糖化血红蛋白不同测定法的评价

目的对3种测定糖化血红蛋白的方法进行方法学评价.方法用离子交换高效液相层析(HPLC)法(X)、微柱亲和层析手工法(Y1)、胶乳凝集免疫法(Y2)测定糖化血红蛋白,进行线性范围、回收率、精密度、干扰因素及参考范围的分析.结果 X、Y1、Y2法的线性范围分别为2.8%～18%、3.6%～15.3%、2.3%～15.5%.3种方法的平均回收率均在95%～104%以内,批内、批间平均变异系数(CV)均<5%.10.2 mmol/L三酰甘油、8.0 mmol/L胆固醇、684 μmol/L胆红素、10.1%的HbF对3种方法均无干扰.Y1法测定结果显著高于X法(P<0.01),回归方程Y1=1.15X-0.17(r=0.86,P<0.01);Y2法与X法的测定结果差异有显著性(P<0.05),Y2法的测定结果偏低,回归方程Y2=1.04X-0.69(r=0.92,P<0.01);X、Y1、Y2法的参考范围分别是4.3%～6.7%、3.5%～8.3%、3.6%～6.7%.结论与HPLC法相比,微柱亲和层析手工法测定结果偏高,而胶乳凝集免疫法的测定结果偏低.     

胶乳凝集比浊法测定糖化血红蛋白的分析性能评价

目的 对胶乳凝集比浊法测定糖化血红蛋白(HbA1c)的分析性能进行评价.方法 用日立7600-120全自动生化分析仪对胶乳凝集比浊法测定HbA1c的分析性能进行检测.结果 试剂稳定性结果表明,新配制的试剂测定低值时到第3天才保持稳定,测定高值时试剂以每天平均0.1%的速度下降;胶乳凝集比浊法测定HbA1c批内CV为1.56%,批间CV为0.0%,天间CV为0.86%,总CV为1.59%;比对实验胶乳凝集比浊法和高效液相色谱(HPLC)法测定HbA1c呈良好的线性关系,Y=0.904X+0.239,r=0.9915;当胎儿血红蛋白F(HbF)≤16.2%时,对胶乳凝集比浊法和HPLC法测定的结果均无影响;线性范围为2%～15.8%;健康人HbA1c95%参考区间4.04%～5.69%,不同性别组比较差异无统计学意义(P＞0.05),年龄方面,以45岁为界,45岁以上中老年人的参考范围略高于45岁以下人群的参考范围(P＜0.05).结论 胶乳凝集比浊法测定HbA1c是一种适用于临床实验室开展的经济、有效、简单可行的方法.     

血清氯化物酶法测定

目的　建立血清氯化物的α 淀粉酶及其底物 2 氯 4 硝基苯 α D 麦芽三糖苷 (CNP G3)直接测定方法。方法　根据氯离子是α 淀粉酶的激动剂原理建立氯化物测定方法 ,并做方法学评价。结果　测定结果的平均偏差率为 0 4 6 % ;线性范围 5 0～1 5 0mmol/L ;平均回收率为 1 0 0 6 2 % ;批内CV <1 2 4 % ,日间CV <1 86 % ,总CV1 4 5 %～ 2 2 4 % ;加入高浓度的维生素C、葡萄糖、蔗糖、果糖、α 淀粉酶、三酰甘油、血红蛋白、胆红素、钙离子、溴离子、碘离子、氟离子、硫氰酸钾、对硝基酚、叠氮钠和硫酸铵均未显示干扰。与硫氰酸汞比色法 (MTC) ( x±s)比较 :MTC法 (X) :(95 6 6± 1 4 .4 5 )mmol/L ,酶法 (Y) :(95 6 2± 1 4 .93)mmol/L ,t=0 .0 78,P >0 5 ,Y =1 .0 1 6X - 1 .5 87,r=0 .984 ,n =93,P <0 .0 0 1 ;与离子选择电极法 (ISE) ( x±s)比较 :ISE法 (X) :(99.0 0±1 3.1 1 )mmol/L ,本法 (Y) (98.6 1± 1 2 .70 )mmol/L ,t=0 .1 4 0 ,P >0 .5 ,Y =0 .96 2X +3.375 ,r=0 .993,n =4 4 ,P <0 .0 0 1。溶解的工作试剂 (R1、R2 ) 2～ 8℃冷藏至少可以稳定 1 4天。结论　该方法测定成本低 ,准确、精密、线性范围宽 ,稳定性好 ,在抗卤族元素溴、碘及硫氰酸等阴离子的干扰方面 ,显著优于其他方法     

胶乳凝集法检测糖化血红蛋白

目的探讨在全自动生化分析仪上用胶乳凝集法检测糖化血红蛋白(HbA1c)的可靠性。方法收集糖尿病患者和健康体检者标本共40份,分别在全自动生化分析仪上用胶乳凝集法,在糖化血红蛋白分析仪上用高效液相色谱(HPLC)法检测HbA1c,以HPLC为参比方法,与胶乳凝集法进行比对。计算在全自动生化分析仪上采用胶乳凝集法检测HbA1c的精密度、准确度、线性试验、回收试验。结果胶乳凝集法批内平均变异系数(CV)为3.43%,批间平均CV为4.19%,平均回收率为99.58%,胶乳凝集法与HPLC法回归方程为Y=0.976 2 X+0.023 5,r2=0.998 3。结论胶乳凝集法精密度能满足临床需要,与HPLC法相关性较好,适用于临床常规自动分析。     

丙酮酸干扰丙氨酸氨基转移酶测定研究

目的　研究内源性丙酮酸干扰丙氨酸氨基转移酶 (ALT)测定程度。方法使用献血者混合血浆样本以不同参数做测定ALT的丙酮酸干扰实验 ,计算不同参数的干扰百分率。结果实验组样本中干扰物丙酮酸浓度为 0 .5、1 .0、1 .5、2 .0和 2 .5mmol/L时 ,与对照组ALT活性 4 0 .3U/L相比 ,参数 1测定ALT最高达 4 4 .0U/L ,参数2可高达 4 9.3U/L(P <0 .0 1和P <0 .0 0 5 ) ;上述干扰浓度时参数 1和 2干扰百分率分别为 1 .74 %、3.4 7%、5 .96 %、7.4 4 %、9.1 8%和 6 .2 0 %、1 0 .92 %、1 3.1 5 %、1 7.87%、2 2 .33% ,两组参数测定比较差异有显著或极显著性意义 (P <0 .0 5、P <0 .0 1、P<0 .0 1、P <0 .0 1和P <0 .0 0 1 ) ;两组干扰物终浓度 (X )与干扰百分率 (Y )的回归方程为Y1 =79.4 87X - 0 .1 1 7,r =0 .996 ,n=5 (P <0 .0 0 1 ) ;Y2 =6 0 .0 2 9X+2 .35 2 ,r =0 .994 ,n=5 ,(P<0 .0 0 1 ) 。结论调整测定参数即减少样本体积分数可以有效地降低内源性丙酮酸干扰ALT测定 ,应当使用自动生化分析仪测定ALT。     

低密度脂蛋白胆固醇直接测定法的评价

目的　评价基于选择性水解原理的两种低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)的直接测定法 (Ⅰ法和Ⅱ法 )的精密度、准确度和特异性。方法　将这两种方法与聚乙烯硫酸沉淀法 (PVS法 )作了比较 ,并以超速离心分离的HDL和LDL组分分析了对LDL C测定的特异性与准确性。结果　高、低两种LDL C浓度混合血清所测定的结果表明这两种方法均有良好的精密度 ,总CV值直接测定Ⅰ法 3 96 %～ 4 42 % ,直接测定Ⅱ法 0 78%～ 3 91% ,都可达到临床满意的程度。 48份临床标本测定结果 ( x±s)分别为 3 6 8± 1 2 3mmol/L(PVS法 ) ,3 2 5± 1 11mmol/L(直接测定Ⅰ法 )和 3 37± 1 2 1mmol/L(直接测定Ⅱ法 ) ,直接测定法与PVS法测定结果的差异无统计学意义。PVS法 (X)与直接测定Ⅰ法 (Y)的回归方程为Y =0 .848X +0 .12 1(r=0 .942 7) ,与直接测定Ⅱ法 (Y)的回归方程为Y =0 .914X +0 .0 0 7(r=0 .935 3) ,两种直接测定法与PVS法有良好的相关。对超离心HDL和LDL组分测定的结果表明两种直接测定法对LDL C有较好的特异性。稀释试验的结果表明两种直接测定法均有良好的线性 ,线性范围至少可达 9 2 8mmol/L。结论　以选择性水解法直接测定LDL C具有较好的精密度 ,对LDL有很好的特异性 ,适应自动分析 ,可以真实反映LDL C的水平 ,值得在临床推     

氧电极法测定血清葡萄糖方法学探讨

目的了解电极法测定血清GLU的实验特点.方法采用氧电极法测定血清葡萄糖,并对其方法学进行了初步研究.结果氧电极法测定血清葡萄糖批内精度≤1.01%,批间精度≤1.74%,线性范围达46.81mmol/L,平均回收率101.08%,反应特异,快速,干扰因素少,本法(Y)与葡萄糖氧化酶法(X1)和己糖激酶法(X2)比较:Y=0.9922X1+0.1045,γ1＝0.9997,P1＞0.05;Y=0.9966X2-0.0278,γ2＝0.9994,P2＜0.005.结论氧电极法测定血清葡萄糖准确,快速,适合临床应用.     

两种糖化血红蛋白测定方法的相关性分析

目的探讨在全自动生化分析仅上用胶乳凝集法测定糖化血红蛋白（HbAlc）与糖化血红蛋白分析仪上用高效液相色谱法测定HbAle的可比性。方法收集糖尿病患者和健康体检者标本共柏例,分别在全自动生化分析仪上用胶乳凝集法、在糖化血红蛋白分析仪上用高效液相色谱法（HPLc）测定糖化血红蛋白,以HPLC为比对方法,对胶乳凝集法进行精密度试验、回收试验、干扰试验;对两种方法结果进行分析。结果胶乳凝集法批内平均CV为3．33％,批闻平均CV为4．02％,平均回收率为99．6％,胶乳凝集法与高效液相色谱法比较Y=0．998X-0．0813,r2=0．998。结论胶乳凝集法与HPLC法相关性较好,精密度能满足临床需要适用于临床常规自动分析。     

胶乳凝集比浊法与荧光偏振免疫法检测卡马西平血药浓度的相关性分析

目的：分析胶乳凝集比浊法与荧光偏振免疫法两种方法的卡马西平检测试剂盒测定卡马西平血药浓度结果相关性。方法利用荧光偏振免疫法在雅培AxSYM免疫分析仪上和使用胶乳凝集比浊法在奥林巴斯AU2700生化分析仪上分别检测卡马西平的血药浓度,以荧光偏振免疫法测定值为X,胶乳凝集比浊法测定值为Y进行线性回归,评价其相关性。结果104组数据经线性回归得回归方程：Y=1.154X-0.216（n=104,r=0.9823）。结论胶乳凝集比浊法与荧光偏振免疫法两种方法检测卡马西平血药浓度测定结果具有较好相关性。     

氧电极法测定血清葡萄糖方法学探讨

目的了解电极法测定血清GLU的实验特点。方法采用氧电极法测定血清葡萄糖,并对其方法学进行了初步研究。结果氧电极法测定血清葡萄糖批内精度≤1.01%,批间精度≤1.74%,线性范围达46.81mmol/L,平均回收率101.08%,反应特异,快速,干扰因素少,本法(Y)与葡萄糖氧化酶法(X1)和己糖激酶法(X2)比较:Y=0.9922X1+0.1045,γ1=0.9997,P1>0.05;Y=0.9966X2-0.0278,γ2=0.9994,P2>0.005。结论氧电极法测定血清葡萄糖准确,快速,适合临床应用。     

Batch to batch imprecision in the affinity chromatography assay of glycated hemoglobin

An affinity chromatographic method (AC) was compared with ion exchange chromatography (IEC) for determination of glycated hemoglobin (gHb). In vitro, increasing glucose concentration produced no change on AC-determined gHb. gHb measurement by AC was highly correlated with mean blood glucose (r = 0.96). Mean values of gHb were apparently higher, and variation greater, by AC than by IEC. Intra-assay variation was 2.0% and 3.0%, respectively. Inter-assay variation was 4.8% by IEC and 6.4% by AC. When different batches of AC-columns were compared, mean values as well as precision differed considerably. The affinity chromatographic method tested here shows several expected advantages, but precision and inter-batch variation of the columns remain to be improved.     

3种仪器检测糖化血红蛋白结果分析

目的 比较3种仪器检测糖化血红蛋白的结果。方法 分别采用D-10全自动糖化血红蛋白分析仪(离子交换色谱法)、HA-8160全自动糖化血红蛋白分析仪(亲和色谱法)和7170A全自动生化分析仪(免疫比浊法)检测75例全血样本,对检测结果进行方差齐性检验,方差齐后,进行单因素方差分析和相关性分析。结果 D-10全自动糖化血红蛋白分析仪和HA-8160全自动糖化血红蛋白分析仪测定结果呈正相关(r2=0.996),回归方程为Y=0.953 X+0.519;D-10全自动糖化血红蛋白分析仪和7170A全自动生化分析仪测定结果呈正相关(r2=0.996),回归方程为Y=0.925 X+0.576;HA-8160全自动糖化血红蛋白分析仪和7170A全自动生化分析仪测定结果呈正相关(r2=0.998),回归方程为Y=0.969 X+0.081。结论 在保证实验室质量控制的前提下,均可以采用以上3种不同的仪器检测糖化血红蛋白。     

Acetylcholine receptors from normal human muscle: concentration, purification, and use in radioreceptor assays for autoantibodies

We measured the concentration of acetylcholine receptor (AChR) in various normal human muscles, obtained at autopsy, in order to find a more reliable and convenient source than the amputated leg muscle from diabetic patients for the isolation of AChR. We found that human calf muscle contains the highest concentration of AChR, approaching the concentration of receptor required for the radioreceptor assay for autoantibodies in myasthenia gravis (MG). Because the amount of contaminant proteins in the receptor preparations affect the sensitivity and precision of the assay, various chromatographic techniques were tested to improve the purity of the receptor preparation. We found that both G-100 Sephadex and DEAE Sephacel chromatographies were effective in removing contaminant proteins. DEAE Sephacel chromatography is particularly useful because the procedure provides higher recovery of receptor. Against the same pool of autoantibodies from patients with MG, AChRs from diabetic and normal leg muscle exhibit similar affinities. We conclude that AChR from normal human calf muscle can be used in radioreceptor assays for measuring autoantibodies in patients with myasthenia gravis.     

微粒色谱法和高效液相色谱法检测糖化血红蛋白的相关性研究

目的分析微粒色谱法和高效液相色谱法在糖化血红蛋白(HbA1c)检测中的相关性和临床符合情况。方法依照美国临床和实验室标准协会(CLSI)的EP9-A2文件要求,每日随机抽取重庆市急救中心门诊或住院患者血液标本8份,连续5d,共采取40份。分别用微粒色谱法和高效液相色谱法测定HbA1c,并对数据进行比较分析。结果对两种方法测定的HbA1c结果进行比对分析,结果表明两检测系统内重复性好,符合相关性实验要求;方法间无离群点存在;线性回归方程为Y=1.088 5 X-0.521 4,相关系数r=0.993,95%置信区间(B^C,low,B^C,high)为(0.019 1,0.181 8),在允许误差(-0.35,0.35)之内,两种方法测定结果无明显差异,不存在有意义的偏倚。结论微粒色谱法和高效液相色谱法可比性高,相关性好,符合临床需求,检验科可根据自身条件,选择适合的测定方法。     

核心岩藻糖化运铁蛋白测定在良,恶性肝病鉴别诊断中的初步应用

利用LCA-agarose固相亲和层析法分离血清中核心岩藻糖化的运铁蛋白（cFuc-Tf），再结合运铁蛋白免疫比浊法，测定了50例正常人、44例良性肝病患者以及19例肝癌患者血清中的核心岩藻糖化运铁蛋白。结果显示正常人、良性肝病患者以及肝癌患者血清中的CFCC-Tf分别为36±34.9mg／L、40．5±34．1mg／L和167．8±104mg／L。经统计学处理，肝癌患者血清中的cFuc-Tf含量较正常人及其它良性肝病患者有极显著的升高。以cFuc-Tf＞140．7mg／L为诊断上限时，诊断肝癌的特异性为98．9％，阳性率为579％，对伴有AFP升高（＞40pg／L）之肝癌，阳性率为100％。血清eFuc-Tf测定可作为肝癌鉴别诊断的一项新指标。     

Blood glycated haemoglobin,serum fructosamine,serum glycated albumin and serum glycated total protein as measures of glycaemia in diabetes mellitus

Blood glycated haemoglobin (HbAlc), serum fructosamine (FA), serum glycated albumin (GA), and serum glycated total protein (GTP) were determined in 61 subjects (19 pregnant women with gestational diabetes, 24 pregnant women with insulin-dependent diabetes mellitus [IDDM] and 18 non-pregnant subjects with IDDM). FA, GA, and GTP correlated with HbAlc similarly (r=0.791, 0.816, and 0.794, respectively, p < 0.001). In a subgroup of 22 subjects data on blood glucose home monitoring was recorded and used for calculating mean blood glucose as an index of average glycaemia preceding sampling of the glycation products. Mean blood glucose levels preceding sampling of HbAlc by 2 months and FA, GA, or GTP by three weeks correlated significantly with HbAlc (r=0.668, p < 0.001) and GA (r=0.441, p < 0.05) whereas no significant correlation was found between mean blood glucose and FA (r=0.003) or GTP (r=0.252). In conclusion, such methods which measure specifically the non-enzymatic glycation of a single species of protein (i.e. FPLC for HbAlc and affinity chromatography for GA) are to be preferred for assessing glycaemia.     

S/D病毒灭活方法对人凝血酶活性影响及其S/D去除的试验研究

为了验证病毒灭活剂(S/D)对血液制品中人凝血酶活性的影响及其去除的方法。采用层析和液相色谱法对S/D影响人凝血酶活性及其残留物的去除效果进行了研究。结果,纯化的凝血酶加入S/D进行病毒灭活对活性无影响,离子交换层析分离工艺几乎可全部除去S/D残留物,使产品达到了对人体无害的标准要求。结论,S/D对人凝血酶活性无影响,采用离子交换层析法能去除血液制品中的S/D,使产品达到安全可靠。     

The effect of in vitro captopril and angiotensin II on plasma renin activity

Samples of plasma from ten normotensive volunteers and ten hypertensive patients were assayed for plasma renin activity before and after the addition of either captopril or captopril and angiotensin II. The study was repeated after treating portions of the same specimens with trypsin, to activate the inactive renin component. The results indicate that inactive renin is not converted to the active form by captopril in vitro, nor does the addition of angiotensin II inactivate the active form. These data are consistent with the in vivo findings that changes in active and inactive renin occur independently under conditions of challenge by captopril or angiotensin II analogues.     

反相高效液相色谱法测定人血浆中无环鸟苷

目的对流动相的配方进行改良,建立反相HPLC法测定人血浆中阿昔洛韦浓度。方法采用SphericorbC18色谱柱,以2．5％的乙腈水溶液（内含10mmol/L高氯酸,5mmol/L乙酸钠,3．5mmol/L庚烷磺酸钠）为流动相,紫外检测波长254nm。血浆以高氯酸沉淀后高速离心取上清液分析。结果阿昔洛韦峰和其它杂峰得到很好的分离,最低检测限为30ng/ml（进样50μl,信噪比为3：1）。结论本法快速、简便、灵敏度高,且可检测到阿普洛韦代谢物。     

足叶乙甙浓度快速灵敏的高效液相色谱法研究

目的:建立足叶乙甙浓度的快速灵敏、适合临床应用的高效液相色谱检查方法,以便进行足叶乙甙药动学监测和治疗剂量个体化。方法:离心后的血浆中加入内标物质(鬼臼毒素),采用固相柱药物洗提方法,将含有提取物的试管在40℃的水中加热风干,以100mL26%乙腈溶解后作反向高效液相色谱检测。含非蛋白结合足叶乙甙的血浆超滤液和透析液则直接加入分析内进行浓度检测。结果:足叶乙甙和内标物在色谱仪上的保留时间分别为5.15min和9.14min。标准计算曲线在足叶乙甙浓度为1μg/mL和15μg/mL之间可建立相关系数为0.99的线形曲线;最低检测浓度为0.05μg/mL,其变异系数小于7.2%,各种浓度的准确度大于98%,日内、日间精确度分别是5.05%和5.43%。结论:高效液相色谱检查是一种简单快捷而且灵敏度较高的检测足叶乙甙浓度的方法,可代替其它检测血浆足叶乙甙浓度及药动学方法。