自噬对血管性痴呆大鼠海马CA1区生长相关蛋白-43及微管相关蛋白-2表达的影响

目的探讨自噬对血管性痴呆大鼠海马CA1区突触可塑性相关蛋白生长相关蛋白-43(GAP-43)和微管相关蛋白-2(MAP-2)表达的影响。方法 96只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、血管性痴呆模型组(VD组)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤预处理组(3-MA组)和自噬激动剂雷帕霉素预处理组(Rap组)。每组又分为模型制备成功后1周、2周、4周、8周四个亚组,每个亚组6只。应用改良Pulsinelli四血管阻断法制备血管性痴呆模型。采用免疫组化法检测大鼠海马CA1区GAP-43、MAP-2蛋白的表达。结果与Sham组比较,VD组各时间点GAP-43蛋白表达明显增加(P0.01),MAP-2蛋白表达明显减少(P0.01);与VD组比较,3-MA组各时间点GAP-43、MAP-2蛋白表达水平增加(P0.05),Rap组各时间点GAP-43、MAP-2蛋白表达水平降低(P0.05)。结论自噬抑制血管性痴呆大鼠海马CA1区突触可塑性相关蛋白GAP-43、MAP-2表达,抑制自噬可能有利于血管性痴呆大鼠海马CA1区神经突触重塑。     

盐酸法舒地尔对蛛网膜下腔出血大鼠学习记忆功能及海马CA1区自噬的影响

目的研究盐酸法舒地尔对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠学习记忆及海马CA1区自噬的影响。方法雄性Sprague-Dawley大鼠54只,随机分为假手术组、SAH组、药物组,各18只。颈内动脉刺破法造模,药物组造模成功后予盐酸法舒地尔10 mg/kg腹腔注射,每天1次,假手术组和SAH组腹腔注射等量生理盐水,干预后6 h、24 h、72 h予穿梭箱试验;取海马CA1区组织HE染色观察细胞形态,免疫组织化学染色观察Beclin-1和微管相关蛋白l轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)的表达。结果与假手术组相比,SAH组大鼠各时间点穿梭箱试验逃避反应次数减少(P0.05),逃避反应时间延长(P0.05);海马CA1区神经细胞数目减少(P0.05),Beclin-1、LC3-Ⅱ表达增高(P0.05)。与SAH组相比,药物组各时间点逃避反应次数增多(P0.05),逃避反应时间减少(P0.05);海马CA1区神经细胞增多(P0.05),Beclin-1、LC3-Ⅱ表达进一步增多(P0.05)。结论盐酸法舒地尔可改善SAH大鼠学习记忆功能,减少神经细胞损伤,增强海马CA1区自噬。     

养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区超微结构及p38丝裂原活化蛋白激酶蛋白表达的影响

目的观察养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区超微结构及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白表达的影响。方法 180只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、血管性痴呆模型组(模型组)和养血清脑颗粒治疗组(治疗组),采用改良的Pulsinelli四血管阻断法制作血管性痴呆模型,分别在术后1、2、4、8周采用透射电镜观察大鼠海马CA1区超微结构变化,免疫组化法和Western blotting法检测海马CA1区p38MAPK水平。结果模型组海马CA1区神经元大量固缩,细胞核溶解,异染色质边集,线粒体肿胀。治疗组海马CA1区神经元核膜较完整,核染色质分布较均匀,胞质内线粒体及其他细胞器基本正常。与假手术组相比,模型组各时间点p38MAPK蛋白表达明显增多(P0.01),4周时达高峰;与模型组比较,治疗组各时间点p38MAPK蛋白表达明显减少(P0.01)。结论养血清脑颗粒可改善血管性痴呆模型大鼠海马CA1区损伤的神经元超微结构,可能与抑制p38MAPK蛋白的表达有关。     

微管相关蛋白1轻链3Ⅱ与微管相关蛋白2在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达

目的观察微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)与微管相关蛋白2(MAP-2)在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达及变化情况。方法 48只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组和模型组(血管性痴呆模型),每组大鼠又随机分为模型制备成功后1、2、4和8周4个亚组,每个亚组6只。采用四血管阻断法制备大鼠血管性痴呆模型。免疫组化法检测LC3Ⅱ与MAP-2的表达。结果与假手术组比较,模型组各时间点LC3Ⅱ表达均显著增高(P0.001),MAP-2表达均显著减少(P0.001)。模型组各时间点大鼠海马CA1区LC3Ⅱ与MAP-2的蛋白表达呈负相关(r=-0.723,P0.001)。结论 LC3Ⅱ蛋白在海马CA1区过度表达,MAP-2蛋白表达减少,这可能是血管性痴呆发生、发展的重要机制之一。     

电针对阿尔茨海默病大鼠海马突触可塑性及自噬相关蛋白的影响

目的 观察电针对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马区突触可塑性及自噬的影响,探讨电针改善AD认知功能障碍的相关机制。 方法 采用随机数字表法将30只健康雄性SD大鼠分为假手术组、模型组及电针组,通过向双侧海马CA1区注射Aβ1-42将模型组及电针组大鼠制成AD动物模型,假手术组同部位注射等量生理盐水。于造模成功后次日,电针组选取百会、双侧肾俞穴进行电针治疗,每次治疗20 min,每天治疗1次,每周治疗6次,连续治疗2周。于治疗结束后采用Morris 水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,采用MED64微电极阵列检测大鼠海马区长时程增强（LTP）变化,采用透射电镜观察海马区自噬小体形成情况,采用Western Blot法检测海马区自噬相关蛋白1（Beclin-1）及微管相关蛋白轻链3（LC3）含量。 结果 与模型组比较,电针组大鼠逃避潜伏期明显缩短（P<0.05）,穿越平台次数显著增多（P<0.05）;电针组大鼠海马区神经元兴奋性突触后电位波幅百分比较模型组显著增高（P<0.05）;模型组大鼠海马神经元中有大量自噬体,而电针组明显减少;电针组大鼠海马组织LC3Ⅱ/LC3I比值和Beclin-1蛋白表达量均较模型组显著降低（P＜0.05）。 结论 电针百会、肾俞穴可改善AD模型大鼠学习记忆功能,促进海马LTP恢复,其治疗机制可能与调控海马神经细胞自噬水平有关。     

电针井穴对血管性痴呆大鼠行为学及海马CA1区CREB表达的影响

目的:探讨电针井穴对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆能力及海马CA1区环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响。方法:采用4VO法制备VD大鼠模型。随机分为伪手术组、模型组、药物组、电针组,每组各8只,通过跳台试验检测各组大鼠的学习记忆能力,采用免疫组织化学技术检测各组大鼠海马CA1区CREB阳性神经元表达的变化。结果:模型组大鼠学习记忆能力低于假手术组(P0.01),电针组与药物组学习记忆能力明显优于模型组(P0.01),但不及假手术组(P0.05),电针组和药物组无差异(P0.05);CREB的表达模型组显著低于假手术组(P0.01)。结论:电针井穴可能通过增加VD大鼠海马CA1区CREB的表达,保护神经元,改善大鼠学习记忆能力。     

血管性痴呆小鼠海马神经元ERK1 mRNA表达特征的研究

目的：探讨血管性痴呆（vascular dementia,VD）小鼠海马CA1区神经元ERK1 mRNA的表达及意义。方法：双侧颈总动脉线结反复缺血-再灌注法制备VD小鼠模型,设正常组、假手术组及血管性痴呆模型组,利用跳台试验和水迷宫试验观测其行为学改变,应用原位杂交技术观测其海马CA1区神经元ERK1 mRNA的表达变化。结果：VD模型组小鼠学习、记忆成绩低于正常组和假手术组（P〈0.05）。与正常组（34.79±21.10）和假手术组（34.43±18.65）比较,VD模型组小鼠海马CA1区的ERK1 mRNA阳性锥体细胞面密度值（14.57±3.67）明显减少（P〈0.01）。结论：VD小鼠学习、记忆成绩下降可能与其海马ERK1 mRNA表达水平增加有关。ERK1 mRNA的表达增加是血管性痴呆小鼠学习、记忆成绩下降的分子学机制之一。     

养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法 144只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(n=48)、血管性痴呆模型组(模型组,n=48)和养血清脑颗粒治疗组(治疗组,n=48)。采用改良Pulsinelli四血管阻断法制作血管性痴呆大鼠模型。假手术组和模型组灌胃生理盐水10 ml/(kg?d);治疗组灌胃养血清脑颗粒3.2g/(kg?d)。分别在术后1周、2周、4周和8周采用免疫组化法和Western blotting法检测海马CA1区GFAP表达水平。结果与对照组比较,模型组各时间点大鼠海马CA1区GFAP表达明显增高(P0.01);与模型组比较,治疗组各时间点GFAP表达明显下降(P0.01)。结论养血清脑颗粒可抑制血管性痴呆大鼠海马CA1区星形胶质细胞的增生和活化。     

黄蒲通窍胶囊对血管性痴呆大鼠神经细胞凋亡Fas/FasL蛋白表达的影响

目的探讨黄蒲通窍胶囊对血管性痴呆大鼠神经细胞凋亡Fas/FasL蛋白表达的影响机制。方法制作线栓法大脑中动脉栓塞所致的血管性痴呆大鼠模型,观察各组大鼠神经细胞凋亡Fas/FasL蛋白表达的变化。结果4周后模型组大鼠皮层(额顶叶皮质)及海马CA1区神经细胞内有大量的Fas、FasL蛋白表达,中药组的阳性细胞数明显降低,有显著性差异(P<0.01)。结论黄蒲通窍胶囊可能通过Fas信号路径抑制神经细胞凋亡而起到改善记忆和认知功能的作用。     

脑缺血大鼠海马CA1、CA3区及齿状回钙神经素的表达与学习记忆损伤的关系

目的:建立脑缺血致大鼠学习记忆障碍模型,通过免疫组化检测海马CA1、CA3区和齿状回钙神经素(CaN)的分布与表达,探讨海马内CaN的表达与脑缺血后学习记忆损伤的关系。方法:SD雄性大鼠54只,随机分为对照组、假手术组、缺血组、缺血再灌注组,对后3组大鼠建立模型。大鼠造模后1周进行Morris水迷宫学习获得实验,3周后进行记忆保持实验。实验结束后取海马组织,HE染色观察海马CA1、CA3区及齿状回组织细胞形态,免疫组化法检测CaN的表达。结果:(1)与对照组及假手术组相比,缺血再灌注组海马病理学变化、学习记忆损伤程度最明显。(2)与对照组及假手术组相比,缺血组与缺血再灌注组CA1、CA3区及齿状回的CaN阳性细胞数明显增多(P<0.05);假手术组与对照组CA1、CA3区及齿状回的CaN阳性细胞数相比较差异无统计学意义;缺血组与缺血再灌注组CA1区和齿状回的CaN阳性细胞数相比较差异无统计学意义;缺血组CA3区CaN阳性细胞数与缺血再灌注组阳性细胞数差异有统计学意义(P<0.05)。结论:缺血组、缺血再灌注组大鼠学习记忆功能明显损伤,其海马CA1、CA3区及齿状回CaN表达明显增多,提示海马内CaN可能与大鼠脑缺血致学习记忆障碍有关。     

白念珠菌酰基载体蛋白1的制备

目的：通过在大肠埃希菌BL21中表达白念珠菌酰基载体蛋白1（acyl carrier protein 1, Acp1）, 以制备高纯度的目的：蛋白。方法：采用PCR扩增目的：基因ACP1后, 在序列的C端拼接上6xHis tag及终止子, 拼接完成后连接构建到质粒中, 成为原核表达载体pET30a-ACP1, 转化入大肠埃希菌感受态细胞BL21中, 通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside, IPTG）诱导表达。收集表达产物后通过镍离子螯合柱纯化, 最终利用考马斯亮蓝Bradford法测得目的：蛋白含量。结果：白念珠菌酰基载体蛋白Acp1在大肠埃希菌BL21中高效表达;抽提纯化蛋白后行蛋白电泳检测, 结果显示, 在还原条件下Acp1一直存在2条相对分子质量为17 000的条带。经还原和非还原电泳及蛋白印迹法检测, 结果显示该蛋白在非还原状态下有聚集。利用Bradford方法测得蛋白Acp1浓度为2.68 mg/mL。结论：成功制备了白念珠菌酰基载体蛋白Acp1, 为后期利用荧光偏振法筛选靶点为Ppt2酶的临床药物提供基础。     

酒精性肝炎单核细胞趋化蛋白-1含量分析

目的 分析单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与酒精性肝炎(AH)肝损伤间的关系。方法 检测46例AH患者血清中MCP-1值，同时观察了16例患者不同时间点(0、1、2、4月)分离的单核细胞，在不同培养环境中进行体外培养24小时悬浮液中的MCP-1值，用SPSS软件分析其差异。结果 AH患者中MCP-1值明显高于对照组，其单棱细胞在体外仍能分泌高含量的MCP-1，尤其在脂多糖(LPS)作用下更显著；但随着病情好转，MCP-1含量逐渐下降。N-乙酰半胱氨酸(NAC)能明显抑制单核细胞分泌MCP-1。结论 急性AH患者MCP-1含量增高，LPS能促进单核细胞分泌MCP-1，而NAC则能抑制其分泌MCP-1。     

E3泛素连接酶1对SOX2蛋白稳定性的影响

目的 探讨WW结构域的E3泛素蛋白连接酶1(WWP1)和E3泛素蛋白连接酶2(WWP2)对3种转录因子[八聚体结合转录因子4(OCT4)、性别决定区Y-box蛋白2(SOX2)和NANOG蛋白]水平的影响.方法 通过质粒转染,在HEK 293FT细胞中分别共表达OCT4、SOX2、NANOG和WWP1或WWP2.通过免...     

肥胖与蛋白酪氨酸磷酸酶-1B的研究现状

蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(proteintyrosinephosphatase1B,PTP-1B)在人类各组织细胞中广泛表达,没有特异性受体,与细胞内不同蛋白底物作用可产生不同的生理反应,在体内主要受生长因子、蛋白激酶等的调节。目前研究发现在肥胖人群中存在胰岛素抵抗、瘦素抵抗、脂代谢异常等现象,这些现象与肥胖症的发病及发展关系密切;同时肥胖人群细胞内PTP-1B也表达明显增多,提示PTP-1B可能参与了肥胖症的发病。在动物实验中发现肥胖动物模型的PTP-1B表达增多;而其体重下降,PTP-1B表达也随之减少。PTP-1B基因缺失的小鼠在致肥胖饮食条件下也不出现肥胖,一系列动物实验进一步证实了PTP-1B与肥胖症之间的关系。这使人们普遍关注PTP-1B特异性抑制剂在肥胖治疗中的价值,文章主要介绍了PTP-1B的研究现状及其引起肥胖症的可能机制。     

超促排卵对galectin一1在小鼠子宫内膜围着床期表达的影响

目的 观察超促排卵药物（PMSG＋HCG）对小鼠子宫内膜组织围着床期半乳糖凝集素（galectin）-1表达的变化,探讨galectin-1在超促排卵下对胚泡着床过程中所起的作用.方法 将60只雌性小鼠随机分为两组,对照组：生理盐水组;实验组：促排卵组.采用免疫组织化学（IHC）SABC法检测小鼠围着床期子宫内膜galectin-1蛋白的表达;用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测小鼠围着床期子宫内膜galectin-1 mRNA的表达.结果 IHC结果 显示,galectin-1分布于小鼠子宫内膜上的腔上皮、腺上皮及基质细胞中;超促排卵组小鼠子宫内膜上galectin-1表达水平显著低于对照组,另一方面,两组结果 均显示越接近着床期,子宫内膜上galectin-1表达水平越高（P〈0.05）.结论 galectin-1参与到胚泡着床这一重要生命活动过程,超促排卵抑制galectin-1在小鼠子宫内膜上的表达.     

六白菖砂粒剂对颈椎病动物模型骨形态发生蛋白2及LIM矿化蛋白1的影响

背景:骨形态发生蛋白2与LIM矿化蛋白1在成骨细胞分化、成熟中有重要作用,与颈椎病的发生有很大联系。目的:观察六白菖砂粒剂对家兔颈椎病模型外周血清中骨形态发生蛋白2、LIM矿化蛋白1的影响。方法:将50只成年健康雄性大耳白兔随机分为5组。除正常对照组外采用蹲坐低头位制作颈椎病动物模型。颈复康对照组每天以颈复康0.25g灌胃,六白菖砂粒剂高剂量组和低剂量组每天分别以0.5g、0.25g灌胃,正常对照组和模型对照组予同等容量的蒸馏水灌胃。与4周、12周测量动物颈椎骨密度,12周时取椎体检测离体骨密度,并检测外周血清中骨形态发生蛋白2、LIM矿化蛋白1因子水平。结果与结论:六白菖砂粒剂高剂量组中骨形态发生蛋白2、LIM矿化蛋白1水平显著高于空白对照组、颈椎病模型对照组和六白菖砂粒剂低剂量组(P<0.05);颈椎病模型对照组中骨形态发生蛋白2、LIM矿化蛋白1水平明显低于正常对照组、颈复康颗粒对照组和六白菖砂粒剂高剂量组(P<0.05),而与六白菖砂粒剂低剂量组相比差异无显著性意义(P>0.05)。提示六白菖砂粒剂是通过提高家兔血清骨形态发生蛋白2、LIM矿化蛋白1水平对颈椎病产生疗效。