miR-451a和MMP-2蛋白在结直肠癌组织中的表达及对肿瘤细胞增殖的影响

目的探讨miR-451a和MMP-2蛋白在结直肠癌组织中的表达情况及两者对肿瘤细胞增殖的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹分别检测结直肠癌组织与癌旁组织(来自2018年金华市中心医院手术切除的标本),多个肿瘤细胞系中miR-451a的表达和MMP-2蛋白的表达;在HCT116细胞系中过表达miR-451a(miR-451a-mimic)检测MMP-2蛋白表达;miR-451a-mimic或沉默MMP-2表达检测细胞增殖情况。结果在结直肠癌组织中miR-451a表达明显下降,MMP-2蛋白的表达显著升高,这种结果同时出现在各个结直肠癌细胞株中,以HCT116细胞株最为明显;在HCT116细胞系中miR-451a-mimic显著减少MMP-2蛋白表达量,miR-451a-mimic或沉默MMP-2均会抑制肿瘤细胞的增殖。结论 miR-451a在结直肠癌组织中表达明显降低,其本身可能通过抑制MMP-2蛋白的表达来抑制肿瘤细胞的增殖。     

miR-17-92通过靶向抑制QKI促进结直肠癌转移

目的探讨miR-17-92和QKI蛋白在结直肠癌(CRC)生物学行为中的作用及其可能的作用机制。方法收集2017年1—12月辽宁省人民医院确诊的CRC患者29例的新鲜癌组织和癌旁组织,分别通过实时定量(qRT)-PCR技术检测miR-20a、Western blot方法检测QKI蛋白在结直肠组织中的表达水平,并观察和分析两者表达相关性;在结肠癌SW480细胞系中转染miR-20a模拟物或共转染QKI蛋白过表达质粒,通过Western blot检测QKI蛋白的表达量,同时运用Transwell迁移实验对结直肠癌细胞迁移能力的变化进行分析。结果 qRT-PCR检测显示,miR-20a在CRC组织中呈高表达(t=4.099,P=0.000);Western blot检测显示,QKI蛋白在CRC组织中呈低表达(t=3.037,P=0.005);相关性分析结果显示,miR-20a和QKI蛋白在CRC组织中的表达呈负相关(r=-0.437,P=0.018)。Western blot检测和Transwell细胞迁移实验结果显示,在结肠癌SW480细胞过表达miR-20a后,QKI蛋白的表达量下降,细胞的迁移能力增强(P<0.05);而共转染QKI过表达质粒后,QKI蛋白的表达量有所上升,细胞迁移能力的增强作用有所减弱。结论 miR-17-92和QKI共同参与结直肠癌的进展;miR-17-92可能通过靶向抑制QKI而促进结直肠癌的转移。     

claudin-23在结直肠癌组织中的表达及其对人结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的 了解claudin-23在结直肠癌中的表达及其对人结直肠癌细胞株生长、增殖及迁移能力的影响。方法 自四川大学华西医院疾病组织标本库选取6对结直肠癌组织及相应癌旁正常组织标本,采用实时荧光定量PCR检测组织标本中claudin-23基因的表达量。构建稳定过表达claudin-23的结直肠癌细胞株,用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹验证后,采用CCK-8、Transwell细胞迁移实验检测过表达claudin-23对人结直肠癌细胞生长、增殖以及迁移能力的影响。结果 在结直肠癌组织中claudin-23的表达量较癌旁正常组织中减少（P<0.05）,过表达claudin-23后HCT15细胞间的黏附性降低,细胞呈离散型生长,并且可促进HCT15细胞的生长增殖,此外,过表达claudin-23可使RKO细胞及HCT15细胞的迁移能力明显增强。结论 claudin-23可显著提高人结直肠癌细胞的迁移能力,提示claudin-23可能与结直肠癌的转移相关。     

miR-30b-5p抑制胆固醇合成和结直肠癌细胞增殖

目的 探索 miR-30b-5p 在结直肠癌中的作用及机制.方法 收集结直肠癌患者的癌及癌旁组织、患者及正常人血清,提取RNA,实时荧光定量 PCR检测 miR-30b-5p表达.将miR-30b-5p的inhibitors转入HT-29 细胞中;将miR-30b-5p的mimics转入 HCT-116 细胞中;CCK-8 试剂盒检测细胞活力;胆固醇试剂盒检测细胞中胆固醇含量;实时荧光定量PCR检测低密度脂蛋白受体( LDLR)的表达,Western blot检测 LDLR 蛋白表达;在转入 miR-30b-5p inhibitors 的HT-29细胞中应用siRNA敲低LDLR,检测LDLR蛋白表达、细胞胆固醇含量及细胞增殖.结果 与正常人相比,miR-30b-5p在结直肠癌患者组织及血清中表达降低,且其在结直肠癌细胞系HT-29、Caco-2及HCT-116中的表达量低于正常结直肠细胞系NCM460;在HT-29细胞中转入miR-30b-5p的inhibitors,细胞增殖加快,胆固醇含量增加,LDLR表达上调;在HCT-116细胞中转入miR-30b-5p的mimics,细胞增殖减慢,胆固醇降低,LDLR表达被抑制;此外,在miR-30b-5p沉默的HT-29细胞中敲低LDLR,胆固醇含量减少,细胞增殖减慢.结论 miR-30b-5p在结直肠癌中是一种抑癌microRNA,它通过抑制LDLR和胆固醇合成抑制结直肠癌细胞增殖.     

Notch1在结直肠癌的表达与奥沙利铂敏感性的关系

目的：明确Notch1在结直肠癌中的表达状况,探讨Notch1表达水平与奥沙利铂对结直肠癌化疗敏感性的关系.方法：收集36例结直肠癌新鲜手术标本进行原代细胞培养,采用胶原凝胶体的方法检测奥沙利铂敏感性.免疫化学染色检测结直肠癌组织、结直肠组织和结肠癌细胞株（SW480）Notch1的表达水平.将经二甲基亚砜（DMSO）、DAPI处理后的SW480细胞分4组（DMSO、DAPI、DMSO＋oxaliplatin、DAPT＋oxaliplatin）,分别用奥沙利铂作用后CD-DST检测各组吸光度值.结果：Notch1在结直肠癌组织上呈阳性表达,表达水平明显高于正常组织,与奥沙利铂敏感性呈负相关.Notch1在SW480细胞呈阳性表达,与DMSO组相比,DAPT组之间的差异无统计学意义;而DMSO＋oxaliplatin组及DAPT＋oxaliplatin组之间的差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论：Notch1在结直肠癌中呈高表达,且表达水平与奥沙利铂的敏感性呈负相关.DAPT阻断Notch1信号通路可提高细胞奥沙利铂的敏感性.     

miR-27a靶向调控SFRP1对结直肠癌生物学行为的影响

目的 探讨miR-27a在结直肠癌中的表达,并分析其靶向调控分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对人结直肠癌细胞HCT116生物学行为的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达情况;Western blot检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中SFRP1蛋白表达水平;运用TargetScan预测软件及双荧光素酶报告基因实验检测miR-27a对SFRP1的靶向调控作用;将miR27a模拟物(miR-27a mimic)、miR-27a抑制物(miR-27a inhibitor)及阴性对照(NC)转染至HCT116细胞中;采用qRT-PCR测定各组细胞中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达水平;运用四唑盐(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验评估各组细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测各组细胞中SFRP1、Wnt/β-catenin信号通路中的关键因子Wnt4和β-catenin的蛋白表达水平。结果 与癌旁正常组织相比,miR-27a在结直肠癌组织中高表达,而SFRP1在结直肠...     

MiR-150-5p靶向HIF1α调控结直肠癌细胞西妥昔单抗耐药的相关机制研究

目的探讨miR-150-5p调控结直肠癌西妥昔单抗敏感性可能的机制。方法将miR-150-5p的模拟物、miR-150-5p的对照组分别转染到结直肠癌细胞株HTC8细胞中,然后加入300 mg/L的西妥昔单抗。首先通过RT-qPCR检测转染之后miR-150-5p在各组的表达水平,然后运用CCK-8分别比较HTC8细胞在转染miR-150-5p模拟组、转染miR-150-5p对照组以及西妥昔单抗+miR-150-5p模拟物组的细胞增殖情况。RT-qPCR检测各组缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)的mRNA水平,Western blot检测各组HIF1α的蛋白水平。流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与HIF-1α之间作用。结果过表达miR-150-5p加西妥昔单抗处理组显著抑制细胞株HTC8的增殖(P<0. 05)并促进其凋亡(P<0. 05),进一步降低HIF1αmRNA和蛋白的表达(P<0. 05),双荧光素酶报告基因实验证明HIF-1α是miR-150-5p的直接作用靶点。结论 MiR-150-5p可能通过靶向HIF-1α调控HTC8细胞的增殖与凋亡,同时miR-150-5p可增加结肠癌细胞对西妥昔单抗的敏感性。     

circVRK1/miR-18b-5p轴调控结直肠癌细胞增殖、迁移和凋亡

目的 探讨circVRK1/miR-18b-5p轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 实时定量聚合酶链式反应检测53例结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中circ VRK1和miR-18b-5p表达。体外培养结直肠癌LoVo细胞,双荧光素酶报告基因实验验证circVRK1与miR-18b-5p的调控关系。分别转染pcDNA-circVRK1、miR-18b-5pinhibitor,或共转染pcDNA-circVRK1与miR-18b-5p mimic至LoVo细胞,采用CCK-8法、克隆形成实验、划痕实验、流式细胞术、蛋白质印迹法分别检测细胞增殖、迁移、凋亡、蛋白（cleaved-caspase3、Bax、Bcl-2）表达。结果 结直肠癌组织中的circVRK1表达量显著低于癌旁组织（P<0.05）,miR-18b-5p表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）。circ VRK1可靶向结合miR-18b-5p,且过表达circVRK1抑制LoVo细胞中miR-18b-5p的表达。过表达circVRK1或敲减miR-18b-5p后,LoVo细胞的抑制率、凋亡率、cleaved...     

miR-33a-3p通过调控EphA2影响结直肠癌化疗耐药

摘要:目的 探讨微小 RNA-33a-3p(miR-33a-3p)对结直肠癌化疗耐药的影响及其调控机制。方法 实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)法检测结直肠癌亲本株(HCT8)及耐药细胞株(HCT8/5-Fu及 HCT8/DDP)中 miR-33a-3p的表达。构 建 miR-33a-3p模拟物和阴性对照转染至结直肠癌耐药细胞后检测细胞增殖、凋亡、周期分布及化疗敏感性变化,运用生 物信息学方法预测 miR-33a-3p的靶基因,运用qRT-PCR和 Westernblot检测过表达 miR-33a-3p对下游靶基因 EphA2 的影响。结果 结直肠癌耐药细胞系中 miR-33a-3p的表达显著低于亲本株(均 P<0.01)。与阴性对照组相比,过表达 miR-33a-3p的耐药细胞增殖能力降低,细胞凋亡增加,细胞于 G2/M 周期阻滞,化疗敏感性增强(均 P<0.05)。生物信 息学预测结果显示 EphA2可能为 miR-33a-3p的下游靶基因。当过表达 miR-33a-3p时,耐药细胞 EphA2表达明显降 低。结论 miR-33a-3p可能通过调控下游靶基因 EphA2的水平逆转结直肠癌化疗耐药。     

稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞模型的建立及意义

目的利用慢病毒表达载体建立稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞系,探讨miR-27b对结直肠癌细胞生物学特性的影响及作用。方法构建miR-27b过表达重组慢病毒载体,经包装病毒后感染结直肠癌细胞SW480,利用流式细胞仪分选获得绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性细胞并荧光定量PCR检测miR-27b表达情况,建立稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞系;通过MTT法和Transwel检测过表达miR-27b后细胞体外增殖、侵袭能力的变化。结果稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞中miR-27b的表达水平是空载体对照细胞中miR-27b的5.02倍;与对照细胞相比,miR-27b过表达能够促进结直肠癌细胞的增殖和侵袭能力(P<0.05)。结论成功建立了稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞模型,为深入研究miR-27b在结直肠癌发生发展过程中的作用、调控靶基因和相应的作用机制奠定了基础。     

MicroRNA-153 对脑膜瘤细胞放疗敏感性的影响

目的 探讨microRNA-153 对（miR-153）对脑膜瘤细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。 方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应检测放疗前后脑膜瘤SF3061 细胞系中miR-153 的表达变化,用脂质 体转染技术将miR-153 mimics 及对照转染至SF3061 细胞中,采用MTT 法、流式细胞术及克隆形成实验检 测放射处理后细胞的放疗敏感性变化。使用TargetScan 预测及双荧光素酶报告基因实验验证miR-153 与视 网膜母细胞瘤蛋白结合锌指1（RIZ1）的靶向作用,基因敲除RIZ1 验证其对脑膜瘤细胞放疗敏感性的影响。 结果 脑膜瘤细胞经过放疗处理后miR-153 的表达水平降低;miR-153 mimics 提高放疗后细胞的增殖抑制 率和凋亡率,降低细胞克隆形成率;TargetScan 预测及双荧光素酶报告基因实验证实RIZ1 是miR-153 的靶标; 转染si-RIZ1 增加脑膜瘤细胞的放疗敏感性。结论 miR-153 通过靶向干扰RIZ1 的表达,增加脑膜瘤细胞 的放疗敏感性。     

MiRNA-381 抑制肾癌侵袭能力及其分子机制

目的：研究miRNA-381对肾癌侵袭的抑制作用,并探索其机制。方法：上调miRNA-381表达后,观察 miRNA-381对肾癌细胞侵袭的抑制作用。通过miR数据库starBase研究miRNA-381靶基因,再通过双荧光素酶实验验 证。分析miRNA-381及相应靶基因在细胞和组织水平的表达丰度。结果：转染miRNA-381后,其表达增加,跨膜细胞 数目显著下降,细胞侵袭力受抑制。生物信息学分析显示miRNA-381靶基因为CREB绑定蛋白(CREB binding protein, CBP)、β-catenin和淋巴增强因子-1(lymphoid enhancer binding factor-1,LEF-1);包含野生型靶基因3'-非编码区载体组的 荧光素酶活性明显降低。实时定量PCR显示肾癌细胞中miRNA-381低表达,在高转移潜能肾癌细胞株786-OHM中表达 更低;相反,在细胞、组织水平miRNA-381靶基因CBP,β-catenin与LEF-1表达均增高。结论：MiRNA-381可抑制肾癌 细胞的侵袭能力,其机制可能是通过CBP,β-catenin和LEF-1实现的。     

miRNA-186靶向Twist-1促胃癌侵袭、迁移的机制研究

目的检测miRNA-186在胃癌中的表达情况,观察miRNA-186表达改变对人胃癌细胞株侵袭、迁移能力的影响并分析可能的分子机制。方法RT-PCR法检测40例胃癌患者胃癌及配对的正常胃黏膜组织中miRNA-186的表达水平,同时检测miRNA-186在胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞中的表达水平。在胃癌细胞中分别转染miRNA-186模拟物（mimic）、抑制物（inhibitor）以上调、下调miRNA-186的表达,应用Transwell试验观察其对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响。应用生物信息学软件预测miRNA-186可能的靶基因,并经双荧光素酶试验及Westernblot试验验证靶基因,分析其促转移的分子机制。结果胃癌组织相较于正常胃黏膜组织、胃癌细胞株相较于正常胃黏膜上皮细胞株的miRNA-186表达水平均降低（均P＜0.05）。在胃癌细胞中,分别上调、下调miRNA-186的表达水平,能够抑制、促进胃癌细胞的侵袭、迁移能力。miRNA-186与Twist-1之间存在反向调控的关系,Twist-1是miRNA-186的靶基因。同时发现,下调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达上调,E-cadherin表达下调,而当上调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调。结论在胃癌组织中miRNA-186的表达水平降低,可能通过靶向调控Twist-1的表达,改变E-cadherin和N-cadherin的表达水平,导致胃癌细胞上皮间质转化,进而促进胃癌细胞的侵袭、迁移。     

miR-181b通过靶向调控N-myc下游调节基因2影响骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨miR-181b对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响。方法培养骨肉瘤细胞,实时荧光定量PCR检测miR-181b在骨肉 瘤细胞中的表达。抑制miR-181b的表达,Transwell检测对骨肉瘤迁移和侵袭的影响;生物信息学分析miR-181b靶基因并采用 荧光素酶报告基因分析miR-181b和靶基因在骨肉瘤中是否直接作用,同时采用Western Blotting检测靶基因在骨肉瘤细胞中的 表达以及Transwell检测靶基因对骨肉瘤迁移和侵袭的影响。结果实时荧光定量PCR结果表明miR-181b在骨肉瘤细胞中高 表达。抑制miR-181b 的表达能够抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭;生物信息学分析表明N-myc 下游调节基因2（NDRG2）是 miR-181b直接作用的靶基因,荧光素酶报告基因分析验证了该结果;Western blotting检测表明NDRG2在骨肉瘤中低表达,而 抑制miR-181b 能够显著提高NDRG2 的表达。抑制miR-181b 的表达的同时抑制靶基因NDRG2 的表达,能够逆转抑制 miR-181b的表达对骨肉瘤细胞的迁移和侵袭的影响,从而显著提高骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。结论miR-181b在骨肉瘤中过 表达,NDRG2为miR-181b直接调控靶基因,抑制miR-181b能够提高NDRG2的表达从而抑制骨肉瘤细胞的迁移侵袭。     

MiR-9在人神经胶质瘤中调节CBX7的表达

目的检测CBX7在人神经胶质瘤中的表达,研究人神经胶质瘤中异常表达的microRNA对CBX7的可能调控作用。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测2例正常脑组织、9例胶质瘤组织和3株胶质瘤细胞系中CBX7mRNA和蛋白水平的表达变化。结合Miranda和改良的机器学习法预测调控CBX7的miRNA。采用real-time PCR检测上述组织和细胞系中miR-9的表达,然后在细胞中过表达或敲低miR-9,结合荧光素酶实验和Western blot检测miR-9对CBX7表达的影响。采用MTT实验和流式细胞术分析miR-9敲低后对T98G细胞生长的影响。结果在胶质瘤组织和细胞系中,CBX7的mRNA水平改变不明显,而蛋白水平却明显下调。生物信息学预测CBX7可能受包括miR-9在内的多个miRNAs调控。与正常组织相比,miR-9在胶质瘤中表达明显增高。在293ET细胞中,过表达miR-9能抑制CBX7-3UTR报告基因活性。在T98G细胞中,敲低miR-9可增加CBX7-3UTR报告基因活性,对内源性CBX7的mRNA水平无明显影响,但使CBX7蛋白表达增加。敲低miR-9后,T98G存活细胞数增加,而且G1期细胞数比对照组明显减少。结论由于受到miR-9转录后水平的抑制,CBX7在人神经胶质瘤中表达下调甚至缺失。     

MiR-148a-3p通过靶向SRPK2抑制结肠癌细胞转移

目的:MicroRNA (miRNA/miR)参与结肠癌各种生物学过程。目前,miR-148a-3p在结肠癌中的作用还不完全清楚。本研究旨在探讨miR-148a-3p对结肠癌细胞转移及侵袭能力的影响及机制。方法:实时定量PCR （qRT-PCR）检测结肠癌细胞系中miR-148a-3p及SRPK2 mRNA的表达,Western blot检测SRPK2 蛋白的表达。使用miR-148a-3p mimic, miR-148a-3p inhibitor调节HCT-116及SW480细胞中miR-148a-3p的水平。通过划痕及transwell实验检测miR-148a-3p对结肠癌细胞迁移及侵袭能力的影响。生物信息学分析预测miR-148a-3p的靶点,荧光素酶报告实验验证。Western blot及qRT-PCR检测miR-148a-3p对结肠癌细胞上皮-间质转化及SRPK2表达的影响。结果:与正常结直肠粘膜细胞FHC相比,结肠癌细胞系中miR-148a-3p水平降低（P<0.05）。结肠癌细胞中miR-148a-3p过表达可以明显抑制结肠癌细胞转移及侵袭能力（P<0.05）。相反的,敲低miR-148a-3p结肠癌细胞转移及侵袭能力增强（P<0.05）。荧光素酶报告系统结果提示SRPK2是miR-148a-3p的直接作用靶点。过表达miR-148a-3p可以抑制SRPK2在结肠癌中的表达（P<0.05）,但是敲低miR-148a-3p时SRPK2表达明显增高（P<0.05）。结论:MiR-148a-3p可能通过靶向SRPK2抑制结肠癌细胞的转移及侵袭能力。MiR-148a-3p可能成为诊断和治疗结肠癌的靶点之一。     

MiR-744-5p通过靶向 CCND1 抑制肾透明细胞癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的 探讨miR-744-5p/CCND1轴在肾透明细胞癌(ccRCC)中的作用及机制。方法 qRT-PCR检测ccRCC组织和细胞系中miR-744-5p 的表达水平。实验分组：miR-744-5p 模拟物（miR-744-5p mimic）、阴性对照（NC mimic）、CCND1 模拟物（CCND1 mimic）及其阴性对照（NC mimic）。CCK-8实验、划痕愈合实验和transwell实验验证miR-744-5p对ccRCC细胞增殖、迁移及侵袭功能的影响。通过生物信息学预测miR-744-5p的下游靶分子,qRT-PCR和Western blot验证CCND1在786-O及OSRC2细胞中的表达水平,双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-744-5p和CCND1的关系,最后通过回复实验验证miR-744-5p/CCND1轴在ccRCC中的作用。结果 MiR-744-5p在ccRCC组织和细胞系中显著下调（P<0.05）,过表达miR-744-5p可以抑制ccRCC细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05）。生物信息学分析结果和双荧光素酶报告基因实验结果显示,CCND1是miR-744-5p的下游靶标。回复实验结果显示,上调CCND1可以部分逆转上调miR-744-5p对ccRCC细胞增殖、迁移以及侵袭的抑制作用（P<0.05）。结论 miR-744-5p通过靶向CCND1抑制ccRCC细胞的恶性表型,miR-744-5p/CCND1轴可能是ccRCC诊断和治疗的一个新的靶点。     

长链非编码RNA MIAT通过miR-124促进鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的：探究长链非编码RNA MIAT是否通过miR-124调节鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭。方法：采用荧光定量PCR检测鼻咽癌细胞中MIAT水平,通过检测荧光素酶活性评估MIAT和miR-124之间的相互作用。随后将si-MIAT与miR-124 inhibitor分别或同时转染鼻咽癌细胞,检测其对鼻咽癌细胞生长、迁移与侵袭的影响。采用Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白的表达情况。结果：与正常鼻咽上皮细胞NP-69相比,鼻咽癌细胞HONE-1中MIAT的表达水平显著提高。在线软件与双荧光素酶活性实验分析证实MIAT与miR-124之间存在相互作用。进一步实验表明,si-MIAT可上调miR-124水平,从而抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭。Western blot分析显示si-MIAT通过miR-124抑制Wnt/β-catenin信号通路在鼻咽癌细胞中发挥促癌作用。结论：MIAT通过miR-124调节Wnt/β-catenin信号通路进而影响鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭。MIAT靶向调控miR-124,可作为鼻咽癌诊断与治疗的一个潜在靶点。     

miR-202通过降低肝癌细胞ROCK1表达抑制其迁移和侵袭

目的：研究微小RNA-202（miR-202）对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：通过实时定量PCR检测Hep3B、Huh7及HCCLM3人肝癌细胞和LO2人正常肝细胞中miR-202的表达水平。以miR-202表达水平最低的HCCLM3细胞为转染对象,转染miR-202模拟物或空白对照miRNA,以miR-202表达水平最高的Hep3B细胞为转染对象,转染miR-202抑制物或阴性对照miRNA,并利用实时定量PCR验证转染效率。采用Transwell迁移和侵袭实验检测过表达和敲低miR-202对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。生物信息学网站检索并应用荧光素酶报告基因实验验证miR-202的靶基因。实时定量PCR和Western blot检测miR-202靶基因的表达水平。结果：与正常肝细胞LO2相比,miR-202在肝癌细胞的表达水平显著降低;HCCLM3细胞转染miR-202模拟物后,细胞miR-202的表达水平显著增加;过表达miR-202后,HCCLM3细胞的迁移和侵袭能力显著降低;Hep3B细胞转染miR-202抑制物后,细胞miR-202的表达水平显著降低;敲低miR-202后,Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显著增强;生物信息学检索及荧光素酶报告基因证明ROCK1基因为miR-202的靶基因。过表达miR-202可明显降低肝癌细胞中ROCK1基因的表达,而敲低miR-202可明显增加肝癌细胞中ROCK1基因的表达。结论：miR-202在肝癌细胞中低表达,miR-202通过抑制ROCK1的表达抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。     

miR-145抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞增殖活性及其与CDK6的靶向关系

目的 在口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞中验证miR-145靶向CDK6对其细胞增殖活性的影响. 方法 构建pcD-NATM6.2-GW-pre-miR-145重组表达质粒并转染入Tca-8113细胞,以荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测转染后癌细胞miR-145的表达水平.MTT法评价miR-145对Tca-8113细胞增殖活性的影响,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-145对候选靶基因CDK6的调控作用,同时采用Western blot法检测miR-145对CDK6蛋白表达水平的影响. 结果 成功构建miR-145真核表达载体,qRT-PCR显示miR-145组中miR-145的表达显著高于内源性表达量（P＜0.001）,说明miR-145在Tca-8113细胞中具有较高的转染效率.MTT法提示miR-145的过表达能够显著抑制Tca-8113细胞的增殖（P＜0.01）,同时双荧光素酶报告基因分析表明,共同转入miR-145与CDK6野生型（CDK6-WT）会显著抑制Tca-8113细胞中的荧光酶表达（P=0.002）;Western blot进一步证实了miR-145的过表达能够抑制内源性CDK6蛋白的表达. 结论 miR-145可能通过直接靶向CDK6来抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞的增殖活性.