皮肤干细胞将成为细胞治疗神经系统疾病的新的细胞来源

皮肤干细胞主要有表皮干细胞、毛囊干细胞和皮肤前体细胞(SKP),具有多向分化潜能及强大的增殖能力,主要应用于皮肤组织工程。随着皮肤干细胞的不断研究深入,发现在体外可诱导皮肤干细胞成为神经干细胞,有些皮肤干细胞本身就具有神经干细胞性质,它们在一定的条件下可以分化为神经元和神经胶质细胞等。所以,皮肤干细胞的这一特性为神经系统病伤的细胞治疗提供了新的细胞来源。     

小鼠胚胎干细胞来源的神经干细胞的稳定传代体系探索

目的探讨体外诱导、获取均一的神经干细胞群(NSCs)的有效方法,并建立神经干细胞体外稳定传代扩增体系。方法首先采用无血清的诱导培养基贴壁诱导mESCs形成神经上皮祖细胞(NPCs)。然后将经添加表皮生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子-2(FGF2)的无血清培养基短暂悬浮培养后的NPCs再贴壁培养,诱导形成NSCs。通过细胞系46C监测NPCs的形成,同时对分化细胞进行定量PCR和免疫荧光染色,在不同水平检测细胞分化效果。结果 mESCs神经诱导5 d出现大量Sox1+的NPCs;NPCs悬浮培养后,进一步诱导可得到形态均一的NSCs。第2代和第6代NSCs的神经干细胞标志定量PCR检测结果为:Pax6、Nestin、Mash1、BLBP高表达。第8代NSCs免疫荧光染色显示90%以上的细胞均为Nestin、RC2和Pax6阳性。结论成功诱导mESC生成神经干细胞群,并且可以在体外连续稳定的传代。     

短暂性脑缺血对C57BL/6小鼠海马区神经发生的影响

目的:利用小鼠急性全脑缺血模型观察急性脑缺血对海马神经发生的影响。方法:将C57BL/6雄性小鼠(6~8周)随机分为脑缺血组和假手术组。采用双侧颈动脉结扎法建立短暂性全脑缺血模型;利用HE染色观察脑缺血后不同时间(1周,2周)海马区形态学变化;采用免疫组织荧光染色观察缺血后海马区caspase-3表达变化;利用Ed U染色观察缺血3 d、7 d、14 d和28 d后,海马区神经干细胞增殖变化;利用免疫组织荧光染色观察缺血3 d、7 d、14 d和28 d后,海马区nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及少突胶质细胞特异蛋白(OSP)等蛋白表达变化,判断脑缺血对海马区神经干细胞分化的影响。结果:脑缺血7 d后,小鼠海马CA1区神经元数目减少,caspase-3阳性细胞增加(P0.05)。海马DG区Ed U阳性细胞数量在第3 d开始增加(P0.05),第1周达到峰值(P0.05);海马CA1区Ed U阳性细胞数量在缺血后1周开始增加(P0.05),缺血2周后逐渐降低。海马DG区nestin、GFAP及OSP阳性细胞数量均在缺血3 d后开始增加(P0.05),缺血1周后达到峰值(P0.05),2周后逐渐降低。海马CA1区GFAP及OSP阳性细胞数量在缺血3 d后开始增加(P0.05),缺血1周后达到峰值(P0.05),2周后逐渐降低。结论:脑缺血激活了海马DG区神经干细胞,使干细胞增殖,并向神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞分化,同时逐渐向CA1区迁移。     

成体神经干细胞与微环境

背景：成体神经干细胞广泛分布于中枢神经系统,它存在于特殊的微环境中,有自我更新和分化能力,可作为内源性干细胞来源来修复受损的神经组织。 目的：归纳总结神经干细胞与微环境的研究与进展。 方法：由第一作者检索PubMed(1989至2012年)数据库与中国期刊全文数据库(CNKI：2001至2012年),检索词分别为“神经干细胞;微环境;调控”和“neural stem cells;microenviroment;regulation”。 结果与结论：阅读文题和摘要进行筛选,选择具有原创性,论点论据可靠且分析全面、密切相关的文章,排除重复性研究与以及质量较差文章,共检索到379篇英文文章,131篇中文文章,按纳入及排除标准筛选后,共纳入64篇文章。微环境中的各种组成成分如血管及内皮细胞、星形胶质细胞、室管膜细胞、细胞外基质与神经干细胞关系密切,在成体神经干细胞的生存、增殖、分化调控中均发挥重要作用。同时,成体神经干细胞的分化受基因调控。成体神经干细胞与微环境两者之间的研究将为神经组织的修复带来新的方向。     

不同胎龄人胎脑皮质顶叶神经干细胞发育规律研究

目的探讨不同胎龄胎脑皮质顶叶神经干细胞（NSCs）的发育规律。方法收集胎龄16～32周的水囊引产胎儿90例．采用免疫组织化学及光镜技术对人胎脑皮质顶叶NSCs的分布、形态、生长方式以及数量进行检测。结果NSCs主要分布在锥体细胞层及内颗粒细胞层，NSCs呈圆形及椭圆形，以圆形细胞尤甚，0～1个突起，核相对较大，核仁1～5个不等，染色质疏松。NSCs呈明显的区域性分布．大部分NSCs以单个形式存在于其它神经细胞中，少部分NSCs以数个细胞形成的小集落样生长方式存在。各胎龄组间NSCs在分布、形态、种类、生长方式等方面无明显差别。随着胎龄的增加，皮质顶叶NSCs逐渐减少。结论不同胎龄人胎脑皮质顶叶NSCs在分布、形态、种类、生长方式等方面无明显差别。其数量随着胎龄的增加而减少。     

建立大鼠胚胎神经干细胞克隆的实验研究

为了获得神经干细胞克隆,作者从胚胎大鼠脑前区取出神经组织,经酶消化,机械吹打,有限稀释法培养具有单细胞克隆能力的细胞群,再利用单细胞克隆技术连续传代培养获取亚克隆,采用免疫细胞化学技术检测并鉴定神经干细胞和分化后成熟神经细胞特异抗原的表达.发现从胎脑分离的细胞群具有形成连续克隆能力,并表达特异的神经干细胞蛋白(Nestin);诱导分化后的细胞表达神经元和星形神经胶质细胞的特异抗原(Tubulin和GFAP).因而认为分离细胞克隆具有自我更新和多分化潜能,表达神经干细胞蛋白,有较强的体外增殖和分化成成熟神经细胞的能力,是中枢神经系统的干细胞.     

成年脑内神经干细胞的研究进展

以前 ,人们普遍认为中枢神经系统的神经元发生在出生前或出生后不久即停止。然而 ,近 30年来 ,许多研究报道成年后仍有新的神经元继续加入哺乳动物的脑部 ,这些生成神经元的前体细胞 ,一般位于脑室侧壁。它们从这些增殖性区域向离它们最近的靶组织迁移并进行分化 [1 ]。在体外 ,这些神经干细胞能被生长因子或细胞素诱导增殖 ,并在不同环境因子的作用下具有不同的分化。近年来 ,有关生长因子和细胞素对神经干细胞的诱导及多能神经干细胞的移植研究等已成为人们关注的焦点。本文对神经干细胞的研究进展作一简要综述并对相关问题进行初步探讨。…     

细胞凋亡与缺血性脑损伤

缺血性脑损伤所致的神经元死亡有坏死和凋亡两种形式。坏死是急性期神经元死亡的主要形式,多发生在缺血早期出现的缺血中心区,凋亡则是神经元继发性或迟发性死亡的主要形式,多发生在缺血后期的缺血半影区^[1]。目前对缺血半影区的细胞凋亡机制已经有了比较深入的研究,现就近年来针对细胞凋亡机制的治疗手段的研究作如下综述。     

两种人胚胎干细胞系向神经元方向诱导分化的比较研究

目的:比较研究两种人胚胎干细胞系H8和H9在维持培养、向神经前体细胞和神经元方向分化的特性.方法:采用mTeSR1做为基本培养基,Matrigel做为基质胶,进行无滋养层的维持培养.采用白细胞抑制因子1(Smad-1)双抑制剂的神经前体细胞诱导,和含B27的Neurobasal联合脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细...     

低氧对神经干细胞、造血干细胞增殖调控的影响

干细胞（stem cell，SC）在医学研究和临床应用方面有着广泛用途，已成为一个研究热点。但在低氧时对SC增殖的调控目前国内缺少系统研究。低氧影响最大的是神经系统，其次是心血管系统，而低氧时心血管系统的变化与造血干细胞活动又有着密切关系。现将神经干细胞（neural stem cell，NSC）及其发育产生的神经祖细胞（neural progenitor cells，NPC）和造血干细胞（hematopoietic stem cells，HSC）及其发育产生的造血祖细胞（hematopoietic progenitor cells，HPC）在低氧时的增殖调控综述于下。     

促红细胞生成素促进脊髓损伤大鼠移植神经干细胞存活和迁移

背景：如何有效促进移植入脊髓损伤组织内的神经干细胞存活和迁移,是目前神经修复研究的重点。 目的：观察促红细胞生成素对脊髓损伤大鼠移植神经干细胞存活、增殖和迁移的影响。 方法：将60只SD大鼠随机分为3组,均制备脊髓横断损伤模型。造模7 d,神经干细胞移植组和促红细胞生成素组于脊髓损伤处移植BrdU标记的神经干细胞7 μL(1×10⁹ L^-1),脊髓损伤对照组移植DMEM/F12培养基;促红细胞生成素组腹腔内注射促红细胞生成素5 000 U/kg,1次/d,连续注射7 d,其余两组注射等量生理盐水。于细胞移植后8周取损伤脊髓组织。 结果与结论：造模2周后,神经干细胞移植组和促红细胞生成素组BBB评分明显高于脊髓损伤对照组(P < 0.05),造模4周后,促红细胞生成素组BBB评分明显高于神经干细胞移植组(P < 0.05)。免疫荧光染色显示促红细胞生成素组大鼠损伤脊髓组织BrdU阳性细胞数量及迁移距离均大于神经干细胞移植组(P < 0.05)。说明促红细胞生成素能促进损伤脊髓组织原位移植的神经干细胞的存活与迁移,加速神经功能修复。     

早期运动训练联合神经干细胞移植对脊髓损伤模型大鼠后肢运动功能的影响

BACKGROUND: Studies have shown that neural stem cell transplantation combined with exercise training can promote the recovery of hindlimb motor function from spinal cord injury in rats, but its mechanism of action has not been fully elucidated. OBJECTIVE: To investigate the effects of early exercise training combined with neural stem cell transplantation on the recovery of hindlimb motor function in rats with spinal cord injury. METHODS: Sixty Sprague-Dawley rats with spinal cord injury were randomly divided into three groups: control group (n=20, given conventional treatment after injury), cell transplantation group (n=20, given neural stem cell transplantation after injury), experimental group, (n=20, given neural stem cell transplantation combined with early exercise training after injury). Recovery of the hindlimb motor function was assessed by Basso, Beattie and Bresnahan scale and inclined plane test before and at 1, 7, 14, 21 days after injury. Western blot assay was used to detect caspase-3 and myeloperoxidase expression. Hematoxylin-eosin staining was done at 21 days after injury to observe the structure changes of the injured spinal cord. RESULTS AND CONCLUSION: (1) Scores of Basso, Beattie and Bresnahan scale and inclined plane test were significantly better in the experimental group than the cell transplantation group followed by the control group (P < 0.05). (2) In the control group, the expression of caspase-3 and myeloperoxidase was significantly increased at 14 days after injury. In the cell transplantation, the expression of caspase-3 and myeloperoxidase was significantly higher than the experimental group (P < 0.05). (3) Pathological inflammation was reduced most in the experimental group followed by the cell transplantation group. In the experimental group, the structure of injured spinal cord was improved and became relatively clear and intact. These findings indicate that neural stem cell transplantation combined with early exercise training can effectively promote the recovery of hindlimb motor function from spinal cord injury in rats, by reducing the expression of caspase-3 and myeloperoxidase and alleviating secondary lesion of the spinal cord.      

脊髓全横断模型大鼠损伤区白细胞介素17的表达

背景：现阶段,针对已知的炎性递质的干预措施对于减轻脊髓继发损伤的效果局限。白细胞介素17是重要的促炎性细胞因子,在中枢神经系统疾病发病机制中的作用正逐渐受到关注。 目的：观察急性脊髓损伤模型大鼠白细胞介素17 mRNA和蛋白表达的变化规律。 方法：健康雄性SD大鼠随机分为2组：模型组制作大鼠脊髓完全横断模型,假手术组仅剪开硬脊膜而不伤及脊髓实质。开放后测定肢运动功能评分观察急性脊髓损伤对大鼠运动功能的影响,苏木精-伊红染色观察脊髓损伤后不同时间点组织病理学改变,实时荧光定量PCR、Western blot分别检测各组大鼠脊髓损伤后不同时间点白细胞介素17 mRNA和蛋白水平表达变化。 结果与结论：开放后肢运动功能评分结果：假手术组大鼠BBB评分均为20-21分,脊髓损伤1,2 d大鼠BBB评分均为0分,损伤后7 d BBB评分为0-3分(P < 0.05)。苏木精-伊红染色结果：与假手术组相比,脊髓损伤6 h后,炎性细胞浸润,神经元和胶质细胞肿胀,神经元突起减少;脊髓损伤12 h后,灰质、白质组织结构疏松、空泡化;脊髓损伤后7 d,胶质细胞增生,组织纤维化明显。RT-qPCR结果显示：白细胞介素17 mNA于脊髓损伤后3 h出现,并于6 h表达出现高峰(P < 0.01),随后表达减少,7 d后表达接近假手术组水平。Western blot结果显示：脊髓损伤6 h后,白细胞介素17表达开始升高,并于损伤后12 h出现高峰(P < 0.05),随后表达减少,至伤后7 d表达接近假手术组水平。结果可见脊髓损伤12 h后组织损伤表现最严重,并与白细胞介素17表达改变存在时间的一致性,推断白细胞介素17可能参与了脊髓继发性炎症反应过程。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

Cellular prostheses fabricated with motor neurons seeded in self-assembling peptide promotes partial functional recovery after spinal cord injury in rats

To evaluate effects of motor neurons prostheses (MN-prosthesis) fabricated with MNs differentiated from neural stem cells of fetal spinal cord seeded in self-assembling peptides (sapeptides) scaffolds on functional recovery after spinal cord injury (SCI). Spinal cord hemisection was performed in adult rats. The MN-prosthesis was implanted into the lesion of injured spinal cord. TUNEL staining showed that the MN-prosthesis could decrease the number of apoptotic cells at 2, 4, and 7 days after transplantation. In the MN-prosthesis group, some cholinergic neurons survived within and around the implant, more neural fibers went through the implant from rostral side to caudal side. On day 84, Basso, Beattie and Bresnahan (BBB) score, the peak latencies and amplitudes of N1 wave in both motor evoked potential (MEP) and cortical somatosensory evoked potential (CSEP) on the ipsilateral hind limb in the MN-prosthesis group were also significantly greater than those in the other groups (p<0.05). Thus, implantation of MN-prosthesis increases survival of the damaged cells, promotes formation of connection of neural fibers between the regenerative axons and the host tissue, and improves motor and electrophysiological functions. These findings demonstrate that MN-prosthesis serves as a potential tool for restoring neurologic function after SCI.     

低频电磁场促进骨髓间充质干细胞移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究

背景：骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤被视为一种有前途的治疗方法,如何更有效地促进骨髓间充质干细胞在脊髓损伤区存活,加速脊髓损伤肢体运动功能的恢复是目前研究的重点。前期研究发现,低频电磁场能够促进骨髓间充质干细胞的增殖分化,低频电磁场是否可应用于骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤还需进一步研究。 目的：探讨低频电磁场对移植骨髓间充质干细胞脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复的影响。 方法：采用脊髓压迫法制备64只T10不完全性脊髓损伤大鼠模型,随机等分为对照组、骨髓间充质干细胞组、电磁场组和电磁场+骨髓间充质干细胞组。造模成功后,骨髓间充质干细胞组和电磁场+骨髓间充质干细胞组大鼠脊髓损伤原部位注射大鼠全贴壁法分离培养BrdU标记的骨髓间充质干细胞,对照组和电磁场组注射a-MEM培养液。造模术后24 h,电磁场组和电磁场+骨髓间充质干细胞组予60 min/d的低频电磁场刺激(频率50 Hz、强度5 mT)。 结果与结论：骨髓间充质干细胞移植后第21天,电磁场+骨髓间充质干细胞组BBB评分与其他组相比,差异有显著性意义(P < 0.05),与其他各组比较,电磁场+骨髓间充质干细胞组移植细胞后,大鼠BrdU阳性细胞在脊髓损伤区域生长并与脊髓组织融合,存活细胞数量较其他组多;空洞面积小;损伤区胶质纤维酸性蛋白表达更少,而基质金属蛋白2表达更多;脊髓损伤大鼠下肢运动功能恢复最快(P < 0.05)。提示低频电磁场促进了移植骨髓间充质干细胞脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复,可能与低频电磁场有利于损伤区移植骨髓间充质干细胞的存活,上调基质金属蛋白2的表达并减少胶质瘢痕的形成有关。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对大鼠脊髓损伤后细胞自噬的影响

背景：过氧化物酶体增殖物激活受体γ受体激动剂具有抗炎和抑制神经凋亡保护作用,能在一定程度上保护脊髓神经元,对脊髓损伤后细胞自噬应激调控等产生影响。 目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ对大鼠脊髓损伤后细胞自噬的影响。 方法：将60只SD大鼠分为3组,正常对照组仅做椎板切除,不损伤脊髓,腹腔注射生理盐水;其余大鼠以改良Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,过氧化物酶体增殖物激活受体γ组腹腔注射罗格列酮;脊髓损伤组不做处理。损伤后1,3,7,       14 d为时间点并取材,对脊髓损伤区分别进行免疫组织化学法检测,并以Western Blot法检测Beclin 1/Bcl-2的表达变化,同时采用BBB评分方法观察神经功能恢复情况。 结果与结论：大鼠脊髓损伤后第3~14天,过氧化物酶体增殖物激活受体γ组BBB 评分显著高于脊髓损伤组(P < 0.05)。脊髓损伤组和过氧化物酶体增殖物激活受体γ组均见自噬相关阳性细胞表达,过氧化物酶体增殖物激活受体γ组细胞自噬程度相对降低,Beclin 1表达较脊髓损伤组降低(P < 0.05),Bcl-2表达较脊髓损伤组明显增加(P < 0.05),神经功能增强(P < 0.05)。提示过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂在一定程度上降低大鼠脊髓损伤后细胞自噬,对细胞凋亡产生拮抗作用,并在一定程度上可促进神经功能的恢复。关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体γ;脊髓损伤;自噬;大鼠;神经功能 缩略语注释：PPARγ：Peroxisome proliferator activated receptor,过氧化物酶体增殖物激活受体γ doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.15.026     

人尿源性干细胞体外向神经元样细胞诱导分化及对大鼠脊髓损伤的保护作用

文题释义： 人尿源性干细胞：是近年来新发现的成体干细胞,具有自我增殖能力和多向分化能力,可能是细胞治疗或组织工程的一种具有应用前景的种子细胞,其来源于尿液,不受伦理和取材限制,同时提取简便,已逐渐引起学者的青睐,近年来已应用于泌尿系疾病的治疗和修复。 脊髓损伤：由于外界直接或间接因素导致脊髓损伤,在损害的相应节段出现各种运动、感觉和括约肌功能障碍、肌张力异常及病理反射等相应改变。大鼠脊髓损伤模型是模拟人体脊髓损伤的基础模型,该研究采用人尿源性干细胞干预动物脊髓损伤模型,探索人尿源性干细胞对于神经修复的作用。 背景：人尿源性干细胞是近年来新发现的成体干细胞,其来源不受限制,提取简便,具备良好的增殖能力及多向分化潜能,近年来已应用于泌尿系疾病中的神经功能修复,如应激性尿失禁以及膀胱输尿管返流等。 目的：探索人尿源性干细胞向神经元样细胞诱导分化能力及对大鼠脊髓损伤的修复作用。 方法：体外获取人尿源性干细胞后利用流式细胞仪检测其细胞表型,将人尿源性干细胞向神经元样细胞诱导后进行免疫组织化学染色鉴定。采用Allen方法制作大鼠T₉节段脊髓损伤模型,24只SD大鼠被随机分为2组：脊髓损伤组和人尿源性干细胞组,每组12只。人尿源性干细胞组在脊髓损伤后第1天于损伤脊髓边缘注入2 μL细胞浓度为1.0×10¹¹ L^-1人尿源性干细胞,脊髓损伤组注入等量含体积分数为10%胎牛血清的L-DMEM培养液,于造模后第1,10,20,30天进行BBB评分,第30天取各组损伤脊髓组织分别进行Luxol Fast Blue染色、小胶质细胞/巨噬细胞染色和胶质纤维酸性蛋白染色,并计算损伤脊髓面积和胶质纤维酸性蛋白荧光强度。 结果与结论：①人尿源性干细胞高表达CD29、CD90,而低表达CD45,并且在体外可向神经元样细胞诱导分化;②造模后第1,10天两组大鼠BBB评分差异无显著性意义(P > 0.05),第20,30天人尿源性干细胞组BBB评分明显高于脊髓损伤组(P < 0.05);③人尿源性干细胞组脊髓损伤面积明显低于脊髓损伤组(P < 0.05),胶质纤维酸性蛋白染色显示人尿源性干细胞组荧光强度明显低于脊髓损伤组(P < 0.05);④结果表明,人尿源性干细胞能向神经元样细胞分化,并对大鼠脊髓损伤具有修复作用。 ORCID: 0000-0002-4704-2975(邓明) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

神经干细胞联合胶原蛋白支架移植脊髓损伤大鼠脑细胞的凋亡

背景：目前的研究表明,从胚胎大鼠大脑皮质分离的神经干细胞在胶原蛋白凝胶中可增殖并分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。 目的：观察神经干细胞联合胶原蛋白支架移植对脊髓损伤后鼠大脑神经细胞凋亡的影响。 方法：取45只SD大鼠制作脊髓半切损伤模型,随机分为3组,造模1周后,细胞移植组大鼠运动皮质后部在脊髓损伤部位注入同种异体神经干细胞悬液,联合组在脊髓损伤部位注入同种异体神经干细胞结合胶原蛋白悬液,模型组不植入任何物质。 结果与结论：移植后1-8周,3组大鼠肢体运动功能均有不同程度恢复,且联合组移植后8周BBB运动评分明显高于其他两组(P < 0.05)。移植后1周苏木精-伊红染色显示3组均可见少量凋亡细胞及Bcl-2抗凋亡蛋白阳性细胞,大量Bax阳性细胞;随时间的推移,3组Bax凋亡蛋白阳性细胞、Bcl-2抗凋亡蛋白阳性细胞逐渐减少,并且移植后8周联合组、细胞移植组Bax阳性细胞明显低于模型组(P < 0.05),Bcl-2抗凋亡蛋白阳性细胞高于模型组(P < 0.05),此时3组均无凋亡细胞。表明神经干细胞联合胶原蛋白支架移植可抑制脊髓损伤后鼠大脑神经细胞的凋亡,促进脊髓神经功能的恢复。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程全文链接：     

盐酸川芎嗪联合骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤模型大鼠的神经保护

BACKGROUND: Ligustrazine hydrochloride which promotes nerve repair can be applied to the treatment of nervous system injury. OBJECTIVE: To investigate the effect of ligustrazine hydrochloride combined with bone marrow mesenchymal stem cells transplantation on electrophysiological property and hindlimb function of rats with spinal cord injury. METHODS: T9 spinal cord transection injury models were made in rats using Allen’s method, and then rat models were randomized into three groups: rats in control group received tail vein injection of culture solution; rats in cell transplantation group underwent bone marrow mesenchymal stem cell transplantation via the tail vein; rats in combined group were subjected to the tail vein injection of ligustrazine hydrochloride and bone marrow mesenchymal stem cells that lasted for 4 hours. At 1, 2, 4, 6, 8 weeks after modeling, Basso, Beattie and Bresnahan scores and modified Tarlov scores were used to detect the motor function of rats. At 72 hours after modeling, RT-PCR method was used to detect the expression of Bcl-2 and basic fibroblast growth factor around the injured region. At 4 weeks after modeling, somatosensory and motor evoked potentials were measured for evaluation of neurophysiological recovery. At 8 weeks after modeling, horseradish peroxidase tracer was used to assess the regeneration of rat spinal cord nerve fibers; PKH-26 labeling was used to observe the survival and migration of transplanted cells. RESULTS AND CONCLUSION: At 1, 2, 4, 6, 8 weeks after modeling, Basso, Beattie and Bresnahan scores and modified Tarlov scores were significantly higher in the combined group than the cell transplantation followed by the control group (P < 0.05). At 72 hours after modeling, the expression of Bcl-2 and basic fibroblast growth factor around the injured region was significantly higher in the combined group than the cell transplantation group and control group (P < 0.05). At 4 weeks after modeling, the latencies of somatosensory and motor evoked potentials were ranked as follows: combined group < cell transplantation group < control group (P < 0.05); the amplitudes of somatosensory and motor evoked potentials were ranked as follows: combined group > cell transplantation group > control group (P < 0.05). At 8 weeks after modeling, horseradish peroxidase-labeled pyramidal cells in the cell transplantation group and combined group showed apparent crossing signs; the number of PKH-26-positive cells and horseradish peroxidase-positive cells was the most in the combined group followed by the cell transplantation group, and was the least in the control group (P < 0.05). These findings indicate that ligustrazine hydrochloride combined with bone marrow mesenchymal stem cells transplantation can facilitate nerve cell regeneration, promote the expression of Bcl-2 and basic fibroblast growth factor, and improve motor function in rats after spinal cord injury.      

3D打印胶原/壳聚糖支架改善大鼠脊髓损伤后神经功能恢复

文题释义：壳聚糖：为一种天然多糖,是虾蟹等低等动物外壳的重要成分,具有一定的机械强度,并且具有良好的生物相容性和抗菌性,在生物工程领域具有较好的应用前景。 3D生物打印：是组织工程中最重要的技术之一。目前常用的三维生物打印方法包括喷墨打印、挤压生物打印和激光生物打印,选择好合适的材料后,在计算机指导下根据所选择的生物材料和细胞类型逐层准确地打印出所设计的结构。 背景：3D打印技术可以根据需求制备出满足脊髓植入形状、大小和表面形态要求的生物支架。 目的：观察3D打印胶原/壳聚糖支架对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的影响。 方法：将胶原和壳聚糖按2∶1的质量比混合,采用冷冻干燥法制备普通胶原/壳聚糖支架,采用3D打印机制备3D打印胶原/壳聚糖支架,分别测量两种支架的孔隙率和弹性模量,电镜观察支架形态。将神经干细胞分别与3D打印胶原/壳聚糖支架、普通胶原/壳聚糖支架共培养,进行扫描电镜观察与CCK-8检测。将40只雌性SD大鼠(由中国人民解放军医学科学院军事科学院提供)随机分成4组：假手术组、脊髓损伤组、普通胶    原/壳聚糖支架组和3D打印胶原/壳聚糖支架组,后3组制作脊髓全横断损伤模型,普通胶原/壳聚糖支架组和3D打印胶原/壳聚糖支架组损伤处填充对应的支架材料,术后相应时间点进行后肢功能BBB评分、斜坡实验、神经电生理检测与磁共振平扫。实验方案经天津市神经创伤重点实验室伦理委员会批准。 结果与结论：①扫描电镜显示,3D打印胶原/壳聚糖支架具有互连的多孔结构,普通胶原/壳聚糖支架内部结构紊乱;②神经干细胞在3D打印胶原/壳聚糖支架表面生长良好,完全伸展,且3D打印胶原/壳聚糖支架表面神经干细胞的活性显著高于普通胶原/壳聚糖支架组(P < 0.05);③3D打印胶原/壳聚糖支架的孔隙率与弹性模量均高于普通胶原/壳聚糖支架组(P < 0.05);④3D打印胶原/壳聚糖支架组术后3-8周的BBB评分高于脊髓损伤组、普通胶原/壳聚糖支架组(P < 0.05),术后4,6,8周的斜坡实验角度大于脊髓损伤组、普通胶原/壳聚糖支架组(P < 0.05);⑤3D打印胶原/壳聚糖支架组术后8周的运动诱发电位振幅、体感诱发电位振幅大于脊髓损伤组与普通胶原/壳聚糖支架组(P < 0.05),运动诱发电位潜伏期、体感诱发电位潜伏期短于脊髓损伤组与普通胶原/壳聚糖支架组(P < 0.05);⑥磁共振平扫显示与脊髓损伤组及普通胶原/壳聚糖支架组比较,3D打印胶原/壳聚糖支架组损伤处具有较好的连续性与较多的神经纤维束通过;⑦结果表明,3D打印胶原/壳聚糖支架可促进脊髓损伤大鼠神经功能的修复。 ORCID: 0000-0001-5771-8222(史新宇) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程