软骨中硫化氢含量及其对白介素1β诱导的软骨细胞基质金属蛋白酶13表达的抑制作用

目的：研究关节液及关节软骨中硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）及其合成酶的含量和变化,以及H2S对白介素1β（interlukin-1β,IL-1β）诱导的软骨细胞人基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase 13,MMP-13）表达的影响。方法：收集在北京大学第一医院行膝关节手术（关节镜手术或膝关节置换术）患者的关节液及废弃的关节软骨,用亚甲基蓝法检测关节液H2S的含量;从废弃的关节软骨中分离出相对正常的软骨细胞,用H2S分子探针方法检测软骨细胞中的内源性H2S,用免疫细胞化学方法检测软骨细胞中H2S合成酶胱硫醚-β-合成酶（cystathionine beta-synthase,CBS）、胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine gamma-lyase,CSE）、巯基丙酮酸硫转移酶（3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,MPST）;用Western blot法检测H2S合成酶CBS、CSE、MPST在不同退变程度的软骨组织中的含量。培养相对正常的人软骨细胞至第三代,分为4组：（1）对照组：不加任何药物;（2）IL-β组：单加5 μg/L的IL-1β;（3）IL-1β+H2S组：提前0.5 h加200 μmol/L的NaHS,再加5 μg/L的IL-1β;（4）H2S组：单加200 μmol/L的NaHS。Western blot法检测各组细胞MMP-13蛋白、总核因子κB p65（nuclear factor κB p65,NF-κB p65）及磷酸化NF-κB p65蛋白的含量,Real-time PCR检测各组细胞MMP-13基因的转录情况。结果： 退变膝关节的关节液中H2S含量为(14.3±3.3) μmol/L,Outerbridge分级3级软骨组织中CSE表达量显著高于Outerbridge分级1级软骨组织中的表达量（1.67±0.09 vs. 1.26±0.11,P＜0.01）,而CBS与MPST的表达量差异无统计学意义（P＞0.05）。IL-1β组MMP-13的表达较正常对照组明显升高,且差异具有统计学意义（1.87±0.67 vs. 0.22±0.10,P＜0.05）, IL-1β+H2S组MMP-13的表达较IL-1β组明显降低,且差异具有统计学意义（0.55±0.11 vs. 1.87±0.67,P＜0.05）,H2S组MMP-13的表达较正常对照组差异无统计学意义。 Real-time PCR方法测量了药物干预实验中各组细胞MMP-13基因转录情况,结果显示IL-1β组MMP-13基因转录较正常对照组明显升高,且差异具有统计学意义（31.40±0.31 vs. 1.00±0.00,P＜0.05）, IL-1β+H2S组MMP-13基因转录较IL-1β组明显降低,且差异具有统计学意义（24.41±1.28 vs. 31.40±0.31,P＜0.05）, H2S组MMP-13基因转录较正常对照组无显著性变化。IL-1β组总p65含量较正常对照组明显升高,且差异具有统计学意义（2.13±0.08 vs. 0.73±0.08,P＜0.05）, IL-1β+H2S组总p65含量较IL-1β组明显降低,且差异具有统计学意义（1.24±0.13 vs. 2.13±0.08,P＜0.05）, H2S组总p65含量较正常对照组无显著性变化;IL-1β组磷酸化p65含量较正常对照组明显升高,且差异具有统计学意义（1.30±0.13 vs. 0.19±0.04,P＜0.05）, IL-1β+H2S组磷酸化p65含量较IL-1β组明显降低,且差异具有统计学意义（0.92±0.26 vs. 1.30±0.13,P＜0.05）,H2S组磷酸化p65含量较正常对照组无显著性变化。结论： H2S参与了软骨退变,起到部分抑制细胞外基质降解酶MMP-13的作用,从而实现对软骨细胞外基质的保护。     

PAX2稳转细胞系构建及对细胞迁移和侵袭能力的作用研究

目的 探讨PAX2稳转细胞系构建及生物学作用。方法 选择处于对数生长期大鼠肾小管上皮细胞,实验分为稳转组、空载组、对照组。稳转组采用阳离子脂质体转导将pEGFP-PAX2转入大鼠肾小管上皮细胞,空载组采用同样方法配置空载质粒转染溶液,对照组不添加质粒转染溶液。经G418筛选,建立稳定转染细胞系。通过细胞划痕实验及Transwell实验检测PAX2稳转细胞系的细胞迁移率及细胞侵袭作用。结果 应用G418筛选14 d,稳转组大鼠肾小管上皮细胞有明显克隆长出,建立PAX2基因稳定转染肾小管上皮细胞系。稳转组在荧光显微镜下可见绿色荧光,基因融合表达获得成功。稳转组细胞PAX2条带密度与β-action吸光度比值为（1.00±0.04）,空载组为（0.83±0.03）,对照组为（0.85±0.04）,3组吸光度比值比较,差异有统计学意义（F=398.7,P＜0.05）;其中稳转组吸光度比值高于空载组和对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。细胞划痕后18 h,对照组、空载组和稳转组细胞迁移率分别为（39.34±5.34）%、（40.56±7.54）%和（83.72±7.12）%,3组细胞迁移率比较,差异有统计学意义（F=431.8,P＜0.05）;其中稳转组细胞迁移率高于对照组和空载组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。各组细胞培养48 h后,对照组、空载组和稳转组迁移细胞分别为（23.33±3.63）、（22.00±8.14）、（45.67±7.14）,3组迁移细胞数比较,差异有统计学意义（F=248.5,P＜0.05）;其中稳转组迁移细胞数高于对照组和空载组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 pEGFP-PAX2质粒成功转染大鼠肾小管上皮细胞,并成功筛选出高效稳定表达PAX2的稳转细胞系。PAX2稳转增加了肾小管上皮细胞的迁移及侵袭能力。     

连续肾脏替代疗法联合常规方案治疗脓毒症的效果分析

目的 探讨连续肾脏替代疗法（CRRT）联合常规方案治疗脓毒症的临床效果。方法 选取2011年6月-2013年10月于泰州市人民医院重症监护室治疗的53例脓毒症患者为研究对象,根据是否采用CRRT分为观察组（27例）和对照组（26例）。对照组患者进行常规治疗,观察组患者在常规治疗基础上联合应用CRRT。以治疗前和治疗后7d白细胞计数（WBC）、降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素（IL）-1β、IL-6、IL-10反映感染情况,以心率和血乳酸水平反映血流动力学及组织灌注情况,以住院时间、住院费用、治疗后7d急性生理与慢性健康状况评分系统Ⅱ（APACHEⅡ）评分及病死率反映临床结局。结果 两组治疗前WBC、PCT、CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。两组治疗后7dWBC、PCT、CRP、IL-1β、IL-6水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。两组治疗后7dTNF-α、IL-10水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。观察组治疗后7d心率为（80.3±7.2）次/min,低于对照组的（95.3±7.8）次/min,差异有统计学意义（t=7.267,P＜0.05）;观察组治疗后7d血乳酸水平（1.05±0.36）mmol/L,低于对照组（1.51±0.34）mmol/L,差异有统计学意义（t=4.784,P＜0.05）。两组住院时间、APACHEⅡ评分比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。两组住院费用、病死率比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 CRRT联合常规治疗能改善脓毒症患者的感染状况,控制机体炎性反应,维持血流动力学稳定,改善组织灌注,缩短住院时间。     

青少年糖尿病患者血浆及龈沟液中自细胞介素-1β和C反应蛋白水平

目的：白细胞介素（interleukin,IL）-1β和C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）等炎症细胞因子在糖尿病的发生发展过程中起到了重要作用,因此牙周炎可能通过共同的炎症病理机制和糖尿病关联。通过测定青少年糖尿病患者龈沟液和血浆中IL-1β和CRP的水平,探讨糖尿病在发病初期对机体炎症指标的影响,结合牙周健康指数分析青少年糖尿病患者罹患牙周疾病的风险。方法：实验组为10~16岁糖尿病患者41名,健康对照80名。检查记录各牙周指数：菌斑指数（plaque index,PLI）、改良出血指数（modified bleeding index,mBI）、探诊深度（probing depth,PD）和牙周附着丧失（attachment loss,AL）。采集龈沟液和静脉血样本,以酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）检测龈沟液及血浆中IL-1β和CRP浓度。结果：糖尿病组和对照组的PLI分别为1.23±0.05和0.95±0.04,差异有统计学意义(P=0.001);mBI分别为0.80±0.08和0.51±0.06,差异有统计学意义(P=0.003);两组受试者均未发现牙周附着丧失;PD分别为（2.37±0.51) mm和（2.31±0.05) mm,差异无统计学意义（P=0.358）。部分受试者样本的龈沟液中CRP低于可检出水平,龈沟液中CRP总检出率为22.9% (11/48)。糖尿病组龈沟液中CRP检出率（38.5%）显著高于对照组（4.5%,P=0.006）;糖尿病组血浆CRP浓度［0.23 (0.15, 1.89) mg/L］略高于对照组［0.19 (0.12, 4.18) mg/L］,但差异无统计学意义（P=0.776）。糖尿病组和对照组血浆中IL 1β浓度分别为(14.11±0.57) ng/L和(14.71±0.50) ng/L,差异无统计学意义（P=0.456）;两组龈沟液中IL 1β浓度分别为(12.91±1.95) μg/L和(17.68±3.07) μg/L,差异无统计学意义（P=0.185）。结论：青少年糖尿病患者在患病早期尚未发生牙周组织破坏,但牙周指数和龈沟液中CRP的变化提示青少年糖尿病人群罹患牙周疾病的风险可能高于健康人群。     

男性2型糖尿病血尿酸水平与胰岛β细胞功能的相关性

目的：探讨男性2型糖尿病患者血尿酸水平与胰岛β细胞功能的相关性。方法：选取2014年12月至2016年4月于南京医科大学第一附属医院内分泌科住院的510例男性2型糖尿病患者作为研究对象,根据血尿酸水平分为高尿酸组（50例）和正常尿酸组（460例）,测定人体参数、血尿酸、生化指标、胰岛自身抗体,并行馒头餐试验评估患者胰岛β细胞功能及胰岛素抵抗。结果：线性相关分析发现血尿酸与△C30/△G30（r=0.122,P=0.006）、iCpAUC180/iGAUC180（r=0.304,P＜0.001）、胰岛素分泌功能指数（HOMA2-%β）（r=0.267,P＜0.001）、CpAUC180（r=0.328,P＜0.001）及胰岛素抵抗指数（HOMA2-IR）（r=0.248,P＜0.001）均呈正相关。高尿酸组（50例）与正常尿酸组（460例）的血尿酸水平分别为（480.63±57.39）µmol/L、 （304.22±59.38）µmol/L。高尿酸组与正常尿酸组相比,HOMA2-IR（1.76±0.80 vs. 1.34±0.71,P＜0.001）、HOMA2-%β（89.15±47.64 vs. 67.18±30.88,P＜0.001）、△C30/△G30（146.43±166.05 vs. 75.00±184.45,P=0.009）、CpAUC180（5 991.02±2 549.86 vs. 4 577.51± 1 970.00,P＜0.001）和iCpAUC180/iGAUC180（222.29±175.86 vs. 140.79±104.81,P＜0.001）更高;校正组间差异后,差异仍有统计学意义（均P＜0.05）。对胰岛自身抗体阴性患者进行分析,高尿酸组的HOMA2-IR、HOMA2-%β、△C30/△G30、CpAUC180和iCpAUC180/iGAUC180更高（均P＜0.05）。在校正组间差异后,高尿酸组与正常尿酸组相比HOMA2-%β、CpAUC180和iCpAUC180/iGAUC180仍高,而HOMA2-IR（F=2.141,P=0.144）和△C30/△G30（F=3.655,P=0.057）差异无统计学意义。结论：男性2型糖尿病血尿酸与馒头餐负荷的胰岛β细胞功能及胰岛素抵抗正相关;代谢综合征及胰岛自身抗体可能影响男性2型糖尿病血尿酸与胰岛β细胞功能的相关性。     

bcl-2小分子干扰RNA对人子宫内膜癌RL-952细胞阿霉素敏感性的影响

目的 研究靶向bcl-2小分子干扰RNA（siRNA）干扰序列对人子宫内膜癌RL-952细胞阿霉素（DOX）敏感性的影响及相关作用机制。方法 2014年5-8月,将siRNA干扰序列转染人子宫内膜癌RL-952细胞,设3个实验组：空白对照组、bcl-2 siRNA干扰组（转染bcl-2 siRNA干扰序列）及阴性对照组（转染siRNA空载序列）,检测bcl-2 siRNA干扰组的转染效率和3组bcl-2表达水平。将细胞随机分成5组,分别为空白对照组、阴性对照组（转染siRNA空载序列）、干扰组（转染bcl-2 siRNA干扰序列）、DOX组（加入5 μg/ml DOX）、联合组（转染siRNA干扰序列并加入5 μg/ml DOX）,检测细胞活力、细胞凋亡率、半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-9活性及细胞色素C水平。结果 siRNA干扰序列转染人子宫内膜癌RL-952细胞的转染效率为（94.6±12.5）%。3组bcl-2表达水平比较,差异有统计学意义（F=8.75,P＜0.05）。bcl-2 siRNA干扰组bcl-2表达水平低于空白对照组和阴性对照组（q=3.99、2.87,P＜0.01）。5组细胞活力比较,差异有统计学意义（F=42.52,P＜0.05）。干扰组、DOX组、联合组细胞活力低于空白对照组（q=7.66、8.64、6.89,P＜0.05）;联合组细胞活力低于DOX组（q=6.76,P＜0.01）。5组细胞凋亡率比较,差异有统计学意义（F=112.34,P＜0.05）。干扰组、DOX组、联合组细胞凋亡率高于空白对照组（q=5.78、4.99、6.21,P＜0.05）;联合组细胞凋亡率高于DOX组（q=4.89,P＜0.01）。5组Caspase-3、Caspase-9活性及细胞色素C水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。干扰组、DOX组、联合组Caspase-3、Caspase-9活性及细胞色素C水平高于空白对照组（P＜0.05）;DOX组、联合组Caspase-3活性高于阴性对照组,干扰组、DOX组、联合组Caspase-9活性高于阴性对照组（P＜0.05）;联合组Caspase-3活性高于干扰组,DOX组、联合组Caspase-9活性高于干扰组（P＜0.05）;联合组Caspase-3、Caspase-9活性及细胞色素C水平高于DOX组（P＜0.05）。结论 靶向bcl-2 siRNA干扰序列可以增强人子宫内膜癌RL-952细胞的DOX敏感性,bcl-2可作为人子宫内膜癌基因治疗的候选靶点。     

Th1/Th2型细胞因子及免疫状态在支气管哮喘患儿治疗前后的变化

目的 探讨Th1/Th2型细胞因子及免疫状态在支气管哮喘患儿治疗前后中的变化.方法 选取榆林市儿童医院2011年5月～2013年3月收治的48例支气管哮喘患儿为研究对象（研究组）,另外选取同期进行健康体检的48例健康儿童作为对照组,检测两组研究对象治疗前及治疗后1、4周时Th1细胞因子[白介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）]、Th2细胞因子[白介素-4（IL-4）、白介素-5（IL-5）、白介素-10（IL-10）、白介素-13（IL-13）]和免疫指标,并进行统计学比较.结果 治疗前研究组患儿IL-2 、IFN-γ和IL-10均明显低于对照组（t=8.52、11.84、6.57）,IL-4、IL-5和IL-13明显高于对照组（t=12.98、15.87、11.88）,差异均有统计学意义（P＜0.05）.治疗1、4周后研究组患儿Th1/Th2型细胞因子均明显改善,治疗4周时Th1/Th2型细胞因子水平与对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.治疗前研究组患儿CD3＋、CD4＋及CD4/CD8均明显低于对照组（t=9.23、10.52、8.11）,而CD8＋则高于对照组（t=9.61）,差异有统计学意义（P＜0.05）.治疗1、4周后研究组患儿各项免疫指标均明显改善,治疗4周时CD3＋、CD4＋、CD8＋及CD4/CD8水平与对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.研究组各时间段Th1、Th2细胞因子比较,差异有统计学意义（F=1.96、3.19、3.25、4.01、2.15、1.81,均P＜0.05）.研究组各时间段各免疫指标比较,差异有统计学意义（F=3.74、2.53、3.06、1.98,均P＜ 0.05）.结论 支气管哮喘患儿治疗前后Th1/Th2型细胞因子及免疫状态存在显著变化.     

痛风患者血清中IL-37、IL-1β及IL-18水平检测及其相关性研究#br#

目的：通过检测痛风患者不同阶段血清中白细胞介素（IL）-37、IL-1β及IL-18水平,探讨IL-37在痛风发病中的作用。方法：采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定20例初发痛风患者（痛风组,急性发作期和完全缓解期）、20例高尿酸血症患者（高尿酸血症组）及20例健康志愿者（健康对照组）血清中IL-37、IL-1β及IL-18的水平,比较痛风组患者急性发作期和完全缓解期各指标的表达差异,以及痛风组患者急性发作期及完全缓解期与其他两组各指标的表达差异;同时分析急性发作期患者IL-37水平与血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）、IL-1β和IL-18水平的相关性。结果：痛风组患者急性发作期的IL-1β和IL-18水平均显著高于完全缓解期,差异具有统计学意义（P＜0.05）;而IL-37的水平仅略高于完全缓解期,差异无统计学意义（P＞0.05）。痛风组患者急性发作期IL-37、IL-1β及IL-18水平均高于高尿酸血症组和健康对照组,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;而完全缓解期仅IL-37水平高于高尿酸血症组和健康对照组（P＜0.05）。痛风组患者急性发作期的IL-37水平与其ESR、CRP、IL-1β、IL-18水平呈正相关（均P＜0.01）。结论：IL-37可能作为一个抑炎因子参与了痛风的炎症反应过程。     

辅酶Q10对1-甲基-4-苯基吡啶帕金森病大鼠的干预作用及其机制研究

目的 探讨辅酶Q10（CoQ10）在不同给药时间窗干预1-甲基-4-苯基吡啶（MPP+）-帕金森病（PD）模型大鼠的作用及机制。方法 选取清洁级标准健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠48只,体质量250~280 g。采用MPP+黑质内注射建立PD大鼠模型。按完全随机设计方法分为假手术组、模型组、CoQ10预防性给药组、CoQ10治疗性给药组,每组12只。比较4组大鼠行为学（阿朴吗啡诱导旋转试验、前肢跨步运动试验、触须引发不对称放置试验）情况,测定小胶质细胞特异表达补体C3受体（OX-42）免疫荧光强度、多巴胺（DA）神经元存活率、线粒体酶复合体Ⅰ（Complex Ⅰ）的活性。结果 4组大鼠不同时间点阿朴吗啡诱导旋转试验转数比较,差异有统计学意义（F交互=22.299,P＜0.01;F时间=132.494,P＜0.01;F组间=99.994,P＜0.01）;4组大鼠不同时间点前肢跨步运动试验得分比较,差异有统计学意义（F交互=10.622,P＜0.01;F时间=107.880,P＜0.01;F组间=45.621,P＜0.01）;4组大鼠不同时间点触须引发不对称放置试验得分比较,差异有统计学意义（F交互=8.281,P＜0.05;F时间=120.000,P＜0.01;F组间=40.200,P＜0.01）。4组大鼠OX-42免疫荧光强度比较,差异有统计学意义（F=7.460,P＜0.01）;模型组、CoQ10预防性给药组、CoQ10治疗性给药组OX-42免疫荧光强度高于假手术组（P＜0.01）。4组大鼠DA神经元存活率比较,差异有统计学意义（F=229.757,P＜0.01）;CoQ10预防性给药组大鼠DA神经元存活率高于模型组（q=9.136,P＜0.01）。假手术组、模型组、CoQ10预防性给药组、CoQ10治疗性给药组大鼠的Complex Ⅰ活性分别为（174.3±27.2）、（93.5±17.0）、（151.3±21.9）、（116.2±19.6）,差异有统计学意义（F=16.395,P＜0.01）;CoQ10预防性给药组大鼠Complex Ⅰ活性高于模型组（q=6.507,P＜0.01）;CoQ10治疗性给药组大鼠与模型组Complex Ⅰ活性比较,差异无统计学意义（q=2.550,P＞0.05）。结论 CoQ10预防性给药对MPP+-PD模型大鼠黑质致密部DA神经元有保护作用,其机制可能与增强Complex Ⅰ活性有关。     

益心解毒方对NOX2亚基和NOX4亚基过表达及小干扰RNA引起的心肌细胞还原型辅酶Ⅱ氧化酶活性变化的机制研究

观察益心解毒方含药血清对NOX2、NOX4 亚基过表达和小干扰RNA（RNAi）导致的H9C2心肌细胞还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶活性的变化,探讨益心解毒方的作用机制。方法 采用正常雄性Sprague-Dawley大鼠16只,构建针对NOX2、NOX4亚基的过表达质粒和RNAi质粒。采用转染试剂瞬时转染H9C2心肌细胞,流式细胞术检测转染率,转染24 h后分组（正常H9C2细胞组、过表达组、H9C2转阴性对照质粒组、RNAi质粒组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方中剂量组、益心解毒方低剂量组）给予不同剂量的含药血清干预,24 h后检测NADPH氧化酶活性。结果 转染NOX2亚基过表达质粒的各组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。其中,过表达组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与正常H9C2细胞组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;H9C2转阴性对照质粒组、RNAi质粒组、益心解毒方中剂量组与过表达组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;RNAi质粒组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与H9C2转阴性对照质粒组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与RNAi质粒组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;益心解毒方中剂量组与益心解毒方高剂量组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;益心解毒方低剂量组与益心解毒方中剂量组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。转染NOX4亚基过表达质粒的各组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。其中,过表达组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与正常H9C2细胞组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;H9C2转阴性对照质粒组、RNAi质粒组、益心解毒方中剂量组、益心解毒方低剂量组与过表达组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;RNAi质粒组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与H9C2转阴性对照质粒组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与RNAi质粒组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;益心解毒方中剂量组与益心解毒方高剂量组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;益心解毒方低剂量组与益心解毒方中剂量组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 NOX2、NOX4亚基的过表达可以提高NADPH氧化酶活性,而RNAi表达可以沉默NOX2、NOX4亚基,从而降低NADPH氧化酶活性,益心解毒方不会直接影响NADPH氧化酶活性。实验研究表明干预和抑制NOX2、NOX4亚基的NADPH氧化酶活性调控环节,降低心肌活性氧（ROS）水平,保护心肌细胞,改善心功能,可能是益心解毒方发挥药效的重要机制。     

WNK3激酶高表达对白介素-1β诱导HEK293细胞凋亡的保护作用

目的： 观察WNK3激酶高表达对白介素-1β （IL-1β）诱导人胚肾细胞（HEK293细胞）凋亡的作用。方法：HEK293细胞分为3组：Vector+NS组、Vector+IL-1β组和WNK3+IL-1β组。Vector+NS组、Vector+IL-1β组转染对照Vector,WNK3+IL-1β组转染WNK3。药物干预时,Vector+NS组加入等量0.9%氯化钠溶液,Vector+IL-1β组、WNK3+IL-1β组加入10 ng/mL IL-1β。分别于培养0、12、24、36和48 h时,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性。孵育0、18、36 h时应用Western blot法检测Caspase-3、cleaved Caspase-3、Caspase-9、cleaved Caspase-9等凋亡蛋白。在IL-1β干预0、30、60 min时采用Western blot法检测JNK通路蛋白。 结果： Vector+IL-1β组在给药后细胞活性逐渐下降,在48 h达到最低值,WNK3+IL-1β组下降幅度较缓和,与同时间点Vector+IL-1β组比较细胞活性回升,在48 h时差异有统计学意义（ P＜0.01）。IL-1β孵育后cleaved Caspase-3和cleavedCaspase-9表达量增加。与36 h的Vector+IL-1β组比较WNK3+IL-1β组的cleaved Caspase-3显著减少,2组的cleaved Caspase-9在18 h及36 h时差异亦存在统计学意义（ P＜0.05）。WNK3转染后p-JNK的表达水平较未转染WNK3组的上升幅度降低（ P＜0.05）。 结论： IL-1β诱导HEK293细胞活性下降,而转染WNK3质粒可以有效逆转部分细胞活性。WNK3激酶通过减少JNK的磷酸化抑制Caspase途径的活化,减少细胞凋亡,起到在不利条件下保护肾脏细胞的作用。     

姜黄素通过NLRP3/Caspase-1/IL-1β轴对低氧性肺动脉高压的干预作用

目的：探讨姜黄素对低氧性肺动脉高压（HPH）的作用及其机制。方法：同时研究肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）和SD大鼠肺组织,PASMCs和SD大鼠都设置为常氧组（N）、低氧组（H）、低氧+姜黄素组（HC）3组。CCK-8法测3组PASMCs细胞活力,Western blot法检测3组PASMCs和肺匀浆中NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白表达差异。血流动力学检测3组大鼠的平均肺动脉压（mPAP）及右心肥大程度,HE染色观察3组大鼠肺血管重塑程度。结果：与N组比,H组PASMCs的数量有明显增加（P＜0.05）,H组PASMCs和肺匀浆中NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达均上升（均P＜0.05）,H组大鼠的mPAP及右心肥大指数明显升高（均P＜0.05）,发生明显肺血管重塑;与H组比,HC组PASMCs的数量明显降低（P＜0.05）,PASMCs和肺匀浆中NLRP3、Cas-pase-1、IL-1β蛋白表达均下降（均P＜0.05）,HC组大鼠的mPAP及右心肥大指数明显降低（均P＜0.05）,肺血管重塑改善。结论：姜黄素可能通过抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β轴,改善低氧PASMCs异常增殖、HPH大鼠肺血管重塑和右心肥大,降低肺动脉压力。     

高血压伴抑郁症与外周血干细胞因子及其受体表达水平的关系研究

目的 探讨高血压伴抑郁症与外周血干细胞因子（SCF）及其受体（c-kit）表达水平的关系。方法 选择2013年2-12月江宁区第二人民医院精神科病区、内科与神经精神科门诊初诊的高血压患者147例,其中高血压伴抑郁症患者77例为试验组,高血压不伴抑郁症患者70例为对照组。从试验组中抽取37例患者进行12周抗抑郁治疗,为治疗组。采用酶联免疫吸附法检测外周血SCF、c-kit水平,放射免疫法检测内皮素1及白介素（IL）6水平,采用Logistic回归分析高血压伴抑郁的影响因素。结果 试验组与对照组比较,SCF〔（848±22）、（917±32）ng/L〕、c-kit〔（11.9±3.7）、（13.1±4.1）μg/L〕 水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;内皮素1〔（165±21）、（151±17）ng/L〕、IL-6〔（97.3±12.1）、（86.2±9.8）ng/L〕水平升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）;治疗组治疗后与治疗前比较,SCF〔（873±25）、（852±19）ng/L〕、c-kit〔（12.7±3.1）、（11.4±3.5）μg/L〕 水平升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）,内皮素1〔（140±15）、（166±20）ng/L〕、IL-6〔（46.5±9.7）、（97.9±11.4）ng/L〕 水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Logistic回归分析显示,低SCF（OR=24.779,P=0.002）,低c-kit（OR=79.998,P=0.001）,高内皮素1（OR=27.688,P=0.013）和高IL-6（OR=198.343,P＜0.001）是高血压伴抑郁症的影响因素。结论 高血压伴有抑郁症患者外周血中SCF、c-kit表达水平较单纯高血压患者低,外周血中低SCF、c-kit与高血压伴抑郁症相关;抗抑郁治疗可使外周血中SCF、c-kit表达水平升高。     

非布司他联合秋水仙碱对高尿酸血症患者血清NALP3、IL-1β的影响

目的探讨非布司他联合秋水仙碱对高尿酸血症患者核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NALP3）、IL-1β的影响。方法将86例高尿酸血症患者按照随机数字表法分为两组,每组43例。观察组采用非布司他联合秋水仙碱治疗,对照组采用别嘌醇联合秋水仙碱治疗。比较两组患者治疗前后血尿酸（BUA）、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、NALP3、IL-1β水平。记录治疗过程中两组不良反应发生情况。结果观察组的疗效显著优于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;两组治疗后BUA、NALP3、IL-1β水平较治疗前均明显降低（均P＜0.05）;治疗后,观察组BUA、NALP3、IL-1β水平显著低于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;两组患者治疗前后Scr、BUN水平未发生明显改变,差异无统计学意义（P＞0.05）;观察组不良反应的发生率（16.28%）显著低于对照组（25.58%）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论非布司他联合秋水仙碱能显著降低高尿酸血症患者血清NALP3、IL-1β的水平,疗效较别嘌醇更好。     

重组质粒pcDNA-HA/ΔNp73α转染对人树突状细胞功能的影响

目的 研究转染pcDNA-HA/ΔNp73α重组质粒对树突状细胞（DC）功能的影响。方法 采取健康人脐带血,分离单个核细胞,置入含有白介素4（IL-4）和粒-巨细胞集落刺激因子（GM-CSF）的RPMI 1640完全培养基中培养。在培养第5、7天时收获DC细胞,加入FITC-anti-CD1a、PE-anti-CD83抗体,采用流式细胞仪检测CD1a、CD83表达情况。将DC分为正常培养至成熟的DC组（空白对照组）、空载体pcDNA-HA转染的DC组（阴性对照组）、ΔNp73α重组质粒转染的DC组（实验组）。分别在转染24、48、72 h后采用荧光显微镜检测转染效率;转染48 h后收获并提取细胞总RNA,采用RT-PCR检测转染后各组ΔNp73α mRNA表达情况;采用Western blotting检测转染DC的ΔNp73α蛋白表达水平;在收获的各组DC细胞中分别加入PE-anti-主要组织相容性复合体（MHC-Ⅱ）、FITC-anti-CD40、PE-anti-CD80单克隆抗体,流式细胞仪检测CD40、CD80、MHC-Ⅱ表达情况;ELISA检测各组DC细胞白介素12（IL-12）分泌水平。结果 CD1a和CD83在培养第7天的表达水平均高于培养第5天（t=16.62、34.75,P＜0.001）。DC于第7天诱导成熟。质粒转染DC后,24 h可见特异性绿色荧光蛋白表达,48 h荧光最强,转染效率为38.2%,在48 h后,绿色荧光的表达逐渐减少。实验组在670 bp处可见阳性条带,为ΔNp73α mRNA阳性表达,而空白对照组和阴性对照组未检测到ΔNp73α mRNA的表达。在实验组中检测到ΔNp73α蛋白的表达,而正常对照组和阴性对照组中未检测到ΔNp73α蛋白的表达。各组CD40、CD80、MHC-Ⅱ表达水平比较,差异有统计学意义（F=12.68、41.18、38.95,P＜0.05）;其中实验组CD40、CD80、MHC-Ⅱ表达水平均高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。各组IL-12表达水平比较,差异有统计学意义（F=37.43,P＜0.001）;其中实验组IL-12表达水平高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。结论 从人脐带血中可成功分离DC;重组质粒pcDNA-HA/ΔNp73α转染DC促进其成熟,将有效提高DC的抗原提呈能力。     

重症肌无力患者外周血中IL-21的表达 及其与血清抗AChR抗体类别转换的关系

目的：探讨白细胞介素(IL)-21在重症肌无力(MG)发病中的作用及其对血清抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体类别转换的影响。方法：采集26例MG患者和18例健康对照者的外周血,应用ELISA技术检测外周血血清中抗AChR-IgG及其亚型IgG1,IgG2,IgG3的水平以及IL-21的浓度,利用RT-PCR技术检测外周血单个核细胞上IL-21R mRNA的表达水平,采用流式细胞学技术检测其中8例患者B细胞上IL-21R的表达水平,并分析它们之间的关系。结果：MG患者组血清中IL-21浓度（31.686±8.499 pg/mL）高于正常对照组（15.147±6.366 pg/mL）,差异具有统计学意义（P＜0.01）;MG患者组 PBMCs上IL-21R mRNA的表达（0.139±0.052）高于正常对照组(0.101±0.022),差异具有统计学意义（P＜0.05）;但二者在眼肌型和全身型亚组中差异均无统计学意义（P＞0.05）。8例MG患者B细胞上的IL-21R的表达水平(1.074±0.375)高于正常对照组(0.389±0.391),差异具有统计学意义（P＜0.05）。抗AChR-Ab阳性患者血清IL-21浓度与抗AChR-IgG水平呈正相关,相关系数为0.689（P＜0.05）,但其与IgG1,IgG2,IgG3亚型的水平均无相关性（P＞0.05）;PBMCs上IL-21R mRNA的表达与血清抗AChR-IgG及其IgG1,IgG2,IgG3亚型的水平均无相关性（P＞0.05）;B细胞上IL-21R的表达与抗AChR-IgG及IgG1,IgG3亚型水平呈正相关（分别为P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05）,而与抗AChR-IgG2的水平无相关性（P＞0.05）。结论：IL-21可能通过作用于B细胞上的IL-21R,影响MG患者血清中抗AChR抗体向IgG1和IgG3亚型转换,从而对MG发病起促进作用。     

生长激素释放肽对慢性心力衰竭大鼠心肌组织中白细胞介素-1β水平的影响

目的: 研究生长激素释放肽（GHRP）对慢性心衰(CHF)大鼠心肌组织中白细胞介素-1β（IL-1β）水平的影响,并探讨其相关机制。方法: 30只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组,每组10只。采用腹腔注射阿霉素法建立CHF模型,监测各组大鼠血流动力学变化,HE染色观察大鼠心肌组织病理改变,电镜观察大鼠心肌细胞形态变化;免疫组织化学法检测大鼠心肌中IL-1β免疫阳性细胞的形态变化和平均光密度,ELISA法检测心肌组织匀浆中IL-1β水平变化。结果: 与正常组比较,模型组大鼠心率、动脉压及舒张期左室内压最大变化速率显著降低（P<0.05）;治疗组各项指标比正常组轻度下降,差异无统计学意义（P>0.05）。模型组大鼠心肌细胞排列紊乱,有炎性细胞浸润;与正常组比较,治疗组大鼠心肌细胞形态变化不明显。模型组闰盘电子密度降低,许多区域出现线粒体肿胀、空泡变;治疗组线粒体结构正常,少数区域出现肿胀、空泡变。模型组免疫阳性细胞趋于肥大,有聚集分布现象,治疗组免疫阳性细胞肥大明显减轻,细胞趋于散在分布;模型组心肌组织中IL-1β表达的平均光密度明显高于正常组和治疗组（P<0.05）,治疗组IL-1β表达的平均光密度比正常组轻度增高,差异无统计学意义（P>0.05）。模型组心肌组织中IL-1β水平明显高于正常组和治疗组（P<0.05）;治疗组IL-1β水平比正常组轻度增高,差异无统计学意义（P>0.05）。结论: GHRP能降低CHF大鼠心肌组织中IL-1β表达,从而改善CHF时大鼠心肌细胞重塑。     

肾损伤因子-1在脂多糖诱导的HK-2细胞炎症反应中的作用

目的：分析肾损伤因子-1（KIM-1）在脂多糖（LPS）诱导HK-2细胞炎症模型中的表达并探讨其可能参与的生物学进程。方法：LPS刺激人肾小管上皮HK-2细胞诱导细胞炎症模型,CCK-8比色法分析LPS对HK-2细胞株体外生长的抑制作用;RT-PCR和Western blot实验分析KIM-1在正常组和LPS诱导组中的表达差异;设计siRNA靶向干扰KIM-1基因的表达,分析其对LPS诱导下HK-2细胞生长抑制作用的影响;Hoechst33342/PI双染法分析LPS诱导下对照组和siRNA干扰组细胞凋亡的影响。结果：50、100 μg/mL终浓度的LPS处理24 h和48 h后能抑制HK-2细胞增殖,与对照组比差异有统计学意义（P＜0.05）;KIM-1和IL-6基因和蛋白表达水平在LPS处理组中较对照组明显上调,且具有浓度依赖性,差异有统计学意义（P＜0.05）;LPS处理组中Hoechst33342染色阳性细胞比例明显高于对照组;siRNA转染组中KIM-1和IL-6基因和蛋白表达水平均明显低于siRNA-NC组,在LPS作用下siRNA转染组HK-2细胞增殖率明显高于siRNA-NC组,差异有统计学意义（P＜0.05）;在siRNA转染组中,Hoechst33342染色强度均低于siRNA-NC组,提示靶向KIM-1基因siRNA转染可以抑制LPS诱导的细胞凋亡作用。结论：LPS可以诱导HK-2细胞增殖受抑和凋亡,并且上调KIM-1和IL-6基因表达;KIM-1可能通过调节细胞凋亡和生长抑制过程参与细胞炎症反应。     

急性呼吸窘迫综合征患者白介素6及白介素8水平变化研究

目的 探讨白介素6（IL-6）及白介素8（IL-8）在急性呼吸窘迫综合征（ARDS）发病过程中的水平变化。方法 纳入西安医学院第一附属医院呼吸与危重症医学科2010年12月-2013年2月收治的50例ARDS患者,按预后分为治愈组（30例）和死亡组（20例）,检测患者入院第1天及治愈组出院前最后1次,死亡组死亡前最后1次血清IL-6及IL-8水平。选择同期50例健康体检者作为对照组,并检测对照组血清IL-6及IL-8水平。采用SPSS 19.0统计软件进行统计学处理。结果 ARDS组患者入院第1天血清IL-6及IL-8水平〔（2.1±1.8）、（639.6±98.3）ng/L〕明显高于对照组〔（1.1±0.2）、（415.9±56.8）ng/L〕,差异均有统计学意义（P＜0.01）。死亡组IL-6及IL-8血清水平〔（3.8±0.2）、（687.8±70.2）ng/L〕高于治愈组〔（1.8±0.4）、（493.9±71.7）ng/L〕及对照组,差异均有统计学意义（P＜0.01）;治愈组血清IL-6及IL-8水平均高于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论 ARDS死亡组患者血清IL-6和IL-8水平显著增高,推测IL-6和IL-8在ARDS的发病过程中发挥着重要作用。     

Th1、Th2、Th17 细胞变化及环境因素与习惯性流产的关系研究

目的 探讨Th1、Th2和Th17细胞的变化、转录因子T-bet、GATA-3和STAT-3 mRNA的表达及环境因素与习惯性流产的关系.方法 选取2011年6月～2012年9月河南省开封市妇产医院就诊的50例习惯性流产非孕期患者作为病例组（HA组）,同期某社区50例正常非孕妇女为健康对照组（NNP组）,分别抽取抗凝静脉血5 mL,应用聚多糖密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）,采用流式细胞仪检测三种亚群细胞的比例,酶联免疫吸附法（ELISA）检测IFN-γ、IL-4和IL-17的含量,实时荧光定量PCR检测T-bet 、GATA-3和STAT-3 mRNA的表达.同时进行环境因素问卷调查,比较两组各环境因素的差异.结果 ①HA组患者Th1、Th17细胞百分比[（11.66±3.45）％、（3.65±0.75）％]均明显高于NNP组[（7.05±1.83）％、（0.72±0.11）％],差异有统计学意义（P＜0.05）,Th2细胞的百分比[（1.15±0.33）％]低于NNP组[（3.59±0.62）％],差异有统计学意义（P＜0.05）.②HA组IFN-γ和IL-17在的含量分别为（1163.27±45.25）μg/L和（162.26±25.28）μg/L,明显高于NNP组[（736.25±44.32）、（57.45±11.26） μg/L],差异有统计学意义（P＜0.05）,而IL-4的含量[（118.45±26.75） μg/L]低于NNP组[（220.45±24.63）μg/L],差异有统计学意义（P＜0.05）.③与NNP组比较,HA组T-bet和STAT-3 mRNA表达均明显升高,而GATA-3 mRNA的表达明显降低,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.④HA组BMI≥24.0 kg/m2者所占比例为58％,明显高于NNP组（28％）,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 习惯性流产患者IFN-γ、IL-17的水平较高,而IL-4的水平较低,提示习惯性流产患者体内存在T细胞亚群分化失衡,且此种失衡可能与转录因子T-bet、GATA-3和STAT-3 mRNA的调控有关,同时肥胖可增加习惯性流产发生的可能性.