番茄红素抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的实验研究

目的探讨番茄红素对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法用CCK-8法检测不同浓度番茄红素作用于U251细胞24h、48h及72h后细胞的存活率;应用流式细胞术（FCM）检测细胞周期。结果番茄红素能抑制人脑胶质瘤U251细胞的生长,呈量-效及时-效关系（P〈0．01）;FCM检测表明,细胞主要被阻滞在G0／G1期;番茄红素诱导细胞凋亡率较对照组明显增加（P〈0．01）,具有浓度依赖性。结论番茄红素能抑制U251细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

白藜芦醇对人脑胶质瘤U87细胞自噬的影响

目的 研究白藜芦醇对脑胶质瘤U87细胞自噬的诱导作用及其可能的作用机制.方法 分别用不同浓度的白藜芦醇处理脑胶质瘤U87细胞12、24、48 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测白藜芦醇对U87细胞生长的抑制作用;电子显微镜观察药物处理后U87细胞自噬空泡的出现;逆转录PCR及Western blot分别检测白藜芦醇作用后自噬相关基因微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC-3)、抗Bax交互作用因子(Bif-1) mRNA及蛋白表达的变化.结果 随着药物浓度的增加及作用时间的延长,白藜芦醇对U87细胞的生长抑制作用逐渐增大.电镜检测发现未使用白藜芦醇处理的细胞未出现自噬空泡,而白藜芦醇处理过的细胞出现明显的自噬空泡.白藜芦醇能剂量依赖性地增强自噬相关基因LC-3、Bif-1 mRNA及蛋白水平的表达.结论 白藜芦醇可以通过诱导细胞自噬来抑制U87细胞增殖,LC-3、Bib1基因表达上调是其诱导自噬的可能机制.     

亲细胞非均质分子脂质抑制人脑胶质瘤U87细胞株增殖的实验研究

目的研究亲细胞非均质分子脂质（cytotropic heterogeneous molecular lipid,CHML）对人脑胶质瘤U87细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法不同浓度CHML不同作用时间处理U87细胞后,采用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western印迹法检测细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达。结果 CHML作用于U87细胞后,细胞生长受到明显抑制。流式细胞术检测显示,CHML使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期细胞比例降低。Annexin V-PI法发现,用药24 h后,U87细胞凋亡比例随着CHM L的浓度升高而上升。Western印迹法检测显示,CHML引起U87细胞的周期相关蛋白Cyclin D1和CDK6表达降低,p21表达升高,凋亡相关蛋白Bax和Caspase 3表达增高,Bcl-2表达下降。结论 CHML可能通过诱导细胞凋亡和G1期细胞周期阻滞抑制U87细胞的增殖。     

ADAMDEC1对人脑胶质瘤U87细胞生物学行为的影响

目的 研究解聚素金属蛋白酶家族癸蛋白1(ADAM-DEC1)对人脑胶质瘤U87细胞增殖、黏附、侵袭、迁移和凋亡的影响及可能机制.方法 实验组(ADAMDECl-RNAi)人脑胶质瘤U87细胞用携带特异性siRNA的慢病毒感染来下调ADAMDEC1的表达,对照组(CONTROL-RNAi)用阴性对照慢病毒感染,通过观察GFP荧光的表达情况来判定转染效率,采用Real-time PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白质水平检测稳定转染的U87细胞ADAMDEC1基因的表达情况,CCK-8法检测下调ADAMDEC1表达后细胞增殖及黏附能力的变化,Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力的变化,流式细胞技术检测细胞凋亡的变化.结果 与CONTROL-RNAi相比,ADAMDECl-RNAi mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.01) ;CCK-8法检测结果显示下调ADAM-DEC1表达能够显著抑制U87细胞的增殖(P< 0.05)和黏附能力(P<0. 01) ;Transwell检测结果显示下调ADAMDEC1表达能够显著抑制U87细胞的侵袭和迁移能力(P<0. 01);流式细胞术检测结果显示下调ADAMDEC1表达能够促进 U87细胞的凋亡(P<0.01).结论 在体外细胞培养试验中,下调ADAMDEC1表达能够显著抑制U87细胞的增殖、黏附、侵袭、迁移能力,促进U87细胞的凋亡.     

藏红花素诱导人脑胶质瘤细胞U87凋亡的作用机制研究

目的探讨藏红花素促进人脑胶质瘤细胞U87凋亡的作用及其机制。方法培养U87细胞系,随机分为二甲基亚砜对照组（对照组）和藏红花素治疗组（藏红花素组）。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同剂量藏红花素（低浓度组、中浓度组、高浓度组）对人胶质瘤细胞U87增殖的影响;流式细胞仪观察细胞凋亡情况。Western—blot检测ERK1／2,p-ERK1／2的表达变化。结果与对照组比较,藏红花素组U87细胞的生存率明显降低;随着藏红花素浓度增加,U87细胞的凋亡率显著上升（18．92％→51．68％→70．12％）,组间差异有统计学意义（x2=14．102,P〈0．05）;Western—blot结果显示,与对照组比较,藏红花素组的p-ERK1／2表达降低,而高浓度藏红花素组p-ERK1／2表达降低最显著,不同组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论藏红花素可能呈剂量依赖性的通过抑制。p-ERK1/2但讲TIR7缃晌桶广学垤雷尊的精肿瘤作用     

细胞外ATP对U87胶质瘤细胞生长和侵袭的作用

目的 观察细胞外三磷酸腺苷(adenosine Triphosphate,ATP)对体外培养的U87人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响.方法 采用MTT法检测不同浓度细胞外ATP对U87胶质瘤细胞增殖的影响;以相同条件下不加ATP作为对照组,以加入100 μmol/L ATP作为处理组,采用Transwell细胞侵袭实验检测100 μmoL/L细胞外ATP对U87胶质瘤细胞侵袭能力的影响;用时间显微镜动态观察100 μmoL/L的ATP作用下U87胶质瘤细胞的迁移情况.结果 高浓度(5 000 μmol/L)细胞外ATP对U87胶质瘤细胞增殖有显著抑制作用,较低浓度(50、100、500 μmol/L)细胞外ATP对U87胶质瘤细胞增殖无明显影响,5 000 μ mol/L ATP组与其他浓度组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Transwell侵袭实验中,处理组细胞跨膜细胞数为( 163.83±17.81)明显多于对照组(89.83±13.27)(P＜0.01);迁移实验中,处理组细胞运动速度为(163.83±17.81) μm/h,对照组细胞运动速度为(89.83±13.27) μm/h,2组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 100 μmol/L的细胞外ATP对体外培养的U87胶质瘤细胞的侵袭和迁移具有明显促进作用.     

野黄芩苷对人脑胶质瘤U87细胞的增殖抑制作用及其机制

目的：探讨野黄芩苷（SCU）对人脑胶质瘤U87细胞的增殖抑制作用,并初步阐明其作用机制。方法：培养U87细胞,采用不同浓度（20、40和80 mg·L^-1） SCU处理U87细胞（野黄芩苷组）,同时设空白对照组。MTT法检测各组U87细胞存活率,倒置显微镜观察U87细胞的形态表现,Annexin Ⅴ/PI双染检测各组U87细胞凋亡率,Western blotting法检测各组U87细胞中bax和bcl-2蛋白表达水平。结果：MTT法,与空白对照组比较,20、40和80 mg·L^-1SCU组细胞存活率均明显降低（P<0.01）。倒置显微镜观察,与空白对照组比较,80 mg·L^-1SCU组细胞数明显减少,细胞体积变小,细胞间距变大;细胞出现皱缩、脱落,贴壁细胞轮廓模糊。Annexin Ⅴ/PI双染,与空白对照组比较,80 mg·L^-1SCU组细胞晚期凋亡率和总凋亡率均明显升高（P<0.01）。Western blotting法,与空白对照组比较,20、40和80 mg·L^-1 SCU组U87细胞中bcl-2蛋白水平降低,80 mg·L^-1SCU组差异有统计学意义（P<0.01）;与空白对照组比较,80 mg·L^-1 SCU组U87细胞中bax/bcl-2比值升高（P<0.01）。结论：SCU通过上调U87细胞中bax/bcl-2比值诱导细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞的生长。     

p53靶向小分子RITA联合替莫唑胺对胶质瘤细胞体外生长的影响

目的:研究p53靶向小分子肿瘤凋亡和p53再生化合物(RITA)联合替莫唑胺(TMZ)对胶质瘤细胞体外生长的影响。方法:培养人胶质瘤细胞株U87并随机分为RITA+TMZ组(5μmol/L RITA和10μmol/L TMZ处理)、TMZ组(10μmol/L TMZ处理)、对照组(不含药物的DMEM处理)。处理后24h,测定细胞中p53下游细胞周期分子、凋亡分子及侵袭分子的表达量。结果:RITA+TMZ组、TMZ组细胞中p21~(cip1)、Per2、ATM、E-cadherin的蛋白表达量显著高于对照组,CDK4、CDK6、p-Rb、E2F、MDM2、c-myc、ILK、Snail、Slug的蛋白表达量显著低于对照组;RITA+TMZ组细胞中p21~(cip1)、Per2、ATM、E-cadherin的蛋白表达量显著高于TMZ组,CDK4、CDK6、p-Rb、E2F、MDM2、c-myc、ILK、Snail、Slug的蛋白表达量显著低于TMZ组。结论:p53靶向小分子RITA联合替莫唑胺处理胶质瘤细胞能够诱导p53所介导的细胞周期阻滞、细胞凋亡激活以及细胞侵袭抑制。     

探索替莫唑胺联合amlexanox对胶质瘤细胞的作用效果及机制

目的:探索替莫唑胺（TMZ）联合amlexanox对胶质瘤细胞的作用效果及机制。方法:本研究分为体外和体内实验,其中体外实验分为4组:对照（NC）组、amlexanox组、TMZ组和TMZ+amlexanox 组,包括检测细胞增殖能力的cell counting kit-8（CCK-8）实验、检测细胞侵袭和迁移的细胞划痕和Transwell实验及检测核因子κ-B激酶抑制剂（IKBKE）及蛋白激酶B（Akt）通路蛋白质变化的 Western印迹实验;体内实验分为3组:NC组、TMZ组和TMZ+amlexanox组,包括颅内成瘤实验和免疫组织化学染色（IHC）实验。结果:与amlexanox组、TMZ组相比,TMZ联合amlexanox组U87 MG和原代细胞 增殖能力明显受抑制、划痕愈合面积显著降低（P< 0.01）。Transwell侵袭和迁移实验表明,TMZ+amlexanox组穿出小室细胞数量显著降低（P< 0.01）。Western印迹实验结果显示,TMZ联合amlexanox组 Akt和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）活性明显受抑制。动物实验表明,TMZ联合amlexanox组裸鼠颅内肿瘤生长显著抑制（P < 0.01）,颅内肿瘤动物模型的生存时间延长（由21 d延长至31 d）;IHC 结果显示,TMZ联合amlexanox组肿瘤标本中磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化mTOR（p-mTOR）表达量明显下降。结论:TMZ联合amlexanox能显著抑制U87 MG和原代细胞增殖、迁移和侵袭能力,而且二者联合 能显著抑制裸鼠颅内肿瘤生长并延长裸鼠生存时间。该作用机制可能是amlexanox在一定程度上通过抑制IKBKE活性逆转TMZ诱导Akt激活,进而降低胶质瘤细胞对TMZ的耐药性。     

雷帕霉素联合嘧啶亚硝脲抑制U87-MG胶质瘤细胞增殖

目的 探讨联合运用雷帕霉素及嘧啶亚硝脲(尼莫司汀)作用于人U87-MG胶质瘤细胞的效果及相互作用,并探讨其可能的机制.方法 MTT法检测雷帕霉素和尼莫司汀单药或联用抑制胶质瘤细胞增殖的效果并用改良寇式法计算各自的半数抑制浓度(IC50);等辐射法评价两药联合作用的相互关系;流式细胞术检测用药前后细胞周期分布和凋亡;吖啶橙及单丹(磺)酰戊二胺荧光染色检测细胞自噬;透射电镜观察细胞超微结构.结果 MTT检测显示单用或联合运用雷帕霉素及尼莫司汀均可抑制U87-MG胶质瘤细胞生长[雷帕霉素IC50为(0.726±0.063) μmol/L,尼莫司汀IC50为(26.900±2.300) μg/ml],等辐射法分析显示两药联合有协同效应;流式细胞术检测显示ACNU可诱导代表凋亡的亚G1峰出现(20.6%),而RAP可诱导细胞发生G1期阻滞(64.8%),但无明显的亚G1峰,两药联合作用后G1期细胞比例明显增多(76.0%),亚G1峰也略有增加(27.5%);吖啶橙及单丹(磺)酰戊二胺荧光染色结果表明RAP可诱导细胞发生自噬,ACNU则不明显,两药联用后自噬囊泡较单用RAP组明显增多;透射电镜可观察到两药联用后同一细胞内自噬体及凋亡同时出现.结论 雷帕霉素及尼莫司汀联合作用于人U87-MG胶质瘤细胞可起协同效应,抑制U87-MG胶质瘤细胞的生长及增殖.     

IKK16对人胶质母细胞瘤U87细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨IκB激酶(IKK)抑制剂IKK16对人胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响 ,并探讨其可能作用机制.方法将体外培养的人胶质母细胞瘤U87细胞分为4组 :空白组(未予干预处理) ,对照组(1% 二甲基亚砜) ,IKK16低剂量组(70 nmol/L IKK16)和IKK16高剂量组(200 nmol/L IKK16) ,使用二苯基溴化四氮唑蓝(M T T )法检测IKK16对人胶质母细胞瘤U87增殖的抑制作用 ,Western blot法检测加药后48 h细胞内p65、Caspase-3、Bcl-2和CyclinD1的表达.结果 空白组与对照组U87细胞增殖率比较 ,差异无统计学意义(P＞0 .05);与对照组比较 ,IKK16可以显著抑制人胶质母细胞瘤U87细胞的增殖 ,同时显著降低细胞核内p65的表达(P＜0 .05) ,抑制CyclinD1和Bcl-2的表达 ,增加Caspase-3的表达量(P＜0 .05) ,并呈剂量依赖性.结论IKK16可以抑制人胶质母细胞瘤U87细胞增殖并促进凋亡.     

穿心莲内酯对胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用及其机制

目的：观察穿心莲内酯（Andro）对胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用,阐明其作用机制。方法：取对数生长期U87细胞,分为二甲基亚砜(DMSO)对照组、4H-穿心莲内酯(4H-Andro)对照组和Andro组, MTT法检测不同浓度(0、5、10、15、20和25 μmol•L^-1) DMSO 、4H-Andro 及Andro对U87细胞活力的影响,计算U87细胞半数抑制浓度（IC50）;Western blotting法检测各组U87细胞NF-κB蛋白表达强度。结果：通过浓度筛选,Andro平均IC50为8 μmol•L^-1。与DMSO和4H-Andro对照组比较,8 μmol•L^-1 Andro处理24 h后U87细胞增殖活性降低（P<0.01）,增殖抑制率达到50%;Andro处理96 h时,U87细胞增殖活性进一步降低（P<0.01）,增殖抑制率达到65%。与DMSO和4H-Andro对照组比较,8 μmol?L-1 Andro处理48 h后, U87细胞中NF-κB（即磷酸化p65）蛋白表达强度下降（P<0.01）。结论：Andro作为临床上常用的天然抗炎药物,具有抑制胶质瘤细胞增殖的功能,并且可通过靶向抑制NF-κB蛋白表达强度发挥作用。     

MiR-181b suppresses proliferation of and reduces chemoresistance to temozolomide in U87 glioma stem cells

MicroRNAs regulate self renewal and differentiation of cancer stem cells.There,we sought to identify the expression of miR-181b in glioma stem cells and investigate the biological effect of miR-181b on glioma stem cells in this study.MiR-181b expression was measured by real-time PCR in glioma stem cells isolated from U87 cells by FACS sorting.After miR-181b was overexpressed in U87 glioma stem cells by miR-181b lentiviral expression vector and/or treatment of temozolomide,secondary neurosphere assay,soft agar colony assay and MTT assay were performed.Compared with U87 cells,the expression of miR-181b was significantly decreased in U87 glioma stem cells.Overexpression of miR-181b decreased neurosphere formation by U87 glioma stem cells in vitro and suppressed colony formation in soft agar,and the cell growth inhibition rates increased in a time-dependent manner in U87 glioma stem cells infected with miR-181b lentivirus.Furthermore,miR-181b had a synergistic effect on temozolomide-induced inhibition of secondary neurosphere and soft agar colony,and on cell growth inhibition rates.MiR-181b functions as a tumor suppressor that suppresses proliferation and reduces chemoresistance to temozolomide in glioma stem cells.     

银杏提取物联合顺铂对人胶质瘤U251细胞增殖 凋亡的影响

目的 研究银杏提取物(GBE)联合化疗药物顺铂对人脑胶质肿瘤细胞生长增殖和凋亡的影响.方法 正常培养传代后的U251胶质瘤细胞按随机分配的方法 分为4组,A组仅加普通培养液,B、C、D组分别加银杏提取物(200 mg/mL)0.5 mL、顺铂(1 mg/mL)0.01 mL、银杏提取物(200 mg/mL)0.5 mL+顺铂(1 mg/mL)0.01 mL;MTT法观察U251细胞增殖情况,流式细胞仪检测U251细胞凋亡率.结果 培养12、24、36、48、60 h,B、C、D组细胞增殖指数逐渐下降,与A组比较差异具有统计学意义(P<0.05);D组与B、C组比较,差异具有统计学意义(P<0.05).将各组细胞培养24 h后上机,测得A组、B组、C组、D组肿瘤细胞的凋亡率分别为(0.6±0.3)%、(19.3±1.2)%、(38.9±3.5)%、(58.1±3.1)%.其中,B组、C组、D组分别与A组进行比较,差异具有统计学意义(P<0.05);将D组与B组和C组进行比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论 银杏提取物(GBE)联合顺铂可抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖,并诱导其凋亡.     

LY294002联合顺铂对脑胶质瘤U87细胞株增殖的影响

目的 体外观察磷酸肌醇-3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002与顺铂(CDDP)联合对人脑胶质瘤U87细胞株增殖的抑制作用.方法 采用细胞毒实验(MTT)法、流式细胞术(FCM)检测LY294002单独或联合CDDP对人脑胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用,并观察细胞形态学变化.结果 LY294002 与CDDP均能抑制U87细胞生长,呈剂量依赖性,两者联合有协同效应.当CDDP为0.625 μg/mL和LY294002为5 μmol/L时达到最大协同作用(Q=1.21),FCM检测细胞被阻滞在G1期,S期细胞比例减少,差异有统计学意义(P<0.01).结论 LY294002能有效提高神经     

放射治疗联合替莫唑胺治疗脑胶质母细胞瘤疗效观察

目的探讨放射治疗联合替莫唑胺(TMZ)治疗脑胶质母细胞瘤(GBM)的疗效和安全性,并分析影响GBM患者预后的因素。方法 40例初诊脑GBM患者给予放射治疗联合TMZ治疗,放射治疗采用三维适形或调强放射治疗技术,患者放射治疗期间同步应用TMZ 75 mg·m-2·d-1,口服;放射治疗结束4周后行TMZ辅助化学治疗,TMZ 150~200 mg·m-2·d-1,口服,连续服用5 d,停药23 d,28 d为1个周期。观察患者的治疗效果及安全性,并对患者性别、年龄、Karnofsky评分、手术切除程度、手术至放射治疗开始间隔时间、放射治疗技术及TMZ辅助化学治疗周期数等因素对患者预后的影响进行多因素分析。结果随访时间为6.6~45.0个月,中位随访时间为19.0个月,失访1例,随访率为97.5%。40例患者中,肿瘤局部进展或复发28例(70.0%),死亡26例,生存14例。本组患者1、2、3 a总生存(OS)率分别为82.5%(33/40)、30.8%(8/26)和22.7%(5/22),中位OS时间为21.0个月;本组患者1、2、3 a无进展生存(PFS)率分别为62.5%(25/40)、26.1%(6/23)和22.7%(5/22),中位PFS时间为14.8个月。单因素分析结果显示,Karnofsky评分和TMZ辅助化学治疗周期数与患者OS率及PFS率有关(P<0.05),而性别、年龄、手术切除程度、手术至放射治疗开始间隔时间、放射治疗技术与患者OS率及PFS率无显著相关性(P>0.05)。多因素分析结果显示,Karnofsky评分和辅助化学治疗周期数是影响OS的独立因素(P<0.05,P<0.01);手术切除程度和辅助化学治疗周期数是影响PFS的独立因素(P<0.05,P<0.01)。结论放射治疗联合TMZ治疗初诊脑GBM疗效肯定,安全性较好。Karnofsky评分、手术切除程度及辅助化学治疗周期数是影响患者预后的重要因素。     

转录因子FOXC1促进胶质瘤细胞系U87的侵袭能力

目的：探讨转录因子FOXC1对人脑胶质瘤细胞系U87侵袭的促进作用。方法：qPCR、Western blot检测胶质瘤细胞系U87、U251及正常星型胶质细胞中FOXC1 mRNA和蛋白表达水平。将FOXC1-siRNA转染至U87细胞中,分别用qPCR、Western blot检测FOXC1-siRNA的转染效率。细胞划痕实验和Transwell实验检测U87细胞转染FOXC1-siRNA后对细胞侵袭能力的影响,利用 Western blot检测U87细胞上皮间质化相关通路蛋白（Snail1、β-catenin、Twist1）、标记蛋白（N-cadherin、Vimentin、E-cadherin）表达水平。结果：U87细胞下调FOXC1表达后侵袭能力明显减弱,上皮间质化相关通路蛋白（Snail1、β-catenin、Twist1）表达水平下降,上皮细胞标记蛋白表达水平E-cadherin表达水平升高、间质细胞标记蛋白N-cadherin、Vimentin表达水平降低。结论：转录因子FOXC1通过上皮间质化促进胶质瘤细胞的侵袭。