凝血酶诱导人肺成纤维细胞释放单核细胞趋化蛋白-1

目的：研究凝血酶对人肺成纤维细胞（HFL-1）释放单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的调节作用。方法：HFL-1分别培养于96孔培养板各孔内,不同浓度（0．001-300nmol／L）凝血酶诱导2、6、9、12、24h后,收集上清液并用ELISA法检测其MCP-1浓度。结果：凝血酶可诱导HFL-1释放MCP-1,其最高释放量是基础分泌量的近17倍。凝血酶诱导的HFL-1释放MCP-1呈浓度和时间相关性。结论：凝血酶可诱导HFL-1表达MCP-1。     

成纤维细胞活化蛋白在乳腺癌中表达的临床病理意义

目的：探讨成纤维细胞活化蛋白在乳腺癌中表达的临床病理意义。方法：应用免疫组织化学技术检测乳腺癌和正常乳腺组织中成纤维细胞活化蛋白的表达,分析蛋白表达与临床指标的相关性。结果：α-FAP在50例正常乳腺组织和良性增生性病变中的阳性表达率为10.0%（5/50）,在220例浸润性导管癌中的阳性表达率为31.8%（70/220）,两者比较有统计学意义（P〈0.05）。α-FAP阳性率与乳腺癌患者的年龄、肿块大小、淋巴结转移、分期无显著性相关,但与患者病死率有密切相关（P=0.01）。α-FAP表达可影响乳腺癌的生存,α-FAP阴性患者生存期显著长于α-FAP阳性患者（P=0.002）。结论：乳腺癌中α-FAP表达与乳腺癌的发生、演进、预后相关,α-FAP表达提示乳腺癌预后差。     

PKC介导凝血酶诱导人肺成纤维细胞单核细胞趋化蛋白-1的表达

摘要：目的研究蛋白激酶C（PKC）在凝血酶诱导人肺成纤维细胞(HLF-1)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达信号通路中的作
用。方法分别用几种不同类型的PKC抑制剂预处理HLF-1,再用凝血酶（10 nmol/L）刺激HLF-1,利用ELISA法检测上清液中
MCP-1的蛋白表达;提取细胞裂解液中总RNA并逆转录合成cDNA,利用实时荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA表达水平。结
果广谱型PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I 和RO-31-8220 可抑制凝血酶诱导的HLF-1 MCP-1 蛋白释放及mRNA表达,而
Ca2+依赖性PKC抑制剂Gö 6976则没有抑制效果。结论非Ca2+依赖性PKC介导凝血酶诱导HLF-1释放MCP-1。
     

乳腺癌特异基因1在乳腺癌表达的意义

目的 检测乳腺癌特异基因1(BCSG1)在乳腺癌中的表达，评价其表达与乳腺癌临床病理因素的相关性。方法 利用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR法)检测28例乳腺癌、7例乳腺增生症及5例乳腺纤维瘤中BCSG1的表达。结果 28例乳腺癌中有BCSG1表达12例(42．9％)，其中Ⅲ／Ⅳ期乳腺癌的表达率为69.2％(9／13例)，乳腺良性病变中BCSG1无一例表达。BCSG1的表达与乳腺癌分期密切相关(P=0．02)，与患者年龄、月经、肿瘤部位以及雌激素受体、孕激素受体、核增殖抗原、C—erbB2的表达等无相关性。结论 BCSG1可能是与肿瘤恶性进展有关的肿瘤标记物，是乳腺癌发生过程中的中晚期事件，为判定乳腺癌预后的新指标。     

乳腺癌间质成纤维细胞α-SMA表达的意义

目的 探讨乳腺癌间质成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-CSMA)在乳腺癌浸润机制中的作用以及与乳腺癌预后的关系.方法 通过免疫组化的方法检测α-SMA在乳腺癌及正常乳腺组织间质中的表达,结合5年随访资料分析α-SMA表达与浸润性导管癌预后的关系.结果 α-SMA在原位癌间质成纤维细胞和早期浸润性导管癌表达阳性率分别为12.5%(2/16),42.9%(9/21),两者差异有统计学意义(P＜0.05);α-SMA在浸润性导管癌间质与原位癌及早期浸润癌表达差异均有统计学意义(P＜0.01).在浸润性导管癌中,α-SMA在Ⅲ期、Ⅳ期表达阳性率高于Ⅰ期、Ⅱ期,差异有统计学意义(P＜0.05).对68例浸润性导管癌进行生存分析,α-SMA表达阴性组5年生存率高于α-SMA表达阳性组,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 α-SMA与乳腺癌浸润机制有一定关系,可能是影响乳腺癌预后的因素之一.     

特发性肺纤维化病人肺成纤维细胞过度表达单核细胞趋化蛋白-1

目的研究凝血酶对正常人肺成纤维细胞（normalhuman lung fibroblasts,N-LF）和特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）病人肺成纤维细胞（F-LF）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响。方法 N-LF和F-LF细胞分别培养于96孔培养板内,凝血酶诱导4和24h后,收集上清液并用ELISA方法检测MCP-1蛋白水平。结果凝血酶可诱导N-LF和F-LF细胞释放MCP-1,但F-LF细胞的MCP-1分泌水平远远高于N-LF细胞。结论人肺成纤维细胞在肺纤维化过程中过度合成和释放MCP-1,凝血酶可进一步促进其过度表达MCP-1。     

转化生长因子-β1对瘢痕成纤维细胞的调节及意义

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞中纤维粘连蛋白(FN)和肌动蛋白(α—actin)表达的诱导作用，探讨TGF-β1与瘢痕挛缩的关系。方法 采用细胞培养、免疫组化、图像分析技术，观察在不同含量TGF-β1的作用下，瘢痕成纤维细胞FN和α—actin的表达情况。结果 不同含量的TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达FN和α—actin的作用不同，分别以25～100μg／L和10～50μg／L为有效；与正常瘢痕组织相比，增生性瘢痕的成纤维细胞在表达FN和α—actin方面，对TGF-β1的反应更为敏感，差异均有显著性意义(P＜0．01)。结论 TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞FN和α—actin的表达增加可能与瘢痕挛缩有关。     

成纤维生长因子2对人乳腺癌细胞MCF7骨涎蛋白表达的影响

【目的】研究成纤维生长因子2（FGF2）对人乳腺癌细胞MCF7骨涎蛋白（BSP）表达的影响。【方法】将MCF7细胞随机分为5组：空白对照组、FGF2（10 ng/ml）刺激3、6、12和24 h组,分别应用实时荧光定量PCR和免疫印迹技术检测BSP mRNA和蛋白表达水平。【结果】各实验组均有BSP的mRNA表达,其表达水平在FGF2刺激后呈时间依赖性增加,6 h增强最为明显。BSP蛋白表达量也呈时间依赖性增加,12 h增强最为明显。【结论】乳腺癌细胞MCF7组成性表达BSP,在FGF2作用下BSP表达水平呈时间依赖性增强。     

缺氧诱导因子-1α及碱性成纤维细胞生长因子在人乳腺癌组织中的表达及其与血管生成的关系

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在人乳腺癌组织中的表达,以及两者与乳腺癌血管生成的关系及作用机制。方法:用免疫组化检测67例乳腺癌及39例乳腺纤维腺瘤组织中HIF-1α和bFGF的表达;用CD105标记血管内皮细胞并计数肿瘤微血管密度(MVD)。结果:HIF-1α及bFGF在乳腺癌组织中的表达阳性率分别为80.6%(54/67)、73.1%(49/67),与乳腺纤维腺瘤组织中的表达阳性率[0.0%(0/39)、35.9%(14/39)]比有统计学意义(P<0.001);乳腺癌组织中HIF-1α与bFGF的表达呈正相关(rs=0.314,P<0.01);乳腺癌淋巴结转移阳性组中HIF-1α及bFGF的表达与阴性组比无统计学意义;HIF-1α及bFGF阳性肿瘤组织中的MVD均值显著高于阴性组织,且MVD随着HIF-1α及bFGF表达的增强而增加;淋巴结转移阳性组中MVD高于阴性组(P<0.05)。结论:HIF-1α和bFGF在人乳腺癌组织中均高表达,且两者具有明显的相关性;HIF-1α与bFGF间可能通过相互作用共同调节乳腺癌血管生成。     

TGF-β1对人肾成纤维细胞热休克蛋白47表达的影响

目的 探讨TGF-β1在肾组织纤维化中的作用机制.方法 采用原代培养的人肾成纤维细胞,将细胞分为0、0.1、1、5ng/ml和10ng/ml不同浓度TGF-β1刺激培养组.应用免疫细胞化学方法检测TGF-β1作用下人肾成纤维细胞热休克蛋白47(heat shock protein 47,HSP47)表达,RT-PCR方法检测TGF-β1作用下人肾成纤维细胞HSP47和I型胶原mRNA表达.结果 (1)对照组(0ng/ml TGF-β1组)人肾成纤维细胞几乎无HSP47表达,在 TGF-β1刺激下,培养的人肾成纤维细胞HSP47表达增强.(2)在0.1～5ng/ml范围内,TGF-β1以剂量依赖方式促进培养的人肾间质成纤维细胞表达HSP47和I型胶原mRNA.结论 TGF-β1促进肾组织纤维化形成,可能部分是通过其促进肾间质成纤维细胞表达HSP47,进而增加胶原合成所致.     

釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞矿化相关蛋白的影响

目的通过检测釉基质蛋白（Enamel matrix proteins,EMPs）作用于体外培养牙周膜成纤维细胞,对细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连素、牙骨质附着蛋白（Cementum attachment protein,CAP）表达及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性的影响,探讨EMPs促进牙周组织再生的作用机制。方法酶消化法获得人牙周膜成纤维细胞（Human periodontal ligament fibroblast,hPDLF）用100mg/L的EMPs诱导,镜下逐日观察细胞形态变化,在3天、7天两个时间点利用免疫组化方法和图像分析技术检测和分析诱导条件作用后细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连素表达的影响,检测细胞牙骨质附着蛋白的表达。利用ALP法检测诱导后细胞成骨活性的变化。结果 100mg/L的EMPs对hPDLF具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连素的作用,随时间延长这种促进作用愈明显;EMPs作用hPDLF 3天即表达牙骨质附着蛋白;EMPs可促进hPDLF碱性磷酸酶活性的增强。结论 EMPs在一定浓度下可促使hPDLF向成骨、成牙骨质样细胞分化。     

TGF-β1对口腔鳞癌相关成纤维细胞FAP表达的影响

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对癌相关成纤维细胞(CAFs)中成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达的影响.方法 应用10 ng/ml的TGF-β1作用于CAFs细胞,设置正常成纤维细胞(NFs)和未经处理的CAFs细胞作为对照组,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中FAP的蛋白和mRNA表达情况.结果 FAP在NFs中几乎不表达,而在CAFs中FAP的mRNA和蛋白表达均增加.与NFs组和CAFs组相比,10 ng/ml的TGF-β1能够明显促进CAFs细胞分泌FAP,作用12、24 h后FAP mRNA和蛋白的相对表达量差异有统计学意义(P＜0.05).且随着作用时间的延长,FAP的表达持续升高,24 h较12 h表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TGF-β1能够促进CAFs中FAP的表达,在肿瘤上皮-间质交互作用中扮演着重要角色.     

乳腺癌特异基因1在乳腺癌表达和临床意义

目的探讨乳腺癌特异基因1（BCSG1）在乳腺癌中的表达,评价乳腺癌特异基因1与乳腺癌病理因素的相关性。方法回顾性分析2008年1月-2010年12月期间我院收治的乳腺癌30例患者、乳腺纤维瘤29例患者、乳腺增生27例患者,应用免疫组织化学SABC法检乳腺癌特异基因1在乳腺癌、乳腺纤维瘤、乳腺增生症的表达。观察乳腺癌患者与非乳腺癌患者乳腺癌特异基因1的比较,以及观察在乳腺癌患者中乳腺癌特异基因1与临床分期、淋巴结转移的关系。结果 BCSG1在乳腺癌组织内表达,阳性表达积分光密度值（IOD）为84.5±21.4,与乳腺纤维瘤、乳腺增生症IOD的32.4±15.5、24.4±9.4比较有统计学意义（P〈0.05）。BCSG1的表达与乳腺癌TNM分期、淋巴结转移密切相关,各组间比较有显著差异,有统计学意义（P〈0.05）。结论 BCSG1可能与乳腺癌恶性化有密切关系,可作为乳腺癌诊断的指标。     

重组人骨形成蛋白2在皮肤成纤维细胞中的表达

目的 构建人骨形成蛋白2(BMP2)的真核表达载体以探讨成纤维细胞表达BMP2的情况。方法 构建携带人BMP2基因的真核表达载体pRK5-hBMP2，并将其转染CHO细胞、NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞后，采用RT-PCR方法检测人BMP2在mRNA水平上的表达。结果 RT-PCR显示转染后的CHO细胞、NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞可以有效地转录BMP2 mRNA。结论 含有人BMP2 cDNA的重组质粒pRK5-hBMP2转染正常人皮肤成纤维细胞后可以有效地表达BMP2。     

单核细胞趋化蛋白1对人牙周膜细胞凋亡及凋亡调控蛋白Bax表达的影响

目的 探讨单核细胞趋化蛋白1(CCL2)对人牙周膜细胞凋亡和凋亡调控蛋白Bax表达的影响.方法 无菌条件下刮取因阻生或正畸需要拔除的牙齿根中1/3的牙周膜组织,采用组织块法进行体外原代培养,免疫荧光化学法检测CCL2的表达,人牙周膜成纤维细胞(HPDLCs)中加入不同浓度(5、10、20和50 ng/mL)的趋化因子CCL2,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组织化学染色法测定凋亡调控蛋白Bax的表达.结果 HPDLCs细胞呈CCL2阳性表达.与无血清对照组比较,不同浓度CCL2组的细胞凋亡率和Bax平均灰度值均显著降低(P值均<0.05),且随着CCL2浓度的增大呈下降趋势.结论 CCL2可能通过调节Bax在人HPDLCs中的表达,对抗无血清诱导的细胞凋亡,从而促进牙周膜细胞的生长.     

蛋白酶活化受体1介导人胚肺成纤维细胞释放单核细胞趋化蛋白-1

目的：研究蛋白酶活化受体1（PAR1）对凝血酶诱导人胚肺成纤维细胞（HFL-1）释放单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的调节作用。方法：HFL-1用PAR1激动剂凝血酶、PAR1活性肽SFLLR和反活性肽RLLFS进行诱导,并用PAR1阻断剂SCH79797进行阻断后用凝血酶和SFLLR刺激;用ELISA检测MCP-1浓度。结果：凝血酶及SFLLR可引起HFL-1释放MCP-1,而RLLFS不能引起MCP-1的释放增加;SCH79797可阻断凝血酶及SFLLR诱导HFL-1释放MCP-1。结论：PAR1介导凝血酶诱导的HFL-1细胞释放MCP-1。     

细胞直接共培养模型在大鼠肺成纤维细胞转分化中的应用

目的:探讨细胞直接共培养模型在大鼠肺成纤维细胞转分化研究中的应用价值。方法:分离SD大鼠肺巨噬细胞和成纤维细胞,采用ThinCertTM进行共培养,并分为4组:对照组加入无SiO2粉尘的培养基,SiO2低、中、高剂量处理组分别加入终质量浓度为25、50和100mg/L的SiO2粉尘悬液,培养24h后,收集成纤维细胞和培养上清,分别采用real-time PCR检测成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)及Ⅲ型胶原(COLⅢ)的mRNA水平,ELISA法测定培养上清中α-SMA、COLⅠ和COLⅢ蛋白。结果:SiO2处理组的α-SMA、COLⅠ和COLⅢmRNA和蛋白的表达水平明显高于对照组,且随SiO2质量浓度的升高,α-SMA、COLⅠ和COLⅢmRNA和蛋白的表达水平有升高的趋势(P<0.05)。结论:细胞直接共培养模型可用于大鼠肺成纤维细胞转分化的研究。     

碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-β_1在人胎儿内耳的定位表达

利用免疫组织化学技术对胎龄为９．５～２９周的１０例人胎儿内耳中碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）和转化生长因子－β（ＴＧＦ－β１）的表达情况进行研究。免疫组织化学染色采用ＬＳＡＢ方法并参考Ｓｈｉ等火棉胶包埋人颞骨切片免疫组化染色技术。结果发现：ｂＦＧＦ及ＴＧＦ－β１在全部胎儿的内耳中均有表达。ｂＦＧＦ在Ｃｏｒｔｉ＇ｓ器、前庭斑和壶腹嵴的感觉上皮有较强的表达，但在９．５周的Ｃｏｒｔｉ＇ｓ器始基一部细胞群染色相对较深而下部细胞群相对稍浅。分化成熟后的毛细胞及支持细胞均维持较强的表达。ＴＧＦ－β１在各…     

成纤维细胞中hEra-EGFP融合蛋白的表达定位

目的：研究人era基因在体外培养细胞中的定位。方法：将era基因克隆入带绿色荧光蛋白（EGFP）荧光标签的真核表达载体pSMEGFP,使其位于EGFP的N端，转染NIH3T3细胞，于转染后24和36h分别用荧光显微镜观察。结果：成功构建了EGFP－hEra融合蛋白的表达载体，转染细胞后可见融合蛋白位于细胞的胞质近核膜处。结论：用EGFP融合蛋白的方法初步将hEra定位于胞质内。     

碘乙酰胺诱导成纤维细胞水通道蛋白1的表达具有能量依赖性

目的旨在观察细胞的能量代谢状态是否会影响水通道蛋白1(AQP1)的表达。方法采用体外培养的Balb/c 3T3小鼠成纤维细胞株,用肌酸激酶抑制剂碘乙酰胺(IA)作用于该细胞,应用免疫印迹和免疫组化技术检测细胞在0、4、6 h时AQP1的表达。结果细胞与IA作用4 h后,AQP1表达开始增加,至6 h时AQP1表达大量增加,同时伴有细胞死亡;RT-PCR发现AQP1 mRNA显著增加,干扰线粒体功能的微管抑制剂及呼吸链细胞色素c氧化酶阻断剂同样诱导了AQP1的表达。结论 IA诱导Balb/c 3T3小鼠成纤维细胞AQP1的大量表达存在着转录前的调节,并且具有线粒体相关的能量依赖性。