高效液相色谱法测定血浆中儿茶酚胺

目的：建立用高效液相色谱（HPLC）电化学检测器同时测定血浆中儿茶酚胺水平的方法,以诊断哮铬细胞瘤和神经母细胞瘤。方法：利用离子对提取血浆中儿茶酚胺,电化学检测器检测血浆中儿茶酚胺水平,并测定其回收率,线性范围,精密度及最低检查限度,参考18例正常人儿茶酚胺水平建立正常参考范围。结果：肾上腺素,去甲肾上腺素回收率分别为86．2％和90．5％,该方法测定肾上腺素在0．2－11．6nmol.L^-1内呈良好线性关系,最低检查限度为0．05nmol.L^-1,批内,批间变异系数别小于10．7％和11．1％。结论：本法肜于检测血浆中儿茶酚胺水平具有准确,灵敏,简便的特点,适合临床诊断。     

高效液相色谱电化学法测定血清褪黑激素水平

目的 :建立测定血清褪黑激素水平的高效液相色谱方法。方法 :血清褪黑激素用氯仿反复萃取 ,氯仿层经真空干燥、氮气吹干 ,最后残流物溶解进样。用C18反相柱进行色谱分析 ,电化学检测器测定结果。结果 :测定线性范围达 1.72nmol·L-1 ,最低检测限为 0 .0 84nmol·L-1 ,日内变异 4.2 %～ 4.8%,日间变异 4.4%～ 5 .0 %,方法回收率 5 5 .3 %～ 76.5 %。结论 :本方法可用于临床实验室测定血清褪黑激素水平。     

HPLC-FD法检测尿儿茶酚胺

目的 :建立一种简便、灵敏度高、重复性好的尿儿茶酚胺检测方法。方法 :应用高效液相色谱 (HPLC)系统和荧光检测器 ,探索检测 2 4h尿去甲肾上腺素、肾上腺素和多巴胺含量的最佳条件以及回收率、线性范围、精密度、最低检测线。结果 :流动相甲醇与 0 .0 2mol·L- 1 磷酸二氢钾的比为 2∶98、pH值为 3 .0时测定效果最佳。去甲肾上腺素、肾上腺素和多巴胺回收率依次为 69%～ 78%、63 %～ 73 %及 60 %～ 71% ,最低检测线依次为 0 .0 15、0 .0 0 8、0 .0 0 3 μmol·L- 1 ,RSD为 4.9%～ 10 .6%。结论 :HPLC FD法用于临床检测尿儿茶酚胺简便易行 ,灵敏度高 ,重复性好 ,易于临床推广     

血浆儿茶酚胺的同时提取及反向高效液相测定法

目的建立一种操作简便、高效的测定血浆中去甲肾上腺素(NA)、肾上腺素(AD)、的方法,为有关药物作用机制的研究提供实验手段.方法以有机溶剂提取,高效液相色谱-电化学检测器(HPLC-EC)测定大鼠血浆NA、AD的含量.结果测得NA、AD的绝对回收率分别为:86.3±11.6%,88.5±16.3%.线性范围0.04～4ng,批内与批间变异系数分别小于6%及7%.结论该方法具有简便、迅速、回收率较高的特点,便于应用.     

高效液相色谱法测定生物样品中儿茶酚胺及其代谢产物

目的 :建立一种测定生物中儿茶酚胺及其代谢产物的灵敏方法。方法 :样品经过磺基水杨酸去蛋白后直接进样 ,测定各种生物样品中的儿茶酚胺及其相关的代谢产物 ;流动相为 2 0mmol·L- 1 柠檬酸三钠 (pH4 .5 0 ) 甲醇(95∶5 ,V V) ,柱温 35℃ ,检测器电压为 0 75V。结果 :该方法能同时检测 7种化合物。最低检测限为 10～ 2 5pg·ml- 1 ,回收率均在 96 %以上 ,线性范围为 2 0pg·ml- 1 ～ 10 μg·ml- 1 。结论 :该方法灵敏可靠 ,能同时测定生物样品中的儿茶酚胺及其代谢产物     

HPLC-ECD测定人血及尿中儿茶酚胺浓度

目的建立简便快速准确测定体内儿茶酚胺的方法,为临床检测和研究提供技术支持。方法血浆和尿样经Al2O3吸附,净化,0．2mol·L－1HCl洗脱,以C8为固定相,磷酸缓冲液（pH2．7）、200mg·L－1SDS、10mg·L－1EDTA、6％乙晴为流动相,分离去甲肾上腺素（NE）肾上腺素（E）、多巴胺（DA）,电化学检测,工作电压＋0．75V,灵敏度4nA,以外标法定量。结果NE,E,DA分离良好,且不受体内其他内源性物质及代谢物干扰。绝对回收率血浆为（71．58±5．57）％,尿样为（75．65±6．22）％。血浆相对回收率为（95．83±4．98）％,尿样为（101．5±7．17）％,血样线性范围0．1～20μg·L-1,尿样0．5～80μg·L-1,最低检测浓度0．05μg·L－1。结论操作、分析简便快速,专一性强,无干扰,重复性较好,适合于儿茶酚胺的临床测定与研究。     

高效液相色谱测定尿中香草扁桃酸含量

目的 :建立测定尿中的香草扁桃酸 (VMA)含量的高效液相色谱法。方法 :以Nova PakC18柱为分析柱 ,流速是 0 9ml·min-1,流动相为 40mmol·L-1NaH2 PO4 液 (内含Na2 EDTA和辛基磺酸钠各为 5 0mg·L-1,pH3.0 ) ,采用电化学检测器和利用内标法测定了 30例正常人 2 4h尿中的VMA含量。结果 :当VMA浓度为 5～ 2 0 0 μmol·L-1时呈良好的线性关系。VMA的平均回收率为 99 1% ,平均批内变异系数为 5 8% ,平均批间变异系数为 7 7% ,最低检出量是 5 3 2μg。标本量为 10 0 μl时的最低检出浓度为 0 2 8μmol·L-1;正常人 2 4h尿中VMA含量为 (18 13± 6 17) μmol。结论 :该方法能准确测定尿中VMA含量 ,适合临床常规应用。     

高效液相色谱-荧光检测法测定血浆总同型半胱氨酸浓度

目的 :建立测定血浆总同型半胱氨酸的高效液相色谱 (HPLC) 荧光检测分析方法。方法 :用TCEP将血浆中各种形式的同型半胱氨酸 (Hcy)还原成总同型半胱氨酸 (tHcy) ,以光胺作内标 ,巯基特异性荧光衍生剂SBD F对Hcy ,胱胺等含巯基化合物进行柱前衍生 ,然后行HPLC 荧光检测。结果 :本方法所检测的Hcy浓度在 2 .5～ 16 0 μmol·L- 1 范围具有良好的线性关系 (r =0 .9975 ) ,Hcy最低检测限 0 .6 2 5 μmol·L- 1 ,批内变异小于 5 .5 % ,批间变异小于 9.0 % ,平均回收率 98.87%。结论 :本法简便、灵敏、精确、稳定     

尿中儿茶酚胺含量的高压液相色谱检测法

①目的　建立高压液相色谱快速测定尿中儿茶酚胺含量的方法。②方法　流动相选用柠檬酸 柠檬酸三钠 甲醇 离子对试剂 EDTA 2Na混合液 (pH 4 .2 ) ,采用PEC18(30mm× 3mm)色谱柱 ,并以自制的固相萃取柱对标本预处理 ,以电化学检测器检测。③结果　线性范围在 2～ 10 0 0 μg L ,最低检测限为 2～ 30 μg L ,平均回收率为80 .1%～ 10 7.3% .④结论　该方法能满足对嗜铬细胞瘤等疾病的实验诊断需要。     

高效液相色谱柱后衍生法测定豚鼠鼻粘膜中组胺

通过比较各种分析柱的分离效果 ,建立用离子交换柱分离 ,邻苯二甲醛 (OPA)柱后衍生荧光检测并分析豚鼠鼻粘膜组织中组胺的液相色谱方法 ,并对流动相的离子强度和pH进行了优化 ,确定以 40mmol·L- 1 pH 5 .5 0的柠檬酸钠缓冲液作为流动相为最佳条件。该方法的最低检测限为 5 0nmol·L- 1 ,回收率 >92 % ,线性范围为 5 0nmol·L- 1～ 5 0 0 μmol·L- 1 ,组胺的保留时间为 13min 12s,组胺峰面积的相对标准差 <3%。     

急性胰腺炎患者尿胰蛋白酶原激活肽的动态变化及其意义

目的 :观察急性胰腺炎 (AP)患者尿中胰蛋白酶原激活肽 (TAP)的动态变化特点及其临床意义。方法 :出现首发症状后 4 8h内入院的急性胰腺炎患者 4 1例及对照组患者 1 1例 ,入院时、2 4、4 8及 72h取尿样。运用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测TAP浓度。结果 :入院时 ,重症组尿TAP中位值 (95nmol·L-1 )显著高于轻型组 (2 0nmol·L-1 ;P <0 .0 1 )及对照组 (1 5nmol·L-1 ;P <0 .0 1 )。 2 4 ,4 8h重症组仍然显著高于轻型组及对照组 (P <0 .0 5 ) ,72h各组间差异无显著性。轻型组与对照组各时相差异均无显著性 (1 5nmol·L-1 ;P <0 .0 1 )。结论 :急性胰腺炎患者早期胰腺间质和血中胰蛋白酶原的暴发激活可能是重症急性胰腺炎 (SAP)发病的关键环节。早期动态检测TAP有助于对病情和预后的判断     

HPLC紫外检测法测定血浆甲磺酸瑞波西汀浓度

目的建立测定血浆甲磺酸瑞波西汀浓度的高效液相色谱检测法。方法以麦普替林为内标,取血浆样本1mL,用饱和Na2HPO4碱化后以重蒸乙醚5mL提取,再用0.2mol.L-1盐酸0.2mL反提取,80℃～100℃热水浴下氮气吹干盐酸层,用50μL流动相重组后进样。采用InertsilODS-3柱(GLSciense,5μm,4.6mm×150mm)进行分离。流动相为乙腈-50mmol/L磷酸钠缓冲液(pH=6)(40:60,v/v),流速为0.6mL.min-1,紫外检测波长210nm。结果瑞波西汀对内标的峰高比与血浆甲磺酸瑞波西汀浓度直线相关,相关系数r=0.9997,线性范围3.12～200ng.mL-1。甲磺酸瑞波西汀的最低检测限0.5ng,最低检测浓度2ng.mL-1,提取回收率在82.50%～86.08%之间,批内和批间RSD分别为2.02%～5.33%和3.83%～8.50%。结论本法具有较高的灵敏度、精密度和特异性,适用于甲磺酸瑞波西汀的药代动力学和治疗药物监测的研究。     

马来酸罗格列酮缓释片有关物质的测定

目的：建立RP-HPLC法测定马来酸罗格列酮缓释片的有关物质。方法：采用ODS Diamonsil^TM C18（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈-0．01mol／L醋酸钠水溶液（冰醋酸调pH=6．0）（57：43）。检测波长为247nm，流速为1．0ml／min。结果：罗格列酮与各杂质及降解产物分离良好，在10-60μg／ml浓度范围内线性关系良好（r=0．9999），平均回收率为99．9％，RSD为0．68％，最低检测限为10ng，最低定量限为70ng。结论：该方法简便、快速、准确、灵敏度高、重复性好，可用于马来酸罗格列酮缓释片有关物质的测定。     

液相色谱-质谱技术测定大鼠血浆中L-NNA浓度

目的建立检测大鼠血浆中L-NNA浓度的液相色谱-质谱联用方法。方法采用Phenomenex Kromosil C18分析柱(4.6mm×250mm,5.0μm),以甲醇∶水溶液(10∶90)为流动相,电喷雾电离源,选择性离子监测质荷比(m/z)分别为:149.3(L-NNA)、218.2(D-苯甘氨酰胺),以D-苯甘氨酰胺为内标物,测定大鼠血浆中L-NNA的浓度。结果 L-NNA浓度在0.10～6.44mg/L范围内线性关系良好;最低检测限为24μg/L,最低定量限为80μg/L;血浆中L-NNA的回收率在85%以上,日内和日间的相对偏差(RSD)均10%。结论本方法快速、准确、灵敏,可用于大鼠血浆中L-NNA浓度的测定。     

哌嗪雌酚酮的含量测定方法研究

目的 采用非水滴定法和HPLC-UV法测定哌嗪雌酚酮原料药含量,建立柱切换柱前衍生化荧光检测的HPLC法测定狗血浆中哌嗪雌酚酮含量。方法 分别采用无水冰醋酸为溶剂,0．1mol／L高氯酸为滴定液,结晶紫指示液指示终点的非水滴定法和HPLC-UV法测定哌嗪雌酚酮原料药含量;以FMOC-CL为衍生化试剂,采用柱切换柱前衍生化荧光检测的HPLC法测定狗血浆中哌嗪雌酚酮含量。结果非水滴定法日内精密度(RSD)及日间精密度(RSD)分别为0．28％、0．21％;HPLC-UV法中哌嗪雌酚酮在1．001～5．005μg范围内呈良好的线性关系和重现性,方法的检测限为4ng(S／N=3);柱切换柱前衍生化荧光检测的HPLC法中线性范围为8．4～420ng／mL,净化回收率为77．24％～83．10％,方法回收率为98．33％～103．3％,日内精密度(RSD)及日间精密度(RSD)分别小于7．7％和7．3％,方法的检测限为1ng(S／N=3)。结论 以上三种方法简便、准确、重现性好,分别为哌嗪雌酚酮原料药及狗血浆中的哌嗪雌酚酮的含量测定提供了方法。     

高效液相色谱法同时测定血浆中的肾上腺素和去甲肾上腺素

为同时测定人血浆中肾上腺素和去甲肾上腺素浓度,建立了高效液相色谱－电化学检测方法,采用ＹＷＧ－Ｃ１８分析柱,３,４－二羟在苄胺作内标,以０．０５ｍｏｌ／Ｌ醋酸盐结冲液（ｐＨ３．０）－甲醇－０．０５ｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ－Ｎａ２（７８：２０：２）为流动相,每１Ｌ流动相含ＳＤＳ２００ｍｇ,流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ。去甲肾上腺素和肾上腺素及内标的保留时间分别为７．３、８．３和１０．４分钟,线性范围均为３１     

H_2O_2对PC12细胞Caspase-3和NF-κB P65基因表达的影响

目的 :探讨H2 O2 对PC12细胞半胱天冬酶 3(caspase 3)和核转录因子 kappaBP6 5 (uclearfactor kappaB ,NF κBP6 5 )基因表达的影响。方法 :不同剂量H2 O2 (0～ 4 0 0nmol·L-1)处理PC12细胞 8h ,采用RT PCR检测Caspase 3、NF κBP6 5mRNA表达变化 ,Westernblot检测Caspase 3P 2 0活性片段和NF κBP6 5蛋白表达的变化 ,用比色法检测Caspase 3相对活性。结果 :随H2 O2 浓度从 10 0～ 4 0 0nmol·L-1增加 ,Caspase 3、NF κBP6 5mRNA表达和Caspase 3P2 0活性片段及NF κBP6 5蛋白表达水平逐渐增加 ;随H2 O2 浓度从 5 0～ 4 0 0nmol·L-1增加 ,Cas pase 3相对活性增加 (P <0 .0 5 ) ,在 4 0 0nmol·L-1H2 O2 时Caspase 3相对活性达最大值。 结论 :H2 O2 可剂量依赖性的增加Caspase 3mRNA表达和Caspase 3P 2 0活性片段 ,增加Caspase 3活性 ;H2 O2 可剂量依赖性的增加NF κBP6 5mRNA表达和NF κBP6 5蛋白表达。     

高效液相色谱法检测胃内容物中安定含量

目的：建立一种高效液相色谱法测定胃内容物中安定含量的方法.方法：用外标法,以正常大鼠胃内容物作为空白对照组,以正常大鼠胃内容物添加安定标准品作为样品组,通过液-液萃取法提取样品、挥干并以流动相溶解后,用高效液相色谱仪进行定量分析,计算胃内容物中安定含量,并评价方法的准确度、精密度和线性范围.结果：胃内容物中安定的线性方程为Y=35.553 3X＋40.383 3,r=0.999 5,线性范围为1.562 5～100 mg/L,最低检出限为0.076 mg/L,平均回收率为83.20％,日内精密度分别为4.89％、6.55％、7.22％,日间精密度为7.56％,均小于10％.结论：高效液相色谱法检测胃内容物中安定含量具有准确度和灵敏度高的优点.