苦参碱对胃腺癌细胞SGC7901黏附和移动的影响

目的:探讨不同浓度苦参碱对SGC7901细胞黏附和移动能力的影响。方法:5,50,100,250和500 mg/L苦参碱作用SGC7901细胞24 h后,黏附实验检测细胞黏附率,划痕损伤实验(Wound healing assay)检测迁移速度,在Transwell培养体系中,观察苦参碱对SGC7901细胞的抑制作用,PKA试剂盒检测PKA活性。结果:5,50,100,250和500 mg/L苦参碱处理24 h后,SGC7901细胞黏附率分别为78.56%,44.28%,42.48%,39.75%和31.54%,总体呈下降趋势,50 mg/L组与5 mg/L和500 mg/L组比较差异有显著性(P<0.01);与100 mg/L和250 mg/L组比较差异无显著性(P>0.05)。50 mg/L苦参碱作用24 h后SGC7901细胞迁移速度显著降低(P<0.01),Transwell培养体系中,苦参碱组上层迁移到下层的细胞明显少于不加苦参碱组(P<0.01),且PKA活性明显降低(P<0.01)。结论:苦参碱能抑制SGC7901细胞黏附和运动。     

VASP磷酸化对PDGF-BB诱导细胞迁移的影响

目的:探讨血管扩张刺激磷蛋白(VASP)对血小板源性生长因子B(PDGF-BB)诱导的细胞迁移的影响及其机制。方法:通过细胞划痕损伤实验检测ECV304细胞迁移速度,用非放射性酶法检测该细胞中蛋白激酶A(PKA)的活性,用Western blot检测细胞中磷酸化VASP(P-VASP)表达的变化。结果:经PDGF-BB作用后,ECV304细胞向划痕内迁移的距离较对照组明显增加(P<0.05),胞内PKA活性明显增加(P<0.05),细胞内磷酸化VASP的表达显著增强(P<0.05);而预先给予PKA抑制剂H89处理能显著地抑制PDGF-BB介导的ECV304的迁移效应(P<0.01),明显降低PDGF引起的胞内PKA活性升高(P<0.01),抑制PDGF-BB对VASP的磷酸化作用(P<0.05)。结论:PDGF-BB通过PKA信号传导通路,使其下游底物VASP磷酸化,磷酸化的VASP介导细胞移动。     

苦参碱抑制宫颈癌HeLa细胞增殖作用及机制

目的探讨苦参碱对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖的抑制作用及其分子机制。方法以不同浓度(0.5、1.0、1.5、2.0g/L)的苦参碱分别处理HeLa细胞24、48、72h后,应用MTT法检测细胞增殖抑制率,WesternBlot方法检测培养48h细胞中真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)、4E结合蛋白1(4E-BP1)蛋白表达情况;1.0g/L的苦参碱作用HeLa细胞1、3、6、12h后,Western Blot方法测其eIF4E、4E-BP1蛋白磷酸化水平。结果苦参碱明显抑制HeLa细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性:在相同时间内,随着苦参碱浓度的增加,HeLa细胞的增殖抑制率明显升高(F=235.035,P<0.05);在同一浓度时,随着苦参碱作用时间的延长,HeLa细胞的增殖抑制率也明显升高(F=320.207,P<0.05);2.0g/L苦参碱作用72h对HeLa细胞增殖抑制率最大,为(65.30±2.17)%。不同浓度苦参碱处理HeLa细胞48h后,eIF4E、4E-BP1蛋白的表达均无明显变化(F=0.171、0.932,P>0.05)。1.0g/L苦参碱作用于HeLa细胞不同时间后,细胞中eIF4E、4E-BP1蛋白磷酸化水平均降低,且呈时间依赖性(F=43.48、107.23,P<0.01)。结论苦参碱可以明显抑制体外培养宫颈癌HeLa细胞的增殖,其作用可能是通过抑制eIF4E以及4E-BP1的磷酸化,从而抑制蛋白翻译来实现的。     

薤白总皂苷对人宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响

目的观察薤白总皂苷对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响,并探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的薤白总皂苷(25、50、100、250、500、1000μg/ml)于不同作用时间(24、48、72 h)处理宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法检测不同浓度的薤白总皂苷在不同作用时间下对HeLa细胞增殖率的影响;用100和200μg/ml的薤白总皂苷处理宫颈癌HeLa细胞48 h后,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HeLa细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果薤白总皂苷对HeLa细胞的生长抑制作用呈明显的时间一剂量依赖性;薤白总皂苷(100和200μ/ml)处理能显著降低HeLa细胞线粒体膜电位,抑制HeILa细胞增殖,促进其凋亡(P<0.05,P<0.01);上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P<0.05,P<0.01)。结论薤白总皂苷有显著的抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能与其降低HeLa细胞线粒体膜电位,上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性有关。     

苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用

目的:观察不同浓度的苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用。方法:浓度分别为0.5,1.0,1.5,2.0 g/L的苦参碱体外培养HeLa细胞24,48,72 h后,分别用MTT法观察苦参碱对HeLa细胞的生长抑制作用、AnnexinV-PI双标染色用流式细胞仪检测苦参碱对HeLa细胞凋亡的影响。结果:不同浓度(0.5,1.0,1.5,2.0 g/L)的苦参碱具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖的作用,呈明显的时间、剂量依赖性。各浓度和时间之间比较具有显著差异性(P<0.01)。FCM检测结果显示苦参碱作用后,细胞的凋亡率增加,呈现随时间和剂量依赖性。各浓度和时间之间比较也具有显著差异性(P<0.01)。结论:苦参碱对人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有明显的抑制作用,能诱导细胞凋亡的凋亡。     

白藜芦醇抑制HeLa细胞增殖及其作用机制

目的研究白藜芦醇(Res)对宫颈癌HeLa细胞体外生长抑制作用及其机制。方法以17.5、35.0、70.0、140.0μmol/L Res分别处理HeLa细胞24、48与72 h,采用MTT法检测HeLa细胞存活率;应用70μmol/L的Res处理HeLa细胞24 h,采用Western Blot检测HeLa细胞中磷酸化真核细胞翻译起始因子4E(p-eIF4E)、磷酸化4E结合蛋白1(p-4E-BP1)和半胱氨酸蛋白酶蛋白3(caspase-3)的表达。结果不同浓度的Res作用不同时间后HeLa细胞增殖受到明显抑制,且呈时间和剂量依赖性,在相同时间内,随着Res浓度的增加,HeLa细胞的增殖抑制率明显升高(F=93.76~637.22,P<0.01);在同一浓度时,随着Res作用时间的延长,HeLa细胞的增殖抑制率也明显升高(F=8.79~29.99,P<0.01)。70μmol/L的Res作用HeLa细胞24 h后,HeLa细胞中p-eIF4E、p-4E-BP1蛋白表达较对照组减少(t=14.93、4.78,P<0.01),caspase-3蛋白表达较对照组增加(t=10.68,P<0.01)。结论 Res对宫颈癌HeLa细胞体外生长有明显抑制作用,其机制可能与抑制p-eIF4E、p-4E-BP1表达,并诱导caspase-3活化,从而增加HeLa细胞凋亡有关。     

抗CXCR4单克隆抗体12G5对胃癌细胞粘附与侵袭的影响

目的:探讨抗CXCR4单克隆抗体12G5对SGC7901细胞与基质的粘附性与侵袭性的影响.方法:应用MTT法、Transwell Chamber体外侵袭实验技术检测12G5(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)对胃癌细胞株SGC7901粘附、侵袭和迁移能力的影响.结果:(1)10μg/ml的12G5即可使胃癌细胞粘附Matrigel的能力明显受抑,与对照组相比(P<0.01).随着时间的延长及单抗浓度的加大,实验组的粘附能力低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).(2)SGC7901细胞对照组和实验组侵袭迁移实验穿膜细胞数分别为:121.7±5.51,54.3±9.07;140.3±6.03,62.0±11.53.实验组的侵袭迁移能力明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论:12G5能在一定程度上抑制SGC7901细胞的粘附性及侵袭性.     

川芎嗪对自血病细胞Jurkat粘附、运动和侵袭的影响

目的:研究川芎嗪(Ligustrazine)对人急性淋巴细胞白血病(Acute lymphoblastie leukemia,ALL)细胞株Jurkat粘附、运动和侵袭的抑制作用.方法:Jurkat细胞体外培养,经50μg/ml、100μg/ml、150μg/m)川芎嗪分别处理细胞,通过细胞粘附实验、细胞迁移实验和细胞侵袭实验全面观察川芎嗪对Jurkat细胞粘附力、运动力和侵袭力的影响.计量资料的多组比较采用方差分析(One-Way ANOVA).结果:与对照组比较,50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml川芎嗪可显著降低Jurkat细胞的运动力和降解基底膜的侵袭力(P<0.01);100μg/ml、150μg/ml川芎嗪能有效抑制Jurkat细胞与纤维粘连蛋白的粘附力(P<0.01);50μg/ml川芎嗪抑制作用不明显(P0.05).结论:川芎嗪能从细胞粘附、运动和侵袭等多环节全面抑制Jurkat细胞侵袭转移能力,是一种较好的白血病细胞侵袭转移的抑制剂,其抑制作用呈剂量依赖性.     

连翘乙醇提取物对人胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响

目的:探讨连翘乙醇提取物(EEFF)对人低分化胃腺癌细胞株BGC-823体外增殖和凋亡的影响。方法:四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测不同EEFF浓度(31.25、62.5、125、250、500和1000μg/ml)处理24、48和72 h对BGC-823细胞增殖的抑制率。Annexin V/PI双染色法通过流式细胞仪检测不同浓度EEFF(0、200和400μg/ml)处理24 h及400μg/ml EEFF分别处理24和48 h的BGC-823细胞凋亡率。结果:EEFF作用于BGC-823细胞24、48和72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(566.21±31.76)、(338.91±29.11)和(159.01±17.23)μg/ml,且其作用呈明显的时效和剂量关系。不同浓度EEFF(0、200和400μg/ml)处理24 h的BGC-823细胞凋亡率分别为8.3%、10.4%和16.4%;400μg/ml EEFF分别处理BGC-823细胞24和48 h的细胞凋亡率分别为18.7%和33.3%。结论:EEFF对BGC-823细胞有抑制增殖和促凋亡作用。     

三氧化二砷诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡的初步研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导子宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡,探讨As2O3 对子宫颈癌的临床应用意义。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0μmol/L的As2O3 作用1、2、3、4 d后HeLa细胞的存活率,并进行形态学观察;采用细胞凋亡原位检测(TUNEL)法进行细胞凋亡的检测。结果:2.0μmol/L As2O3 处理HeLa细胞48 h后,可见细胞的存活率明显降低(P<0.05),处理96 h后,细胞的存活率进一步降低(P<0.01),经5.0μmol/L As2O3 处理的HeLa细胞24 h后就明显可见细胞的存活率降低;As2O3 作用后,HeLa细胞具有明显的凋亡特征性改变;TUNEL法检测可发现HeLa细胞有DNA的断裂。结论:As2O3 可以诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡,抑制细胞增殖,随着As2O3 浓度增加,作用时间延长,效果越明显,其作用具有浓度和时间依赖性。     

苦参碱通过调控β-catenin信号通路抑制肝癌细胞干性

目的探讨苦参碱对人肝癌HepG2和Huh7细胞增殖活性、细胞干性、β-catenin转录活性以及AKT/GSK3β/β-catenin信号 通路的影响。方法应用MTT法检测细胞增殖活性,平板克隆形成实验检测0 g/mL、200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱对 人肝癌HepG2 和Huh7 细胞的克隆形成能力,荧光定量PCR分析0 g/mL、200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL 苦参碱对人肝癌 HepG2 和Huh7 细胞干性基因CD90、EpCAM（上皮细胞粘附分子）和CD133 mRNA的表达水平,双荧光素酶报告基因检测 0 g/mL、200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL 苦参碱对人肝癌HepG2 和Huh7 细胞内β-catenin 转录活性,Western blotting 检测 0 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱对人肝癌HepG2和Huh7细胞内AKT（蛋白激酶B）、GSK-3β和β-catenin及其相应磷酸化 蛋白的表达水平。结果MTT实验结果显示,苦参碱呈时间-浓度依赖性地抑制肝癌HepG2 和Huh7 细胞的增殖,处理24、 48、72 h 对HepG2 细胞的半数抑制浓度依次为2369、1565、909.1 μg/mL,对Huh7 细胞的半数抑制浓度依次为1355、781.8、 612.8 μg/mL。苦参碱浓度依赖性地抑制肝癌细胞的克隆形成能力,400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著抑制HepG2细胞的 克隆形成能力（P<0.01,P<0.001）,200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著抑制Huh7细胞的克隆形成能力（P<0.05,P<0.01, P<0.001）。苦参碱能够显著肝癌细胞内CD90、EpCAM和CD133 等干细胞标志物mRNA的表达,其中400 μg/mL、800 μg/mL 苦参碱能够显著抑制HepG2细胞中CD90（P<0.01,P<0.001）、EpCAM（P<0.05,P<0.01）和CD133（P<0.01,P<0.01）mRNA的表 达,400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著抑制Huh7细胞中CD90（P<0.01,P<0.01）、EpCAM（P<0.05,P<0.01）和CD133（P<0.01, P<0.01）mRNA的表达。同时400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱显著抑制HepG2细胞（P<0.001,P<0.001）和Huh7细胞（P<0.01,P<0.001） 内β-catenin的转录活性。研究结果显示400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著降低HepG2和Huh7细胞内β-catenin和磷酸化 的AKT和GSK-3β蛋白水平,增加β-catenin的磷酸化水平。结论苦参碱可抑制肝癌HepG2和Huh7细胞的增殖、克隆形成以及 肝癌干性基因CD90、EpCAM和CD133的表达,其机制可能与抑制AKT/GSK3β/β-catenin信号通路,从而降低β-catenin的转录 活性有关。     

槲皮素通过STAT3信号通路抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭

目的 观察槲皮素通过抑制信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 体外培养A549细胞,以不同浓度(0、7.5、15、30、60、120μmol/L)槲皮素处理24、48和72 h,采用CCK-8检测槲皮素对A549细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50).A549细胞随机分为4组:分别以0(空白对照组)、15和30μmol/L槲皮素和3μg/ml顺铂(阳性对照组)处理24 h.采用细胞黏附实验、划痕修复实验、Transwell小室体外侵袭实验观察A549细胞黏附、迁移、侵袭能力,Western印迹法检测STAT3、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)蛋白表达的变化.结果 槲皮素剂量依赖性地抑制A549细胞增殖.与空白对照组相比,槲皮素显著抑制A549细胞黏附率、迁移率、侵袭细胞数(P<0.05或P<0.01);与空白对照组相比,槲皮素显著降低A549细胞STAT3和p-STAT3蛋白表达(P<0.05或P<0.01).结论 槲皮素具有明显的抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用,其机制可能与抑制STAT3信号通路有关.     

不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblasts,HSF）增殖、迁移、凋亡的影响。方法将体外HSF
分为腐胺组和对照组,以含腐胺浓度分别为0.5、1、5、10、50、100、500、1000 μg/ml完全培养基培养细胞设为腐胺组,不添加腐胺
设为对照组。经对照组及不同浓度腐胺组处理的HSF培养24 h后,再以四唑化合物电子耦联显色法（MTS法）测定细胞增殖能
力（用吸光度值表示）,Transwell迁移实验测定细胞的迁移能力,流式细胞技术（Flow Cytometry, FCM）Annexin V/PI标记法测
定细胞凋亡率。结果（1）细胞增殖能力（MTS）测定结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml 腐胺组HSF的吸光度值较对照组升高（P<
0.01）,并且1 μg/ml时达峰值（0.754±0.024）;500、1000 μg/ml腐胺组HSF吸光度值较对照组降低（P<0.01）;50、100 μg/ml腐胺
组HSF的吸光度值与对照组无明显差异（P>0.05）;（2）Transwell迁移实验结果显示,1 μg/ml腐胺组穿过微孔膜的细胞数目较对
照组显著增加（P<0.01）,且达到峰值309±21;50 μg/ml及以上浓度腐胺组HSF穿过微孔膜的数目较对照组减少（P<0.05）;0.5、
5、10 μg/ml腐胺组HSF穿过微孔膜的细胞数目与对照组比较无明显差异（P>0.05）;（3）流式细胞凋亡结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml
腐胺组HSF凋亡率较对照组显著降低（P<0.05）,而且在1 μg/ml时细胞凋亡率达最低值（11.10±0.79）%;100 μg/ml及以上浓度
腐胺组细胞凋亡率较对照组显著升高（P<0.01）,而且随着浓度增加凋亡率逐渐升高;50 μg/ml腐胺组与对照组比较细胞凋亡率
无明显差异（P>0.05）。结论微量腐胺可维持细胞正常的迁移能力,显著提高HSF的细胞增殖能力,而较高浓度的腐胺能显著
抑制HSF迁移与增殖,并诱导细胞发生凋亡,提示不同浓度的腐胺会对创面愈合起到完全不同的作用。
     

Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系

目的 探讨Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系.方法 实验设正常对照组(细胞未作其他处理)、人乙酰肝素酶重组蛋白处理组(5、10 μg/ml)以及提前3 h加入Src激酶特异性抑制剂pp2(5 μmol/L)或p38激酶特异性抑制剂SB 203580(1 μmol/L)再加入人乙酰肝素酶重组蛋白(10 μg/ml)作用24 h组.利用划痕损伤实验和Transwell小室基质侵袭实验分别检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞、高表达乙酰肝素酶的人胃癌SGC-7901细胞和乙酰肝素酶表达被下调的SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中Src激酶、p38激酶、磷酸化Src激酶(p-Src)和磷酸化p38激酶(p-p38)蛋白表达的影响.结果 与正常对照组比较,5和10 μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白均能明显增强人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力(P<0.05);与未加抑制剂的人乙酰肝素酶重组蛋白比较,抑制剂pp2和SB 203580均能削弱人乙酰肝素酶重组蛋白增强的人胃癌MGC-803细胞的迁移和基质侵袭能力(P<0.05).10 μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白促进人胃癌MGC-803细胞Src激酶和p38激酶的磷酸化,而SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中磷酸化的Src激酶和p38激酶表达水平较SGC-7901细胞明显下调(P<0.01);抑制剂pp2和SB 203580对人胃癌SGC-7901细胞中乙酰肝素酶蛋白表达无明显影响;在人胃癌SGC-7901细胞和MGC-803细胞中,Src激酶的抑制剂pp2抑制磷酸化p38蛋白的表达,而p38激酶的抑制剂SB 203580对磷酸化Src蛋白表达无明显影响.结论 乙酰肝素酶可能通过促进Src激酶磷酸化或p38激酶的磷酸化或先促进Src激酶磷酸化再促进p38激酶的磷酸化,从而促进人胃癌细胞迁移和侵袭能力.乙酰肝素酶-Src激酶磷酸化-p38激酶磷酸化可能是人胃癌细胞内存在的与细胞迁移和侵袭有关的信号转导通路.     

L-4F对oxLDL刺激下脂肪细胞表达单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的观察载脂蛋白A-I模拟肽L-4F对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)刺激下3T3-L1脂肪细胞分泌表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 3T3-L1脂肪细胞促分化成熟后,oxLDL(50μg/ml)刺激脂肪细胞,给予L-4F(1-50μg/ml),H-89(10μmol/L)及H-89+L-4F(50μg/ml)干预,收集细胞,测定脂肪细胞MCP-1上清液中的浓度和mRNA表达水平,以及脂肪细胞核因子C/EBPα、β的蛋白质水平;改良Boyden小室法检测不同干预组上清液对人外周血单核细胞趋化活性的影响。结果 OxLDL(50μg/ml)刺激使分化成熟的3T3-L1脂肪细胞表达及分泌MCP-1明显增加,并使得诱导的单核细胞移动距离明显增加。L-4F以浓度依赖的方式减少脂肪细胞MCP-1的表达和分泌,降低单核细胞趋化活性;50μg/ml L-4F使MCP-1 mRNA的表达降低(91±6)%(P<0.01)。PKA抑制剂H-89(10μmol/L)干预oxLDL刺激的脂肪细胞后MCP-1 m RNA的表达也显著减少(P<0.01),但是,在50μg/ml L-4F作用的基础上,H-89(10μmol/L)的孵育并未使得MCP-1 mRNA的表达进一步降低(P>0.05)。50μg/ml oxLDL刺激对脂肪细胞C/EBPα的含量无明显影响,但增加C/EBPβ蛋白量,且该作用呈时间依赖性;L-4F和H-89干预均降低C/EBPβ的蛋白质含量。结论 OxLDL时间依赖性地诱导脂肪细胞C/EBPβ的蛋白合成,并增强脂肪细胞MCP-1的表达分泌,L-4F以浓度依赖的方式对抗oxLDL的致炎作用,cAMP/PKA-C/EBPβ信号通道可能是L-4F的作用途径之一。     

Twist shRNA对人宫颈癌细胞体外黏附、铺展及迁移能力的影响

目的通过RNA干扰抑制Twist基因在人宫颈癌HeLa细胞中的表达,观察Twist基因沉默对HeLa细胞体外黏附、铺展及迁移能力的影响。方法根据shRNA设计原则,构建两种靶向Twist基因的短发夹RNA（shRNA）干扰质粒,稳定转染HeLa细胞。通过荧光定量PCR及Western印迹法检测HeLa细胞中Twist基因mRNA和蛋白的表达水平,利用黏附实验、铺展实验和划痕实验检测其对细胞黏附力和迁移力的影响。结果成功构建的Twist shRNA真核表达载体稳定转染HeLa细胞后可显著降低Twist基因的表达。与对照组相比,Twist基因沉默组细胞的黏附、铺展及迁移能力明显下降（P〈0.05）。结论成功构建的Twist shRNA真核表达载体,能有效抑制HeLa细胞黏附、铺展及迁移能力。     

RNA干扰Ezrin对肾癌细胞株786-0增殖及侵袭力的影响

目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白Ezrin对肾癌细胞株786-0细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法以ezrin为靶基因,以Pgenesil-1质粒为载体设计和构建重组体,设计2条发夹式RNA(shRNA),合成后克隆入载体Pgenesil-1,脂质体Lipofectamine2000转染进786-0细胞,观察RNA干扰Ezrin后肾癌细胞株786-0细胞增殖及侵袭能力的改变。结果稳定转染细胞荧光定量PCR结果显示shRNA-ezrin1对ezrin mRNA的表达量抑制率66.33%,稳定转染细胞Ezrin下调率达93%,shRNA干扰后786-0细胞增殖活性减弱,GO/G1时段明显延长(P<0.01),PI缩短(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.01);细胞黏附力减弱,细胞运动、穿孔能力减弱(P<0.01)。结论 RNA干扰Ezrin可有效抑制786-0细胞增殖活性、降低细胞的侵袭力,Ezrin在人肾癌细胞增殖、侵袭中发挥重要作用。