一种同时培养原代皮质及海马神经元的实验方法北大核心

背景:近年来原代神经元细胞模型在颅脑疾病中扮演着重要的角色,此类细胞模型特性更加贴近于疾病细胞,可用于模拟研究各类神经系统疾病。目的:建立一种便捷实用的可同时提取皮质及海马原代神经元的培养方法。方法:取新生24 h内的SD大鼠,麻醉后断脊法处死,采用体积分数为75%乙醇消毒,用镊子分离出颅骨及脑膜,解剖出完整大脑,剥离脑血管膜,游离出大脑皮质及海马组织,采用木瓜蛋白酶及适量DNA酶顺序消化方案,吹打、离心、过滤,然后接种于左旋多聚赖氨酸包被的6孔板和爬片内,以含体积分数10%胎牛血清的DMEM-F12培养基为种植液,6 h后换用含有B27的Neurobasal无血清专用培养基,持续培养7 d后,显微镜下观察细胞形态及生长状态。分别采用β-Tubulin免疫荧光法、Neun抗体免疫组化法鉴定皮质神经元与海马神经元,以及采用MAP2免疫荧光法鉴定其纯度。结果与结论:①接种24 h后细胞体积变清晰,呈不规则圆形、周围环绕光晕,少数细胞已有细小突起,均已贴壁生长;持续培养3 d后,胞体逐步增大,部分呈聚团性生长,突触延长,细胞间出现交联;持续培养7 d后,胞体成熟饱满,细胞质显著增多,光晕增强,形成更为密集的神经元网络;②经Neun抗体免疫组化法、β-Tubulin免疫荧光法鉴定为神经元,神经元标志物MAP2免疫荧光法鉴定皮质神经元和海马神经元纯度分别为(94.00±0.34)%和(91.00±0.26)%,可用于后期实验;③结果表明,采用同一批24 h内新生SD大鼠分离大脑皮质和海马组织,经木瓜蛋白酶与DNA酶顺序消化后,可提取到优质的海马神经元及皮质神经元。该方案得到的神经元纯度高,操作简化,可作为研究各类神经系统疾病细胞模型的基础。     

一种稳定高效的新生大鼠皮质神经元原代培养方法

目的:建立一种稳定、高效、简单可行的新生大鼠大脑皮质神经元原代培养方法。方法:取新生24 h内的SD大鼠,分离皮质,采用木瓜蛋白酶消化、实验前多聚赖氨酸铺板、不同机械吹打次数及细胞接种2 h后全量换为添加B-27的Neurobasal A培养基的培养方法,MTT比色法分析检测神经元细胞成活率;于不同时间在倒置相差显微镜下观察细胞的生长状态;利用神经元特异性标志物微管蛋白相关标志物2(microtubule associated protein 2,MAP2)鉴定神经元纯度。结果:木瓜蛋白酶明显增加原代培养神经元细胞活力(P0.01),采用适度的机械吹打、实验前多聚赖氨酸铺板及细胞接种2 h后全量换为添加B-27的Neurobasal A培养基,对神经细胞的活力没有明显的影响(P0.05)。大部分皮质神经元具有典型的神经元形态特征,经MAP2免疫荧光技术鉴定神经元所占比例达95%以上。结论:该方法操作简单高效,方便可行,结果稳定。     

新生大鼠海马神经元的体外原代培养

目的研究体外原代培养新生大鼠海马神经元的方法,并观察其发育分化过程中形态学的变化。方法取出生24 h内的Wistar大鼠分离海马,消化后差速贴壁,种植在涂有多聚-L-赖氨酸的盖玻片上,于不同时间在倒置相差显微镜下观察形态变化;采用NSE免疫细胞化学技术鉴定神经元。结果神经元12~24 h后大部分贴壁,随时间延长形态多变,突起逐渐增多,神经元突起间互相接触形成网络。培养第7~10天时细胞最为丰满,至28天时培养液中有悬浮的细胞碎片。NSE鉴定结果显示神经元纯度为(92.3±6.8)%。结论该方法简单易行,神经元纯度较高,可作为神经元体外培养的良好模型用于以后的研究。     

新生大鼠离体海马神经元原代培养方法及鉴定

目的:建立一种稳定的生后大鼠离体海马神经元的培养方法。方法:无菌环境下将出生24 h内SD大鼠断头取脑分离海马,经消化后差速贴壁,采用无血清培养基进行培养,倒置显微镜下观察不同时间段细胞生长形态变化:采用Hoechst33258与NeuN抗体双染方法鉴定神经元。结果:采用差速贴壁后,使用无血清培养基培养的神经元生长良好,纯度较高,12 d时经鉴定神经元纯度可以达到92%以上。结论:差速离心法后可以采用无血清培养神经元,培养的神经元具有纯度高,结果稳定的优点,该方法为以后进行相关的研究奠定了基础。     

新生大鼠海马神经元原代培养方法的研究

目的 :研究和比较 3种不同培养神经元的方法 ,提供一种纯化效率和存活率均较高的培养技术。方法 :取新生SD大鼠的海马区 ,应用一般培养法、加阿糖胞苷法、加阿糖胞苷和神经生长因子法培养神经元 ,观察神经元的形态。用倒置显微镜观察和MTT比色分析检测神经元的存活率。用ABC免疫组化染色法 ,比较 3种不同培养方法在不同培养时间所获得神经元的纯度。结果 :加阿糖胞苷和神经生长因子培养组神经元生长良好 ,纯度和存活率均较高。结论 :加阿糖胞苷和神经生长因子培养神经元的方法具有简便可行 ,易于生长的优点 ,可作为神经元体外培养的良好模型     

灯盏花素干预体外培养大鼠脑皮质神经元的存活与生长

背景：神经生长因子在维持中枢神经系统神经细胞的存活、分化,促进其生长、发育,维持其功能方面具有不可替代的作用。 目的：观察灯盏花素对SD大鼠大脑皮质体外培养神经元生长的影响,并初步探讨其机制。 方法：取新生SD大鼠胚胎,取其大脑皮质后,对神经元进行原代培养,随机分为3组,其中灯盏花素组加入10 g/L灯盏花素,对照组加入等量生理盐水,正常组不作任何处理,各组又分为24 h、48 h亚组。对24孔板中各组细胞各时间点采集图像,之后采用RT-PCR技术检测神经生长因子、酪氨酸激酶A mRNA的表达变化。对96孔板中各组细胞不同时间点采用MTT检测神经元生长活力。 结果与结论：正常组和对照组在各时间点细胞数、胞体面积、突起长度及细胞活力无明显差异(P > 0.05),但正常组及对照组均有随时间点延长,3个指标均上调(P < 0.05),灯盏花素组细胞数、胞体面积、突起长度及细胞活力均较正常组及对照组升高(P < 0.05)。神经生长因子及TrkA mRNA的表达在正常组和对照组在各时间点无明显差异(P > 0.05),灯盏花素组各时间点较正常组和对照组上调(P < 0.05)。提示灯盏花素促进SD大鼠脑源性神经元的存活、生长,其机制可能是通过上调神经生长因子及其受体TrkA的表达发挥作用。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

新生SD大鼠大脑皮质神经元的原代培养及鉴定

背景：培养神经元的质量是研究中枢神经系统疾病的关键所在,但培养方法一直没有统一的标准。目的：探究取材部位及阿糖胞苷处理对原代培养神经元活性、纯度及成熟度的影响。方法：选取新生24 h内的SD乳鼠,取大脑皮质表面2.0-3.0 mm处细胞,培养后24,48,72 h,用5μmol/L或10μmol/L阿糖胞苷处理48 h;另取全部大脑皮质细胞,培养后48 h用5μmol/L阿糖胞苷处理48 h。培养至第7天,倒置显微镜下观察细胞形态,采用CCK-8法检测阿糖胞苷对神经元活性的影响,免疫荧光和Western blot检测神经元的纯度及成熟度。结果与结论：（1）倒置显微镜：10μmol/L阿糖胞苷24,48,72 h组神经元密度分别低于同时间下的5μmol/L阿糖胞苷组,该6组神经元突起相互之间均可连接成紧密的网状结构,神经元胞体丰满并充满折光特性;全皮质组细胞密度低于正常对照组,并可明显观察到非神经元;（2）CCK-8检测：各阿糖胞苷组细胞活性均低于正常对照组（P <0.001）, 10μmol/L阿糖胞苷24,48,72 h组神经元活性低于同时间下的5μmol/L阿糖胞苷组（P &...     

体外培养大鼠皮质神经元兴奋性对Agrin表达的影响

本文目的在于观察体外培养神经元在兴奋性改变状况下其Agrin表达的变化,藉以了解Agrin与神经元发育的关系。采用高钾和低钾培养基培养皮质神经元,用免疫组织化学方法观察这些神经元Agrin表达的变化程度。结果表明,与正常组相比,高钾培养的皮质神经元在形态上无明显改变,神经元胞体的大小、突起的长短都与对照组接近;低钾培养神经元也仍能保持正常的形态,未发现明显的形态改变。免疫细胞化学结果提示,在高钾和低钾培养的皮质神经元中Agrin表达都明显增强,但高钾组的表达程度较低钾组为高。结论:神经元培养液中钾离子浓度所致的神经元活动是影响Agrin表达的重要因素。     

大鼠小脑皮质NPY能神经元的形态与分布

目的　研究大鼠小脑皮质内NPY免疫阳性神经元的形态与分布。方法　SD大鼠 10只 ,雌雄不限 ,升主动脉灌注固定 ,开颅取小脑 ,SP免疫组织化学染色。结果　大鼠小脑内NPY免疫阳性神经元分布在皮质的Purkinje细胞层 ,胞体呈梨形或烧瓶状 ,细胞核清晰不染 ,轴突伸向颗粒层 ,树突呈网状伸向分子层 ,突起未见染色。分子层和颗粒层未见阳性细胞 ,但可见神经纤维的存在。结论　小脑Purkinje细胞层内存在NYP阳性神经元。     

SD大鼠胰岛的分离纯化及培养

目的探讨分离纯化大鼠胰岛素分泌细胞的方法,并评价细胞的生物学特性。方法选用3～4周龄健康成年SD大鼠,常规外科手术显露SD大鼠胰腺和胆总管,在胆总管内插入4.5～5号头皮针后固定,逆行注入预冷的0.5mg/ml的胶原酶V溶液8～10ml,使胰腺膨胀后迅速取出胰腺放入6mlHanks液中38℃消化10min,用含10%胎牛血清的Hanks液终止消化,60目筛网过滤后用Ficoll400非连续梯度离心纯化胰岛。纯化后的细胞用DTZ染色和胰岛素释放试验来分析胰岛素的分泌情况。结果 DTZ染色后β细胞胞浆着色,为均一的猩红色。胰岛细胞分布于Ficoll400浓度为23%～20%和20%～11%的界面之间,纯度高达90%,并且细胞的胰岛素分泌情况良好。结论胶原酶V消化,Ficoll400纯化是一种简单高效的胰岛素分泌细胞分离纯化的方法,可以获取数量多,活性和纯度好的胰岛素分泌细胞。     

新生大鼠脊髓运动神经元的纯化培养与鉴定

背景：神经元是有丝分裂后的细胞,体外培养很难存活。脊髓运动神经元的分离、纯化和培养同时也是细胞培养的技术难点。 目的：建立新生大鼠脊髓运动神经元培养体系,并予以分类鉴定和测定其纯度。 方法：取新生大鼠脊髓腹侧组织分离成细胞悬液,经密度梯度离心及差速贴壁后纯化培养,采用免疫细胞化学双标染色法对培养盖片上的细胞予以鉴定、分类,结合Hoechst荧光染核,计数各细胞成分的含量。 结果与结论：细胞贴壁生长良好,神经元占85.8%,其中运动神经元达71.6%,星形胶质细胞占7.8%,NF200和胶质纤维酸性蛋白染色皆为阴性的细胞占6.4%。结果说明,取新生大鼠腹侧脊髓组织结合密度梯度离心及差速贴壁接种法可以培养出高纯度的脊髓运动神经元。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

一种高纯度小鼠原代脑微血管内皮细胞的分离培养方法

BACKGROUND: Brain microvascular endothelial cells (BMECs) are important tools in the field of neuroscience research; therefore, how to obtain highly purified BMECs is a key and difficulty in vitro. OBJECTIVE: To develop a simple method of isolating and culturing highly purified BMECs. METHODS: C57BL/6 mice aged 6-8 weeks old were selected, and microvessels were obtained using enzyme digestion and gradient centrifugation. Further, endothelia cells were purified by certain drugs, followed by identified by CD31 and GFAP immunofluorescence staining. The expression of Claudin-5 was detected using immunofluorescence staining with anti-Claudin-5 antibody. RESULTS AND CONCLUSION: Mouse BMECs grew and arranged in spiral or cobblestone-like. Immunofluorescence staining showed that the purity of BMECs reached above 99% and Claudin-5 was highly expressed. In conclusion, a simple method of easy accessibility is developed to obtain highly purified primary mouse BMECs. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

乙酰胆碱对培养的新生鼠皮质—基底节神经细胞毒性效应观察

目的：观察Ａｃｈ对培养的新生鼠皮质－基底节神经细胞存活率的影响。方法：细胞分离和培养。结果：Ａｃｈ在浓度达到５０ｍｍｏｌ／Ｌ时造成神经细胞变性坏死。阿托品、氯化锂和ｎｉｍｏｄｉｐｉｎｅ均可拮抗Ａｃｈ对神经细胞的毒性作用。结论：高浓度的Ａｃｈ对神经细胞有直接的毒性作用，可能与Ｍ受体激活后细胞内三磷酸肌醇生成增多和游离Ｃａ２＋浓度异常升高有关。     

三维培养诱导人脂肪间充质干细胞微球的成软骨分化能力

背景：关节软骨损伤后修复结果不满意,需要新的手段,而脂肪间充质干细胞较适宜做种子细胞诱导软骨,然而怎么能够使诱导的软骨具有功能需要研究。 目的：采用三维培养体系诱导人脂肪间充质干细胞微球向软骨分化。 方法：无菌切取吸脂术后脂肪组织,分离培养人脂肪间充质干细胞,传至第3代进行流式细胞术分析,成骨成脂肪诱导等鉴定,同时也给予合适的培养条件用三维培养的方式向软骨细胞诱导,并行阿利辛蓝染色鉴定糖胺多糖的合成,苏木精-伊红染色进行组织学分析,免疫荧光检测Ⅱ型胶原表达,称质量测量软骨硬度。 结果与结论：分离的人脂肪间充质干细胞CD105,CD44,CD29均高表达,而 CD45,CD34低表达,并且成骨成脂诱导后细胞茜素红染色和油红O染色均为阳性。三维培养法诱导的软骨细胞可表达大量糖胺多糖及Ⅱ型胶原。结果证实,三维培养法诱导人脂肪间充质细胞向软骨分化后,具有软骨细胞的特性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

差速贴壁法原代培养椎间盘髓核细胞中的应用优势

BACKGROUND: As the main function cell of intervertebral disc, nucleus pulposus cells are the focus of studying the degenerative mechanism; thereby, it is crucial to maintaining the physiological function of nucleus pulposus cells in vitro and the stability of the cell phenotype. OBJECTIVE: To study the excellence of differential velocity adherent procedure in primary culture of nucleus pulposus cells of rat intervertebral disc through comparison. METHODS: Twenty male Wistar rats aged 4 weeks were enrolled, and then nucleus pulposus cells of intervertebral disc were isolated and cultured in vitro; cell passage culture was performed in different groups when the primary cells were merged to 90%. Differential velocity adherent group cells adhered for 30 minutes, and non-adherent cells were aspirated and transferred to new culture dish after readjusting the concentration; the controls received no intervention. Passages 1 and 2 cells in the differential velocity adherent group were isolated and purified by the same procedure. The morphology of three generations of cells in the two groups was compared, the purity of the identification was detected by immunohistochemistry, the cell viability was detected by cell counting kit-8 and the cell growth curve was drawn. RESULTS AND CONCLUSION: Inverted phase contrast microscope and hematoxylin-eosin staining revealed that the cell homogeneity of the differential velocity adherent group was significantly higher than that of the control group, and there were more kinds of fibroblast-like cells in nucleus pulposus cells in the control group. Identification and purity analysis of collagen type II showed that the cytoplasm of two groups were both stained brown, indicating that they were the nucleus pulposus chrondrocytes. The positive rate of differential velocity adherent group was significantly higher than that of the control group (P < 0.05). The cell growth curve of cell counting kit-8 showed cells in the two groups all passed by the latency phase within 2 days, then to the logarithmic phase of 3 days, and entered the lag phase, while the growth rate of the control group was more rapid during the latency and the early logarithmic phases. These findings suggest that differential velocity adherence method is a practical and effective procedure for the isolation and purification of primary cultured rat nucleus pulposus cells. Through the primary culture, twice differential velocity adherence procedure, the passage 3 rat nucleus pulposus cells are metabolic exuberant, consistent with the phenotype, the cell purity is higher, and the logarithmic growth phase can be used as the optimal time for studying the mechanism of intervertebral disc cells. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

不同培养方法对人脐带间充质干细胞的影响

BACKGROUND:Umbilical cord stem cells mainly derive from full-term infants, and common culture methods include tissue-attached method and trypsin-digestion mehod. However, effects of different culture methods on the separation of umbilical cord mesenchymal stem cells remain many disputes. OBJECTIVE:To observe the effects of different culture methods on umbilical cord mesenchymal stem cells. METHODS:Umbilical cords of 30 healthy full-term and caesarean delivery infants were selected, and cultured using tissue-attached method or trypsin-digestion method to isloate and culture human umbilical cord mesenchymal stem cells. Meanwhile, cell growth was measured by flow cytometry. RESULTS AND CONCLUSION:The fusiform-shaped cells began to separate from the umbilical cord tissue that was primary cultured using tissue-attached method, and 10 days later, the cell fusion reached 80%; after the umbilical cord was cultured using collagenase-trypsin digestion for 5 days, a small amount of adherent cells with different shapes appeared, and the fiber-like cells reached 80% of confluence until 2-week culture. There was no significant difference in the growth of umbilical cord mesenchymal stem cells cultured by different culture methods (P > 0.05). Moreover, cells cultured by two methods were all positive for CD13, CD29, CD44 and CD105. These results demonstrate that human umbilical cord mesenchymal stem cells exhibit a high success rate in primary culture using tissue-attached method, which is superior to the trypsin-digestion method.     

肾脂肪囊与腹股沟来源脂肪干细胞体外培养的生物学特性

背景:脂肪组织来源丰富,不同部位脂肪组织分离培养的脂肪干细胞在体外生物学特性上是否存在差异,目前相关研究较少。目的:观察肾脂肪囊来源与腹股沟来源脂肪干细胞的体外增殖和成软骨诱导分化能力。方法:收集大鼠肾脂肪囊来源与腹股沟区来源组织进行脂肪干细胞培养与鉴定,MTT法检测两组细胞的体外增殖能力。取第3代细胞进行软骨定向诱导2周,免疫荧光检测诱导后细胞CollagenⅡ表达,RT-PCR检测两组细胞诱导后Aggrecan、CollagenⅡm RNA表达水平。结果与结论:(1)肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞经原代与传代培养,形态基本一致;(2)经流式细胞仪检测,不同来源脂肪干细胞的CD44阳性率均达到95%以上;(3)两组细胞的体外生长曲线均呈"S"型;(4)诱导后两组细胞均表现出CollagenⅡ阳性表达;(5)两组细胞的Aggrecan、CollagenⅡmRNA表达水平比较差异无显著性意义(P>0.05);(6)结果显示,肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞均在体外生长稳定,迅速增殖,经定向诱导向软骨细胞发生分化,二者无明显区别。     

四周龄大鼠海马脑片培养方法

目的探讨4周龄大鼠海马脑片培养方法。方法体外微孔膜插件培养海马脑片,应用倒置相差显微镜、乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒、免疫荧光组织化学法及共聚焦激光扫描显微镜观察培养情况。结果培养海马脑片逐渐变薄,细胞条带亮度逐渐减弱;培养12d内,培养液中LDH含量稳定,海马脑片存活良好;在培养过程中,神经细胞逐渐减少,星形胶质细胞逐渐增多。结论本实验建立的4周龄大鼠器官型海马脑片培养模型可为体外研究神经系统相关疾病提供一种实验方法。     

心脏干细胞分离培养及其增殖与迁移的机制

文章快速阅读：文题释义： 干细胞niche：在心脏干细胞的自我更新、生长增殖、多向分化和持续存活等方面需要依赖特定的微环境,即干细胞niche。干细胞niche对干细胞的作用是通过多种因素起作用的,例如干细胞间的相互作用、干细胞与邻近分化细胞的相互作用、干细胞与细胞因子、生长因子及黏附因子的相互作用等,干细胞niche调控干细胞自我更新、多向分化是一个复杂的网络。 心肌重构：是由一系列复杂的分子和细胞机制导致心肌结构、功能和表型的变化,这些变化包括心肌细胞肥大、细胞凋亡、胚胎基因和蛋白质的再表达、心肌细胞外基质量和组成的变化。 摘要 背景：体外环境下进行心脏干细胞培养的过程中,生长微环境可能会对细胞的的增殖等产生一定的影响。 目的：在体外环境下培养大鼠心脏干细胞,探讨心脏干细胞增殖、迁移的可能机制。 方法：纳入SD大鼠10只,获得心肌组织块进行原代和传代培养。收集第3代心脏干细胞进行免疫荧光染色,进行干细胞鉴定,检测干细胞生长因子受体(c-kit)和CD45、CD90的表达。收集培养后的组织块,随机分为2 份,一份用多聚甲醛进行固定,常规石蜡包埋后切片,进行苏木精-伊红染色、Masson染色以及细胞凋亡检测;另一份在培养基中添加EdU标记增殖细胞,采用免疫荧光染色检测c-kit阳性细胞以及基质金属蛋白酶2,9及转化生长因子β1等表达。 结果与结论：①细胞鉴定结果：心肌组织培养7-10 d后有明亮的圆形细胞长出,细胞贴壁后呈梭状,生长、增殖能力旺盛。免疫荧光染色可观察到大量细胞呈c-kit、CD45阳性表达,CD90阴性表达;②细胞凋亡情况：培养的组织块切片后染色见大量新生细胞生长的同时伴随心肌细胞的凋亡;③免疫荧光染色结果：经EdU标记后阳性细胞分布于心肌间隙,基质金属蛋白酶2,9及转化生长因子β1少量表达,但周围心肌组织上述3因子表达明显增多。④结果表明,心肌组织体外培养可获取心脏干细胞,伴随细胞增殖和迁移,其机制与基质金属蛋白酶2,9及转化生长因子β1的表达有关。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程 ORCID: 0000-0002-7743-0450(侯波)     

小鼠乳鼠原代心肌细胞的改良培养

背景：大鼠心肌细胞原代培养技术日渐成熟,但小鼠心肌细胞在同样实验条件下不易获得,而小鼠基因组与人类基因组有更多相似之处,具有更高的研究价值。目的：改进小鼠乳鼠原代心肌细胞的培养方法,得到纯度高、活力强、保持心肌细胞原有结构和功能的心肌细胞。方法：将小鼠心肌组织利用酶消方法分离为单个的心肌细胞,实验步骤中将经典的胰酶、胶原蛋白酶混合酶消法分解开,先用胰酶消化心肌组织,使心肌组织变得松散,再用胶原蛋白酶,作用于细胞间质的胶原纤维,使心肌组织分离为单个的心肌细胞。调整胰酶和Ⅱ型胶原蛋白酶的浓度和作用时间,严格控制试剂pH值和各步骤的温度。结果与结论：心肌细胞在接种24 h后开始贴壁,48 h后可观察到部分心肌细胞出现自主搏动,72 h后彼此形成交联,96 h后可观察到心肌细胞形成细胞簇,并出现一致性搏动。心肌细胞的存活率和纯度均达95%以上。结果证实,实验采用改良方法成功培养出小鼠乳鼠心肌细胞,并且保留心肌细胞的结构和功能,纯度和成活率高,是可行的培养方法。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程