骨髓干细胞的鉴定技术

背景：科研中常用到单一特定的干细胞,但如何证明所提取的细胞是必需细胞就要用到鉴定技术。 目的：介绍分离后的骨髓间充质干细胞和骨髓造血干细胞鉴定技术。 方法：由第一作者检索1998年1月至2010年12月PubMed数据及维普数据库有关骨髓间充质干细胞及骨髓造血干细胞的鉴定的文献。英文检索词为“Bone marrow stem cell,bone marrow hematopoietic stem cells ,Identification”;中文检索词为“骨髓造血干细胞;骨髓间充质干细胞;鉴定”。排除重复性研究,31篇进行归纳总结。 结果与结论：目前没有特定的某一种表面标记物能作为鉴定骨髓间充质干细胞的“金标准”,可从3方面对其进行检测：细胞形态和培养特性;细胞标记分子;多种分化潜能。一般认为细胞呈类纤维细胞形态、培养可以贴壁分裂增生具有表面CD44、CD29的细胞,而不表达CD34、CD45等阴性标记物,可初步判断为间充质干细胞。目前真正的造血干细胞表型尚难以确定。造血干细胞的检测主要方法有脾克隆形成法、外克隆形成法及流式细胞测量法等。     

细胞传代对骨髓间充质干细胞向神经干细胞分化的影响

BACKGROUND:It is unclear whether serial cell passage in vitro influences the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into neural stem cells. OBJECTIVE:To investigate the effect of cell passage on the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into neural stem cells. METHODS:Rat bone marrow mesenchymal stem cells were isolated and cultured by the whole bone marrow adherence method. Bone marrow mesenchymal stem cells at passages 3, 6, 9, 12 were incubated in serum-free medium. After culture for 7 and 14 days, cell biological characterization was observed and differenitaiton ability into neural stem cells was observed by detecting Nestin expression in cells using flow cytometry. Then, the cells were further induced to differentiate and cell multipotential differentiation capacity was detected by measurement of nerve enolase and glial acidic protein expression. RESULTS AND CONCLUSION:Under induction, bone marrow mesenchymal stem cells at different passages were all differentiated into Nestin-positive neural stem cells. However, there was a significant difference in differentiation proportion of cells at different passages (P < 0.05). Strongest differentiation ability was found in the passage 6 cells, with the Nestin expression up to (93.7±2.3)% at 7 days of induction and (96.2±1.8)% at 14 days of induction. The proportion of differentiated cells at passages 6 and 9 was signfiicantly higher than that at passages 3 and 12. Moreover, adherent cells were positive for nerve enolase and glial acidic protein. All these findings indicate that the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into neural stem cells is correlated with cell passage. Cells at lower or higher passages are both detrimental to cell differentiation.     

大鼠骨髓间质干细胞定向分化的心肌细胞间形成闰盘样结构

目的：建立大鼠骨髓间质干细胞（BMMSCs）定向分化为心肌细胞的模型，了解细胞间藕联情况。方法： 采用贴壁筛选法分离BMMSCs，体外扩增，5-氮胞苷(5-aza)定向诱导第2代BMMSCs分化为心肌细胞，取继续培养1周、2周、3周的细胞进行免疫细胞化学染色，鉴定横纹肌肌动蛋白和闰盘样结构的存在。结果： 5-aza处理后1周、2周、3周均可见横纹肌肌动蛋白染色阳性细胞。5-aza处理后1周及2周连结蛋白43在部分细胞上表达:呈核周散在分布的棕黄色颗粒，5-aza处理后3周连结蛋白43 在细胞密度大的区域呈核周聚集成线形分布的棕黄色颗粒，个别细胞间可见此结构,类似正常心肌的闰盘结构。结论： 骨髓间质干细胞分化为心肌细胞过程中，随培养时间延长及细胞密度增加逐渐形成闰盘样结构。     

自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化的疗效观察

治疗终末期肝病,原位肝移植是最理想的手段,然而供体短缺、手术损伤大、术后的免疫排斥反应以及费用高昂等问题限制了肝移植技术的发展和临床应用。自体骨髓干细胞移植操作简便、有效、侵入性小且并发症少,具有重要的临床意义。我科2009年9月至2011年1月共收治严重肝硬化失代偿期患者8例,经自体骨髓干细胞移植,治疗效果良好     

人骨髓间质干细胞体外扩增和向内皮细胞定向诱导分化的研究

目的：体外分离、扩增成人骨髓间质干细胞（MSCs）和向内皮细胞（ECs）定向诱导分化，开辟心血管组织工程种子细胞的新来源。 方法： 采用Percoll(1 073 g/L)从正常成人骨髓中分离出MSCs，纯化和扩增后流式细胞仪鉴定其纯度；用血管内皮生长因子(VEGF)诱导MSCs向ECs分化，Ⅷ因子(vWF)免疫组化和透射电镜(TEM)鉴定细胞性质。 结果： 5.0×105个MSCs在体外扩增15代后，获得8.0×1012个MSCs，扩增了约1.6×107倍；MSCs在加入VEGF诱导培养大约14-21 d，80%-90%的诱导细胞对Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应；TEM可观察到胞浆内有Weible-palade小体，证实为ECs。 结论： 成人骨髓MSCs在体外具有定向诱导分化为ECs的潜能，这为心脏组织工程瓣体外构建, 尤其是在小儿先天性心脏病组织工程研究中种子细胞的来源提供了可能性。     

在复合成分培养基中骨髓间充质干细胞的诱导成骨

背景：研究显示骨质疏松多伴有成骨细胞的减少,成骨细胞替代疗法成为治疗骨质疏松症的新靶点。 目的：观察人骨髓间充质干细胞在含地塞米松、维生素C及β-甘油磷酸钠培养基中向成骨细胞分化的能力。 方法：采用人淋巴细胞分离液从成人骨髓血中分离纯化间充质干细胞,应用流式细胞仪检测其表面标志物的活性,透射电镜观察骨髓间充质干细胞的超微结构;将骨髓间充质干细胞在含有地塞米松、维生素C与β-甘油磷酸钠的成骨诱导培养基中诱导分化, RT-PCR检测骨髓间充质干细胞成骨诱导后骨形态发生蛋白2 mRNA的表达情况。 结果与结论：培养2周后可见细胞呈成纤维状生长,强表达CD44,CD29,不表达CD34,CD45,具有向成骨细胞诱导分化的潜能,茜素红及碱性磷酸酶染色阳性,骨形态发生蛋白2 mRNA表达阳性,说明人骨髓间充质干细胞在含地塞米松、维生素C及β-甘油磷酸钠培养基中可向成骨细胞诱导分化,具有治疗骨质疏松症的潜能。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

内源骨髓间充质干细胞在心肌梗死后的迁移、归巢与分化

背景：目前的大多数研究主要集中在移植外源干细胞来源的心肌细胞对受损心肌进行修复与再生,而有关内源干细胞迁移、归巢及分化的研究比较少。 目的：观察内源骨髓间充质干细胞在心肌梗死后迁移、归巢以及分化情况。 方法：成年雌性C57BL/6小鼠随机分为2组：心肌梗死组(n=4)小鼠建立骨髓重建模型,于骨髓重建4周后行冠状动脉左前降支结扎术建立急性心肌梗死模型,1周后处死;对照组(n=3)小鼠进行单纯骨髓重建,于骨髓重建4周后处死。取心脏组织,采用免疫荧光染色检测心肌特异性蛋白Troponin Ⅰ的表达,观察心肌梗死后表达绿色荧光蛋白的骨髓间充质干细胞在心肌组织中的分布、分化情况。 结果与结论：骨髓重建小鼠心肌梗死组与对照组均可见到发绿色荧光的骨髓间充质干细胞,心肌梗死组骨髓间充质干细胞数量比对照组明显增多。两组切片均可见部分骨髓间充质干细胞呈GFP、Troponin Ⅰ和PI三阳性,心肌梗死组三阳性的细胞比对照组明显增多,表明心肌梗死后内源骨髓间充质干细胞能迁移、归巢到受损的心肌组织并获得心肌分化表型。     

颅骨来源骨髓基质干细胞的分离培养方法

背景：从小鼠颅骨提取的一类骨髓基质干细胞称为PA6细胞,研究者发现当PA6细胞与其他干细胞共培养时可向神经细胞分化,此特性可被应用于神经损伤部位的修复。所以,PA6细胞越来越受到研究者的关注,但目前国内对类似骨髓基质干细胞PA6的提取方法鲜见报道。 目的：分离培养SD大鼠颅骨来源的骨髓基质干细胞,体外观察细胞形态并免疫荧光鉴定。 方法：无菌条件下,取新生的SD大鼠颅骨将其剪碎,用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液冲洗颅骨碎片,反复吹打制成单细胞悬液,将其置于培养瓶中培养,多次换液培养纯化细胞。取第2代生长均一的细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,并用免疫荧光染色法进行细胞表面标记鉴定。 结果与结论：原代细胞培养24 h后,骨髓基质干细胞开始贴壁;3 d后细胞数量增多,形态呈不规则形、多角形、三角形和扁平形;细胞传代后,形态基本均一,细胞排列呈放射状和束状,贴壁能力较强,部分细胞呈聚集生长,增殖速度比原代有明显的加快。免疫荧光染色检测CD105、CD73、CD44、CD90表达呈阳性,CD45、CD34、CD14和HLA-DR表达呈阴性,证实了提取的细胞为骨髓基质干细胞。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

芒果苷对缺氧损伤骨髓间充质干细胞的保护作用

背景：研究表明骨髓间充质干细胞移植在临床治疗方面具有广阔的应用前景。然而,移植细胞的死亡限制了组织再生,寻找新的抗自由基和保护骨髓间充质干细胞的药物有着重要意义。 目的：研究芒果苷对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞缺氧损伤的保护作用。 方法：采用氯化钴(CoCl2)建立体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞缺氧损伤模型。将细胞分为正常对照组、氯化钴缺氧损伤组、氯化钴加芒果苷20,40,80,160 µmol/L组。缺氧损伤12,24 h检测各组骨髓间充质干细胞培养上清液中超氧化物歧化酶、丙二醛、过氧化氢酶水平。缺氧损伤3,6,12,24 h检测各组骨髓间充质干细胞内活性氧变化。 结果与结论：芒果苷能明显提高缺氧损伤的骨髓间充质干细胞的存活率,提高细胞内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性,降低细胞内丙二醛、活性氧水平,有效保护缺氧损伤下的骨髓间充质干细胞。芒果苷具有较强的抗氧化能力及缺氧保护作用,可明显减轻骨髓间充质干细胞的氧化应激损伤。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

骨关节炎患者骨髓间充质干细胞的功能状态与病情进展

背景：骨髓间充质干细胞对骨和软骨在细胞水平的发育和再生至关重要,其数量缺失和功能受损被广泛认为是骨关节炎病因之一。 目的：探讨骨关节炎患者骨髓间充质干细胞功能状态与病情进展的关系。 方法：2013年7月至2014年10月间收集3组病例,每组10例,分别为对照组、轻度骨关节炎患者组、重度骨关节炎患者组。获取3组患者股骨或胫骨骨髓5 mL分离培养骨髓间充质干细胞,培养至3代时采用CCK-8法检测各组患者骨髓间充质干细胞的增殖能力,成软骨诱导14 d后行甲苯胺蓝染色鉴定,Real time PCR法检测对照组诱导后软骨细胞特征基因Aggrecan、Col2A1的表达。 结果与结论：骨髓间充质干细胞体外培养后贴壁生长,胞浆含有较大的颗粒,核卵圆形,细胞呈多角形、梭形,有多个大小不一的突起,细胞分裂相多见。对照组增殖能力最强,重度骨关节炎患者组增殖能力最弱,但均在培养1周后进入平台期。成软骨诱导14 d后细胞呈多角形、类圆形改变,紫红色异染颗粒分布于胞浆外围。对照组诱导后软骨细胞特征基因Aggrecan、Col2A1有高表达趋势。结果表明骨关节炎患者骨髓间充质干细胞功能状态与病情严重程度成负相关,其功能状态影响骨关节炎患者的病情进展。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

移植骨髓间充质干细胞肝癌大鼠细胞凋亡及炎症因子的动态变化

BACKGROUND:Bone marrow mesenchymal stem cell transplantation has not been thoroughly reported on its effects on apoptosis in hepatoma carcinoma cells and inflammatory factor level. OBJECTIVE:To investigate the effect of rat bone marrow mesenchymal stem cells on dynamic change of inflammatory factors and cell apoptosis during hepatocarcinogenesis. METHODS:Sixty healthy Sprague-Dawley rats were divided randomly into healthy group (n=30), control group (n=30) and transplantation group (n=30). Healthy group was given ordinary feed and normal water, while other groups were given diethylnitrosamine solution in drinking water to induce liver cancer models. Then, rats in the transplantation group were subjected to bone marrow mesenchymal stem cell transplantation via the tail vein. Two weeks after cell transplantation, CXCL5, interleukin-8 and interleukin-6 levels were tested by ELISA, mRNA level of hepatocyte nuclear factor 1α detected by RT-PCR, expression of Bcl-2 and Bax in liver tissue measured by immunohistochemical method, and liver cancer cell apoptosis index detected by TUNEL technique. RESULTS AND CONCLUSION:After modeling, the expressions of CXCL5, interleukin-8 and interleukin-6 in the control group were significantly higher than those in the healthy group (P < 0.05), while these indexes were reduced significantly after bone marrow mesenchymal stem cell transplantation (P < 0.05) and close to the normal levels (P > 0.05). Bone marrow mesenchymal stem cell transplantation significantly up-regulated the mRNA level of hepatocyte nuclear factor 1α in the liver tissue that was decreased obviously after modeling (P < 0.05). In addition, the expression of Bcl-2 was reduced, while the expression of Bax and the apoptosis index increased significantly in the transplantation group compared with the control group (P < 0.05). These findings indicate that bone marrow mesenchymal stem cell transplantation contributes to hepatocyte differentiation and regeneration in liver cancer rats by reducing serum inflammatory factor levels and promoting apoptosis in hepatoma carcinoma cells.     

神经干细胞联合胶原蛋白支架移植脊髓损伤大鼠脑细胞的凋亡

背景：目前的研究表明,从胚胎大鼠大脑皮质分离的神经干细胞在胶原蛋白凝胶中可增殖并分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。 目的：观察神经干细胞联合胶原蛋白支架移植对脊髓损伤后鼠大脑神经细胞凋亡的影响。 方法：取45只SD大鼠制作脊髓半切损伤模型,随机分为3组,造模1周后,细胞移植组大鼠运动皮质后部在脊髓损伤部位注入同种异体神经干细胞悬液,联合组在脊髓损伤部位注入同种异体神经干细胞结合胶原蛋白悬液,模型组不植入任何物质。 结果与结论：移植后1-8周,3组大鼠肢体运动功能均有不同程度恢复,且联合组移植后8周BBB运动评分明显高于其他两组(P < 0.05)。移植后1周苏木精-伊红染色显示3组均可见少量凋亡细胞及Bcl-2抗凋亡蛋白阳性细胞,大量Bax阳性细胞;随时间的推移,3组Bax凋亡蛋白阳性细胞、Bcl-2抗凋亡蛋白阳性细胞逐渐减少,并且移植后8周联合组、细胞移植组Bax阳性细胞明显低于模型组(P < 0.05),Bcl-2抗凋亡蛋白阳性细胞高于模型组(P < 0.05),此时3组均无凋亡细胞。表明神经干细胞联合胶原蛋白支架移植可抑制脊髓损伤后鼠大脑神经细胞的凋亡,促进脊髓神经功能的恢复。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程全文链接：     

骨髓间充质干细胞移植联合依达拉奉抑制脑梗死后的神经元凋亡

背景：国内外多项研究证实骨髓间充质干细胞移植对脑梗死组织具有一定的神经保护作用。依达拉奉是一种新型强效小分子羟自由基清除剂,可通过清除脑梗死产生的自由基,抑制神经细胞损伤,从而起到脑保护作用。 目的：观察骨髓间充质干细胞移植联合依达拉奉对大鼠脑梗死组织水通道蛋白4、Bcl-2、脑源性神经营养因子表达的影响。 方法：选取Wistar大鼠80只,建立右侧大脑中动脉闭塞模型,随机分为对照组、骨髓间充质干细胞组、依达拉奉组和联合治疗组。建模6 h后通过尾静脉分别注入移植液,对照组注射培养液,骨髓间充质干细胞组注射骨髓间充质干细胞,依达拉奉组给予依达拉奉注射液,联合组同时注入骨髓间充质干细胞和依达拉奉注射液。分别在伤后72 h将大鼠麻醉后断头取脑,应用RT-PCR、Western Blot法检测脑组织中水通道蛋白4、Bcl-2、脑源性神经营养因子基因表达和蛋白合成变化。伤后12,24,36 h取大鼠脑组织以TUNEL法测定细胞凋亡情况。 结果与结论：RT-PCR、Western Blot结果显示,在骨髓间充质干细胞与依达拉奉联合治疗组中,Bcl-2、脑源性神经营养因子的表达明显高于骨髓间充质干细胞组、依达拉奉组及对照组(P < 0.05);而水通道蛋白4的表达低于其余各组(P < 0.05)。TUNEL测定结果显示,联合治疗组中免疫组化呈棕色的凋亡细胞明显少于单独治疗组及对照组。提示骨髓间充质干细胞移植与依达拉奉联合应用治疗大鼠脑梗死,可进一步促进损伤局部脑源性神经营养因子及Bcl-2的表达,对神经细胞凋亡具有明显的抑制作用,同时可下调水通道蛋白4水平,减轻脑水肿程度,二者联合运用的效果明显优于单独治疗组。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

骨髓间充质干细胞移植联合依达拉奉治疗大鼠脑梗死

背景：依达拉奉具有清除自由基和抑制脂质过氧化反应的作用,能够改善中枢神经系统损伤区的微环境。 目的：观察骨髓间充质干细胞移植联合依达拉奉治疗大鼠脑梗死的效果。 方法：采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型,随机分为3组,对照组经尾静脉注射细胞培养液,骨髓间充质干细胞组经尾静脉注射2.0×109 L^-1的骨髓间充质干细胞悬液,依达拉奉+骨髓间充质干细胞组经尾静脉注射2.0×109 L^-1骨髓间充质干细胞悬液同时经腹腔注射依达拉奉3 mg/(kg•d),连续5 d。移植后行神经功能缺损评分,应用RT-PCR测定脑梗死组织水通道蛋白9及水通道蛋白4 mRNA的表达,并经全脑冷冻切片苏木精-伊红染色及荧光显微镜观察细胞自然存活及分布情况。 结果与结论：移植后24 h,3 d各组间神经功能缺损评分差异无显著性意义(P > 0.05),移植后2周,依达拉奉+骨髓间充质干细胞组大鼠神经功能缺损评分低于骨髓间充质干细胞组及对照组(P < 0.05-0.01)。骨髓间充质干细胞组大鼠脑梗死周围组织水通道蛋白9 及水通道蛋白4 mRNA的表达高于依达拉奉+骨髓间充质干细胞组,却低于对照组(P < 0.05)。依达拉奉+骨髓间充质干细胞组CM-Dil阳性细胞和神经元数量多于骨髓间充质干细胞组及对照组(P < 0.05)。提示移植的骨髓间充质干细胞可移行至大鼠脑梗死灶周围并存活,分化为神经元样细胞。联合注射用依达拉奉治疗可明显改善脑梗死大鼠的神经学功能。     

基质细胞衍生因子1预处理抑制大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡

背景：研究发现基质细胞衍生因子1除参与趋化干细胞定向迁移途径,还具有抗凋亡作用。 目的：观察基质细胞衍生因子1预处理后对骨髓间充质干细胞凋亡的影响。 方法：以不同浓度H₂O₂诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡,取最适宜浓度100 μmol/L用于实验。不同质量浓度基质细胞衍生因子1干预100 μmol/L H₂O₂诱导后的大鼠骨髓间充质干细胞,选择0.2 mg/L最佳保护质量浓度用于实验。取第3代大鼠骨髓间充质干细胞,随机分组：正常对照组不进行任何处理;损伤组在培养液中加入H₂O₂作用24 h;基质细胞衍生因子1预处理组于H₂O₂损伤细胞前6 h加入基质细胞衍生因子1;基质细胞衍生因子1+AMD3100(基质细胞衍生因子1受体CXCR4的阻断剂)组于H₂O₂细胞损伤前6 h加入基质细胞衍生因子1与AMD3100共孵。 结果与结论：H2O2能体外模拟缺血缺氧环境诱导骨髓间充质干细胞凋亡,且作用呈剂量依赖性。与损伤组比较,加入基质细胞衍生因子1预处理后细胞凋亡明显减轻(P < 0.01),细胞E2F6基因表达增强(P < 0.05),E2F1基因表达减少(P < 0.05),线粒体细胞色素C转位减少(P < 0.05),Caspase-3活性降低(P < 0.05),AMD3100可阻断基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞的保护作用。提示基质细胞衍生因子1可能通过增强E2F6基因,负性调控E2F1基因抑制线粒体损伤导致的骨髓间充质干细胞凋亡。     

动员自身骨髓干细胞与缺血再灌注肾损伤细胞的凋亡与增殖

背景：骨髓干细胞具有多项分化潜能,可分化为肾组织固有细胞、修复损伤肾组织。 目的：探讨粒细胞集落刺激因子联合干细胞因子动员自身骨髓干细胞对大鼠缺血再灌注肾损伤细胞凋亡与增殖的影响。 方法：160只大鼠尿筛阴性后随机均分为正常对照组、模型组、细胞因子治疗组、治疗对照组。模型组和细胞因子治疗组建立大鼠单侧肾脏缺血再灌注损伤模型;细胞因子治疗组和治疗对照组于造模后24 h开始皮下注射粒细胞集落刺激因子(50 μg/kg,1次/d)和干细胞因子(200 μg/kg,1次/d),连续5 d;模型组不给药,正常对照组不予干预。TUNEL法检测细胞凋亡;免疫组织化学法(SABC法)检测肾组织CD34+细胞、Caspase-3、Bcl-2、细胞增殖核抗原表达情况。 结果与结论：细胞因子治疗组肾组织内CD34+细胞较正常对照组、模型组明显增多(P < 0.05)。不同时间点模型组和细胞因子治疗组凋亡指数、Capase-3表达量均高于正常对照组和治疗对照组(P < 0.05),且模型组均显著高于细胞因子治疗组(P < 0.05)。不同时间点模型组和细胞因子治疗组Bcl-2阳性表达细胞均高于正常对照组和治疗对照组(P < 0.05)。细胞因子治疗组显著高于模型组,然后随着时间推移Bcl-2表达量明显减少(P < 0.05)。模型组和细胞因子治疗组均可见细胞增殖核抗原阳性表达细胞;模型组于第24天增殖指数达峰值,后逐渐下降。细胞因子治疗组在第10天即达到高峰,持续至第17天,然后逐渐下降。说明粒细胞集落刺激因子联合干细胞因子动员自身骨髓干细胞可以促进肾缺血再灌注损伤后肾小管上皮细胞的增殖和减少细胞凋亡,从而有利于肾小管损伤的恢复。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

病毒转染骨髓基质干细胞在不同移植点对颅脑损伤的保护

BACKGROUND:Bone marrow stromal cells can differentiate into nerve cells to promote nerve tissue repair, but the exact mechanism has not been fully elucidated. OBJECTIVE:To explore the influence of adenovirus-mediated β nerve growth factor transfection on bone marrow stromal stem cell transplantation fighting against brain injury in rats. METHODS:(1) Rat bone marrow stromal stem cells were cultured in vitro, transfected with the adenovirus-mediated β nerve growth factor and directionally induced using β-mercaptoethanol. (2) A total of 210 Sprague-Dawley rats were randomized into induction+tranfection group, induction+non-transfection group, induction+medium group, model group, and sham group (n=42 per group). Rat skull injury models were made, and given corresponding treatments at different time points (12, 24, 36, 48, 72 hours). Neurological function of rats was evaluated based on neurological severity scores on the day that the rats were given transplantation, and 1, 2, 3, 4 weeks after transplantation. (3) Another 75 Sprague-Dawley rats were also divided into five groups (n=15 per group) as above, followed by model establishment and corresponding treatments at 24 hours after modeling. Neurological severity scores were recorded at the same day, 1, 2, 3, 4 weeks after transplantation. Five rats from each group were sacrificed to detect levels of malondialdehyde and superoxide dismutase in the rat brain at the same day, 2 and 4 weeks after transplantation, respectively. RESULTS AND CONCLUSION:If the cells were transplanted within 48 hours after modeling, the neurological severity scores in the induction+transfection group decreased significantly compared with the induction+non-transfection group and model group at 1 and 2 weeks after transplantation (P < 0.05). If the cells were transplanted at different time, the neurological severity scores in the induction+transfection group were decreased significantly compared with the induction+non-transfection group and model group at 3 and 4 weeks after transplantation (P < 0.05). If the cells were transplanted within 24 hours after modeling, the neurological severity scores in the induction+transfection group decreased significantly compared with the model group at 1 week after transplantation (P < 0.05), and the neurological severity scores in the induction+transfection group and induction+non-transfection group both were significantly lower than those in the model group (P < 0.05). Two weeks after cell transplantation, the level of superoxide dismutase was significantly higher in the induction+transfection group than the induction+medium group and model group (P < 0.05), but the level of malondialdehyde was significantly lower (P < 0.05). All these findings indicate that adenovirus-mediated β nerve growth factor transfer plays a certain neuroprotective role in bone marrow stromal stem cell transplantation for brain injury in rats.     

脂肪间充质干细胞移植治疗1型糖尿病模型大鼠的作用

背景:干细胞移植是1型糖尿病比较有前景的治疗方法,脂肪间充质干细胞是继骨髓间充质干细胞后的又一研究热点。目的:观察脂肪间充质干细胞移植对1型糖尿病大鼠的治疗作用。方法:将45只SD大鼠随机分为正常组、模型组和细胞移植组,后2组采用链脲菌素腹腔注射建立1型糖尿病模型。造模后7 d,正常组腹腔静脉注射生理盐水,模型组腹腔静脉注射无血清的DMEM培养液,细胞移植组腹腔静脉注射脂肪间充质干细胞悬液。移植后2周,监测各组大鼠体质量、血糖水平,ELISA法检测各组大鼠胰岛素分泌量,RT-PCR检测胰腺组织PDX-1 m RNA的表达。结果与结论:(1)移植前细胞移植组与模型组的体质量均低于正常组,移植后2周细胞移植组大鼠体质量逐渐增加,而模型组的体质量持续下降;(2)与正常组比较,模型组大鼠空腹血糖维持在较高水平(P<0.05),与模型组相比,细胞移植组大鼠空腹血糖水平显著下降(P<0.05);(3)与正常组比较,模型组胰岛素水平明显降低(P<0.05),与模型组比较,细胞移植组胰岛素水平则显著增加(P<0.05);(4)正常组胰腺组织PDX-1 mR NA表达最高,模型组最低,各组间比较差异有显著性意义(P<0.05);(5)结果表明,脂肪间充质干细胞移植促进胰岛组织PDX-1表达,改善了大鼠的高血糖状态。     

骨髓间充质干细胞定向趋化及骨修复中基质细胞衍生因子1的作用

背景：骨折愈合与聚集在骨折端的骨髓间充质干细胞的数量及功能密切相关,基质细胞衍生因子1可增强骨髓间充质干细胞的趋化功能。 目的：采用携带绿色荧光蛋白转基因骨髓间充质干细胞的骨髓嵌合体小鼠,制作左胫骨骨折模型,观察基质细胞衍生因子1对骨髓间充质细胞定向迁移的影响及其骨折修复中的作用,并初步探讨其作用机制。 方法：利用密度梯度离心法从携带绿色荧光蛋白转基因小鼠C57BL的骨髓内分离培养出携带绿色荧光蛋白的骨髓间充质干细胞;将经X射线照射后携带绿色荧光蛋白转基因的骨髓间充质干细胞与雄性小鼠的骨髓非贴壁细胞联合移植,最后建立起稳定的骨髓嵌合型小鼠模型,再建立左胫骨骨折模型。建模后分别用基质细胞衍生因子1和基质细胞衍生因子1抗体干预,并设置对照组。 结果与结论：建模后第1,3,7,14天各相应时相点骨折端的骨髓间充质干细胞数量,建模后第14,21天各相应时相点的骨痂量,建模后第28天抗折力,均为基质细胞衍生因子1组>对照组>基质细胞衍生因子1抗体组(P < 0.05);在建模后第28天基质细胞衍生因子1组骨痂量减少(P < 0.05),骨小梁融合成片,部分骨髓腔再通,对照组和基质细胞衍生因子1抗体组髓腔未通。证实,基质细胞衍生因子1 可促进骨髓间充质干细胞向骨折端迁移,具有促进骨折愈合的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子基因真核表达载体转染骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病

BACKGROUND:Existing studies have shown that bone marrow mesenchymal stem cells can significantly improve islet function in diabetic rats to decrease excessively high blood glucose level, which may be related to the enhancement of differentiation ability of autologou pancreatic stem cells. OBJECTIVE:To observe the therapeutic efficacy of basic fibroblast growth factor gene eukaryotic expression vector (PEGFP-C3-BFGF) transfection of bone marrow mesenchymal stem cells in diabetic rats. METHODS:Recombinant adenovirus (Ad.aFGF) mediated PEGFP-C3-BFGF was transfected into bone marrow mesenchymal stem cells, and PEGFP-C3-BFGF expression was observed using fluorescence microscopy. Eighty Sprague-Dawley rats were randomly divided into normal control group, diabetes group, transplantation group, gene transfection group, with 20 rats in each group. After modeling, rats in different groups were given portal vein injection of normal saline, PBS, 1 mL of bone marrow mesenchymal stem cell suspension, and 1 mL of PEGFP-C3-BFGF-transfected bone marrow mesenchymal stem cell suspension. RT-PCR method was used to detect mRNA expression of matrix metalloproteinases in pancreatic tissue of rats in each group. Blood glucose levels of rats were detected at 24 hours, 3, 7, 14, 21 days after transplantation. ELISA method was used to detect plasma insulin levels in rats. Pathological changes of the pancreas were observed using hematoxylin-eosin staining. RESULTS AND CONCLUSION:Under the fluorescence microscope, PEGFP-C3-BFGF transfected into cells after 48 hours showed significant specific red fluorescence. Two weeks after transplantation, matrix metalloproteinases mRNA expression was significantly increased in the diabetes group compared with the control group (P < 0.05), while it was decreased in the transplantation and gene transfection groups compared with the diabetes group (P < 0.05). After transplantation, the blood glucose levels in rats were ranked as follows: control group < gene transfection group < transplantation group < diabetes group (P < 0.05), and the plasma insulin levels in rats ranked as follows: control group > gene transfection group > transplantation group > diabetes group (P < 0.05). Pathological findings of the pancreas showed that the transplantation group was superior to the diabetes group, but inferior to the gene transfection group that was similar to the control group. All these findings indicate that PEGFP-C3-BFGF-transfected bone marrow mesenchymal stem cell transplantation can improve blood glucose levels and stimulate insulin secretion in diabetic rats, which may improve the severity of diabetes mellitus by decreasing the mRNA expression of matrix metalloproteinases.