DA的含量降低(P<0.05);经正天丸预防给药后,偏头痛模型大鼠耳红程度减轻,耳红的持续时间缩短,挠头、甩头次数减少,大鼠脑组织中5-HT、DA及NE的含量有所增加,与模型组比较有统计学意义。结论正天丸能明显改善大鼠偏头痛发作,这种作用可能与调节机体单胺类神经递质5-HT、NE和DA的释放有关。     

P2X3受体在糖尿病神经痛动物模型中的研究进展

糖尿病神经痛(diabetic neuropathic pain, DNP)作为临床上最常见的并发症之一, 极大地影响了患者的生活质量, 目前发病机制尚不明确, 缺少有效的治疗方法。DNP与周围感觉神经兴奋性增强有关, 涉及多种离子通道、受体表达、功能上调, 已有研究表明P2X3受体参与DNP等多种神经病理痛的痛觉形成、传导和调节, 本文将围绕DNP模型的建立及P2X3受体在DNP模型中的作用予以综述。     

P2X2、P2X3受体与CGRP和calretinin在大鼠脊神经节内的共存

目的研究ATP受体P2X2、P2X3在大鼠脊神经节感觉神经元的表达、形态特点及与神经肽降钙素基因相关肽(CGRP)、钙结合蛋白calretinin的共存.方法应用激光共聚焦显微镜结合免疫组织化学双标技术.结果免疫组织化学显示脊神经节内可见大量P2X2 、P2X3受体阳性的细胞和神经纤维;P2X2受体亚型阳性细胞多为大、中、小型神经元,P2X3受体亚型阳性细胞为中、小型神经元;免疫组织化学双标显示有41.2±1.9%P2X2受体阳性细胞含有CGRP,而P2X3受体亚型与CGRP共存的细胞很难见到;有8.9±1.1%的P2X2免疫阳性神经元和7.2±1.3%P2X3受体阳性神经元分别含有calretinin.结论这一结果表明大鼠脊神经节内表达的ATP受体P2X2 、P2X3是不同的受体亚型.     

蛋白激酶A和蛋白激酶C对大鼠背根神经节神经元P2X3受体介导的内向电流的调节作用

目的 探讨蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)对分离培养的背根神经节(DRG)神经元ATP受体P2X3功能的调节作用.方法 分离培养大鼠DRG神经元,给予外源性ATP诱导出瞬时型内向电流,通过全细胞膜片钳记录的方法观察P2X3和P2X2/3受体特异性阻断剂TNP-ATP对这一电流的影响,在此基础上观察PKA和PKC激动剂对ATP诱导的瞬时型内向电流的调节作用.结果 在分离培养的DRG神经元上,ATP诱导的瞬时型电流可以被TNP-ATP抑制,其抑制效应呈剂量依赖性,半数有效剂量(IC50)为(21.7±7.6)nmol/L.PKA激动剂forskolin(1 μmol/L)和PKC激动剂PMA(1 μmol/L)均可以快速、可逆地抑制ATP诱导的瞬时型电流.结论 在大鼠分离培养的DRG神经元,PKA和PKC可能通过磷酸化调节抑制P2X3受体的功能,从而抑制ATP诱导的瞬时型内向电流,提示蛋白激酶对P2X3受体的调节作用可能参与痛觉的形成.     

大鼠DRG上的P2X3受体在介导外周伤害刺激引起疼痛的作用机制研究

目的探讨P2X3受体在介导外周伤害刺激引起疼痛的作用及作用机制。方法雄性SD大鼠30只,随机分为A、Β、C、D、E组,每组6只。分组：A组正常对照组足底注射生理盐水;B组大鼠足底注射P2X3受体激动剂ATP;C组大鼠足底注射P2X3受体强效激动剂α、β-meATP;D组大鼠足底注射P2X3受体强效激动剂和P2X3受体拮抗剂α、β-meATP＋TNP-ATP,E组大鼠足底注射P2X3受体激动剂和P2X3受体拮抗剂ATP＋TNP-ATP,观察缩脚次数,每5 min作为一个观察单位持续观察一个小时,大鼠DRG急性分离。采用免疫组化的方法分别测定每组DRG上P2X3受体。结果1、大鼠足底注射生理盐水未出现伤害性行为学反应。而ATP、α、β-meATP组大鼠左足底注射约5 min左右出现明显的伤害性行为反应如咬尾、摆尾及缩脚,α、β-meATP组最为明显。两组缩脚次数有显著差异性P〈0.05。而应用抑制剂之后缩脚次数明显减少,A组和D组相比P〈0.05,A组和E组相比P〈0.01。D、E组相比P〈0.05。2、DRG的P2X3受体表达：P2X3在DRG中小神经元细胞的胞体,α、β-meATP组阳性细胞数表达显著占46%、ATP组占35%,生理盐水占28%,TNP-ATP占20%。α、β-meATP组胞浆呈棕褐色,而ATP组胞浆呈棕黄色。A和B组阳性细胞数差异性显著P〈0.05,α、β-meATP组与α、β-meATP-TNP＋ATP组相比阳性细胞数有显著差异P〈0.01。结论DRG上P2X3受体在介导感觉神经的伤害性信息的传递中起重要作用。     

低频电针刺激对慢性痛大鼠背根神经节P2X3受体表达的影响

目的观察低频脉冲电针对慢性痛大鼠模型背根神经节P2X3受体表达的影响。方法使用完全弗氏佐剂复制慢性炎性痛大鼠模型,24h后用电针刺激双侧“夹脊”穴和“足三里”穴,参数为波宽0．6ms,频率2Hz,电流强度为0．5、1和2mA,各10min,共刺激30min。使用实时定量PCR法,观察慢性痛大鼠给予电针治疗后背根神经节P2）（3受体的表达变化。结果低频电针可以减轻痛觉超敏,疗效持续约70min。同时,低频电针也可以使慢性痛大鼠背根神经节增高的P2X3mRNA明显减低。结论低频脉冲电针的镇痛作用可能部分是通过抑制P2X3基因的表达实现的。电针可以通过改变初级传入神经元中基因的表达而对疼痛起到调控作用。     

川芎嗪对P2X3受体介导的大鼠伤害性兴奋传入的作用

通过动物痛行为反应(缩足反射)确定局部和鞘内应用川芎嗪(TMP)对ATP等P2X受体激动剂所致大鼠足底急性伤害性行为反应的影响。P2X3受体拮抗剂TNP-ATP(0．3μmol／L)明显抑制P2X受体激动剂ATP(1μmol／L)或α，β-meATP(0．6μmol／L)引起的大鼠足底急性伤害性反应。大鼠足底局部应用TMP(0．1-10mmol／L)剂量依赖性地对ATP(1μmol／L)或α，β-meATP(0．6μmol／L)引起的伤害性反应具有抑制作用。鞘内应用TMP(50mmol／L)对ATP(1μmol／L)或α，β-meATP(0．6μmol／L)引起的伤害性反应具有抑制作用。结果表明，TMP可通过阻断P2X3受体介导的伤害性兴奋传入抑制P2X受体激动剂引起的大鼠足底急性伤害性反应。