牵张应力对人黄韧带细胞成骨分化的影响

目的探讨牵张应力在胸椎黄韧带骨化症中的作用。方法牵张应力作用于胸椎黄韧带细胞后,通过PNPP法、Real-timePCR等实验方法,观察牵张应力对黄韧带细胞成骨分化的影响。结果牵张应力可以促进黄韧带细胞碱性磷酸酶活性增强,骨钙素的表达增高。结论牵张应力可促进胸椎黄韧带骨化症黄韧带细胞向成骨方向分化。     

人黄韧带细胞骨化发生过程中的自噬

文题释义： 黄韧带骨化症：是由于脊柱黄韧带发生骨向分化而形成的一种韧带骨化疾病,常导致椎管狭窄,造成脊髓受压,并产生不可逆损害,出现肢体感觉障碍,严重的将导致瘫痪。目前对黄韧带骨化病因学研究取得了一定的进展,但其具体的发病机制仍未完全明确。 自噬：因外界或自身环境的改变,细胞器和胞内蛋白通过溶酶体进行分解消化并重新利用,从而达到适应外界环境、维持细胞内环境稳定的过程,是真核细胞特有一种表现形式。 MAPK信号通路：是生物体内重要的信号转导系统之一,它可以被物理应激、炎性细胞因子、生长因子以及细胞复合物等一系列细胞外信号或刺激激活,从而参与介导细胞生长、发育、分裂以及分化等多种生理及病理过程。在哺乳动物细胞中MAPK信号通路的主要信号分子包括ERK1/2、JNK以及P38等。 背景：黄韧带骨化发生的病理机制尚不清楚,临床上无有效的药物或非手术治疗的方法。目前研究发现,骨桥蛋白与自噬在成骨过程中均发挥重要作用,二者在黄韧带骨化中的作用尚不清楚。 目的：通过对骨桥蛋白和自噬在黄韧带骨化发生机制的研究,尝试找出药物治疗的潜在作用靶点。 方法：①黄韧带骨化病、胸椎骨折或单纯腰椎间盘突出症患者行后路全椎板切除减压获取黄韧带,将标本分为骨化组和非骨化组,每组各取8例标本,通过免疫组化染色观察骨桥蛋白、骨钙素及自噬指标Beclin-1、LC3、P62的表达;②通过组织块贴壁法进行黄韧带细胞的分离培养,并用不同质量浓度的骨桥蛋白干预不同时间来构建体外黄韧带细胞骨化模型;③非骨化组黄韧带细胞用不同浓度的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤干预后,再用100 μg/L骨桥蛋白诱导,应用Western blot检测骨化指标碱性磷酸酶、骨钙素的表达变化;④用100 μg/L骨桥蛋白干预非骨化黄韧带细胞,并在0,15,30,60,120 min终止骨化诱导过程,应用Western blot检测MAPK信号通路中重要分子ERK1/2、JNK、P38的磷酸化情况;⑤非骨化组黄韧带细胞用ERK1/2特异的磷酸化阻滞剂U0126阻断ERK1/2通路磷酸化后,再用100 μg/L骨桥蛋白诱导,应用Western blot检测碱性磷酸酶以及骨钙素的表达变化。 结果与结论：①骨化黄韧带和非骨化黄韧带组织骨钙素、骨桥蛋白的免疫组化均呈阳性表达;骨化黄韧带组织中Beclin-1呈阳性表达,而LC3及P62未见明显阳性结果;非黄韧带骨化组织中Beclin-1、LC3、P62均呈阳性表达;②与非骨化组比较,骨化组黄韧带细胞中碱性磷酸酶和骨钙素的表达增加;骨桥蛋白可诱导黄韧带骨化,骨桥蛋白的作用具有浓度相关性和时间相关性;③自噬强弱与骨化程度呈负相关,即自噬越明显,骨化作用越弱;④骨桥蛋白能使MAPK信号通路磷酸化,并具有一定的时间相关性;抑制MAPK磷酸化过程后,骨桥蛋白仍然能够诱导黄韧带细胞的骨化;⑤结果表明,黄韧带骨化发生过程中,信号通路上ERK1/2、骨桥蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶分子的上下游关系为：ERK1/2→骨桥蛋白→骨钙素/碱性磷酸酶。 ORCID: 0000-0003-0008-9802(许国峰) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

黄韧带的弹性改变和钙化

黄韧带组织成分的70%～80%为弹性纤维,因此赋予脊柱以良好的弹性.在衰老、损伤、异常含量的微量元素及遗传等因素作用下,黄韧带中出现弹性纤维变性减少,胶原纤维增多,钙盐结晶沉积,以致骨化.     

胸椎黄韧带骨化的影像学研究及其临床意义

目的:探讨胸椎黄韧带骨化的影像学表现,评价X线、CT和MRI的诊断价值.方法:回顾性分析23例经手术病理证实的胸椎黄韧带骨化的X线、CT和MRI影像学资料.结果:所有病例的X线平片显示胸椎退行性改变,仅其中3例的侧位片显示椎间孔处模糊骨化影.CT扫描显示胸椎椎板前缘凸向椎管的高密度影,椎管变窄,外侧型7例,弥漫型8例,结节增厚型8例.MRI显永黄韧带骨化病变呈低信号影,脊髓不同程度受压.23例患者共发现黄韧带骨化节段57个,骨化节段为单发病灶6例,多发病灶17例.病变累及上胸段(T1-4)3例,中胸段(5-8)7例,下胸段(T9-12)16例.合并后纵韧带骨化6例,合并胸椎间盘突出2例.结论:胸椎黄韧带骨化有典型的CT和MRI影像学表现,但在X线平片上容易漏诊;CT结合MRI检查是确诊胸椎黄韧带骨化的蕈要诊断手段.     

尸体胸椎黄韧带骨化的病理观察

研究兴柱黄韧带骨化的病理特征。方法：随机选择２１具尸体胸椎标本，矢状剖开１８具，冠状剖开３具，观察每一节段黄韧带病理学特征，对骨化标本进行病理学研究。结果；２１具标本中，９具５９节段骨化，其中增生骨化４具，２３节段占３９％，单纯骨化７具，累积３６节段，病理表现呈３层结构。     

胸椎黄韧带骨化症的临床分析

胸椎黄韧带骨化症(Ossification of thoracic ligamentum flavum,OTLF)是致椎管狭窄、脊髓受压的重要原因之一。其起病隐匿,病程较长,初期易被忽略。为提高对本病的认识,本文对我院资料完整的15例进行回顾性分析。 1 资料与方法 1.1 临床资料 自1996年2月至2001年10月,我科收治OTLF患者15例,均为临床检查、胸椎X线片、MBI及CT确诊病例,并经手术和病理证实。其中男13例,女2例,年龄35～67岁,平均52岁。病程3个月～7年,平均20个月。临床症状呈进行性加重,主要表现为:感觉障碍14例,下肢肌力减退12例,括约肌功能障     

人脊柱棘间韧带与黄韧带应力松弛实验的研究

从应力松弛力学特性角度对棘间韧带和黄韧带进行定量分析,为人工韧带材料研究和韧带损伤吻合手术提供应力松弛力学参数。将标本装夹于软组织夹具中,之后装夹于电子万能试验机夹头内,驱动机器以1%/s的应变增加速度对标本施加拉应变,在36.5℃温度场下进行实验,采集90个数据,实验结束后计算机自动输出7 200 s之间应力松弛数据和曲线。棘间韧带组7 200 s应力松弛量为1.06 MPa,黄韧带组7 200s应力松弛量为1.62 MPa。棘间韧带和黄韧带具有不同的应力松弛力学特性。     

胸椎黄韧带骨化手术前后的护理

胸椎黄韧带骨化因其诊断困难,常被漏诊和误诊,但近年来已被人们逐渐认识并引起重视。该病主要累及椎板间连接组织——黄韧带发生增生肥厚、骨化,最终导致椎体边缘唇样增生,椎间隙变窄,从而引起椎管狭窄和脊髓的压迫性损害。本病多发生于东亚地区,日本报道较早,国内胸椎黄韧骨化仅有少数病例报告。本文总结我所1983～1994年手术治疗48例胸     

过量氟化物致腰椎黄韧带的退变与骨化

背景：黄韧带是脊柱后部的重要连接结构,一旦出现退变导致其弹性下降,在各种影响因素作用下,可使椎管的有效空间更加减小,导致脊髓、神经根受压,出现神经症状,严重者可致瘫痪、病残。目的：分析过量氟化物导致大鼠腰椎黄韧带退变与骨化的作用机制。方法：选取雄性SD大鼠30只,随机分为两组,观察组饮用含NaF(质量分数为10^-4)蒸馏水,对照组给予等量的蒸馏水,分别于3,6个月后检测骨密度,血清、骨组织标本中Ca²⁺、P³⁺含量和血清碱性磷酸酶活性;且行大鼠腰段黄韧带标本X射线检查后组织病理观察。结果与结论：观察组3个月后有5只大鼠下门牙开始出现白垩色条纹或斑点,6个月后大鼠均出现氟斑牙,表现为广泛的白垩色,且大鼠中腰椎骨密度显著增加(P < 0.05);观察组大鼠在3个月和6个月时其血清Ca²⁺均显著高于对照组,P³⁺显著低于对照组,差异均有显著性意义(P < 0.05);且血清碱性磷酸酶的活性在3个月和6个月时均显著高于对照组(P < 0.05);6个月后X射线检查发现大鼠腰椎骨质密度明显增高;病理观察结果显示观察组大鼠黄韧带中弹力纤维数量进一步减少,胶原纤维大量增生,大量的成纤维细胞与钙盐沉积,且在椎板附着处可见韧带骨化形成。结果提示过量氟化物可造成SD大鼠腰椎黄韧带的退变、骨化,可能在黄韧带的骨化中可能起重要作用。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

腰椎黄韧带肥厚骨化的数字化表现

目的　通过对腰椎退变黄韧带的数字化重建,为影像诊断和临床手术规划,提供立体直观的形态学依据。 方法　收集腰腿痛患者薄层螺旋CT影像资料,在后处理工作站中观察退变黄韧带形态及分布,选取轴位像中黄韧带厚度大于4 mm和/或有钙化患者63例,男31例,女32例,年龄32~80岁。将原始数据导入Mimics16.0软件重建图像,观察其形态、分布。 结果　315个腰椎节段中205个节段出现黄韧带肥厚和/或骨化。黄韧带单纯肥厚占总出现节段79.51%,单纯骨化占6.34%,肥厚伴骨化占14.15%。205个节段全部成功建模,肥厚黄韧带建模形态有合页状、不规则片状和柱状;骨化黄韧带建模形态有短柱状、短锥状、不规则片状;肥厚伴骨化黄韧带重建后形态各异。 结论　数字化技术重建黄韧带能清楚显示其分布、形态、邻近结构,还可将所建退变黄韧带模型与腰椎骨性模型随意组合、切割,便于立体直观地显示病变细节。     

经椎板间隙内窥镜下分开黄韧带切除椎间盘

背景：经椎板间隙途径内窥镜下间盘切除需游离黄韧带,后者如果辅助连续扩张器及工作通道进行操作,无论切口多小(甚至3-5 mm),均可完整保留黄韧带。 目的：介绍经椎板间隙内窥镜下分开黄韧带切除椎间盘的应用。 方法：采用经椎板间隙内窥镜下分开黄韧带椎间盘切除治疗16 例男性患者和14例女性患者,平均年龄(48±15)岁,主诉单下肢根性疼痛,病变位于L_3-4间隙1例,L_4-5间隙13例,L₅-S₁间隙16例,其中间盘向上脱出游离者4例,向下脱出游离者7例,所有患者术中电生理监测,在工作通道中分开黄韧带,间盘切除撤出工作通道后,黄韧带可自行复位。 结果与结论：操作时间20-40 min,治疗后随访时间(149±108) d。治疗中电生理监测无异常,椎间盘切除症状均得以改善。经核磁随访显示：脱出间盘组织已完全摘除,黄韧带保留完整,所有患者无相关并发症。结果可见经椎板间隙内窥镜下分开黄韧带切除脱出的间盘组织,是一种可行的操作方式。     

腰椎肥厚黄韧带中细胞凋亡及凋亡因子caspase-3、fas、p53的表达

文题释义： 黄韧带：由左右两部分组成,韧带上下分别附着于上位椎板的前下方,下位椎板的上缘,连接椎弓板,参与围成椎管,控制脊柱过度前屈,维持脊柱稳定。黄韧带肥厚可造成椎管管腔减小及椎间孔狭窄,硬膜囊和脊神经根的压迫,从而产生临床症状。 免疫组织化学技术：是用标记的特异性抗体(或抗原)对组织内的抗原(或抗体)的分布进行定位、定性、定量检测,经过组织化学呈色反应在组织原位显示抗原(或抗体),如各种蛋白质、多肽、磷脂和多糖等成分的一门技术。 背景：腰椎管狭窄症是造成老年人步态紊乱和腰腿痛的关键原因之一,黄韧带肥厚是导致腰椎管狭窄症的主要病理机制,目前关于黄韧带的影像学及病理研究较多,关于细胞凋亡的研究较少。                                                   目的：检测肥厚黄韧带组织中的细胞凋亡率及凋亡因子caspase-3、fas、p53的表达,为深入了解黄韧带退变的机制提供实验依据。          方法：实验组50个经MRI及术后测量证实肥厚黄韧带标本(L₂-S₁)来自50例腰椎管狭窄症行后路减压手术自愿捐赠的患者,男22例,女28例,年龄32-74岁,平均54.46岁;对照组30个经MRI及术后测量证实非肥厚黄韧带标本(L₂-S₁)来自30例腰椎间盘突出症行手术及腰椎爆裂骨折行手术患者,男19例,女11例,年龄19-67岁,平均47.27岁。采用TUNEL染色法检测黄韧带中的凋亡细胞率,用SP免疫组织化学法检测caspase-3、fas、p53的表达。研究通过了新疆医科大学第六附属医院伦理委员会批准,伦理编号为LFYLLSJ2016007。                                           结果与结论：①TUNEL染色示实验组的平均凋亡细胞率高于对照组[(37.80±3.04)%,(13.18±1.34)%,t=41.83,P < 0.001];②SP免疫组织化学染色示实验组caspase-3、fas、p53阳性表达率均为100%,对照组caspase-3、fas、p53阳性表达率为13.3%,16.7%,10%,两组比较差异均有统计学意义(P < 0.001)。结果表明,腰椎肥厚黄韧带组织中细胞凋亡增加,肥厚黄韧带中细胞凋亡与caspase-3、fas、p53的表达上调具有一定的相关性。 ORCID: 0000-0002-0539-5510(张方新) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

黄韧带退变与腰椎管狭窄症椎管形态的变化

背景：目前研究发现Ⅰ型及Ⅱ型胶原在结缔组织的增殖与分化、软骨的形成和吸收等过程中起十分重要的作用。 目的：探讨腰椎黄韧带退变与腰椎管狭窄症椎管形态变化的相关性。 方法：收集中央型腰椎管狭窄症36例和外伤性腰椎骨折20例患者的黄韧带标本分别为实验组和对照组,采用酶联免疫吸附法测定Ⅰ型和Ⅱ型胶原;CT测量腰椎硬膜横截面积;黄韧带行苏木精-伊红和Masson染色,观察组织病理学变化。 结果与结论：实验组黄韧带厚度、Ⅰ型及Ⅱ型胶原含量高于对照组,腰椎硬膜横截面积和Ⅰ型/Ⅱ型比值低于对照组(P <　0.05);病理学显示实验组黄韧带弹性纤维排列紊乱,数量减少,胶原纤维增生。提示腰椎黄韧带Ⅰ型、Ⅱ型胶原含量及Ⅰ型/Ⅱ型比值发生改变,可能引起黄韧带厚度增加,导致椎管横截面积减小,参与腰椎管狭窄症的发生。关键词：黄韧带;腰椎管狭窄症;Ⅰ型胶原;Ⅱ型胶原;病理学 型/II型比值 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.17.001     

环抱法切除胸椎黄韧带骨化症的临床疗效与解剖学基础

目的 明确I期后入路徒手环抱法切除胸椎黄韧带骨化症的手术指征、临床疗效与解剖学基础。方法 回顾2010年1月至2018年6月符合以下指征行I期后入路徒手环抱法手术切除胸椎骨化黄韧带患者20例（男9例,女11例,平均年龄55.2岁,43至75岁）：第一诊断为胸椎黄韧带骨化;排除Sato分型中的融合型及结节型;排除术前CT检查具有硬膜骨化征患者;排除各节段的单侧骨化物椎管占有率大于55%患者。收集术前与末次随访的改良JOA评分、临床解剖学特点及手术时间、出血量、并发症等临床资料,予以分析总结。结果 20例患者均行环抱法经后路I期切除骨化韧带,共36个节段。平均手术时间116 min,出血量131 mL。术中有1例脑脊液漏,术中予缝合,术后无症状。病例均得以随访,随访时间48～54个月,平均50.9个月。术前mJOA评分（7.50±1.02）,末次随访（10.25±0.62）,差异有统计学意义（P<0.05）。术后改善率平均80.43%,优13例,良7例。未出现复发病例。结论 对符合手术指征的黄韧带骨化患者行环抱法切除术具有操作简单,辅助工具少,手术时间短,效疗确切的优点。术后未见复发...     

Tissue transglutaminase is involved in mechanical load–induced osteogenic differentiation of human ligamentum flavum cells

Mechanical load–induced osteogenic differentiation might be the key cellular event in the calcification and ossification of ligamentum flavum. The aim of this study was to investigate the influence of tissue transglutaminase (TGM2) on mechanical load–induced osteogenesis of ligamentum flavum cells. Human ligamentum flavum cells were obtained from 12 patients undergoing lumbar spine surgery. Osteogenic phenotypes of ligamentum flavum cells, such as alkaline phosphatase (ALP), Alizarin red-S stain, and gene expression of osteogenic makers were evaluated following the administration of mechanical load and BMP-2 treatment. The expression of TGM2 was evaluated by real-time PCR, Western blotting, and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) analysis. Our results showed that mechanical load in combination with BMP-2 enhanced calcium deposition and ALP activity. Mechanical load significantly increased ALP and OC gene expression on day 3, whereas BMP-2 significantly increased ALP, OPN, and Runx2 on day 7. Mechanical load significantly induced TGM2 gene expression and enzyme activity in human ligamentum flavum cells. Exogenous TGM2 increased ALP and OC gene expression; while, inhibited TG activity significantly attenuated mechanical load–induced and TGM2-induced ALP activity. In summary, mechanical load–induced TGM2 expression and enzyme activity is involved in the progression of the calcification of ligamentum flavum.     

Histological investigation of rabbit ligamentum flavum with special reference to differences in spinal levels

The structure of the ligamentum flavum has yet to be fully elucidated and no studies have investigated fine structural differences at different spinal levels in any animals. The aim of the present study was to clarify structural differences in the ligamentum flavum at different spinal levels (cervical: C3/4 and C5/6; upper thoracic: T2/3; lower thoracic: T9/10; lumbar: L3/4) using light and electron microscopy of rabbit specimens. Light microscopy using resorcin—fuchsin staining revealed that the distribution of elastic fibers was diffuse in the cervical and upper thoracic regions, but was generally dense in the lower thoracic and lumbar regions. Electron microscopy demonstrated that the cervical and upper thoracic regions were rich in collagen fibers. Conversely, the lower thoracic and lumbar regions were rich in elastic fibers. Quantitative image analyses displayed thick elastic fibers in the lower thoracic and lumbar regions, with high area ratios. Radiographic examinations revealed that ranges of motion were large at the cervical region, but small at the lower thoracic and lumbar regions. These findings suggest that structure of the ligamentum flavum varies at different spinal levels with respect to differences in motion.     

透明质酸影响人膝骨关节炎滑膜成纤维样细胞骨桥蛋白和CD44的表达

背景：在骨关节炎病程中,透明质酸水平的改变可以使一系列细胞因子和酶表达水平改变,但是滑膜组织中骨桥蛋白、CD44的高表达是否与透明质酸水平改变相关目前尚不清楚。 目的：通过透明质酸干预体外培养的人膝骨关节炎滑膜成纤维样细胞,观察透明质酸对骨关节炎滑膜成纤维样细胞骨桥蛋白和CD44表达的影响。 方法：选取接受膝关节镜手术和膝关节置换的原发性膝关节骨关节炎患者滑膜标本10例,进行体外培养获取纯化的滑膜成纤维细胞,取第4~6代滑膜成纤维细胞,分为3组：空白对照组不进行任何干预;透明质酸组用100 mg/L透明质酸干预24 h;透明质酸酶组用300 mg/L透明质酸酶干预24 h。 结果与结论：与空白对照组相比,透明质酸组滑膜成纤维细胞骨桥蛋白mRNA表达水平上升(P < 0.05),透明质酸酶组滑膜成纤维细胞骨桥蛋白mRNA表达水平下降(P < 0.05)。透明质酸组和透明质酸酶组之间膜成纤维细胞骨桥蛋白mRNA表达水平差异有显著性意义(P < 0.05)。空白对照组、透明质酸组和透明质酸酶组滑膜成纤维细胞CD44 mRNA表达水平差异均无显著性意义(P > 0.05)。提示透明质酸可以使骨关节炎滑膜成纤维细胞骨桥蛋白mRNA表达增高,对CD44 mRNA表达没有影响。