金雀异黄素对大鼠血管平滑肌细胞钾电流的影响

目的观察金雀异黄素(GST)对大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞(MASMC)钾电流(IK)的影响。方法采用急性酶分离法获得SD大鼠单个MASMC,应用全细胞膜片钳记录方法,研究GST对IK以及膜电位的影响。结果 (1)GST(100μmol/L)可以快速可逆的抑制IK(P<0.05),tyrphostin25(10μmol/L)也可抑制IK(P<0.05),其作用与GST类似,而Daidzein(100μmol/L)对IK没有显著影响(P>0.05)。(2)在电极内液不含ATP的条件下,GST(100μmol/L)和tyrphostin25(10μmol/L)对IK的抑制没有统计学意义(P>0.05)。(3)GST能浓度依赖性地去极化膜电位(P<0.05),而且此作用是可逆的。Daidzein(100μmol/L)、tyrophostin25(10μmol/L)则对膜电位没有明显影响(P>0.05)。结论 GST可以快速可逆的抑制IK,使膜电位去极化,其作用与酪氨酸磷酸化相关。     

骨桥蛋白反义核苷酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

背景：骨桥蛋白在血管损伤后新生内膜中的表达明显上调,而且能促进血管平滑肌细胞和外膜细胞的增殖、迁移。 目的：探索骨桥蛋白反义核苷酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。 方法：培养大鼠A10主动脉血管平滑肌细胞,通过MTT比色法测定骨桥蛋白反义核苷酸对平滑肌细胞增殖的影响,流式细胞仪测定骨桥蛋白反义核苷酸对平滑肌细胞周期分布的影响;通过RT-PCR方法检测血管平滑肌细胞转染骨桥蛋白反义核苷酸对增殖细胞核抗原表达的影响。 结果与结论：骨桥蛋白反义核苷酸对血管平滑肌细胞的增殖有明显的抑制作用,随时间延长对细胞增殖抑制率下降。骨桥蛋白反义核苷酸主要作用于G1/S限制点,能阻止血管平滑肌细胞由G0/G1期向S期推进,从而将血管平滑肌细胞阻滞于G0/G1期,抑制血管平滑肌细胞的增殖。血管平滑肌细胞转染骨桥蛋白反义核苷酸后,增殖细胞核抗原的表达水平均较对照组降低(P < 0.05)｡因此,得出骨桥蛋白反义核苷酸通过阻止血管平滑肌细胞由G0/G1期向S期推进,从而抑制血管平滑肌细胞的增殖,进而抑制血管内膜增生。     

三氧化二砷对大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及凋亡的影响,以提供含As2O3缓释血管内支架植入手术后防止再狭窄的实验依据。方法分离培养大鼠VSMC并以As2O3处理;用四甲基偶氮唑蓝还原反应(MTT法)检测细胞增殖情况,RT-PCR检测增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA;以AnnexinV+PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡;比色法检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的活性。结果 2μmol/L的As2O3对VSMC的生长有明显的抑制作用,且此作用呈时间依赖性(P<0.01)。以2μmol/L的As2O3作用72h后,AS2O3对PCNAmRNA表达有显著的抑制作用(P=0.009),对VSMC凋亡的发生(P=0.0001)及对Caspase-3的激活(P=0.005)均有显著促进作用。结论 As2O3可有效抑制VSMC增殖,诱导VSMC凋亡。As2O3的应用有可能为防治血管内支架植入术后再狭窄的药物研究提供一个新思路。     

溶血磷脂酸受体在小鼠血管平滑肌细胞的表达及意义

目的探讨溶血磷脂酸(LPA)受体亚型(LPA1、LPA2、LPA3)在小鼠血管平滑肌细胞的表达及意义。方法小鼠被随机分为LPA1组、LPA2组及LPA3组,每组24只。以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术和Western Blot方法检测小鼠血管平滑肌细胞LPA受体各亚型基因和蛋白的表达水平。结果(1)LPA1、LPA2和LPA3 mRNA在小鼠血管平滑肌细胞均有表达,表达量LPA1(0.79±0.05)、LPA2(0.82±0.06)明显高于LPA3 mRNA(0.53±0.05)(均P<0.001);LPA1与LPA2 mRNAs表达差异无统计学意义。(2)LPA1、LPA2和LPA3蛋白在小鼠血管平滑肌细胞均有表达,LPA1(0.98±0.23)与LPA2(1.04±0.17)蛋白表达显著高于LPA3(0.75±0.14)(均P<0.001),LPA1与LPA2蛋白表达差异无统计学意义。结论LPA1、LPA2和LPA3受体在小鼠血管平滑肌细胞均能表达,LPA可能与其受体结合,参与调控动脉粥样硬化的发生与发展。     

藏红花素通过调控cGMP/PKG通路对癫痫大鼠的神经保护及对海马神经元兴奋性的影响

目的 观察藏红花素对癫痫大鼠的神经保护及对海马神经元兴奋性的影响。方法 取45只大鼠,随机选取10只设为健康组,剩余35只建立癫痫模型,成功30只。随机分为癫痫组(10只)、藏红花素组(10只)、抑制剂组(10只); 藏红花素组腹腔注射藏红花素(50 mg/kg); 抑制剂组腹腔注射藏红花素(50 mg/kg),髓鞘注射ODQ[1H(1,2,4)oxadiazolo(4,3 α)quinoxaline 1 one] [环磷酸鸟苷(Cyclic guanosine monophosphate,cGMP)/cGMP依赖性蛋白激酶(cGMP-dependent protein kinase,PKG)通路抑制剂](10 μg/只); 健康组、癫痫组腹腔注射等体积生理盐水; 1次/d,干预14 d; 检测血清氧化应激反应水平指标; 检测神经元钙离子水平; 用原位末端标记法(Terminal deoxynucleoitidy transferase mediated nick end labeling,TUNEL)检测海马神经元凋亡率; 用免疫印迹法检测海马组织cGMP,PKG、磷酸化-PKG(Phosphorylation-PKG,p-PKG)蛋白表达水平。结果 与癫痫组比较,藏红花素组血清丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平、海马神经元内钙离子水平、海马神经元凋亡率降低,血清超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性水平、海马组织cGMP蛋白表达水平、p-PKG/PKG升高(P<0.05); 与藏红花素组比较,抑制剂组血清MDA水平、海马神经元内钙离子水平、海马神经元凋亡率升高,血清SOD活性水平、海马组织cGMP蛋白表达水平、p-PKG/PKG降低(P<0.05)。结论 藏红花素可抑制海马组织氧化应激,降低海马神经元兴奋性,保护神经功能,推测其作用机制可能与激活cGMP/PKG信号通路有关。     

血管平滑肌细胞凋亡在大鼠蛛网膜下腔出血后血管痉挛中的表达

目的：研究血管平滑肌细胞凋亡在大鼠蛛网膜下腔出血（ SAH ）后脑血管痉挛中的表达。方法采用枕大池二次注血法建模,42只SD大鼠随机分成正常对照组、假手术组、实验组。根据取材时间不同,实验组分为SAH后1 d、3 d、5 d、7 d及14 d 5个组。观察基底动脉病理改变,TUNEL法检测平滑肌细胞凋亡变化。结果实验组细胞凋亡阳性细胞数以第1d表达增高,第3d、5d仍持续高位表达,第7d后降低,第14 d时明显下降,实验组平滑肌细胞凋亡与正常对照组比较有显著差异（14 d组除外）（均P﹤0．01）。结论血管平滑肌细胞凋亡在大鼠蛛网膜下腔出血后血管表达明显增高,血管平滑肌细胞凋亡在脑血管痉挛发病机制中可能存在一定作用。     

平肝潜阳方含药血清中天麻素水平测定及其对血管平滑肌细胞活性的影响

背景：平肝潜阳方为中药复方制剂,化学成分复杂,直接测定血清中药物含量,比较困难。天麻是平肝潜阳方的君药之一,且其为成苷类衍生物,水平容易测定。 目的：通过检测血清中天麻素水平了解平肝潜阳方在体内的药物浓度,探讨制备含药血清的具体方法,并观察平肝潜阳方含药血清对血管平滑肌细胞活性的影响。 方法：大鼠予以平肝潜阳方浸膏2 g/d给药3 d或7 d,分别于3 d或7 d内于每天8:00和16:00各灌药1 g,与第4或第8天8:00灌药2 g,于最后给药前及给药后0.5,1,2,3,5 h心脏内采血。高效液相色谱测定大鼠体内天麻素水平;在血管平滑肌细胞的培养液中分别添加不同浓度灭活处理的含药血清,加药培养后24 h采用MTT法观察细胞活性的抑制率。 结果与结论：平肝潜阳方浸膏3 d与7 d给药大鼠,均在最后一次给药后1 h达到最高血药浓度,但3 d给药血药浓度迅速下降,而7 d给药可维持较长时间的血药浓度平台;天麻素在0.045~5.6 mg/L范围内呈线性,r=0.999 2,精密度RSD日内为1.86%,加样回收率为93.88%。不同浓度含药血清对血管平滑肌细胞的生长均有抑制作用,但以5%浓度含药血清对血管平滑肌细胞的生长抑制率最大(P < 0.01),其中7 d给药组的抑制率明显高于3 d给药组(P < 0.01)。因此,平肝潜阳方含药血清的制备应选取连续给药7 d后末次给药1 h后为最佳采血时间点,含药血清能够抑制血管平滑肌细胞的活性。     

人巨细胞病毒感染对人脑血管平滑肌细胞AT受体基因表达的影响

目的:探讨血管紧张素受体1、2(AT1,AT2)及人巨细胞病毒(HCMV)感染在动脉粥样硬化过程中的作用。方法:建立HCMV感染细胞模型,采用RT-PCR等技术研究在更昔洛韦(GCV)和AT1、AT2受体拮抗剂作用下,HCMV对体外培养人脑动脉血管平滑肌细胞AT1和AT2受体基因表达的影响。结果:HCMV感染体外培养的人脑血管平滑肌细胞上调了AT1和AT2受体的基因表达,AT1和AT2受体拮抗剂及GCV能够抑制HCMV感染对人脑血管平滑肌AT1和AT2受体的激活作用。结论:HCMV感染引起人脑血管平滑肌细胞增生可能由于AT1和AT2受体基因表达的激活。     

血管紧张素Ⅱ和缬沙坦对血管平滑肌细胞增殖和基质金属蛋白酶9表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）的增殖及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响及缬沙坦（Valsartan）的干预作用。方法分离大鼠胸主动脉平滑肌细胞,贴块法原代培养大鼠血管平滑肌细胞,取第5～10代细胞进行实验,随机分成AngⅡ组（A组）、AngⅡ＋Valsartan组（A＋V组）、Valsartan组（V组）及对照组4组,各组细胞分别采用四唑盐（MTT）比色法检测血管平滑肌细胞增殖,逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法测定MMP-9mRNA和蛋白的表达水平。结果与对照组比较,AngⅡ组VSMC的增殖率升高;与AngⅡ组比较,AngⅡ＋Valsartan组VSMC的增殖率降低,差异均明显（P〈0．05）。AngⅡ组与对照组比较,MMP-9mRNA和蛋白的表达均升高;AnⅡValsartan组与AngⅡ组比较,MMP_9mRNA和蛋白的表达均降低,差异均显著（P〈O．05）。结论血管紧张素Ⅱ可以诱导血管平滑肌细胞的增殖和基质金属蛋白酶-9mRNA和蛋白的表达增加;血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）拮抗剂一缬沙坦可抑制此作用,ATR参与介导此过程。     

HCMV感染及AngⅡ对人脑血管平滑肌细胞SM22α表达的影响

目的探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染和血管紧张素受体Ⅱ型（AngⅡ）对人脑动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）中SM22α表达的影响。方法采用RT-PCR等技术观察VSMCs在更昔洛韦（GCV）、AngⅡ以及AT1和AT2受体拮抗剂（valsartan与P123319）作用下其SM22α的表达。结果病毒感染5dVSMCs中SM22α基因表达量较感染3d和1d时明显上调。经AngⅡ诱导1h和6h后，VSMCs中SM22α相对表达量较未诱导组明显上调。AngⅡ＋valsartan组SM22α相对表达量高于AngⅡ诱导组，AngⅡ＋P123319组SM22α相对表达量低于AngⅡ诱导组；AngⅡ诱导12h和24h后，3组间SM22α相对表达量差异无统计学意义。结论HCMV感染可使VSMCs中SM22α基因表达上调，AngⅡ对VSMCs的早期作用可能通过AT2受体途径激活SM22α基因表达。     

硼替佐米对LDLR-/-小鼠动脉粥样硬化血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的观察泛素-蛋白酶体抑制剂(UPI)硼替佐米对LDLR-/-小鼠动脉粥样硬化血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响。方法取12只周龄为8w的雄性LDLR-/-小鼠,适应性喂养1w,随机将12只小鼠分为高脂饮食+硼替佐米组(6只)和高脂饮食+生理盐水组(6只)。将上述2组小鼠分别给予硼替佐米(50μg·kg~(-1))和同等剂量生理盐水进行腹腔注射,1w2次,共8w。处死小鼠,取主动脉根部,观察主动脉根部的病理变化;利用免疫组化方法检测VSMC中激活型caspase-3的表达水平。利用Tunel技术检测VSMC凋亡,计算凋亡指数。结果光镜下苏木精-伊红染色显示盐水组小鼠主动脉根部内膜出现较多泡沫细胞、内膜广泛增厚,硼替佐米组主动脉根部内膜局部增厚,泡沫细胞的数量较少。硼替佐米组小鼠主动脉根部激活型caspase-3表达高于生理盐水组(0.048±0.0133 vs 0.021±0.008,P <0.05)。硼替佐米组小鼠主动脉根部凋亡率较生理盐水组明显增高(0.302±0.105 vs 0.164±0.039,P <0.05)。结论蛋白酶体抑制剂硼替佐米可通过诱导VSMC凋亡从而延缓LDLR-/-小鼠主动脉动脉粥样硬化的进展,其机制可能与调控激活型caspase-3表达有关。     

15-HETE影响大鼠脑动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的机制

目的 观察15-羟化二十烷四烯酸(15-HETE)对脑动脉平滑肌细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,进一步探讨15-HETE引起[Ca2+]i变化的钙来源,从而明确15-HETE引起脑动脉平滑肌收缩的机制. 方法 酶法分离大鼠脑动脉平滑肌细胞,分为15-HETE组与对照组,15-HETE组添加15-HETE处理;对照组正常培养,不做其他处理.激光共聚焦技术测定15-HETE对[Ca2+]i的影响;进一步通过阻断外钙内流和耗竭内钙,探明15-HETE引起钙动员的来源;应用血管环技术从功能上判定细胞外钙对15-HETE引起的颈内动脉环收缩有无影响. 结果 15-HETE组与对照组相比,[Ca2+]i明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);预先加入硝苯地平、镧离子及改用无钙液阻断外钙内流后,15-HETE组[Ca2+]i仍明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);而预先加入咖啡因耗竭细胞内钙后,15-HETE组[Ca2+]i较对照组差异无统计学意义(P＞0.05);采用无钙液去除细胞外钙后,15-HETE引起的血管环张力增加与有钙液中比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 15-HETE可通过促使内钙释放而使[Ca2+]i增加,进而引起大鼠脑动脉平滑肌收缩.     

The effects of hyperosmolar solutions on cerebral arterial smooth muscle

The present study was conducted to clarify the effect of hyperosmolar solutions on the constrictor responses of cerebral arteries to vasoactive agents, in vitro. The canine basilar arteries under resting tension were slightly relaxed with both mannitol (0.5, 1 and 2%) and sucrose (1, 2, and 4%). Constrictor responses of canine basilar arteries to 40 mM K+, 10(-7) M serotonin or 10(-6) M prostaglandin F2 alpha (PGF2 alpha) were markedly suppressed by pretreatment with either mannitol or sucrose. The rate of suppression correlated well to osmolarity changes in the Kreb's solution. When the specimens were incubated in Ca++-free medium, 10(-6) M PGF2 alpha elicited small contractions. Addition of 1 mM Ca++ to the bath promptly elicited larger contractions. The large contractions in response to the influx of extracellular Ca++ were markedly suppressed by pretreatment with mannitol or sucrose, while the small contractions induced by intracellular Ca++ were not inhibited. In addition, the contractions induced by the addition of Ca++ to the specimens depolarized with 80 mM K+ in Ca++-free medium were dose-dependently inhibited with either mannitol or sucrose, while the caffeine-induced contractions in Ca++-free medium were not altered by mannitol. These results suggest that hyperosmolar solutions produce non-specific vasodilation of cerebral arteries by inhibiting the influx of external Ca++ rather than the release of intracellularly stored Ca++. This direct vasodilatory effect may account in part for the transient increase of cerebral blood flow following administration of hyperosmolar mannitol.     

氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖及周期素D1的表达

背景：氧化型低密度脂蛋白可通过Ras/Raf/丝裂原活化蛋白激酶激酶/丝裂原活化蛋白激酶途径诱导血管平滑肌细胞增殖及细胞周期蛋白的表达。 目的：观察胞外信号调节激酶是否参与了氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞周期推进以及周期素D1的表达。 设计、时间及地点：对照观察细胞学实验,于2008-02/10在广州医学院完成。 材料：人血浆低密度脂蛋白来自健康志愿者血清。SD大鼠由广州医学院实验动物中心提供。 方法：采用超速离心法分离人低密度脂蛋白进行氧化修饰及鉴定。以酶消化法培养大鼠血管平滑肌细胞,采用免疫组织化学染色法鉴定。 主要观察指标：在静止的血管平滑肌细胞中加入MEK1/2选择性抑制剂10 μmol/L PD98059和/或50 mg/L氧化型低密度脂蛋白,以CCK-8和细胞计数法测定细胞增殖,流式细胞术观察细胞周期,蛋白印迹检测周期素D1蛋白表达及胞外信号调节激酶的活性。 结果：CCK-8和细胞计数法显示,氧化型低密度脂蛋白能明显诱导血管平滑肌细胞增殖,PD98059抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖,并且呈时间依赖性。流式细胞术分析表明,经氧化型低密度脂蛋白处理24 h后,血管平滑肌细胞从G0/G1期进入S期,S期细胞百分比明显增高(P < 0.01),加入PD98059处理24 h后,血管平滑肌细胞由G0/G1期向S期的推进受到抑制。蛋白印迹结果显示,氧化型低密度脂蛋白能明显诱导周期素D1蛋白表达及胞外信号调节激酶的磷酸化,PD98059抑制氧化型低密度脂蛋所诱导的周期素D1蛋白表达以及胞外信号调节激酶的磷酸化。 结论：氧化型低密度脂蛋白能诱导血管平滑肌细胞增殖,促进细胞由G0/G1期向S期转换以及周期素D1表达,其作用部分是由胞外信号调节激酶所介导。     

刺五加皂甙对大鼠血管性痴呆防治作用的研究

目的探讨刺五加皂甙对血管性痴呆(VD)模型大鼠学习记忆等认知功能的改善和对海马CA1区神经元的保护作用.方法SD大鼠随机分为正常组、(VD)模型组、刺五加皂甙组,采用4-血管阻断改良法制备VD大鼠模型,各组作避暗回避试验和跳台试验等行为学测试,Nissl染色.结果行为学测试表明刺五加皂甙能明显改善(VD)模型大鼠学习记忆等认知功能,形态学结果表明刺五加能减轻海马CA1区神经元丢失.结论刺五加皂甙能减轻海马脑缺血缺氧后神经元损害,从而改善(VD)模型大鼠学习记忆功能.     

Effects of Lamotrigine on brain nitrite and cGMP levels during focal cerebral ischemia in rats

Glutamate receptor antagonists are protective in animal models of focal cerebral ischemia. Lamotrigine (3,5-diamino-6-[2,3-dichlorophenyl]-1,2,4-triazine) is an anticonvulsant drug that blocks voltage-gated sodium channels and inhibits the ischemia-induced release of glutamate. Experiments in primary neuronal cultures implicate nitric oxide (NO) as a mediator of glutamatergic neurotoxicity acting via N-Methyl- d -Aspartate (NMDA) receptors. The effect of glutamate release inhibitor, Lamotrigine upon NO and cGMP production has been examined in focal cerebral ischemia in rats. Focal cerebral ischemia was produced by the permanent occlusion of right middle cerebral artery (MCA) in urethane anesthetized rats. A number of indicators of brain NO production (nitrite, cGMP) were determined in ipsilateral and contralateral cerebral cortex and cerebellum after 0, 10, 60 min of focal cerebral ischemia. The same parameters were measured in rats treated with Lamotrigine (20 mg/kg, i.p.) 30 min before or just after the occlusion of the right MCA.