大鼠弥散性血管内凝血时水通道蛋白1基因表达与肾脏损伤的关系

目的 研究对Wistar大鼠滴注脂多糖(LPS)造成弥散性血管内凝血(DIC)后,肾脏细胞表面水通道蛋白1(AQP1)mRNA表达变化与其损伤的关系.方法 清洁级,雄性Wistar大鼠50只随机分为5组(每组10只):对照组(经鼠尾静脉持续4 h滴注10 mL生理盐水后直接取血及组织);DIC组:滴注LPS(30 mg/kg,溶于10mL生理盐水持续4 h鼠尾静脉滴注)后4 h,6 h,8 h,10 h组,在滴注LPS后4 h,6 h,8 h及10 h取血及组织.检测各组血小板(PLT)计数、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(D-D);各组.肾、肺组织苏木苏.伊红(HE)染色,观察肾、肺组织中微血栓形成情况及病理变化(结合血液学指标与病理变化判断DIC病程),提取各组大鼠肾组织总RNA,RT-PCR检测AQP1 mRNA水平的表达.采用SNK-q方法对结果进行统计学分析.结果 各实验组PLT计数、PT、APTT、FIB及D-D与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);滴注LPS后4 h的AOP1 mRNA表达较对照组下调(P<0.01),6 h达最低;滴注LPS后6 h肾小管细胞浊肿,8h肾小管细胞变性坏死.结论 肾脏AQP1 mRNA表达下调先于肾小管细胞的损伤,表明AQP1参与了大鼠DIC时肾小管细胞的损伤.     

水蛭素对大鼠DIC模型脑组织水通道蛋白4表达的干预作用

目的 探讨水蛭素对DIC模型的大鼠脑组织水通道蛋白4(AQP4)表达的干预作用.方法 通过鼠尾静脉滴注脂多糖制作DIC模型,将大鼠分为三组即对照组、DIC组和水蛭素组,选取4个时间点(4,6,8,12 h)测定血小板计数,PT,APTT,纤维蛋白原和D-D水平的变化;同时用免疫印迹杂交法检测大鼠脑组织水通道蛋白4的表达.结果 与对照组相比,DIC组及水蛭素组血小板计数,PT,APTT,纤维蛋白原和D-D差异具有统计学意义(P＜0.05);水蛭素组上述指标变化明显低于DIC组(P＜0.05);AQP4表达在水蛭素组明显低于DIC组(P＜0.05).结论 DIC时产生的凝血酶可能通过上调AQP4蛋白的表达,参与脑水肿形成和发展;水蛭素通过抑制凝血酶的形成,减轻脑水肿.     

脂氧素A4对脂多糖攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白5的影响

目的 探讨脂氧素A4(LipoxinA4,LXA4)对脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar type Ⅱ penumonoeyte,ATⅡ)水通道蛋白(aquaporin,AQP)5的影响.方法 对大鼠ATⅡ细胞进行分离、纯化,以1 μg/mL的LPS刺激ATⅡ 4 h建立LPS攻击ATⅡ细胞模型.将ATⅡ随机分为:空白对照(无血清的培养基不含任何药物)组;溶剂对照(乙醇,0.7μL/mL)组;LPS(1μg/mL)组;LXA4(1×107mol/mL)组;LPS+LXA4组.用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测大鼠ATⅡ中AQP5的信使核糖核酸(mRNA)的变化,免疫组织化学方法(IHC)检测ATⅡ中AQP5蛋白表达.结果 1μg/mL的LPs刺激ATⅡ4 h后,ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组明显减低(P<0.01),而LPS+LXA4组ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较LPS组明显增高(P<0.01),且LXA4组ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组也明显增高(P<0.01).结论 大鼠ATⅡ上表达有AQP5,LXA4能促进AQP5 mRNA和蛋白表达上调,提示LXA4可能通过上调AQP5的表达起到促进肺泡水肿液清除作用.     

高原环境中大鼠脑水肿与水通道蛋白4的表达变化

目的:探讨大鼠在模拟5000m高原环境下脑水肿脑组织水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)的表达变化及意义。方法:实验选用Wistar大白鼠56只按随机数字法将大鼠分为正常对照组8只、实验组48只,其中实验组按在模拟高原环境中饲养时间分为饲养4,24,48,72h,2周和4周组,每组8只。在各时相点取大鼠大脑半球组织,测定脑组织含水率,作AQP4免疫组织化学染色和组织原位杂交,用图像分析软件检测AQP4抗体和基因阳性表达相对灰度值,了解AQP4在大鼠大脑的表达变化。结果:饲养4,48,72h组大鼠脑组织含水率明显高于正常对照组(P<0.05～0.01),大鼠在模拟高原环境中饲养2周时含水率逐渐下降,饲养4周组脑组织含水率接近正常对照组。AQP4在脑毛细血管壁及胶质纤维呈阳性表达,正常对照组大鼠AQP4平均相对灰度值(averagerelativegray,ARG)(1.268±0.119)明显低于饲养4h组(1.392±0.098)(t=5.258,P<0.05);饲养24,48和72h组AQP4阳性表达增强,ARG值显著增加(t=2.967～5.652,P<0.01);饲养2周组ARG值有所下降(t=5.239,P<0.05)。AQP4mRNA在胶质细胞核和神经细胞核表达阳性,变化规律与AQP4蛋白变化基本一致,即24,48和72h组阳性细胞数率增加(t=3.045～5.526,P<0.01),阳性染色增强,饲养2周组阳性表达率下降(t=4.687,P<0.05)。结论:AQP4与血脑屏     

脂多糖诱导大鼠DIC模型水通道蛋白5的表达与肺水肿的关系

目的研究对Wistar大鼠滴注LPS造成DIC后,肺细胞膜表面水通道蛋白5（AQP5）的表达变化与肺水肿的关系。方法清洁级,雄性Wistar大鼠随机分为：对照组（滴注生理盐水组）;实验组（滴注LPS后4h、6h、8h、10h组）。各组取血检测PLT计数、PT、APTT、FIB含量、DD水平;取各组大鼠左肺测量其肺湿／干重比值;取各组肺组织进行HE染色,观察肺组织中微血栓形成情况及组织病理损伤（结合血液学指标与组织病理损伤判断DIC病程）;提取大鼠肺组织细胞总RNA,RT-PCR方法检AQP5mRNA水平的表达。采用SNK—q及直线相关方法对结果进行统计学分析。结果各实验组PLT计数、PT、APTT、FIB含量、DD水平与对照组相比P〈0．01;滴注LPS后6h在肺组织中可见微血栓,滴注LPS后8h、10h肺组织结构紊乱,肺泡中有大量渗出液;滴注LPS后4hAQP5的mRNA表达下调,与对照组相tLP〈0．01;滴注LPS后4h～10h肺湿／干重比值增加。经直线相关分析肺湿／干重比值与AQP5的mRNA呈负直线相关,P〈O．01。结论DIc时肺水肿的程度与肺细胞表面AOP5的表达相关．有望通过调节肺细胞表面AOP5的表达干预DIG时肺水肿的形成或消除。     

内毒素性休克大鼠肺组织糖皮质激素受体mRNA的表达

目的 探讨内毒素(LPS)性休克大鼠肺组织糖皮质激素受体(GR)mRNA的表达.方法 56只SD大鼠,随机(随机数字法)分IPS休克组(16只)、LPS+血管活性肠肽(vasosctive intestinal peptide,VIP)组(16只)、LPS+VIP+糖皮质激素(GC)组(16只)和对照组(8只).尾静脉注射LPS制作休克模型,尾静脉注射LPS 10 mg/kg后,分别于15 min内注射VIP 5 nmol/kg或VIP 5 nmol/ks+甲基强的松龙3 mg/kg,对照组注射等容量生理盐水,分别于沣射后6 h和24 h处死,留取肺标本,观察肺组织病理变化,RT-PCR榆测肺组织GR mRNA的表达.结果 (1)肺组织病理改变:LPS组见肺泡腔结构破坏、肺泡间隔增宽、炎性细胞浸润、出血、间质水肿,细胞器破坏,LPS+VIP组和IPS+VIP+GC组病变较轻.(2)GR mRNA的表达:注射LPS后6 h,LPS组和LPs+VIP组GR mRNA表达下降,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).LPS组下降较LPS+VIP组稍明显,但差异无统计学意义(P＞0.05).24 h GR mRNA表达恢复.LPS+VIP+GC组GR mRNA表达6 h增加,24 h GR mRNA表达更高(P＜0.05).结论 LPS致肺损伤时,肺组织GR mRNA的表达减少.VIP和GC可抵抗炎症反应、减轻肺损伤,其机制可能与增强GR mRNA的表达有关.     

维生素D对脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织血管紧张素转化酶2和维生素D受体表达水平的影响

目的 观察维生素D(vitamin D,Vit D)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致Wistar大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)肺组织中血管紧张素转化酶2(angiotensinconverting enzyme 2,ACE2)和维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)表达水平的影响.方法 采用尾静脉注射LPS方法制备大鼠ALI模型;将30只健康雄性Wistar大鼠随机(随机数字法)分为6组:正常对照组(NC组)、LPS组:尾静脉注射LPS 5mg/kg、Vit D组:给予Vit D活性形式(骨化三醇)25 μg/kg连续灌胃3d和(LPS+ Vit D) 1-3组:分别于骨化三醇1μg/kg、5μg/kg、25 μg/kg灌胃3d后尾静脉注射LPS 5mg/kg,所有大鼠于注射LPS的24 h后进行后续实验.分别观察大鼠一般情况,肺组织病理及肺干/湿重比变化、肺组织中VDR、ACE2蛋白及基因水平的表达.结果 LPS组大鼠病态表现(呼吸浅快、精神萎靡、口鼻可见血性分泌物)明显,(LPS+ VitD) 1-3组病态表现和肺组织病理损伤均较LPS组明显减轻.LPS组VDR和ACE2蛋白及基因水平的表达均较NC组和Vit D组显著降低(P＜0.05),(LPS+ VitD) 1-3组各组VDR和ACE2蛋白及基因水平的表达均较LPS组有所升高(P＜0.05),但仍显著低于Vit D组(P＜0.05),其中(LPS+ Vit D) 1-3组各组VDR蛋白及基因水平的表达差异无统计学意义(P＞0.05),ACE2的表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Vit D能使LPS致ALI大鼠肺组织中ACE2和VDR蛋白及基因表达水平增加,故此推测ACE2和VDR表达增加可能对ALI的发生、发展起保护作用.     

血必净对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠肺组织细胞间粘附分子-1表达的影响

目的观察血必净对脂多糖诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法将45只Wistar大鼠采用随机数字表分为三组:(1)健康对照(Control)组(15只)、(2)脂多糖(LPS)组(15只)、(3)血必净(XBJ)组(15只)。LPS组和XBJ组采用股静脉注射LPS(5 mg/kg)制备大鼠ALI模型。造模前半小时开始给药,XBJ组给予血必净4 m L/kg;Control组和LPS组则给予等容积0.9%氯化钠注射溶液。在造模后6 h、12 h、24 h各随机处死大鼠5只,分别作为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚组,光镜下观察肺脏组织形态学变化,免疫组织化学法(IHC)检测肺组织中ICAM-1蛋白表达。结果造模后LPS组随着实验时间的延长,肺组织ICAM-1蛋白呈逐渐增加趋势,至24 h达到高峰。与LPS组相比,血必净组各时间点肺组织ICAM-1蛋白表达明显降低(PO.05)。光镜显示LPS组肺组织病理形态学改变明显,而血必净组则明显减轻。结论血必净可通过抑制脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠肺组织增强的ICAM-1表达减轻脂多糖诱导的大鼠肺损伤程度。     

脂氧素A4对肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白1,3,5的影响

目的 探讨脂氧素A4(LipoxirA4,LxA4)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡpenumonocyte,AT Ⅱ)水通道蛋白(aquaporin,AQP)1,3,5的影响.方法 每次取SPF级健康SD雄性大鼠,体质量200～250 g一只,对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化,鉴定,得到纯度为≥90%的肺泡Ⅱ型上皮细胞,将细胞随机分为:①溶剂对照(乙醇,0.7μL/mL)组;②空白组(无血清的培养基不含任何药物);③LXA4(1×10-7moL/mL)组;④LPS(1μg/mL)组;⑤LPS+LXA4(1μg/mL LPS+1×10-7moL/mL LXA4)组.药物刺激4 h后用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上AQP1,AQP3和AQP5的mRNA的表达,免疫组织化学方法(IHC)检测肺泡Ⅱ型上皮细胞上AQP1,AQP3和AQP5蛋白的表达.试验重复6次.采用方差分析进行统计学处理.结果 RT-PCR和免疫组织化学法结果显示,用1 μg/mL的LPS刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞4 h后ATⅡ上AQP1,AOP3和AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组明显减低(P＜0.01),而LPS+LXA4组中ATⅡ上AQP1,AQP3和AQP5的mRNA和蛋白表达较LPS模型组有明显增高(LPS+LXA4,AQP1:0.647±0.132,AQP3:0.900±0.856,AQP5:0.879±0.058;LPS.AQP1:0.297±0.133,AQP3:0.512±0.113,AQP5:0.647±0.110;P＜0.01),且LXA4组中ATⅡ上AQP1,AQP3和AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组也有明显增高(LXA4,AQP1:0.539±0.142,AQP3:0.818±0.176,AQP5:0.841±0.066;Blank Control,AQP1:0.518±0.139;AQP3:0.138±0.136,AQP5:0.766±0.066;P＜0.01).结论 大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上表达有AQP1,AQP3和AQP5,LXA4能促进脂多糖攻击的肺泡Ⅱ型上皮细胞上AQP1,AQP3和AQP5mRNA和蛋白表达上调.     

血必净对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠肺组织纤溶酶原激活物抑制剂-1表达的影响

目的观察脂多糖诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠PAI-1的表达及血必净的干预效果,并探讨作用机制。方法 45只Wistar大鼠随机分为三组:(1)健康对照(Control)组(15只)、(2)脂多糖(LPS)组(15只)、(3)血必净干预(XBJ)组(15只)。LPS组和XBJ组采用股静脉注射LPS(5 mg/kg)建立大鼠ALI模型。造模前半小时开始给药,XBJ组给予血必净4 ml/kg,iv;Control组和LPS组则给予等容积0.9%氯化钠注射溶液。在造模后6 h、12 h、24 h各随机处死大鼠5只,分别作为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚组,光镜下观察肺脏组织形态学变化,免疫组织化学法(IHC)检测肺组织中PAI-1蛋白表达。结果造模后,LPS组随着实验时间的延长,肺组织PAI-1蛋白呈逐渐增加趋势,至12 h达到高峰。与LPS组相比,血必净组各时间点肺组织PAI-1蛋白表达明显降低(P<0.05)。光镜显示LPS组肺组织病理形态学改变明显,而血必净组则明显减轻。结论血必净可抑制脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠肺组织增强的PAI-1表达,减轻脂多糖诱导的大鼠肺损伤程度。