微小RNA-133b对心肌纤维化的影响

目的 研究微小RNA-133b(miR-133b)对心肌纤维化的影响。方法 选取人心肌成纤维细胞(CFs),采用CCK8检测过表达及敲低miR-133b时细胞增殖情况,qRT-PCR及Western blot检测结缔组织生长因子(CTGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)及Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)的表达水平;生物学软件预测miR-133b的靶基因,双荧光素酶报告实验证实miR-133b与靶基因的直接调控作用。 结果 qRT-PCR检测结果显示,转染miR-133b mimic后miR-133b的表达水平明显高于阴性对照组(t=26.219,P=0.000),转染miR-133b inhibitor后miR-133b的表达水平明显低于阴性对照组(t=6.738,P=0.003)。转染CFs 21、45、69、93和117 h后,与阴性对照组相比,miR-133b mimic组CFs增殖能力明显降低,而miR-133b inhibitor组CFs增殖水平明显上升(P均<0.05)。与阴性对照组相比,过表达miR-133b后,CTGF(t=9.213,P=0.001;t=8.195,P=0.001)、α-SMA(t=6.511,P=0.003;t=4.434,P=0.011)、collagenⅠ(t=3.172,P=0.034;t=4.053,P=0.015)及collagen Ⅲ(t=6.404,P=0.003;t=5.319,P=0.006)的mRNA和蛋白表达水平均明显下调;敲低miR-133b后,CTGF(t=9.439,P=0.001;t=14.100,P=0.000)、α-SMA(t=4.519,P=0.011;t=4.377,P=0.012)、collagenⅠ(t=5.966,P=0.004;t=5.514,P=0.005)及collagen Ⅲ(t=4.622,P=0.010;t=4.996,P=0.008)的mRNA和蛋白表达水平均明显上升。共转染miR-133b mimic和WT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性明显低于共转染mimic control和WT 3’UTR表达载体的细胞(t=5.654,P=0.005),共转染miR-133b mimic和MUT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性与共转染mimic control和MUT 3’UTR表达载体的细胞差异无统计学意义(t=0.380,P=0.724)。结论 miR-133b可能是通过靶向抑制CTGF来影响CFs的活化增殖,从而改善心肌纤维化。     

miR-146a经TLR4/MyD88途径加速巨噬细胞迁移所致动脉硬化的作用机制

目的 探讨微小RNA-146a(miR-146a)经Toll样受体4(TLR4)/髓系分化因子88蛋白(MyD88)途径调控巨噬细胞迁移所致动脉硬化的具体机制。 方法 RAW264.7巨噬细胞分为空白组、ox-LDL组、miR-146a mimic组、miR-146a inhibitor组、shRNA-MyD88组、shRNA-NC组、shRNA-MyD88+miR-146a mimic组、shRNA-MyD88+miR-146a inhibitor组,除空白组,其他各组均用50 mg/L ox-LDL进行干预;采用Western blotting法检测TLR4、MyD88、核因子κB(NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达水平。采用qPCR法检测miR-146a、TLR4、MyD88、NF-κB、IL-6基因表达水平。采用Transwell法检测巨噬细胞迁移能力。 结果 (1)ox-LDL组细胞内TLR4、IL-6蛋白含量及巨噬细胞迁移率均高于空白组(P均<0.01),miR-146a低于空白组(P<0.01);(2)miR-146a mimic组细胞TLR4 mRNA相对表达量及蛋白含量、巨噬细胞迁移率低于ox-LDL组,miR-146a mRNA相对表达量高于ox-LDL组(P均<0.01);miR-146a inhibitor组细胞TLR4 mRNA相对表达量及蛋白含量、巨噬细胞迁移率高于ox-LDL组,miR-146a mRNA相对表达量低于ox-LDL组(P均<0.01);(3)shRNA-MyD88组MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量、巨噬细胞迁移率低于ox-LDL组(P<0.01),miR-146a、TLR4表达无明显差异(P>0.05);shRNA-MyD88+miR-146a mimic组miR-146a表达高于shRNA-MyD88组,TLR4蛋白含量低于shRNA-MyD88组(P<0.01),MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量表达、巨噬细胞迁移率与shRNA-MyD88组无明显差异(P>0.05);shRNA-MyD88+miR-146a inhibitor组miR-146a表达低于shRNA-MyD88组,TLR4蛋白含量表达高于shRNA-MyD88组(P<0.01),MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量表达、巨噬细胞迁移率与shRNA-MyD88组无明显差异(P>0.05)。 结论 miR-146a是动脉粥样硬化的保护性因子,通过拮抗TLR4/MyD88途径调控炎症因子分泌进而抑制巨噬细胞迁移所致动脉粥样硬化进程,为动脉粥样硬化的防治提供新的治疗靶点。     

LncRNA MALAT1通过miR-34c/SATB2轴对脂肪间充质干细胞成骨分化的促进作用

目的：探讨长非编码RNA肺癌转移相关转录本1（LncRNA MALAT1）通过微小RNA（miR）-34c/特异AT序列结合蛋白2（SATB2）轴对脂肪来源的间充质干细胞（ADSCs）成骨分化的影响,并阐明其作用机制。方法：人ADSCs转染Lenti-NC、Lenti-MALAT1、sh-NC、sh-MALAT1、miR-NC和miR-34c,RT-PCR法检测ADSCs中LncRNA MALAT1、miR-34c和SATB2 mRNA表达水平;miRcode和TargetScan 7.1网站预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-34c与LncRNA MALAT1、miR-34c与SATB2之间的靶向结合作用;Western blotting法检测ADSCs中成骨标志物Runt相关转录因子2（Runx2）、骨桥蛋白（OPN）和骨钙蛋白（OCN）表达水平;碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红S（ARS）染色检测ADSCs中ALP和ARS水平及钙盐沉积。结果：与第0天比较,ADSCs成骨诱导第3、7、14和21天后,细胞中LncRNA MALAT1、SATB2、Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,miR-34c表达水平明显降低（P<0.05）。与Lenti-NC组和sh-NC组比较,Lenti-MALAT1组ADSCs中LncRNA MALAT1表达水平,Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平,ALP和ARS水平明显升高（P<0.01）,sh-MALAT1组上述指标明显降低（P<0.01）。与miR-NC+Lenti-NC组比较,miR-34c+Lenti-NC组ADSCs中Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,ALP和ARS水平明显降低（P<0.01）,miR-34c+Lenti-MALAT1组ADSCs中上述各项指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。与Lenti-NC+miR-NC组比较,Lenti-SATB2+miR-NC组ADSCs中Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平及ALP和ARS水平明显升高（P<0.01）,Lenti-SATB2+miR-34c组上述各项指标差异无统计学意义（P>0.05）。结论：LncRNA MALAT1通过miRNA-34c/SATB2轴促进ADSCs的成骨分化。     

星状神经节阻滞对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2，Bax蛋白表达的影响

目的: 研究自发性高血压大鼠(SHR) 心肌细胞凋亡与Bcl-1/Bax蛋白表达的关系,探讨星状神经节阻滞对SHR心肌细胞凋亡的保护作用。方法: 将32只10周龄雄性SHR随机分为4组(n=8)：左侧星状神经节阻滞组(LS组)、右侧星状节阻滞组(RS组)、药物卡托普利组(D组)、手术对照组(C组)。用ALC-NIBP无创血压测量系统测定大鼠血压,第10周实验结束后用3%戊巴比妥钠腹腔注射(45 mg/kg)麻醉SHR,取出心脏用TUNEL法测定左室心肌细胞凋亡指数,免疫组织化学检测心肌Bcl-2和Bax表达的含量。结果: 与C组和LS组比较,RS组SHR凋亡指数明显降低(P<0.05); 心肌Bcl-2表达明显增强(P<0.05), Bax表达明显减弱(P<0.05), Bcl-2/Bax比值增高(P<0.05)。结论: Bcl-2抗凋亡及Bax促凋亡蛋白表达参与SHR心肌细胞凋亡; 右侧星状神经节阻滞能够影响凋亡相关基因蛋白的表达,降低心肌细胞凋亡指数,减轻左心室肥厚。     

miR-125b对大鼠心肌梗死后心室重构的调控作用

目的：探讨微小RNA-125b（miR-125b）通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路对大鼠心肌梗死后心室重构的影响,阐明其作用机制。方法：75只大鼠随机分为假手术组、心肌梗死组和miR-125b抑制物组,每组25只。心肌梗死组和miR-125b抑制物组大鼠建立急性心肌梗死模型,miR-125b抑制物组大鼠经尾静脉注射miR-125b抑制物。4周后处死大鼠,称大鼠体质量,取心脏,剪去大血管和左右心耳,冲洗干净,电子天平秤称心脏质量,计算心脏质量/体质量（HW/BW）、（左心室+室间隔）质量/体质量[（LV+S）/BW]和（左心室+室间隔）质量/心脏质量[（LV+S）/HW],HE染色观察大鼠心肌组织形态表现,Masson染色观察大鼠心肌组织纤维化情况并计算心肌胶原容积积分,免疫荧光染色观察大鼠心肌组织Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平,Western blotting法测定大鼠心肌梗死周边区心钠肽（ANP）、脑钠肽（BNP）、PI3K、Akt和磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达水平。结果：HE染色,假手术组大鼠心肌细胞排列整齐;心肌梗死组大鼠心肌肥大,排列紊乱;miR-125b抑制物组大鼠心肌细胞排列较为整齐。与假手术组比较,心肌梗死组和miR-125b抑制物组大鼠HW/BW、（LV+S）/BW和（LV+S）/HW明显升高（P<0.05）,胶原容积积分升高（P<0.05）,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平升高（P<0.05）,ANP和BNP蛋白表达水平升高（P<0.05）,PI3K和p-Akt蛋白表达水平降低（P<0.05）;与心肌梗死组比较,miR-125b抑制物组大鼠HW/BW、（LV+S）/BW和（LV+S）/HW降低（P<0.05）,胶原容积积分降低（P<0.05）,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平降低（P<0.05）,ANP和BNP蛋白表达水平降低（P<0.05）,PI3K和p-Akt蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：抑制miR-125b可通过抑制PI3K/Akt信号通路进而抑制大鼠心肌梗死后心室重构,在逆转心肌梗死后心室重构中发挥重要作用。     

miR-26a靶向HMGA1基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响

目的：探讨miR-26a靶向高迁移率族蛋白1（HMGA1）基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响,阐明HMGA1基因是否为miR-26a的靶基因。方法：将miR-NC （对照）、miR-26a mimics （模拟物）和miR-26a inhibitor （抑制物）转染人结肠癌SW480细胞作为miR-NC组、miR-26a mimics组和miR-26a inhibitor组。RT-PCR和Western blotting法分别检测各组SW480细胞中HMGA1 mRNA和蛋白表达水平。采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测各组SW480细胞中双荧光素酶活性,以此确定HMGA1是否为miR-26a的靶基因。采用CCK8实验检测各组细胞增殖活力,Transwell小室法检测各组细胞侵袭数和迁移数。结果：HMGA1基因是miR-26a的靶基因。与miR-NC组比较,转染24、48和72 h时miR-26a mimics组SW480细胞增殖活力明显降低（P<0.01）,而miR-26a inhibitor组细胞增殖活力明显升高（P<0.01）。与miR-NC组比较,各时间点miR-26a mimics组和miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）,而miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-26a mimics组比较,各时间点miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组比较,各时间点miR-26a+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）。结论：HMGA1是miR-26a的靶基因。上调miR-26a表达可抑制人结肠癌SW480细胞增殖,下调miR-26a表达可促进人结肠癌SW480细胞增殖。     

高糖对H9C2心肌细胞系和乳大鼠心室肌细胞钙库操纵性钙内流及相关蛋白的影响

目的 探究高糖环境对大鼠胚胎心肌细胞系（H9C2）和乳大鼠心室肌细胞（neonatal rat ventricular myocytes,NRVMs）钙库操纵性钙内流（store operated calcium entry,SOCE）功能的影响,对基质相互作用分子1（stromal interaction molecule 1,STIM1）蛋白表达及其激活结构的作用,完善SOCE在糖尿病心肌病（diabetic cardiomyopathy,DCM）中的潜在致病机制。方法 将H9C2和NRVMs细胞分为2组,对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）和高糖组（25 mmol/L葡萄糖）,分别培养48 h后用激光共聚焦显微镜实时观察各组心肌细胞在毒胡萝卜素（thapsigargin,TG）刺激后Ca²⁺荧光强度值的变化;采用Western blotting技术检测各组细胞STIM1和钙释放激活钙通道调节分子1（calcium release-activated calcium channel modulator 1,Orai1）蛋白表达的变化;借助化学交联技术和免疫荧光法检测NRVMs的STIM1蛋白的聚集变化;免疫共沉淀技术观察NRVMs心肌细胞内源性STIM1和Orai1蛋白的直接相互作用。结果 与对照组相比,高糖组H9C2和NRVMs心肌细胞钙内流（Ca²⁺ influx）显著增加（P<0.05）;高糖组H9C2和NRVMs心肌细胞STIM1以及Orai1蛋白表达上调（P<0.01）;钙库排空后,高糖组NRVMs心肌细胞STIM1蛋白聚集体显著增多（P<0.01）。结论 体外高糖能诱导大鼠胚胎心肌细胞系H9C2及乳大鼠原代培养心室肌细胞NRVMs的STIM1和Orai1蛋白表达上调,促进STIM1蛋白激活形成聚集体和SOCE激活,Ca²⁺内流增多。该作用提示高糖增加的心肌细胞SOCE可能与糖尿病心肌肥大有关。     

托伐普坦联合达格列净对心衰大鼠心肌纤维化的影响

目的 探讨托伐普坦(TLV)和达格列净(DAPA)对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。 方法 将雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、TLV-L组、TLV-H组、DAPA组和TLV-H+DAPA组。除空白对照组外,其他各组大鼠均给予腹腔注射阿霉素3 mg/kg,1次/周,6周造模,心脏彩超检查射血分数<60%提示心衰大鼠造模成功,随机分组后药物干预30 d。采用苏木精-伊红染色法观察大鼠心脏组织形态学变化,采用Masson染色法检测心肌纤维化程度,并计算胶原容积分数(CVF);采用TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡指数;采用Western blotting法检测各组大鼠左心室心肌组织中TGF-β1、磷酸化Smad2(p-Smad2)及磷酸化Smad3(p-Smad3)的蛋白水平。 结果 与空白对照组相比,模型对照组心肌纤维排列紊乱,较多炎性细胞浸润,心肌纤维化显著,细胞凋亡增加,TGF-β1蛋白表达显著升高,p-Smad2和p-Smad3蛋白水平下降(P<0.05);与模型对照组相比,TLV组、DAPA组及TLV-H+DAPA组心肌纤维化程度明显降低,心肌凋亡指数明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),TGF-β1蛋白表达明显降低;p-Smad2和p-Smad3蛋白水平明显升高(P<0.05)。 结论 TLV与DAPA单用及联合应用均可通过抑制TGF-β1/Smad2/3信号通路发挥抑制心肌纤维化的作用,且联合用药的效果优于单独用药。     

培哚普利对慢性心力衰竭患者血浆miR-423-5p的调控及对心功能的影响

目的 探讨不同剂量培哚普利对慢性心力衰竭患者血浆miR-423-5p表达的影响及与心功能之间的相关性。 方法 选取慢性心力衰竭患者75例,随机分为常规组(常规药物治疗)、小剂量组(常规药物+4 mg/d培哚普利)和大剂量组(常规药物+8 mg/d培哚普利),每组25例。选取同期健康查体心功能正常人群25例(正常对照组)。经药物治疗4周,检测各组治疗前后左室舒张末内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)、氨基末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)及血浆miR-423-5p的表达水平。 结果 基线水平常规组、小剂量组、大剂量组LVEF的表达均显著低于正常对照组(P<0.05),LVEDD、NT-proBNP及血浆miR-423-5p的表达均显著高于正常对照组(P<0.05);治疗4周后常规组、小剂量组、大剂量组LVEF的表达均较治疗前显著升高(P<0.05),LVEDD、NT-proBNP、血浆miR-423-5p的表达均较治疗前显著降低(P<0.05);治疗后小剂量组和大剂量组LVEF的表达均显著高于常规组(P<0.05),LVEDD、NT-proBNP、血浆miR-423-5p的表达均显著低于常规组(P<0.05);同时,与小剂量组比较,大剂量组LVEF、LVEDD、NT-proBNP、血浆miR-423-5p的表达水平变化呈显著差异(P<0.05)。 结论 培哚普利可以降低慢性心力衰竭患者血浆miR-423-5p的表达水平,进而改善左室功能,其改善程度与药物剂量呈正相关。     

miR-203靶向Survivin抑制卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的 探讨miR-203靶向抑制Survivin对卵巢癌SKOV3及OVCAR3细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法 构建过表达miR-203、Survivin及空白对照组的慢病毒载体,转染卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞,嘌呤霉素筛选后构建空白对照组、过表达miR-203组、过表达Survivin组及过表达miR-203联合Survivin组卵巢癌细胞系。Western blotting方法测定各组卵巢癌细胞中Survivin及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达;MTT和平板克隆实验检测卵巢癌细胞增殖能力的改变;Transwell实验检测对细胞迁移和侵袭能力的影响。 结果 (1) 过表达miR-203抑制Survivin的表达及EMT(P<0.05);(2) MTT、平板克隆实验及transwell实验显示,与空白对照组相比,过表达miR-203组能够抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);而过表达Survivin逆转了miR-203对卵巢癌的抑制作用(P<0.05)。 结论 miR-203通过靶向Survivin抑制EMT从而抑制卵巢癌的增殖、迁移及侵袭,miR-203/Survivin/EMT轴有望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

miR-221/miR-222在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

目的：探讨miR-221/miR-222在乳腺浸润性导管癌中的表达及与临床病理特征的相关性。方法：应用茎环Real-time RT-PCR方法检测36例乳腺浸润性导管癌及癌旁非肿瘤乳腺组织中成簇分布的miR-221和miR-222表达,分析miR-221和miR-222表达与乳腺癌常用的临床病理指标的关系。结果：乳腺癌组织miR-221和miR-222表达明显高于其对应的正常乳腺组织（P值均小于0.05）,但miR-221和miR-222两者比值差异无显著性（P=0.176）。miR-221和miR-222的表达和雌激素受体状态及Her-2表达有关。低雌激素受体表达和高Her-2表达的乳腺癌组织的miR-221和miR-222表达均明显高于高雌激素受体和低Her-2表达的标本（P值均小于0.05）。miR-221和miR-222的表达与月经状况、肿块大小、孕激素受体状态、淋巴结转移及TMN分期无关。结论：miR-221/miR-222不但是乳腺癌重要的标记,而且可能成为内分泌治疗抵抗的预兆性标记物和靶向治疗潜在作用靶点。     

miR-221和miR-222在急性髓细胞白血病初发患者中的表达研究

目的探讨miR-221和miR-222在急性髓细胞白血病(AML)骨髓有核细胞中的表达及意义。方法选择16例AML初发患者和44例非白血病患者骨髓标本,分离有核细胞,抽提总RNA,以U6为内参,采用茎环Realtime RT-PCR法检测并比较AML和非白血病患者骨髓有核细胞中miR-221和miR-222的表达,同时比较这两种miRNAs在AML中M3、M4和M5三种亚型间的表达水平。结果 miR-221和miR-222在AML初诊患者骨髓中相对表达量(N=2-ΔCt)明显高于非白血病患者组(P<0.05);这两种miRNAs在M5型AML患者表达最高,但在AML三种亚型间表达水平未见显著的统计学意义(P>0.05)。结论 miR-221和miR-222有可能在为AML的诊断、治疗和预后上,提供一个新的标准和靶点指标。     

实时荧光定量RT-PCR检测肝癌组织中miR-122a及miR-224的表达

目的 运用实时荧光定量RT-PCR方法分析miR-122与miR-224两种miRNAs在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达,探讨以miRNAs为靶点在早期肝癌中的临床诊断意义.方法 采用基于2(-△△ACT)的实时荧光定量RT-PCR法对35例肝癌组织及癌旁组织的miR-122a及miR-224进行了定量分析,结果经由Noahernblot验证.结果 与正常组织相比,在所有的被检肝癌组织中,均发现了miR-122a有不同程度的表达下调(P<0.01),而上述肝癌组织中的miR-224的定量结果显示该miRNA表达显著增加(P<0.001).结论 HCC组织中存在上述两种miRNAs表达水平的改变.实时荧光定量RT-PCR法为早期、准确的在临床上检测肝组织癌变提供了新的思路.     

miR-21、miR-126、miR-143和miR-373在正常宫颈组织、宫颈癌组织及Hela细胞中的表达差异

目的研究miR-21、miR-126、miR-143和miR-373在正常宫颈组织、宫颈癌组织及Hela细胞中的表达差异,探讨microRNAs(miRNAs)对宫颈癌发生的调控作用。方法荧光实时定量检测20例良性肿瘤患者的正常宫颈组织,20例宫颈癌组织及Hela细胞中miR-21、miR-126、miR-143和miR-373的表达。结果 miR-21在宫颈癌组织及Hela细胞系中高表达,在正常宫颈标本中低表达,在宫颈癌组织中相对定量为正常宫颈组织的11.3196倍(P<0.05);miR-143、miR-373在宫颈癌组织及Hela细胞中均低表达,在正常宫颈标本中高表达,miR-143、miR-373在宫颈癌组织中相对定量分别为正常宫颈组织的0.1553倍和0.4907倍(P<0.05);miR-126的表达无明显变化。结论 miRNAs与宫颈癌的发生和调控密切相关。在宫颈癌组织和Hela细胞中,miR-21表达上调,可能在宫颈癌的发生过程中发挥癌基因的作用;miR-143、miR-373表达下调可能发挥抑癌基因的作用;miR-126表达无差异,与宫颈癌无明显关系。     

类风湿关节炎患者外周血miR-146a及miR-16的表达及与病情活动的相关性研究

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中miR-146a及miR-16的表达及与RA病情活动的相关性。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应检测RA患者活动组24例、缓解组16例及健康对照16例PBMCs-miR-146a、miR-16的表达水平,并且与RA患者临床指标进行相关性分析。结果 RA患者组miR-146a、miR-16的表达高于健康对照组(P<0.05);在RA活动组与缓解组的比较中发现活动组miR-146a、miR-16表达水平高于缓解组(P<0.05)。RA患者组miR-146a、miR-16的表达与ESR、CRP及DAS28评分之间呈正相关(P均<0.01),与RF无相关性(P>0.05)。结论 RA患者外周血miR-146a和miR-16表达上调,其表达水平与RA病情活动相关,提示miR-146a和miR-16的检测可作为RA病情活动的判断指标。     

非编码小RNA在肝癌发生中的作用及机制研究进展

MicroRNA(miRNA)是一类约22个核苷酸组成的小分子非编码RNA,主要在转录后水平通过促进靶基因mRNA的降解或抑制其翻译过程而发挥负调控作用.miRNA不但参与生命活动的一些基本过程,如细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡和细胞代谢等,而且与人类疾病,尤其与恶性肿瘤的发生发展密切相关,可作为一类新的癌基因及抑癌基因,在癌症的发生发展中起重要作用.近年,我们首次在肝癌染色体变异区内发现新的肝癌转移促进因子miR-151并阐明了其分子作用机制,即RhoGDIA是miR-151下游靶基因,介导了miR-151的促肝癌转移功能;miR-151与其宿主基因FAK协同作用,活化Rac,cdc42及Rho GTPase,进而促进肝癌细胞的迁移、侵袭与转移,为阻断肝癌转移提供了新的治疗靶点.研究发现多个用于肝癌诊断及转移、复发、预后预测的miRNA分子标志物,建立了肝癌诊断、转移、复发及预后的miRNA预测模型;鉴定miR-125b为肝癌侯选抑癌基因,主要通过抑制癌基因LIN28B发挥抑癌作用;发现miR-30d为肝癌转移促进基因,转移抑制基因GNAI2为其功能靶基因;另外,发现miRNA不仅与mRNA的3’非翻译区结合,而且能与基因家族的蛋白编码区结合从而调控基因表达,为研究miRNA在肿瘤中的调控机制提供了新的思路;采用实验方法论证了单个基因能同时被多个miRNA所调控,为建立miRNA与mRNA复杂的相互作用调控网络提供了良好的实验基础.     

miR-21在白血病发病过程中的作用研究

目的 本实验旨在研究miR-21在白血病细胞中表达情况,探讨miR-21基因与白血病发病的关系.方法 提取组织中的小于200 bp的RNA,用poly(A)聚合酶在其3′末端加尾,再用5′带40 nt延伸序列的单碱基锚定Olig-dT引物进行反转录,然后用特异引物进行real-time PCR扩增,从而检测部分miRNAs在白血病细胞株K562中的表达,并与正常人骨髓表达情况相对比.结果 通过real-time PCR 分析,癌基因miR-21在K562细胞中的表达量约为(1.73±0.24)×105 个拷贝,明显高于正常人骨髓组织中miR-21的表达(P＜0.01).结论 本研究表明miR-21在K562细胞中的表达量增高,可能在白血病的发生过程中起重要作用.     

初发和复发膀胱尿路上皮癌中miR-21和miR-205的表达

目的检测microRNA-21(miR-21)与microRNA-205(miR-205)在初、复发膀胱尿路上皮癌中的表达情况,探讨microRNAs(miRNAs)在膀胱尿路上皮癌中的表达意义及是否与肌层浸润有关。方法采用基于2-△△CT的实时定量PCR(Real-time PCR)方法检测40例初、复发癌组织miR-21及miR-205的表达情况。结果与初发癌相比,复发癌miR-21表达上调(P<0.05),miR-205表达下调(P<0.05);与非肌层浸润性癌相比,肌层浸润性癌miR-21表达上调(P<0.05),miR-205表达下调(P<0.05);肌层浸润性癌miR-21与miR-205表达量的比值5倍于其在非肌层浸润性癌中表达量的比值。结论 miR-21高表达、miR-205低表达可能参与膀胱尿路上皮癌复发并与肌层浸润有关。     

miR-223在胰腺癌组织中的表达及意义

目的分析胰腺癌及其配对癌旁组织中miR-223的表达差异,评价miR-223对胰腺癌潜在的诊断价值。方法收集笔者医院28例胰腺癌患者手术标本的癌组织及配对的癌旁组织,3例正常胰腺组织作为对照。采用TaqMan Real-timePCR方法,以U6为内参,检测miR-223在胰腺癌及配对癌旁组织中的相对表达量,并分析其与胰腺癌临床病理参数的关系。结果胰腺癌组织中miR-223的表达量显著高于癌旁组织(P=0.008),胰腺癌中miR-223的高表达和肿瘤临床特征无关(P>0.05)。结论 miR-223可能在胰腺癌的发生发展中发挥一定作用,并可能成为新的胰腺癌诊断标志物。     

Clinical impact of circulating miR-26a,miR-191, and miR-208b in plasma of patients with acute myocardial infarction

Background

Aberrant expression of several types of miRNAs has been reported in acute myocardial infarction (AMI). The objective of our study was to compare miRNA expression in AMI patients and normal healthy people and determine whether miR-26a, miR-191, and miR-208b could be measured in plasma as indicators for AMI.

Methods

Detection of AMI patients and normal persons by using miRNA microarray chip analysis and miR-26a, miR-191, and miR-208b was screened out. Eighty-seven AMI patients and eighty-seven homogeneous healthy individuals were recruited. Total mRNA including miRNA was isolated and miR-26a, miR-191, and miR-208b expression were determined by qRT-PCR. Receiver operating characteristic curve analysis was performed to evaluate the instructive power of miR-26a, miR-191, and miR-208b for AMI. Dual-luciferase reporter assays indicated p21 is a direct target of miR-208b.

Results

miR-26a and miR-191 were low expressed in AMI compared with normal healthy people, but miR-208b was expressed at a high level in AMI. miR-26a showed an area under the curve (AUC) of 0.745, with a sensitivity of 73.6 % and a specificity of 72.4 %.The AUC for miR-191 was 0.669, with a sensitivity of 62.1 % and a specificity of 69.0 %.The AUC for miR-208b was 0.674, with a sensitivity of 59.8 % and a specificity of 73.6 %.

Conclusions

miR-208b was significantly increased in the AMI compared with healthy people, while miR-26a and miR-191 were decreased. miR-26a, miR-191, and miR-208b were potential indices of AMI, and miR-208b was more effective in patients with non-ST-elevation myocardial infarction.